专利名称：应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法
技术领域：
本发明属于功能性食品开发技术领域，涉及功能性食品活性成分多糖的分离纯化方法和黑木耳的利用，特别是一种从黑木耳中分离制备具有抗肿瘤活性多糖的方法。
背景技术：
黑木耳是一种营养丰富的食用菌，不仅具有显著的抗凝和阻止胆固醇在血管上的沉积，防止血栓形成的作用，而且我国中医证实黑木耳具有很好的抗肿瘤效果，根据文献报道黑木耳的抗肿瘤效果与存在的黑木耳多糖具有很大关系。目前黑木耳多糖的分离方法主要是采用柱层析色谱(轴色谱)方法，采用径向色谱分离具有抗肿瘤的作用的黑木耳多糖未见文献报道。现有的关于抗肿瘤活性多糖的方法主要是采用柱层析色谱方法，其局限是分离效率低、分离速度慢，其次，柱层析色谱方法大批量制备较困难。现有的黑木耳多糖，其结构式为
权利要求
1.应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特征是包括如下步骤1)、将黑木耳放入65 70°C热水中保温浸提16(T200min，得黑木耳多糖提取液；2)、将所述黑木耳多糖提取液浓缩，得浓缩液；所述浓缩液中碳水化合物的含量为 2. 5 3. Omg/ml ；在所述浓缩液中加入占浓缩液体积40飞0%的Savag试剂，震荡离心后，所得的上清液 为去除蛋白的多糖水溶液；3)、在所述去除蛋白的多糖水溶液中加入体积浓度>95%的乙醇进行醇沉，得沉淀；所 述体积浓度> 95%的乙醇是去除蛋白的多糖水溶液体积的1. 8^2. 2倍；将所述沉淀用体积浓度> 95%的乙醇进行清洗；得含有抗肿瘤活性的黑木耳粗多糖；4)、将所述含有抗肿瘤活性的黑木耳粗多糖冷冻干燥，得冻干后的黑木耳粗多糖；5)、将冻干后的黑木耳粗多糖按照lg/15 20ml的料液比溶于蒸馏水中，得样品溶液；将样品溶液泵入径向色谱仪，样品溶液的上样量为25 50ml ;选用DEAE-52纤维素作为填料；分别用以下2种洗脱剂进行洗脱蒸馏水和浓度为0. 2M的NaCl溶液，流速均为 7. 5 8. 5ml/min,每种洗脱剂的洗脱时间55 65min ；6)、收集浓度为0.2M的NaCl溶液所对应的洗脱液，依次经透析、浓缩、干燥，得到具有 抗肿瘤活性的黑木耳多糖。
2.根据权利要求1所述的应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特 征是所述Savag试剂由氯仿正丁醇=3:0.9"!. 1的体积比混合而得。
3.根据权利要求2所述的应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其 特征是所述步骤6)为收集浓度为0.2M的NaCl溶液所对应的洗脱液，用截留分子量为 700(T9000Da的半透膜透析2(T28h，再用旋转蒸发仪浓缩，直至所得的浓缩液为原体积的 10%^ 12% ;再冷冻干燥至恒重。
4.根据权利要求2或3所述的从应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方 法，其特征是所述步骤1)的浸提中黑木耳与所述热水的料液比为lg/2(T25ml ；所述步骤2)的浓缩为用旋转蒸发仪浓缩。
5.根据权利要求4所述的应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特 征是所述步骤2)和步骤6)的旋转蒸发仪浓缩均为真空度< llOPa，温度为39 42°C ；所述步骤4)和步骤6)的冷冻干燥的真空度< 80Pa，温度为-45 -55°C。
6.根据权利要求5所述的应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，其特 征是所述步骤4)和步骤6)的冷冻干燥前，先于_7(T -80°C快速冷冻3. 5^4. 5h。
7.如权利要求1飞任一方法分离而得的黑木耳多糖，其特征是结构式为
全文摘要
本发明公开了一种应用径向色谱从黑木耳中分离抗肿瘤多糖组分的方法，包括如下步骤1)黑木耳热水浸提；2)将黑木耳多糖提取液浓缩后加入Savag试剂，震荡离心；3)在去除蛋白的多糖水溶液中加入体积浓度≥95%的乙醇进行醇沉，所得的沉淀进行清洗；4)将含有抗肿瘤活性的黑木耳粗多糖冷冻干燥；5)将冻干后的黑木耳粗多糖溶于蒸馏水中，得样品溶液；将样品溶液泵入径向色谱仪，选用DEAE-52纤维素作为填料；分别用蒸馏水以及浓度为0.2M的 NaCl溶液进行洗脱； 6)收集浓度为0.2M的 NaCl溶液所对应的洗脱液，依次经透析、浓缩、干燥，得到具有抗肿瘤活性的黑木耳多糖。
文档编号C08B37/00GK102649824SQ20121014810
公开日2012年8月29日 申请日期2012年5月14日 优先权日2012年5月14日
发明者宋广磊, 杜琪珍, 王婧波 申请人:浙江工商大学