专利名称：：一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种多糖磷酸酯的制备方法，尤其是涉及一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法。
背景技术：
：糖类物质是自然界存在的一大类具有广谱化学结构和生物学功能的有机化合物，在体内具有重要的和复杂的生理作用活性。研究发现，多糖所具备的生物活性与其化学结构有极为密切的关系。影响多糖生物学活性的结构因素包括分子量、所带的官能团、多糖的主链性质(糖单元组成和糖苷键类型)、支链的类型、单糖连接方式以及多糖分子的高级结构如空间构象等多糖中的官能团的种类或有无对其生物活性有极大的影响。因此，为了提高多糖的生物活性，多糖的分子修饰和结构改造具有重要意义。沙蒿多糖具有高粘度、高保水性、非水溶性、分散性好、成膜性能稳定粘着力强等特点，因此作为稳定剂，增稠剂，成膜剂等应用于食品工业，化学工业，石油工业等领域，在作为减肥食品，糖尿病患者的食品而被应用。专利ZL200510002228.5于2006年8月2日授权了一种天然生物多糖，可用于治疗化学性糖尿病，降低血糖，显著减缓糖尿病引起的体重下降，并能减少糖尿病对肝、肾的损伤，降低血液中谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮的含量。专利CN1073181A于1993年6月16日公开了一种多糖磷酸酯(即淀粉磷酸酯或魔芋精粉磷酸酯)的制备方法，即将淀粉或魔芋与浓度50%以上的磷酸盐在10016(TC下反应制备多糖磷酸酯，此法制备的磷酸酯酯化取代度约为0.02。专利ZL91108384.7于1994年12月28日授权了一种制备4-去甲基表鬼臼毒葡糖苷的磷酸酯衍生物的制备方法，即表鬼臼毒甲醛糖苷悬浮于千燥乙腈加热溶解，冷却至室温加入N,N-二异丙基乙基胺，然后冷却至(TC迅速加入磷酰氯或二苯基氯代磷酸酯，之后慢慢升至室温反应63小时处理得到4-去甲基表鬼臼毒葡糖苷的磷酸酯衍生物。文献"香菇多糖磷酸化修饰工艺条件的研究"(《食品与发酵工业》，2007，33(12)，6467)2007年在《食品与发酵工业》第12期报道了香菇多糖磷酸酯化的方法，即用混合磷酸盐试剂和香菇多糖在一定温度下进行磷酸化反应，此法随着温度的升高，导致多糖结构严重破坏，糖链断裂，分子量减小。以上专利或文献中提到的磷酸化方法存在着反应时间长，磷含量普遍低等缺陷；且多用于淀粉磷酸酯的制备，其反应副产物多，对多糖结构破坏严重，反应过程复杂等缺点，无法达到增加或改变活性的目的，因此，采用不同的方法制备不同取代度多糖磷酸酯是十分必要的。目前国内外专利均未涉及以沙蒿多糖为原料的磷酸化多糖的制备方法。
发明内容本发明要解决的技术问题是提供一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法；该方法是以天然植物多糖-沙蒿多糖为原料，采用三氯氧磷对沙蒿多糖进行磷酸化，反应时间短，磷含量高，产品得率高，反应副产物少，对多糖结构破坏小。为解决上述技术问题，本发明一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，包括如下步骤，1)将沙蒿多糖放入反应器中，加入无水甲酰胺和无水吡啶，搅拌均匀，得到悬浮液A;2)将三氯氧磷滴加到无水吡啶中，得到液体B;3)将步骤2)得到的液体B全部滴加到悬浮液A中反应，得反应液C;4)将反应液C用氢氧化钠调节至pH二7，装入截流量为800014000Da的透析袋中，通自来水透析，再用去离子水透析；将透析袋内溶液减压浓缩，在浓缩液中加入乙醇，室温下静置，离心，收集下层沉淀物，冷冻干燥，得到沙蒿多糖磷酸酯。进一步地，所述步骤1)的具体步骤如下称取0.0020.005g的纯度在90%以上的沙蒿多糖放入反应器中，加入无水甲酰胺1025ml，室温下搅拌2535min之后加入1025ml无水吡啶，搅拌510min，得悬浊液A。进一步地，所述步骤2)的具体步骤如下取1020ml无水枇啶置于反应器中，滴加三氯氧磷，通氮气保护，搅拌，冰盐浴下反应3060min，得到液体B;所述三氯氧磷与吡啶的体积比为20:110:1。进一步地，所述步骤3)的具体步骤如下冰盐浴下将步骤2)得到的液体B全部滴加到悬浊液A中，控制滴速为0.5ml/minlml/min，在06(TC下搅拌反应l5h，得物质C。进一步地，所述步骤4)的具体步骤如下将物质C用0。C的12mol/ml的氢氧化钠中和至pH=7，装入截流分子量为800012000道尔顿的透析袋中，自来水透析2436小时，去离子水透析3648小时；透析袋内液体在60。C、0.060.08MPa下减压浓縮至原体积的1/301/50，在浓縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占总体积的7080%，沉淀，在-60-50。C、125Pa下的条件下冷冻干燥2436小时，得到沙蒿多糖磷酸酯。下表给出了本发明的实施例和用磷酸盐的对比例的数据比较<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>本发明是以天然植物多糖-沙蒿多糖为原料，采用三氯氧磷对沙蒿多糖进行磷酸化，反应时间短，磷含量高，产品得率高，反应副产物少，对多糖结构破坏小。下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。图1为沙蒿多糖及其磷酸酯的红外光谱。具体实施例方式为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不限于下面的实施例。实施例l一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，包括如下步骤1)称取0.002g的纯度在90%以上的沙蒿多糖放入反应器中，加入无水甲酰胺10ml，室温下搅拌25min之后加入10ml无水吡啶，搅拌5min得悬浊液A;2)量取20ml无水吡啶加入反应器中，滴加三氯氧磷，通氮气保护，通过磁力搅拌器进行搅拌，冰盐浴下反应30min，得到液体B;所述三氯氧磷与吡啶的体积比为20:1;3):冰盐浴下将步骤2)得到的液体B全部滴加到悬浊液A中，控制滴速为0.5ml/min，之后在(TC下搅拌反应5h，得物质C;4):将物质C用Ot:的lraol/ml的氢氧化钠中和至pH-7，装入截流分子量为800012000道尔顿的透析袋中，自来水透析36小时，去离子水透析36小时；透析袋内液体在6(TC、0.06MPa下减压浓縮至原体积的1/30，在浓縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占总体积的80%，沉淀，在-6(TC、1Pa下的条件下冷冻干燥24小时，得到沙蒿多糖磷酸酯，磷含量为5.51%。参见图1所示，为沙蒿多糖及其磷酸酯的红外光谱。通过沙蒿多糖及其磷酸酯的红外光谱对比我们可以看出沙蒿多糖磷酸酯除了多糖母体特征吸收峰外,还增加了1267.91cm—工处是P-0的伸縮振动；904.4cm—工处为P-0-C伸縮振动，这些是磷酸键的特征吸收峰。同时，沙蒿多糖磷酸酯在2931cm1、1053cn^附近的羟基吸收峰有所降低，表明部分羟基已被酯化，以上充分说明多糖已形成磷酸酯。实施例2一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，包括如下步骤1)称取0.003g的纯度在90%以上的沙蒿多糖放入反应器中，加入无水甲酰胺15ml，室温下搅拌30min之后加入15ml无水吡啶，搅拌8min得悬浊液A;2)量取20ml无水吡啶加入反应器中，滴加三氯氧磷，通氮气保护，通过磁力搅拌器进行搅拌，冰盐浴下反应40min，得到液体B。所述三氯氧磷与吡啶的体积比为20:1.5;3)冰盐浴下将步骤2)得到的液体B全部滴加到悬浊液A中，控制滴速为0.8ml/min，之后在6(TC下搅拌反应4h，得物质C。4):将物质C用0。C的2mol/ml的氢氧化钠中和至pH=7，装入截流量为800012000道尔顿的透析袋中，自来水透析24小时，去离子水透析48小时。透析袋内液体在6(TC、0.07MPa下减压浓縮至原体积1/40，在浓縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占总体积的75%，沉淀，在-55t、10Pa下的条件下冷冻干燥30小时，得到沙蒿多糖磷酸酯，磷含量为8.67%。实施例3一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，包括如下步骤1)称取0.005g的纯度在90%以上的沙蒿多糖放入反应器中，加入无水甲酰胺25ml，室温下搅拌35min之后加入25ml无水吡啶，搅拌10min得悬浊液A;2)量取20ml无水吡啶加入反应器中，滴加三氯氧磷，通氮气保护，通过磁力搅拌器进行搅拌，冰盐浴下反应60min，得到液体B。所述三氯氧磷与吡啶的体积比为20:2;3)冰盐浴下将步骤2得到的液体B全部滴加到悬浊液A中，控制滴速为1ml/min，之后在4(TC下搅拌反应3h，得物质C;4)将物质C用Ot:的2.5mol/ml的氢氧化钠中和至pH二7，装入截流分子量为800012000道尔顿的透析袋中，流水透析30小时，去离子水透析42小时。透析袋内液体在6(TC、0.08MPa下减压浓縮至原体积的1/50，在浓縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占总体积的70%，沉淀，在-5(TC、25Pa下的条件下冷冻干燥36小时，得到沙蒿多糖磷酸酯，磷含量为11.54%。比较例本发明一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，包括如下步骤1)称取0.005g沙蒿多糖加入10ml蒸馏水于5(TC下充分溶解，得溶解液A;2)向溶解液A中加入质量分数分别为5%三聚磷酸钠和2%三偏磷酸钠的混合试剂30ml于8(TC下反应12h，得反应液B;3)将反应液B装入截流分子量为800012000道尔顿的透析袋中，流水透析24小时，去离子水透析48小时；透析袋内液体在6(TC、0.08MPa下减压浓縮至原体积的1/50，在浓縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占总体积的70%，沉淀，在-5(TC、25Pa下的条件下冷冻干燥36小时，得到沙蒿多糖磷酸酯，磷含量为2.54%。显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。权利要求1、一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤1)将沙蒿多糖放入反应器中，加入无水甲酰胺和无水吡啶，搅拌均匀，得到悬浮液A；2)将三氯氧磷滴加到无水吡啶中，得到液体B；3)将步骤2)得到的液体B全部滴加到悬浮液A中反应，得反应液C；4)将反应液C用氢氧化钠调节至pH＝7，装入截流量为8000～14000Da的透析袋中，通自来水透析，再用去离子水透析；将透析袋内溶液减压浓缩，在浓缩液中加入乙醇，室温下静置，离心，收集下层沉淀物，冷冻干燥，得到沙蒿多糖磷酸酯。2、根据权利要求1所述的一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，其特征在于所述步骤l)的具体步骤如下称取0.0020.005§的纯度在90%以上的沙蒿多糖放入反应器中，加入无水甲酰胺1025ml，室温下搅拌2535min之后加入1025ml无水吡啶，搅拌510min，得悬浊液A。3、根据权利要求1或2所述的一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，其特征在于所述步骤2)的具体步骤如下取1020ml无水吡啶置于反应器中，滴加三氯氧磷，通氮气保护，搅拌，冰盐浴下反应3060min，得到液体B;所述三氯氧磷与吡啶的体积比为20:110:1。4、根据权利要求3所述的一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，其特征在于所述步骤3)的具体步骤如下冰盐浴下将步骤2)得到的液体B全部滴加到悬浊液A中，控制滴速为0.5ml/minlml/min，在06(TC下搅拌反应15h，得物质C。5、根据权利要求4所述的一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，其特征在于所述步骤4)的具体步骤如下将物质C用0。C的12mol/ml的氢氧化钠中和至pH二7，装入截流分子量为800012000道尔顿的透析袋中，自流水透析2436小时，去离子水透析3648小时；透析袋内液体在60。C、0.060.08MPa下减压浓縮至原体积的1/301/50，在浓縮液中加入乙醇，所述乙醇含量占总体积的7080%，沉淀，在-60-50。C、125Pa下的条件下冷冻干燥2436小时，得到沙蒿多糖磷酸酯。全文摘要一种沙蒿多糖磷酸酯的制备方法，包括如下步骤1)将沙蒿多糖放入反应器中，加入无水甲酰胺和无水吡啶，搅拌均匀，得到悬浮液A；2)将三氯氧磷滴加到吡啶中，得到液体B；3)将步骤2)得到的液体B全部滴加到悬浮液A中反应，得反应液C；4)将反应液C用氢氧化钠调节至pH＝7，装入截流量为8000～14000Da的透析袋中，通自来水透析，再用去离子水透析；将透析袋内溶液减压浓缩，在浓缩液中加入乙醇，室温下静置，离心，收集下层沉淀物，冷冻干燥，得到沙蒿多糖磷酸酯。本发明是以天然植物多糖-沙蒿多糖为原料，采用三氯氧磷对沙蒿多糖进行磷酸化，反应时间短，磷含量高，产品得率高，反应副产物少，对多糖结构破坏小。文档编号C08B37/00GK101619109SQ20091016138公开日2010年1月6日申请日期2009年8月12日优先权日2009年8月12日发明者吴秀琴,健姚,继张,杨云云,梁俊玉,王云普,王俊龙,王小芳,赵保堂,马君义申请人:西北师范大学