专利名称：透明质酸的提纯方法
技术领域：
本发明涉及透明质酸类的提纯方法，用于该提纯方法的提纯剂以及活性炭，和它们的制造方法。
背景技术：
透明质酸，除了作为化妆品的保湿剂以外，还用作眼科、骨科、皮肤科等的药剂制品。透明质酸可以从动物组织，例如，可以从鸡的鸡冠、牛眼玻璃体等的提取物制造而得，但因为作为杂质的硫酸软骨素等的混入，或因组织内含有透明质酸酶等使其容易被低分子量化，也进行具有透明质酸生产能力的微生物的培养，从培养液中制造透明质酸(发酵法)(非专利文献I以及专利文献I)。 使用提取法或发酵法制造得到的透明质酸中，存在蛋白质或致热源等杂质，因而对将这些杂质分离去除后得到高纯度的制品的方法进行了研究。特别是制造的初期阶段中的杂质的去除，能够减轻之后的提纯工序的负荷，有望开发出能够作为药剂制品使用的高纯度制品的方法。作为这样的例子，公开了例如有在发酵液中加入乙醇等有机溶剂使得透明质酸析出与杂质分离的提纯法，或使用阴离子交换树脂从发酵液中去除致热源或蛋白质等的透明质酸提纯法(专利文献2)。非专利文献I :Journal of General Microbiology, 85, 372-375，1976专利文献I :日本国专利公报“特公平4-12960号公报”专利文献2 日本国专利公报“特开昭63-12293号公报”
发明内容
然而，要得到能够工业规模生产的作为注射液等的药剂制品来使用的高纯度透明质酸类，还存在(1)因为在初期阶段杂质的去除没有充分进行，使得后续工序的负荷大
(2)操作复杂且透明质酸类的回收率低等，还需要得到进一步的改善的需求点。鉴于上述情况，本发明旨在提供一种简便且高收率的，用于工业规模下的高纯度透明质酸类的提纯方法。此外，本发明也旨在提供用于该提纯方法的提纯剂、活性炭等，或其制造方法。本发明人等，为了达到上述目的，对从含有透明质酸类的溶液中高效地分离去除杂质，简便且高效地得到高纯度的透明质酸类的提纯方法，进行了各种研究，结果发现使用经特定的预处理方法制备的活性炭，可以高效地吸附去除杂质，完成了本发明。也就是说，本发明提供一种包括，使含有透明质酸及/或其盐和杂质的透明质酸类溶液，与活性炭悬浊液相接触的工序的，透明质酸及/或其盐的提纯方法。该提纯方法，通过使用活性炭，能够高效地吸附去除杂质。也就是说，本发明提供一种透明质酸类的提纯方法，包括使活性炭在水性液体中悬浮得到活性炭悬浊液的工序、该活性炭悬浊液在100°C以上加热20分钟以上的工序、将该加热后的活性炭悬浊液搅拌冷却的工序、使含有透明质酸类和杂质的透明质酸类溶液与该搅拌冷却后的活性炭悬浊液相接触的工序。此提纯方法，通过使用预处理为适用于透明质酸类提纯的状态的活性炭，能够高效地吸附去除杂质。此外，本发明提供一种透明质酸类的提纯剂的制造方法，包括使活性炭在水性液体中悬浮得到活性炭悬浊液的工序、该活性炭悬浊液在100°C以上加热20分钟以上的工序、将该加热后的活性炭悬浊液搅拌冷却的工序。此制造方法，通过将活性炭预处理为适用于透明质酸类提纯的状态，能够制造出可以高效地吸附去除杂质的透明质酸类提纯剂。此外，本发明提供一种活性炭的预处理方法，包括使活性炭在水性液体中悬浮得到活性炭悬浊液的工序、该活性炭悬浊液在100°c以上加热20分钟以上的工序、将该加热后的活性炭悬浊液搅拌冷却的工序。该预处理方法，能够将活性炭预处理为适用于透明质酸类提纯的状态。此外，本发明提供一种透明质酸类的提纯剂，其含有通过下列方法制造的活性炭，该方法包括使活性炭在水性液体中悬浮得到活性炭悬浊液的工序、该活性炭悬浊液在100°C以上加热20分钟以上的工序、将该加热后的活性炭悬浊液搅拌冷却的工序。此提纯 齐U，因含有被预处理为适用于透明质酸类提纯的状态的活性炭，能够高效地吸附去除杂质。
具体实施例方式〔用语说明〕本说明书中的“透明质酸类”包括游离的透明质酸、以及在不损害本发明目的的范围内能够使用的任意透明质酸盐(并非限定于此，例如、钠盐、钾盐、钙盐、锂盐等金属盐，盐酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐等酸加成物等)或水合物、或以上这些的混合物。在此，透明质酸是指，N-乙酰-D-葡糖胺与D-葡萄糖醛酸相结合的双糖单元重复相连成链的高分子量的多糖类，各种盐主要是指葡萄糖醛酸部分呈盐的形式。透明质酸，通过可以折叠的链部分与D-葡萄糖醛酸部分的羧基的负电荷的相互作用，使其容易向空間扩展，因而能够与大量的水结合形成凝胶。此外，即使是低浓度，由于分子间作用力强，所以具有较高的粘性。从这样的作用出发，例如，具有湿润关节的作用、软化皮肤的作用等，生理上也担当这样的角色。透明质酸类中，也已知分子量约为200万Da的透明质酸钠，与分子量约为80万Da的物质相比，作为药剂制品，对于变形性膝关节病、肩周炎、慢性类风湿关节炎等的治疗能发挥优良的疗效(薬理^治療，Vol. 22，No. 9，289 (1994);薬理i治療，Vol. 22，No. 9，319(1994))。此外，在其他方面，已知被用于外科手术后的粘连的预防，还已知用作皮肤科领域、眼科领域中的药剂制品的效果，一部分已经被普遍用于临床。作为药剂制品被使用时，优选使用平均分子量为100万以上的透明质酸类。进而，考虑到获取和处理的容易程度时，优选平均分子量为100万 500万Da的透明质酸类作为药剂制品，特别优选平均分子量为150万 400万Da的透明质酸类。此外，如此高分子量的透明质酸类使用于化妆品用途时，从其高保湿力来说，也能发挥优良的效果。作为药剂制品，作为溶解透明质酸类的注射用溶解剂，可以酌情使用在注射用水、生理盐水等中，加入了含有如酸、碱、磷酸盐的缓冲剂的pH调节剂等通常使用的注射用溶解剂(例如，各国药典认可的注射用溶解剂)。这些透明质酸类，可以是通过从动物组织中提取的提取方法制造而得的，也可以是通过利用生产透明质酸的微生物菌株使之发酵而得的发酵法制造而得的。然而，因为从动物组织中提取得到的透明质酸中，其他粘多糖等杂质比较多，分子量也小，所以优选使用通过发酵法得到的。适用于本发明的发酵法的一个例子中，例如使用链球菌属微生物通过已知方法能够得到透明质酸类。用于本发明的方法等的溶液，优选原封不动使用培养液，当然，也可以使用经已知方法，例如离心分离或过滤处理等，进行了除菌的溶液。根据不同情况，也可以进行经透析处理去除低分子化合物，经精密过滤处理去除不溶于水的微粒等操作，也可以使用加入乙醇等水溶性有机溶剂析出提纯透明质酸的物质。此外，也可以使用经氧化铝等处理过的物质。
本说明书中的“链球菌”包括，能够生成透明质酸的链球菌属(Streptococcus)的任意细菌 其突变株。特别是，优选使用如专利文献2中记载的马链球菌FM-100(微工研菌寄第9027号)、如日本特开平2-234689号公报中所记载的马链球菌FM-300 (微工研菌寄第2319号)能够即高收率又稳定地生产透明质酸的突变株。作为适用于透明质酸生产的链球菌属的细菌的其他例子，虽然并不限定于此，可以列举出，例如，马链球菌(Streptococcusequi)、兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)、似马链球菌(Streptococcusequisimilis)、停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)、化胺链球菌(Streptococcuspyogenes)以及其突变株等。本说明书中的“平均分子量”除特别注明外，表示透明质酸类平均分子量时，均为粘度平均分子量。粘度平均分子量能够通过本领域技术人员常用的方法来求得。优选能够使用各国药典等一般使用的测定方法，更优选能够使用日本药典中所使用的测定方法求得。作为一个例子，但并不限定于此，例如，其平均分子量，使用特性粘度[n]，可以根据下列公式求得。式I
权利要求
1. 一种透明质酸及/或其盐的提纯方法，包括使含有透明质酸及/或其盐和杂质的透明质酸类溶液与活性炭悬浊液相接触的工序。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种简便且高收率的用于工业规模下的高纯度透明质酸类的提纯方法。本发明提供一种透明质酸及/或其盐的提纯方法，包括使含有透明质酸及/或其盐和杂质的透明质酸类溶液，与活性炭悬浊液相接触的工序。
文档编号C08B37/08GK102803298SQ20108006552
公开日2012年11月28日 申请日期2010年3月17日 优先权日2010年3月17日
发明者香坂昌信, 石毛克己, 日置和利, 辻强志 申请人:电气化学工业株式会社