专利名称：一种富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种木耳多糖的纯化方法，特别是涉及一种 利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法。
背景技术：
黑木耳别名光木耳。真菌学分类属担子菌纲，木耳目，木耳科。东北，湖北， 浙江，云南都有分布，是中国木耳的生产区，生长于栎、杨、榕、槐等120多种阔叶树的腐 木上，单生或群生。目前人工培植以椴木的和袋料的为主。木耳子实体胶质，成圆盘形， 耳形不规则形，直径3-12厘米。新鲜时软，干后成角质。口感细嫩，风味特殊，是一种营 养丰富的著名食用菌。含糖类、蛋白质10. 6克、脂肪0. 2克、热量306焦、氨基酸、维生 素和矿物质。有益气、充饥、轻身强智、止血止痛、补血活血等功效。富含多糖胶体，有良 好的清滑作用，是矿山工人、纺织工人的重要保健食品。还具有一定的抗癌和治疗心血 管疾病功能。黑木耳含木耳多糖。从子实体分离的一个多糖，相对分子质量为155000， 由 L-岩藻糖(fucose)，L-阿拉伯糖(L-arabinose)，D_ 木糖(D-xylose)，D_ 甘露糖 (D-mannose), D-葡萄糖(D-glucose)，葡萄糖醛酸(glucuronic acid)等组成，其摩尔比 为.14 0. 045 0. 17 1. 00 :. 61 :.44。菌丝体含外多糖(exopolysaccharide)。 还含麦角甾醇(ergosterol)，原维生素 D2 (provitamin D2)，黑刺菌素(ustilaginoidin)。 生长在棉子壳上的木耳含总氨基酸11. 50 %，蛋白质(protein) 13. 85 %，脂质 (lipid)0. 60 %，糖 66. 22 %，纤维素 1. 68 %，胡萝卜素(carotene)0. 22mg/kg,维生素 (vitamin)A 1. 76u/g，维生素B1 0. 88mg/kg，维生素B2 11. 4mg/kg及各种无机元素钾 1. 98%,钠 0. 055 %，钙 0. 28 %，镁 0. 23 %，铁 0. 0017 %，铜 6. 3 X 10\_6，锌 12 X 10\_6，猛 26X10\-6，磷 392mg%等。木耳多糖是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质，已引起国际社会的 普遍关注。经科学研究及临床应用证明，木耳多糖甲具有抗凝血活性、抗血小板聚集作用、 抗血栓形成、提升白细胞作用、增强对免疫功能的促进作用、对核酸和蛋白生物合成促进作 用、降血脂及抗动脉粥样硬化的作用、延缓衰老作用、抗辐射及抗炎作用、抗溃疡作用、降血 糖作用、.抗癌、抗突变作用。近年来，人们发现天然植物黑木耳中含有大量的木耳多糖，从 中提取木耳多糖并且取得了可喜进展，由于其原料黑木耳原料来源较广。名称为“黑木耳提 取木耳多糖的方法”的专利申请中便公开了将黑木耳切片、粉碎，经强电磁场萃取，用超速 离心机分离提取液，除去蛋白质及其脂类物质，再用真空刮板式薄膜浓缩，用真空冻干机进 行冷干，既得黑木耳冻干粉木。其分离效果远远不如大孔吸附树脂处理后在进行硅胶柱层 析分离的效果。
发明内容
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种 利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法。
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为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其步骤如下(1)将干黑木耳粉碎后以料液比为1 20 50的比例加热回流提取两次，每次 lh；
(2)将经(1)处理的黑木耳提取液高速离心分离，分别收集上清液和滤渣，合并滤 液，得初提物；(3)将所收获初提物加适量的水，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节其 PH值3. 0 7. 5，然后将上述滤渣加入混合液中，加热至40 60°C，加入果胶酶(100万u/ ml)0 2. 0%，混勻后保持酶解0. 5 3h。冷却至室温，静置、过滤、弃去滤渣，减压浓缩滤 液得木耳多糖粗提物；(4)将所得木耳多糖粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集木 耳多糖各阶段洗脱液；(6)将木耳多糖各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得木耳多糖半成品，其含量为40% 以上；(7)将所得木耳多糖半成品上硅胶层析柱，并以正丁醇、氯仿以不同体积比例进行 洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集木耳多糖各阶段洗脱液；(8)将所收集的木耳多糖洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得木耳多糖， 其含量在98%以上。所述的步骤(1)中，黑木耳粉碎后过10 80目筛在进行加热回流提取。在所述的步骤(1)中，用水加热提取时间为4 48小时。所述的步骤(1)中，加热回流提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、 连续提取法中的一种或一种以上。所述的步骤(1)中，加入纯化水的体积为黑木耳粉碎体积的20 50倍。在所述的(3)中，加入纯化水的量按体积计算为提取物水溶液的50倍，调节PH值 所用的酸为盐酸。步骤⑷中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA_9、S_8、 D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。步骤(5)中所述的洗脱为用70 90%的乙醇进行洗脱。在步骤(5)和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。步骤(7)中所采取的氯仿与正丁醇的体积为3 7 1。本发明应用大孔吸附技术分离纯化木耳多糖，对五木耳多糖的吸附选择性良好， 吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明 显，提取纯度高，可以得到含量40%以上的木耳多糖半成品和含量98%以上的木耳多糖终 产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力 强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机 盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附木耳多 糖，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施例方式实施例1 一种利用大孔吸附树脂富集纯化五味子中五味子醇甲的方法，其步骤 如下(1)将干黑木耳粉碎后过60目蹄，以料液比为1 20的比例加热回流提取两次， 每次lh ；(2)将经(1)处理的黑木耳提取液高速离心分离，分别收集上清液和滤渣，合并滤 液，得初提物；(3)将所收获初提物加适量的水，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节其 PH值3. 0，然后将上述滤渣加入混合液中，加热至40°C，加入果胶酶(100万u/ml) 1.0%,混 勻后保持酶解3h。冷却至室温，静置、过滤、弃去滤渣，减压浓缩滤液得木耳多糖粗提物；(4)将所得木耳多糖提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为 天津南开大学所生产的NKA-II型树脂；(5)用70%、80% |、90%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄 层色谱法跟踪检测，收集木耳多糖各阶段洗脱液；(6)将木耳多糖各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为40%以上木耳多糖半成
P
m ；(7)将所得木耳多糖半成品上硅胶层析柱，并用氯仿、正丁醇依次以3 1、4 1、 5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集木耳多糖各阶段洗 脱液；(8)将所收集的木耳多糖洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 98%以上木耳多糖。实施案例2 —种利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其步骤 如下(1)将干黑木耳粉碎后过10目蹄，以料液比为1 30的比例加热回流提取两次， 每次lh ；(2)将经(1)处理的黑木耳提取液高速离心分离，分别收集上清液和滤渣，合并滤 液，得初提物；(3)将所收获初提物加适量的水，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节其 PH值5. 0，然后将上述滤渣加入混合液中，加热至50°C，加入果胶酶(100万u/ml) 1.5%,混 勻后保持酶解3h。冷却至室温，静置、过滤、弃去滤渣，减压浓缩滤液得木耳多糖粗提物；(4)将所得木耳多糖粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南 开大学所生产的D4006型树脂；(5)用70%、80%、90%的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检 测，收集木耳多糖各阶段洗脱液；(6)将木耳多糖各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量50%以上木耳多糖半成
P
m ；(7)将所得木耳多糖半成品上硅胶层析柱，并用氯仿、正丁醇依次以3 1、4 1、 5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集木耳多糖各阶段洗
5脱液；(8)将所收集的木耳多糖洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 98%以上木耳多糖。实施案例3 —种利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其步骤 如下(1)将干黑木耳粉碎后过80目蹄，以料液比为1 20 50的比例加热回流提取 两次，每次lh;(2)将经(1)处理的黑木耳提取液高速离心分离，分别收集上清液和滤渣，合并滤 液，得初提物；(3)将所收获初提物加适量的水，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节其 PH值7. 5，然后将上述滤渣加入混合液中，加热至60°C，加入果胶酶(100万u/ml) 2.0%,混 勻后保持酶解3h。冷却至室温，静置、过滤、弃去滤渣，减压浓缩滤液得木耳多糖粗提物；(4)将所得木耳多糖粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树 脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；(5)用70%、80%、90% |的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱， 用薄层色谱法跟踪检测，收集木耳多糖各阶段洗脱液；(6)将木耳多糖各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量40%以上木耳多糖半成
P
m ；(7)将所得木耳多糖半成品上硅胶层析柱，并用氯仿、正丁醇依次以3 1、4 1、 5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集木耳多糖各阶段洗 脱液；(8)将所收集的木耳多糖洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 98%以上木耳多糖。
权利要求
一种利用大孔吸附树脂分离富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其特征在于，其步骤如下(1)将干黑木耳粉碎后以料液比为1∶20～50的比例加热回流提取两次，每次1h；(2)将经(1)处理的黑木耳提取液高速离心分离，分别收集上清液和滤渣，合并滤液，得初提物；(3)将所收获初提物加适量的水，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节其PH值3.0～7.5，然后将上述滤渣加入混合液中，加热至40～60℃，加入果胶酶(100万u/ml)0～2.0％，混匀后保持酶解0.5～3h。冷却至室温，静置、过滤、弃去滤渣，减压浓缩滤液得木耳多糖粗提物；(4)将所得木耳多糖粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集木耳多糖洗脱液；(6)将木耳多糖洗脱液浓缩回收洗脱剂，得木耳多糖半成品；(7)将所得木耳多糖半成品上硅胶层析柱，并以正丁醇、氯防以不同体积比进行洗脱，收集木耳多糖各阶段洗脱液；(8)将所收集到得木耳多糖洗脱液进行精制的木耳多糖。
2.根据权利要求1或2所述的利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法其 特质是所述的步骤(1)中，黑木耳粉后过10 80目筛再进行加热回流提取。
3.根据权利要求1或2所述的利用大孔吸附树脂富集纯黑木耳中木耳多糖的方法，其 特征是在所属的步骤(1)中，将干黑木耳粉碎后以料液比为1 20 50的比例加热回流 提取两次，每次Ih;
4.根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中五木耳多糖的方法，其 特征是所述的步骤(1)中，加热回流提取的方法为浸渍法、回流提取法，渗漉法、煎煮法、 连续提取法中的一种或一种以上。
5.根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其特 征是；所属的步骤(1)中，加入水的体积为黑木耳粉体积的20 50倍。
6.根据权利要求5所述的利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其特 征是在所述的步骤(3)中，加适量的水，使混合液的重量达到原料干重的50倍，调节PH值 所用的碱为盐酸。
7.根据权利要求6所述的利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其特 征是步骤(4)中所述吸附为静态吸附或动态吸附步骤(5)中所述的洗脱为用70 90% 的乙醇水溶液进行洗脱。
8.根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其特 征是在步骤(5)和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。
9.根据权利要求8所述的利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其特 征是步骤(7)中所采用氯仿与正丁醇得体积比为3 7 1。
10.根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法，其 特征是在步骤(8)中，采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化黑木耳中木耳多糖的方法。其特点是应用大孔吸附技术分离纯化木耳多糖，对木耳多糖的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的木耳多糖半成品和含量98％以上的木耳多糖终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附木耳多糖，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
文档编号C08B37/00GK101812137SQ20091021688
公开日2010年8月25日 申请日期2009年12月28日 优先权日2009年12月28日
发明者姚德利, 姚德坤, 姚航, 闫峰 申请人:大兴安岭科丽尔生物工程有限责任公司