专利名称：改性透明质酸聚合物组合物和相关的方法
技术领域：
本发明公开大致涉及具有低水平的官能团改性的透明质酸，通过该轻度改性透明质酸与合适的二官能性或多官能性反应物的控制反应所形成的混合物，以及相关的水凝胶和水凝胶前体组合物。这里所述的组合物为轻度交联且在活体内注射时具有低的促炎症特性，并且可以用作例如医用设备、生物医学粘合剂和密封剂，和用于生物活性剂的局部传递等。
背景技术：
透明质酸是广泛分布在结缔组织、上皮组织和神经组织中的自然产生的、阴离子性非硫酸化的糖胺聚糖。平均70 kg(lM磅)的人在他/她的身体中具有大致15克的透明质酸，其中的三分之一会每天发生转化(降解和合成)(Mern R. Eur J Cell Bio/ 83(7): 317-25，(2004) ) 0因为透明质酸在身体的许多组织中被自然地发现，因此是生物相容的，所以认为其极其适于生物医学应用。实际上，包括透明质酸(也称为hyaluronan)、其衍生化形式以及其结合物的许多聚合物材料可以用作可注射生物材料，以及用于医用设备和可植入材料中。应用包括将治疗分子传递到局部位点，用作粘合剂或密封剂，用于组织工程，用作关节滑液粘滞度补偿剂(viscosupplements)，和用于伤口愈合。透明质酸在以其自然产生形式施用和用作治疗剂时，会典型地从身体中快速清除，使得需要频繁给药。虽然在一个以上体外模型中，聚合物凝胶或凝胶前体可能显示出对反应化学和条件、凝胶化特性和/或治疗效果有利的性能，但是在某些情况下，该效果无法在体内或临床环境中转化成有益的性能。
发明内容
在第一方面中，提供的是通过与二乙烯基砜反应而改性到10%以下程度的透明质酸。具体地说，该透明质酸具有10%以下的通过与二乙烯基砜的加成反应而发生了衍生化的其羟基。在具体的实施方案中，该透明质酸使其羟基的1-10%衍生化成了 2_(乙烯基磺酰基)乙氧基。具有低水平的二乙烯基砜活化作用的所得活化透明质酸在这里一般称作(2-(乙烯基磺酰基)乙氧基 透明质酸或“VS-HA”。在又一个实施方案中，该透明质酸具有选自1%，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%和10%中的将羟基转化成2-(乙烯基磺酰基)乙氧基的转化率。在又一更特定的实施方案中，该透明质酸具有相对于每个二糖重复单元为约4-5%的将羟基转化成2-(乙烯基磺酰基)乙氧基的转化率。在又一个实施方案中，该乙烯基磺酰基)乙氧基Lic 透明质酸具有约700 至约3百万道尔顿的分子量。在第二方面中，提供的是通过乙烯基磺酰基)乙氧基)HC 透明质酸与具有两个以上硫醇基团的硫醇交联剂的反应所形成的水凝胶。 在相关实施方案中，该硫醇交联剂具有两个到约8个硫醇基团。在又一个实施方案中，该硫醇交联剂具有选自2，3，4，5，6，7和8中的数量的硫醇基团。在涉及所述第二方面的又一个实施方案中，该硫醇交联剂是经硫醇官能化的聚乙二醇(PEG)(即，PEG-硫醇)。在上述的另外的实施方案中，该聚乙二醇硫醇具有约250至约20，000道尔顿的
分子量。在相关实施方案中，该经硫醇官能化聚乙二醇是线性的且在各末端具有硫醇基团，即，为聚乙二醇二硫醇(PEG 二硫醇)。在又一个实施方案中，该经硫醇官能化聚乙二醇为四臂且具有季戊四醇核。在又一个实施方案中，该经硫醇官能化聚乙二醇具有多元醇核，该多元醇核选自甘油，甘油二聚物(3，3’ -氧基二丙烷-1，2- 二醇)，三羟甲基丙烷，山梨糖醇，季戊四醇和六甘油。在又一个实施方案中，通过乙烯基磺酰基)乙氧基)Ht 透明质酸与硫醇交联剂的反应所形成的水凝胶含有低于10%的未反应硫醇和低于10%的未反应乙烯基砜基团。残留的未反应硫醇基团的量可以通过例如使用埃尔曼氏(Ellman's)试验来测定。在又一其它实施方案中，通过乙烯基磺酰基)乙氧基透明质酸与硫醇交联剂的反应所形成的水凝胶含有约0. 5-5. 0%的聚合物相对于水的重量百分数(wt/wt)。 所得水凝胶的聚合物相对于水的示例性重量百分数在一个以上实施方案中为选自0. 5%， 1. 0%, 1，5%, 2. 0%, 2. 5%, 3. 0%, 3. 5%, 4. 0%, 4. 5% 和 5%。在又一个实施方案中，通过乙烯基磺酰基)乙氧基)Ht 透明质酸与硫醇交联剂的反应所形成的水凝胶是粒度在约0. 10-3. 0毫米范围的的颗粒的形式。在又一个实施方案中，上述水凝胶颗粒为含水浆料的形式。在仍然另一个实施方案中，在前述实施方案中的任何一个或多个中所述的水凝胶被分散在未改性的透明质酸的水溶液中。在又一其它和更特定的实施方案中，提供的是在透明质酸的盐水溶液中包含交联水凝胶颗粒的组合物，其中所述水凝胶颗粒是通过聚乙二醇二硫醇(PEG-二硫醇)与透明质酸的反应来形成的，所述透明质酸已用2-(乙烯基磺酰基)乙氧基将其羟基的1-10% 衍生化。在又一其它实施方案中，前述实施方案的任何一个或多个中所述水凝胶包括生物活性剂。在特定的实施方案中，该生物活性剂是皮质类留醇。在又一更具体的实施方案中，该生物活性剂是醋酸去炎松。在又一可选实施方案中，前述实施方案的任何一个或多个中所述的水凝胶包括活细胞。在又一实施方案中，通过乙烯基磺酰基)乙氧基) 透明质酸与双官能性或更大官能性硫醇交联剂的反应所形成的水凝胶在山羊关节注射模型中显示出低的促炎症特性(pro-inflammatory properties)。在具体的实施方案中，该水凝胶显示出如白细胞响应于相关的关节液所示的低的促炎症特性。在又一个具体的实施方案中，该水凝胶如综合观察评分所示，在山羊关节注射模型中显示出低的促炎症特性。在又一其它实施方案中，该水凝胶是无菌的。在又再一个实施方案中，这里提供的水凝胶被填装在注射器中。在又再一个实施方案中，提供的是将这里所述的任一水凝胶组合物施用于对象关节的关节内空间中的方法。在第三方面中，提供的是制备乙烯基磺酰基)乙氧基^lt 透明质酸的方法。该方法包括使透明质酸与二乙烯基砜在可有效让透明质酸二糖重复单元上的不高于约10%的羟基与二乙烯基砜反应的反应条件下进行反应，以形成乙烯基磺酰基)乙氧基透明质酸。在相关的实施方案中，该反应包括使透明质酸与摩尔过量的二乙烯基砜进行反应。在进一步的实施方案中，该反应步骤是在环境条件下进行的。在又一个实施方案中，该反应步骤在环境条件下进行10秒至约120秒。在又一个实施方案中，该反应步骤是在碱水溶液中进行的。在进一步的实施方案中，该方法进一步包括通过酸的添加来淬灭反应。在相关实施方案中，添加足够的酸来调节PH至约4-6. 5的范围。在第四方面中，这里所述的是制备水凝胶的方法。该方法包括使乙烯基磺酰基)乙氧基)^%透明质酸与具有两个以上硫醇基团的硫醇交联剂在可有效形成交联水凝胶的反应条件下进行反应。合适的硫醇交联剂包括经硫醇官能化的聚乙二醇，链烷烃二硫醇等。在相关实施方案中，该反应是在生理pH下进行。在又一个实施方案中，该反应是没有聚合引发剂存在的情况下进行的。在又一个实施方案中，该反应是没有应用外部能量源的情况下进行的。在又一个实施方案中，该反应是在20°C -45°C范围的温度下进行的。在又再一个实施方案中，水凝胶包括10%以下的未反应乙烯基砜或硫醇基团。优选，该水凝胶包括5%以下的未反应砜或硫醇基团。在特定的实施方案中，该水凝胶基本上不包括可检测到的未反应乙烯基砜或硫醇基团。在第五方面中，提供的是包括注射器的试剂盒，其中该注射器包含如上所述由(2-(乙烯基磺酰基)乙氧基)Ht 透明质酸与硫醇交联剂的反应所形成的水凝胶。在又一个相关实施方案中，该注射器包含如上述实施方案中任何一个或多个中所述的水凝胶，其中该水凝胶被分散在未改性的透明质酸的水溶液中。在相关实施方案中，该水溶液是盐水。在相关实施方案中，该注射器为适合于使用18-21号规格注射针的水凝胶关节内注射的形式。
在又一个相关实施方案中，该注射器包含如上述实施方案中任何一个或多个中所述的水凝胶，其中该水凝胶进一步包括生物活性剂。在相关实施方案中，该生物活性剂选自留类，生长因子，抗增殖剂和抗生素。在又一更特定的实施方案中，该水凝胶包含约 0. 01wt%至约20wt%的生物活性剂，这当然取决于该生物活性剂的效力。就是说，较低效力的药剂将典型地以上述范围的较高端例如约10-20wt%的浓度来包含在水凝胶中，而有高效力的生物活性剂将以上述范围的较低端例如约0. 01-3wt%的浓度来包含在水凝胶中。在生物活性剂是醋酸去炎松的特定实施方案中，该水凝胶包含约0. 1-1 wt%的生物活性剂。在又一个实施方案中，该注射器包含上述实施方案中任何一个或多个中所述的水凝胶，其中该水凝胶进一步包括活细胞。示例性的活细胞包括干细胞，主质 (parenchimal)干细胞，血液衍生的细胞和骨髓细胞。在第六方面中，提供的是通过施用包含被分散于水凝胶中的弱水溶性生物活性剂的这里所述的水凝胶来传递弱水溶性生物活性剂的方法。在第七方面中，所述的是通过将这里所述的任何一个或多个方面或实施方案的水凝胶注射到对象的关节如膝关节的关节内空间中，来治疗与骨关节炎、类风湿性关节炎、 其它炎症性关节炎和反复性使用(repetitive use)相关的急性和慢性炎症的方法。在具体的实施方案中，即，当水凝胶包含被引入其中的皮质类留醇时，该方法可有效地使得对软骨的损害低于在等同量的不含皮质类留醇的水凝胶夹含(hydrogel entrapment)的给药时所发生的软骨损害，这在山羊关节注射模型中通过在注射后观天的Mankin总评分来表征。 在相关的实施方案中，上述方法，即，水凝胶在关节的关节内空间中的注射，相对于所述水凝胶注射之前对象所经历的疼痛来说可有效地为对象提供一定程度的疼痛缓减。典型地， 疼痛缓减的起始是由对象在注射之后的约1小时至约1星期之间，更优选在注射之后的约 1小时到约3天之间的任何时刻所经历。就是说，疼痛缓减的起始典型地在注射后的约1， 2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23 或 24 小时内开始，或， 如果在起初二十四小时内没有开始，则在注射后的1，2，3，4，5，6或7天内开始。典型地，疼痛缓减的持续时间预计会持续在约3个月到9个月之间的任何时间，S卩，3，4，5，6，7，8，9个月或甚至更长。在第八方面中，提供的是通过在施用于对象之时或之前将皮质类留醇引入到交联水凝胶中，将皮质类留醇施用于患有骨关节炎的对象的关节的关节内空间中来减少对软骨的损害的方法。交联水凝胶一般是下面更详细描述的透明质酸系水凝胶。示例性的交联水凝胶是通过与二乙烯基砜反应改性到10%以下的程度，随后用具有两个以上硫醇基团的硫醇交联剂交联的透明质酸。令人吃惊地，通过将皮质类留醇引入到交联水凝胶中，与等同量的不含皮质类甾醇的水凝胶引入的给药相比，则对软骨造成更低的损害。在与以上所述内容相关的第九方面中，在通过将治疗有效量的皮质类留醇施用于对象的关节的关节内空间中来治疗骨关节炎的方法中，这里所提供的是包括施用皮质类甾醇的改进，该皮质类留醇为包含皮质类留醇的交联的水凝胶组合物的形式，据此，与等同量的不含皮质类留醇的水凝胶引入的给药相比可以减少对软骨的损害。在与第七、第八和第九方面相关的具体实施方案中，皮质类留醇选自氢化可的松，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，新戊酸替索考酮(tixocortol pivalate),强的松龙， 甲基强的松龙，强的松，去炎松，去炎松盐如醋酸去炎松，丙炎松氨丁酯，双醋酸去炎松(triamcinolone furetonide)，丙酮缩去炎松己酸酯，去炎松双乙酸盐，去炎松醇，莫米他松，安西缩松，布地缩松，丙缩羟强龙，氟轻松醋酸酯，氟轻松，哈西缩松，倍他米松，倍他米松磷酸钠，地塞米松，地塞米松磷酸钠，氟考龙，氢化可的松-17- 丁酸酯，氢化可的松-17-戊酸酯，阿克罗美他松二丙酸酯(aclometasone dipropionate)，倍他米松戊酸酯，倍他米松二丙酸酯，泼尼卡酯，去氢氯氟美松-17- 丁酸酯，氯氟美松-17-丙酸酯，氟考龙已酸酯，氟考龙新戊酸酯，醋酸氟泼尼定，二丙酸氯地米松一水合物，氟尼缩松，氟替卡松丙酸酯，莫米他松糠酸酯一水合物，和氟替卡松糠酸酯。在甚至更特定的实施方案中，该皮质类留醇是醋酸去炎松。在第十方面中，提供的是一种制剂，其包括夹含在这里所述的水凝胶的3维结构内的弱水溶性可溶性药物如甾类，随后将该制剂施用于关节的关节内空间中。在与上述内容相关的一个实施方案中，留类颗粒在水凝胶内的夹含可有效防止大部分的留类颗粒与关节组织的直接接触。在又一个相关的实施方案中，留类颗粒在水凝胶中的夹含可有效地使留类在关节中的局部浓度最大化，同时最大程度地减少其全身中的浓度。在仍然又一个实施方案中，留类颗粒在水凝胶中的夹含可有效地保护该留类颗粒从关节中过早清除。在仍然另外实施方案中，通过将留类夹含在水凝胶中，在与没有水凝胶夹含时所达到的治疗效能的情况下相比而言更低的总剂量下达到了该留类的治疗效力，同时最大程度地减少不希望的局部和全身副作用。在相关方面，所提供的是这里所述的水凝胶注射或植入到哺乳动物对象的骨、牙齿、神经、软骨、血管、软组织或其它组织上或中的用途。组合物、方法、试剂盒等另外实施方案将由下面的叙述，实施例和权利要求显而易见。从以上和以下叙述中可以看出，这里所述的每一个特征以及两个以上此类特征的每一个组合都包括在本方面公开的范围内，其中，包括在该组合中的特征不是互相不一致的。另外，任何特征或这些特征的组合可以特定地从本发明的任何实施方案中排出。本发明的另外的方面和优点在下面的叙述中进行阐述，特别是在结合所附的实施例和附图来考虑时。
图1是如实施例1所述制备的乙烯基砜改性的透明质酸(HA-VS)的1H NMR谱。以该NMR为基础，该透明质酸被测定为相对于每个二糖具有约4%的的水平的乙烯基砜取代。图2是曲线图，揭示了如实施例16中所述的相对于采样号的弱水溶性模型药物醋酸去炎松的释放率百分数。图3是曲线图，揭示了如实施例16中所述的每一个采样点的弱水溶性模型药物醋酸去炎松的累积释放质量。图4是曲线图，揭示了如实施例16中所述的每一个采样点的所释放醋酸去炎松的量。图5是如实施例17中所述相对于1. 5ml注射后M小时所评价的试验材料处理组的注射了试验材料l(Test Material 1)的山羊膝盖中的关节液白细胞计数(细胞/立方毫米)的图示。试验材料1 = HA-VS/PEG-(SH)2凝胶。图6是如实施例17中所述相对于1. 5ml注射后M小时所评价的试验材料处理组的注射了试验材料1的山羊膝盖中的关节液白细胞绝对计数(绝对值=总体积X关节液白细胞计数)的图示。试验材料1 = HA-VS/PEG-(SH)2凝胶。图7是如实施例17中所述相对于1. 5ml注射后M小时所评价的试验材料处理组的已注射的山羊膝盖的关节液白细胞分化分布(各组的平均值)的图示。对各试验材料显示了多形核白细胞(PMN)，淋巴细胞，单核细胞和嗜酸性粒细胞(Eos)的分布。图8是对于如实施例17中所述的各代表性试验材料的已注射的山羊膝盖的关节液，关节组织以及相结合的关节液和关节组织评分(表6)的平均总评分的图示，其中综合总评分=关节液评分+关节总评分。关节液评分或关节总评分的最大值是8并且其中O是正常值；综合总评分的最大值是16并且O是正常值。图9显示了在注射后14天时的来自山羊关节中的软骨样品的藏红0染色评分，该山羊关节已用实施例34中所详述的试验材料进行了处理。试验材料1 HA-VS-PEG-(SH)2，试验材料 2 =HA-VS-PEG-(SH) 2-TA0图10显示了在注射后观天时的来自山羊关节中的软骨样品的藏红0染色评分，该山羊关节已用实施例34中所详述的试验材料进行了处理。图11显示了在处理后观天时的来自山羊关节中的软骨样品的Mankin评分体系的结果，该山羊关节已用实施例34中所详述的试验材料进行了处理。图12和图13显示了分别在注射后第14天(图12)和第观天(图13)有藏红_0染色G0X)的代表性股骨内髁组织结构，详细描述在实施例34中。图14提供了相对于实施例45中所详述的1. 5 ml关节内注射后M小时所评价的试验材料和对照材料的全部动物的平均关节液白细胞计数(平均值+标准偏差)的图示。
具体实施例方式本发明在下文中更充分地描述。然而，本发明可以以许多不同的形式概括并且不应该认为限于这里所述的实施方案；相反地，提供这些实施方案以使本发明公开是彻底的和完全的，并且将本发明的范围表达给本领域中的那些技术人员。在这里列举的全部出版物、专利和专利申请，不论上文还是下文，除非另有说明，在此将它们的全部内容通过引用并入。相同的术语同时在通过引用并入本文的出版物、专利或专利申请中以及在本发明公开中进行定义的情况下，本发明公开中的定义代表主导定义。对于就其具体类型的化合物、化学过程等的说明所引用的出版物、专利和专利申请，与此类化合物、化学过程等相关的部分是该文件通过弓I用并入本文的那些部分。定义
必须指出的是，在本说明书中所使用的单数形式“一个”、“所述”和“该”除非上下文另外清楚地指明，否则包括复数指代。因此，例如，对于“聚合物”的提及包括单个聚合物以及两种以上相同或不同的聚合物。除非另外特定地注释，否则，这里的术语的定义是在有机合成以及聚合物和药物科学领域中使用的标准定义。在描述和要求本发明的权利时，下列术语根据如下所述的定义来使用。
“生物相容性聚合物”是具有下述降解产物的聚合物，该降解产物与活组织相容或可具有有益的生物学特性。生物相容性聚合物可以本身是生物相容的，和/或当与生物活性剂联合使用时可以是协同地生物相容的。术语“透明质酸聚合物”是指包括透明质酸的重复二糖亚单元的聚合物，其中该重复单元可以在D-葡糖醛酸的一个或多个位置上和/或二糖重复亚单元的D-N-乙酰葡糖胺单元上发生衍生化。透明质酸聚合物在含义上包括透明质酸(也称为hyaluronan)，衍生化的透明质酸，盐形式，透明质酸连接剂配合物，和透明质酸结合物。术语“透明质酸”是指未改性或非衍生化的透明质酸。术语“透明质酸衍生物”或“衍生化的透明质酸”或“改性透明质酸”是指已经通过与例如一种或多种的小化学结构部分如二乙烯基砜等反应而衍生化的透明质酸。硫醇衍生化的透明质酸聚合物是指具有三个或更多个二糖重复单元并包括至少一个巯基(硫醇)基团的上述透明质酸聚合物。术语“反应性”是指在普通的有机合成条件下容易地或在实际速率下进行反应的官能团(例如，存在于聚合物中)。与这些基团相对的是不反应或需要强催化剂或不切实际的反应条件来反应的那些基团(即，“非反应性”或“惰性”基团)。在水溶性聚合物如透明质酸的情况下，这里所述的“分子量”或分子重量是指由多角度光散射法测定的聚合物的标称平均分子量。分子量可以表达为数均分子量或重均分子量。除非另有说明，在这里对于分子量的全部提及是指数均分子量。术语“水凝胶”是指含水的三维亲水性聚合物网络或凝胶，其中该水是连续相且其中水含量大于50%(w/w)。这里所述的水凝胶典型地不需要引入交联引发剂或促进剂来实现所需的交联度。“无菌”组合物是使用USP无菌试验所确定的不含活微生物的组合物。参见“The United States Pharmacopeia，，(美国药典)，第 30 片反，The United States Pharmacopeial Convention :2008。这里使用的术语“轻度交联”或“具有低交联度”是指发生交联反应，使得可用交联位点中的约40%至约100%进行反应以产生最终的交联凝胶，其中用于形成凝胶的改性透明质酸起始原料具有10%以下的呈现活化/衍生化形式的其羟基，由此提供了总体认为是轻度交联的水凝胶。在山羊关节注射模型中显示出低的促炎症特性的水凝胶如下水凝胶，当在这里所述的山羊关节注射模型中评价时，在注射后M小时显示低于20，000个细胞/立方毫米的关节液白细胞计数，且优选在注射后M小显示低于15，000个细胞/立方毫米的关节液白细胞计数，其中该计数是从三个分别注射的动物中取得的平均计数。与等同剂量的没有引入皮质类留醇的所述水凝胶的给药相比而言“减少对软骨的损害”或“产生较少软骨损害”的含皮质类留醇的水凝胶典型地通过评价软骨损害的任何合适模型来表征，但是优选地，通过使用在这里详述的体内山羊膝盖注射模型来测量。注射后数据典型地在至少7天但不多于注射后观天时被收集。测量的优选标准是Mankin总评分；按照前面所述方法进行评价的与单独的药物相比的减少对软骨的损害的材料是当以等同量给药时与药物(即，皮质类留醇)相比在平均评分上有改进的一种材料。优选，引入了水凝胶的药物的Mankin总评分与当以无水凝胶夹含的形式给药时药物的Mankin总评分相比改进了至少一分或多分。可互换使用的术语“药物”或“药物活性剂”或“生物活性剂”或“活性剂”是指具有生物活性和适用于或用于治疗目的的任何有机或无机化合物或物质。蛋白质，激素，抗癌药，小分子化合物和模拟物(mimetics)，低聚核苷酸，DNA, RNA和基因治疗药都包括在“药物”的较宽定义中。正如这里所使用，对于药物的提及，以及这里对其它化合物的提及，在意义上包括呈现为化合物的可药用形式当中的任何一种形式的化合物，其中包括可使用的这里所述化合物的异构体如非对映异构体和对映异构体、盐、溶剂化物和多晶型，特殊晶形，以及外消旋混合物和纯异构体。在这里使用的术语“固体”是指非流体物质，其中包括结晶形式，它们的多晶型，非结晶无定形物质，沉淀，和颗粒等。这些固体形式的每一种可以具有不同尺寸，约0.01微米-2，000微米，例如约0. 01微米-1微米，1微米-100微米，100微米-1，000微米，1000微米-2000微米，1100微米-1500微米，和1500微米到2000微米。在这里所述的颗粒尺寸是指粒径，并且典型地通过过筛分析法来测定。典型描述的尺寸或范围对应于筛或网孔尺寸。对应于具体的网目或筛号，可以参考粒度换算表来确定尺寸(例如mm)。参见例如实施例39和40。“水不溶性药物”或“弱水溶性药物”是具有低于10 mg/mL的水溶解度的药物。这里所提供的术语组合物(或水凝胶或聚合物)的“有效量”或“药物学上有效量”或“治疗有效量”是指无毒但足够量的组合物来提供所需的响应如在对象中防止、减轻或消除疼痛。所需的准确量将因不同对象而不同，这取决于对象的种类、年龄和一般症状，所治疗的病症严重性，所使用的具体药物或药物类，组合物的具体性状，给药模式等。在任何个体情况下的合适“有效”量可由本领域中的普通技术人员使用常规实验来确定。“治疗”或“治疗”急性或亚慢性疼痛包括抑制疼痛，S卩，阻止发展或逆转疼痛，或缓解疼痛，即，减少对象所经受的疼痛的量。“任选的”或“任选地”是指随后所述的情形可以发生或不发生，并且该叙述包括其中该情形发生的情况和该情形不发生的情况。在提及某些特征或实体时的术语“基本上”是指在提及特征或实体时的显著程度或几乎完全地(即到85%或更高的程度)。术语“约”，特别在提及所给定的量时，在意义上包括加或减5%的偏差。可在随后的部分中见到其它定义。综述
本申请至少部分地以发明人的体内给药时具有极低的促炎症特性的水凝胶的发现为基础。在进行与本发明公开相关的研究时，发明人认识到，具有似乎有益的化学、生理和其它物理性能和在大量生物相容性和已接受的体外和体内模型中表现有利的许多生物相容性水凝胶可以引起炎症和疼痛，尤其在关节内注射时。这里描述的材料被发现具有显著低的促炎症特性，当在山羊关节注射模型中考察和与类似的水凝胶组合物相比较时。参见例如实施例17和图4-8。通常，在施用于关节的关节内空间中时(例如，当在山羊关节注射模型中考察时)，在与等同量的商购的关节滑液粘滞度补偿剂(viscosupplement)给药于关节的关节内空间中或等同量的这里所述的引入不含活性剂的水凝胶的给药相比时，该水凝胶显示出对软骨不良或不希望的副作用减少。
出乎意料地还发现，将皮质类留醇引入这里所述的交联水凝胶中实际上导致对软骨的更低损害，与等同量或更高剂量的以无水凝胶夹含形式的皮质类留醇的给药时所观察到的情况相比。参见例如实施例34和图9-13。此外，这里提供的结果表明该水凝胶的关节内注射在单独给药(即，不存在活性剂)或与皮质类留醇醋酸去炎松结合给药时均没有产生局部或全身效应。这里所述的优异水凝胶一般是通过具有充分特征化的、低水平的官能团改性的透明质酸与合适的双官能或多官能性交联剂的受控反应来形成的。所得水凝胶是在温和条件下形成的，即，不需要引发剂或促进剂或其它有害添加剂。所得水凝胶经设计为具有最低数量的未反应的反应性基团，且是从最低量的反应物和反应组分形成的。该水凝胶是轻度交联的，且也显示可用于经时地以持续和稳定的方式夹含和释放生物活性剂。参见例如图 2-3。下面现在更详细地讨论组合物、方法和试剂盒等的特征。衍牛化的诱明质酸聚合物
该水凝胶可以从各种的聚合物材料形成。优选的是改性至一定程度而含有一种或多种反应性官能团的可生物降解或可生物吸收的聚合物。优选，该聚合物是聚阴离子多糖 (PAS)。聚阴离子多糖的非排它性例子包括，例如，透明质酸(HA)，羧甲基纤维素(CMC)，羧甲基直链淀粉(CMA)，软骨素-4-硫酸盐，软骨素-6-硫酸盐，硫酸皮肤素，皮肤素-6-硫酸盐，硫酸肝素，肝素，硫酸角蛋白和它们的衍生物，和它们的结合物。此类聚合物是现有技术中已知的，并且已描述在例如美国专利No. 6，056，970中。其它可生物降解的聚合物包括纤维蛋白，纤维蛋白原，淀粉，聚(氨基酸)；肽，蛋白质，明胶和胶原。优选的聚合物是也称为hyaluronan的透明质酸。透明质酸是由通过交替的 β 1->3葡糖苷键和β 1->4氨基葡糖苷键所连接的N-乙酰基-D-葡糖胺和D-葡糖醛酸的交替二糖单元组成的天然线性多糖，因此重复单元是(1->4) - β -D-GlcA-(1->3) - β -D-Glc NAc。用于制备一种或多种的所述水凝胶的透明质酸典型地用一种或多种反应性结构部分如乙烯基砜、丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯等来衍生化。优选，该透明质酸用单个反应活性结构部分来衍生化。改性或衍生化的程度可以是在聚合物内反应活性官能团的1%_100%改性率范围中的任何值，虽然低水平的聚合物改性一般是优选的。一种示例性的改性透明质酸是通过透明质酸的羟基与二乙烯基砜的反应所衍生化的透明质酸。该透明质酸典型地具有在约1至约80%范围的反应性羟基的改性度。就是说，1%程度的改性或取代意指平均1%的该透明质酸二糖单元含有乙烯基砜基团。优选，该透明质酸具有约1-50%范围的反应性羟基的改性度。更优选，该透明质酸具有约1-25%范围的反应性羟基的改性度。在具体的实施方案中，该透明质酸通过与二乙烯基砜反应而改性到10%以下的程度。具体地说，在优选的实施方案中，该透明质酸具有10%以下的通过与二乙烯基砜的加成反应所衍生化的羟基。该透明质酸的羟基转化成乙烯基磺酰基)乙氧基)基团。所得活化透明质酸一般在这里称作乙烯基磺酰基)乙氧基)透明质酸或 VS-HA0尤其，透明质酸具有选自下列这些中的将羟基转化成2-(乙烯基磺酰基)乙氧基的转化率1%，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%和10%。另外地，该透明质酸可以具有落入在任何两个的前述百分数之间的范围内的羟基转化率例如，对于所提供整数的每一个组合，ι-ιο%, 2-10%, 3-10%, 4-10%等，和例如，2-7%，2-6%, 3-8%, 3_7%等。在仍然更特定的实施方案中，该透明质酸具有相对于每个二糖重复单元为约4-5%的将羟基转化成乙烯基磺酰基)乙氧基)基团的转化率。在某些情况下，透明质酸官能团改性的水平是充分表征(即，确定的) 以使交联剂浓度与其它参数一起的被调节和优化，从而控制后续的交联反应。母体聚合物的取代度/改性度可以通过许多合适方法中的任何一种来确定，例如NMR、UV或顶分析，或元素分析。计算聚合物如透明质酸的取代度百分数的优选方法是NMR，例如，质子NMR。参见例如实施例1，其中以屮NMR谱中对应于透明质酸的乙烯基砜和乙酰胺甲基两者的相对峰面积的比率为基础来确定透明质酸的改性程度。聚合物也可包含描述在PCT/US/2004/0407^(W0 2005/056608)中的酰胼-反应
性基团和/或氨基氧基-反应性基团，该发明公开的与该聚合物的衍生化和所得聚合物本身有关的相关部分通过引用将其全部内容引入本文。另外，聚合物可以是硫醇衍生化的，如硫醇衍生化的透明质酸。示例性的硫醇衍生化透明质酸聚合物包括在美国专利No 6，884，788 ；6, 620，927 ；6, 548，081,6, 537，979 ； 6，013，679 ；US 5，502，081 ；和5，356，883中描述的那些，这些文献的与硫醇衍生化聚合物相关的相关部分通过弓丨用将其全部内容引入本文。透明质酸聚合物的附加例子包括半胱氨酸衍生化透明质酸，其中包括但不限于公开于下列文献中的那些聚合物在“Controlled Release from Glycosaminoglycan Drug Complexes"R. V. Sparer 等人，第 6 章，第 107-119 页中；在 Τ. J. Roseman 等人， CONTROLLED RELEASE DELIVERY SYSTEMS, Marcel Dekker, Inc., New York(1983)中。另外的优选聚合物的例子包括通过经由烃基、芳基、取代烃基或取代芳基连接于 N-酰基脲基团上的侧挂硫醇基团所衍生化的透明质酸。用于这里所提供的组合物和方法中的示例性聚合物包括Carbylan -S(详细描述在国际专利出版物No. W02005/056608中)。另外的衍生化聚合物包括以共价键连接于反应性连接剂如二官能性或多官能性丙烯酸酯，烯丙基或甲基丙烯酸酯化合物上的透明质酸。透明质酸改性用的代表性连接剂包括但不限于，聚(乙二醇)_ 二丙烯酸酯(PEGDA)，聚(乙二醇)_ 二甲基丙烯酸酯 (PEGDM)，聚(乙二醇)-二丙烯酰胺(PEGDAA)和聚(乙二醇)-二甲基丙烯酰胺(PEGDMA)， 和它们的衍生物。上述连接剂的PEG-结构部分可以是例如包括2-100个或更多个亚单元的低聚物或聚合物。适合于聚合物如透明质酸的改性/官能化的其它连接剂包括葡聚糖丙烯酸酯，葡聚糖甲基丙烯酸酯，甲基丙烯酸葡聚糖缩水甘油基酯，甲基丙烯酸酯官能化透明质酸，丙烯酸酯官能化透明质酸，甘油二甲基丙烯酸酯，甘油1，3- 二甘油基二丙烯酸酯，山梨糖醇丙烯酸酯和它们的衍生物。衍生化透明质酸或其它聚合物典型地具有在约700-3，000, 000道尔顿的范围内的平均分子量，举例性的分子量范围是约1，000-2, 000, 000道尔顿，或约5，000-1, 000, 000 道尔顿。另外的合适分子量范围包括约50，000道尔顿至约1，000，000道尔顿，或约 100，000道尔顿至约1. 200, 000道尔顿，或约90，000道尔顿至约300，000道尔顿。透明质酸的分子量一般是平均分子量值，它可以例如通过多角度激光散射排阻色谱法(multi-angle laser light scattering exlusion chromatography (MALLS-SEC))来IlJ定。取决于它的来源，透明质酸可具有至多约3，或更优选至多约2的多分散性(Mw/Mn)。一般，透明质酸起始原料将具有较窄的分子量分布，其值低于约2. 5，更优选低于约2。透明质酸的示例性多分散性是约1.02至约2. 5，其中起始透明质酸可以具有约1.02，1.05,1. 1,1.2,1.3,1.3,1.5,1.6,1.7,1.8,1.9,2,0,2. 1，2. 2，2. 3，2. 4或2. 5，或甚至更大的多分散性。另外，用于衍生化的合适透明质酸起始原料可具有一定的粘度，典型地以在水中特定的浓度下的厘泊表示，后者对应于以上提供的平均分子量范围当中的任何一个或多个。交联剂
可有效形成具有这里所述的理想特征的水凝胶的交联剂的例子包括具有位于中心分子上的两个以上反应性基团的化合物，“C”。中心分子可以是线性或环状链烷烃，PEG低聚物或聚合物，或任何其它此类合适中心分子。对于PEG型的交联剂，该PEG可以是线性，支化(具有两个聚合物分支)，或多臂的(例如，具有3，4，5，6，7，8个或更多个聚合物臂)。因此，在这种情况下，中心分子将典型地是线性PEG，具有2个分支的支化PEG，或具有从中心核发散的PEG分支的多分支PEG。该多分支聚合物的示例性核包括赤藓醇，季戊四醇，三羟甲基丙烷，甘油，甘油二聚体(3，3’ -氧基二丙烷-1，2- 二醇)，甘油低聚物，山梨糖醇，六甘油，等等。例如，该交联剂可以是有硫醇或丙烯酸酯基团位于其上的中心分子“C”。含硫醇的交联剂包括两个以上硫醇基团。此类硫醇基团将与例如在乙烯基砜衍生化透明质酸内的乙烯基砜进行反应。示例性的硫醇交联剂包括PEG-二硫醇(HS-PEG-SH)，3分支PEG-三硫醇(甘油核)，4分支PEG-四硫醇(季戊四醇核)，或8-分支PEG-八硫醇(六甘油核)。上述多分支PEG试剂也可具有少于用硫醇功能化的全部分支(的分支数量)。另外的有PEG作为中心分子的合适硫醇试剂可以从Laysan Bio (Arab, Alabama)获得，以及芳族二硫醇如可从NanoScience获得的那些。其它合适硫醇交联剂包括二巯基丁二酸，2，3_ 二巯基丙磺酸，二氢硫辛酸，经硫醇官能化葡聚糖，和经硫醇官能化透明质酸。也可使用具有位于中心分子上的末端丙烯酸酯基团的交联剂。例如，适合作为交联剂的是其中硫醇基团被丙烯酸酯或甲基丙烯酸酯基团替代的以上所述的中心分子。交联剂的其它例子包括描述在PCT/US/2004/0407^中的那些。交联剂也包括包含丙烯酸酯、烯丙基或甲基丙烯酸酯基团的分子。丙烯酸酯，烯丙基或甲基丙烯酸酯交联剂可以在性质上是小分子或聚合物。在一个实施方案中，该连接剂选自于聚(乙二醇)-二丙烯酸酯(PEGDA)，聚(乙二醇)-二甲基丙烯酸酯(PEGDM)，聚 (乙二醇)-二丙烯酰胺(PEGDAA)和聚(乙二醇)-二甲基丙烯酰胺(PEGDMA)，葡聚糖丙烯酸酯，甲基丙烯酸葡聚糖酯，甲基丙烯酸葡聚糖缩水甘油基酯，甲基丙烯酸酯官能化透明质酸，丙烯酸酯官能化透明质酸，甘油二甲基丙烯酸酯，甘油1，3- 二甘油基二丙烯酸酯，山梨糖醇丙烯酸酯和它们的衍生物。交联剂的分子量典型地低于改性透明质酸或以上所述的其它聚合物的分子量。 一般，交联剂的分子量是约200至约20，000道尔顿。交联剂的另外的示例性分子量范围是约 1 ,000 至约 10，000 道尔顿(例如，具有约 lkD，2kD，3kD，4kD，5kD，6kD，7kD，8kD，9kD 或 10 kD的分子量，其中kD等于千道尔顿)或甚至约1，000-5，000道尔顿。交联剂如PEG 二硫醇，或以上所述的其它合适交联剂中的任何一种的示例性分子量包括约3350，3400，和5000道尔顿。生物活性剂
在这里提供的水凝胶、水凝胶前体和相关组合物和/或试剂盒可以任选地包含生物活性剂。包括在这里所提供的组合物和结合物中的生物活性剂包括抗微生剂，抗生素，镇痛药，抗生素，抗增殖/抗有丝分裂剂，其中包括天然产物如长春花生物碱(例如长春花碱，长春新碱，和长春瑞宾)，紫杉醇，印idipodophyllotoxinM例如表鬼白毒素吡喃葡糖苷，表鬼白毒噻吩糖苷)，抗生素(放线菌素(更生霉素)道诺红菌素，亚德利亚霉素和依达比星)，anthracyclines，米托蒽醌，博来霉素，plicamycin(光神霉素)和丝裂霉素，酶(L-天冬酰胺酶)；抗增殖/抗有丝分裂的烷基化剂如氮芥类(二氯甲二乙胺，环磷酰胺和类似物，苯丙氨酸氮芥，苯丁酸氮芥)，氮丙啶和甲基蜜胺(六甲基蜜胺和硫替派)，烷基磺酸盐-白消安，亚硝基脲(亚硝脲氮芥(BCNU)和类似物，链脲霉素)， trazenes-dacarbazinine (DTIC)；抗增殖/抗有丝分裂的抗代谢药如叶酸类似物(氨甲喋呤)，嘧啶类似物(氟尿嘧啶，5-氟脱氧尿苷，和阿糖胞苷)，嘌呤类似物和相关抑制剂 (巯基嘌呤，2-氨基嘌呤-6-硫醇，喷司他丁和2-氯脱氧腺苷[克拉立平])；钼配位络合物(顺氯氨钼，顺二氨环丁烷羧酸钼)，普鲁苄胼，羟基脲，米托坦，氨基导眠能；激素(例如雌性激素)；抗凝血剂(肝素，合成肝素盐和凝血酶的其它抑制剂)；纤维蛋白溶解剂(如组织纤溶酶原激活物，链激酶和尿激酶)，阿斯匹林，潘生丁，噻氯匹定，氯吡格雷，阿昔单抗(abciximab)；抗迁移剂；抗分泌剂(如布雷菲德菌素A)；消炎药如肾上腺皮质类固醇类(氢化可的松，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，新戊酸替索考酮，强的松龙，甲基强的松龙，强的松，醋酸去炎松(或去炎松的任何其它可药用盐)，去炎松，莫米他松，安西缩松， 布地缩松，丙缩羟强龙，氟轻松醋酸酯，氟轻松，哈西缩松，倍他米松，倍他米松磷酸钠，地塞米松，地塞米松磷酸钠，和氟考龙，氢化可的松-17- 丁酸酯，氢化可的松-17-戊酸酯，阿克罗美他松二丙酸酯，倍他米松戊酸酯，倍他米松二丙酸酯，泼尼卡酯，去氢氯氟美松-17- 丁酸酯，氯氟美松-17-丙酸酯，氟考龙已酸酯，氟考龙新戊酸酯，和醋酸氟泼尼定。二丙酸氯地米松一水合物，氟尼缩松，氟替卡松丙酸酯，莫米他松糠酸酯一水合物，醋酸去炎松， 氟替卡松，糠酸酯，非留类药物(nonsteroidal agents)(水杨酸衍生物例如阿斯匹林)； 对氨基苯酚衍生物，即acetominophen ；吲哚和茚乙酸(消炎痛，舒林酸，和etodolac)，杂芳基乙酸(甲苯酰吡啶乙酸，双氯酚酸钠，和酮咯酸)，芳基丙酸类(异丁苯丙酸和衍生物)，邻氨基苯甲酸(扑湿痛和甲氯灭酸)，烯醇酸(吡罗昔康，替诺西康，苯基保泰松，和 oxyphenthatrazone)，萘丁美酮，金化合物(金诺芬，硫金代葡萄糖，硫代马来酸金钠盐)； 免疫抑制剂(环孢灵，藤霉素(Π(-506)，sirolimus (雷帕霉素)，咪唑硫嘌呤，霉酚酸盐 mofetil)；促有丝分裂的或形态产生的生长因子蛋白质，肽或模拟物；血管内皮细胞生长因子(VEGF)，成纤维细胞生长因子(FGF)，转化生长因子-β (TGF-β)超家族成员(其中包括TGF-β和骨形态产生蛋白质(BMP)如BMP-2、3、4、5、6、7、8 ；胰岛素和胰岛素样生长因子 (IGF)，肝细胞生长因子(HGF)，表皮生长因子(EGFR)，刺猬蛋白质(SHH和IHH)，苯丙酸诺龙，抑制素，除去矿物质的骨(DBM)和血小板衍生生长因子(PDGF)，造血生长因子(G-CSF， CSF-I, GM-CSF，红细胞生成素，细胞活素和淋巴细胞活素，其中包括白细胞间介素族(IL-1 至34))，干扰素，神经生长因子(NGF)，中和剂，拮抗剂或激动剂抗体，生长因子受体激动剂或拮抗剂，一氧化一氮给体；抗感应低聚核苷酸，转录因子，信号级联放大媒介剂，和它们的结合物。 抗生素包括林肯霉素家族的抗生素(指最初从林肯链霉菌属(str印tomyces lincolnensis)回收的抗生素的种类)；四环素家族的抗生素(指最初从生金色链霉菌回收的抗生素药的种类)；硫型抗生素如磺酰胺；等等。林肯霉素家族的示例性抗生素包括林肯霉素本身(6，8-双脱氧-6- [ [ (1-甲基-4-丙基-2-吡咯烷基)-羰基]氨基_]-1-硫代-L-threo- -D-galacto-octopyranoside)，氯林肯霉素，林肯霉素的7-脱氧，7-氯衍生物(例如，7-氯-6，7，8-三脱氧-6- [[ (1-甲基-4-丙基-2-吡咯烷基)羰基]氨基]硫代_L_th reo- -D-galacto-octopyranoside)，和它们的可药用的盐和酯。四环素家族的示例性抗生素包括四环素本身4-(二甲基氨基)_1，4，4(1，5，5(1，6，11，12 α -八氢-3,6, 12，12 α -五羟基-6-甲基-1，11- 二氧代-2-并四苯羧酰胺)，氯四环素，土霉素，四环素，地美环素，吡咯甲基四环素，甲烯土霉素和强力霉素和它们的药物学上可接受的盐和酯，特别是酸加合盐如盐酸盐。示例性硫型抗生素包括，但不限于，磺酰胺磺胺醋酰，苯酰磺胺，磺胺嘧啶，周效磺胺，磺胺甲基嘧啶，磺胺二甲嘧啶，磺胺甲噻二唑，磺胺甲基异恶唑，和它们的药理学上可接受的盐和酯，例如，乙酰磺胺钠。抗微生物剂和/或抗生素进一步包括化合物如红霉素，杆菌肽，新霉素，青霉素，多粘菌素B，四环素，紫霉素，氯霉素和链霉素，唑啉头孢菌素， 氨苄青霉素，azactam，托普霉素，氯林肯霉素和庆大霉素。镇痛药包括化合物如利多卡因，苯佐卡因，和麻卡因。这里所提供的水凝胶也可包括活细胞。示例性的活细胞包括干细胞，主质 (parenchimal)干细胞，血液衍生的细胞，和骨髓细胞。在一个优选的实施方案中，该水凝胶包括皮质类留醇。合适皮质类留醇的例子包括氢化可的松，醋酸氢化可的松，醋酸可的松，新戊酸替索考酮，强的松龙，甲基强的松龙， 强的松，去炎松，去炎松盐如醋酸去炎松，丙炎松氨丁酯，双醋酸去炎松，丙酮缩去炎松己酸酯，去炎松双乙酸酯，去炎松醇，莫米他松，安西缩松，布地缩松，丙缩羟强龙，氟轻松醋酸酯，氟轻松，哈西缩松，倍他米松，倍他米松磷酸钠，地塞米松，地塞米松磷酸钠，氟考龙，氢化可的松-17-丁酸酯，氢化可的松-17-戊酸酯，阿克罗美他松二丙酸酯，倍他米松戊酸酯， 倍他米松二丙酸酯，泼尼卡酯，去氢氯氟美松-17- 丁酸酯，氯氟美松-17-丙酸酯，氟考龙已酸酯，氟考龙新戊酸酯，醋酸氟泼尼定，二丙酸氯地米松一水合物，氟尼缩松，氟替卡松丙酸酯，莫米他松糠酸酯一水合物，和氟替卡松糠酸酯。用于这里提供的水凝胶制剂中的一种优选化合物是去炎松 (11 β，16 α )-9-氟-11，16，17，21-四羟基孕甾_1，4_ 二烯-3，20-二酮)，或它的可药用盐或溶剂化物。下面显示醋酸去炎松的结构。
权利要求
1.透明质酸，其10%以下的羟基通过与二乙烯基砜反应而衍生化。
2.权利要求1所述的透明质酸，其羟基的1-10%已衍生化成2-(乙烯基磺酰基)乙氧基(“2-(乙烯基磺酰基)乙氧基^ltw透明质酸”)。
3.权利要求2所述的透明质酸，其中所述透明质酸具有选自1%，2%，3%，4%，5%，6%，7%，8%，9%和10%中的将羟基转化成2-(乙烯基磺酰基)乙氧基的转化率。
4.权利要求2所述的透明质酸，其具有相对于每个二糖重复单元为约4-5%的将羟基转化成2-(乙烯基磺酰基)乙氧基的转化率。
5.权利要求1-4中任何一项所述的透明质酸，其具有700至3百万道尔顿的平均分子量。
6.通过权利要求1-5中任何一项所述的透明质酸与具有两个以上硫醇基团的硫醇交联剂的反应所形成的水凝胶。
7.权利要求6所述的水凝胶，其中所述硫醇交联剂具有两个到八个硫醇基团。
8.权利要求6所述的水凝胶，其中所述硫醇交联剂具有选自2，3，4，5，6，7和8中的数量的硫醇基团。
9.权利要求6所述的水凝胶，其中所述硫醇交联剂是经硫醇官能化的聚乙二醇。
10.权利要求9所述的水凝胶，其中所述经硫醇官能化的聚乙二醇具有约250至约20, 000道尔顿的分子量。
11.权利要求10所述的水凝胶，其中所述经硫醇官能化的聚乙二醇是聚乙二醇二硫醇(PEG 二硫醇)。
12.权利要求9所述的水凝胶，其中所述经硫醇官能化的聚乙二醇具有多元醇核，该多元醇核选自甘油，甘油二聚物(3，3’-氧基二丙烷-1，2-二醇)，三羟甲基丙烷，山梨糖醇，季戊四醇和六甘油。
13.权利要求12所述的水凝胶，其中所述经硫醇官能化的聚乙二醇为四臂且具有季戊四醇核。
14.权利要求6-13中任何一项所述的水凝胶，其包括低于10%的未反应硫醇和低于10%的未反应乙烯基砜基团。
15.权利要求6-14中任何一项所述的水凝胶，其包括约0.5-5. 0%的聚合物相对于水的重量百分数(wt/wt)。
16.权利要求6-15中任何一项所述的水凝胶，其包括生物活性剂。
17.—种组合物，其包括在透明质酸的水溶液中的权利要求6-15中任何一项所述的水凝胶的颗粒。
18.权利要求17所述的组合物，其中所述水凝胶颗粒具有约0.10-3. 0毫米的尺寸。
19.权利要求17或18所述的组合物，其为含水浆料的形式。
20.权利要求17-19中任何一项所述的组合物，其中所述水溶液是盐水。
21.权利要求17-20中任何一项的无菌组合物。
22.权利要求17-21中任何一项所述的组合物，其中进一步包括生物活性剂。
23.权利要求22所述的组合物，其中所述生物活性剂是皮质类甾醇。
24.权利要求23所述的组合物，其中所述皮质类留醇是醋酸去炎松。
25.权利要求22所述的组合物，其包括活细胞。
26.权利要求17-25中任何一项所述的组合物，其填装在注射器中。
27.权利要求6-16中任何一项所述的水凝胶，其填装在注射器中。
28.权利要求沈所述的组合物或权利要求27所述的水凝胶，可经由21号规格注射针挤出。
29.权利要求6-16中任何一项所述的水凝胶用于施用至对象关节的关节内空间中的用途。
30.权利要求17-25中任何一项所述的组合物用于施用至对象关节的关节内空间中的用途。
31.权利要求四或权利要求30所述的用途，用于治疗急性或慢性炎症。
32.权利要求31所述的用途，其中所述急性或慢性炎症与骨关节炎，类风湿性关节炎，其它炎症性关节炎以及反复性使用相关。
33.权利要求6-16中任何一项所述的水凝胶用于注射或植入至哺乳动物对象的骨， 牙齿，神经，软骨，血管，软组织或其它组织上或中的用途。
34.权利要求17-25中任何一项所述的组合物用于注射或植入至哺乳动物对象的骨， 牙齿，神经，软骨，血管，软组织或其它组织上或中的用途。
35.制备乙烯基磺酰基)乙氧基)He 透明质酸的方法，它包括使透明质酸与二乙烯基砜在可有效让该透明质酸二糖重复单元上的不高于约10%的羟基与二乙烯基砜反应的反应条件下进行反应，由此形成O-(乙烯基磺酰基)乙氧基) 透明质酸。
36.权利要求35所述的方法，其包括使透明质酸与摩尔过量的二乙烯基砜进行反应。
37.权利要求35或权利要求36所述的方法，其中反应步骤是在环境条件下进行的。
38.权利要求35-37中任何一项所述的方法，其中反应步骤进行10秒至约120秒。
39.权利要求35-38中任何一项所述的方法，其中反应步骤是在碱水溶液中进行的。
40.权利要求39所述的方法，其中该方法进一步包括通过酸的添加来淬灭反应。
41.制备权利要求6-13中任何一项所述的水凝胶的方法，其包括使乙烯基磺酰基)乙氧基透明质酸与具有两个以上硫醇基团的硫醇交联剂在有效形成交联水凝胶的反应条件下进行反应。
42.权利要求41所述的方法，其中所述反应是在生理pH下进行的。
43.权利要求41或权利要求42所述的方法，其中所述反应是在聚合引发剂不存在的情况下进行的。
44.权利要求43所述的方法，其中所述反应是在没有施加外部能量源的情况下进行的。
45.权利要求44所述的方法，其中所述反应是在20°C-45°C范围的温度下进行的。
全文摘要
本申请提供包含具有低水平的官能团改性的透明质酸的组合物，通过该轻度改性透明质酸与合适二官能性或多官能性交联剂的控制反应所形成的混合物，以及水凝胶前体组合物和所得水凝胶。该组合物为轻度交联且在活体内注射时具有低的促炎症特性，并且可以用作例如医用设备、生物医学粘合剂和密封剂，和用于生物活性剂的局部传递等。
文档编号C08J3/075GK102573941SQ201080044014
公开日2012年7月11日 申请日期2010年7月23日 优先权日2009年7月30日
发明者D.M.格拉韦特, G.Y.丹尼洛夫, 何平人 申请人:卡比兰生物外科公司