本发明属于药物合成领域，具体涉及一种奥贝胆酸的制备方法。
背景技术：
奥贝胆酸(Obeticholic Acid)，又名INT-747，由美国Intercept制药公司研制开发，适应症为原发性胆汁性肝硬化(PBC)和非酒精性脂肪性肝病(NASH)，目前处在临床III期。奥贝胆酸是一种半合成的鹅去氧胆酸，也是法尼酯衍生物X受体的特异性激动剂，动物试验已证明其改善胰岛素抵抗和减轻肝脏脂肪含量的作用，是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物，市场潜力巨大。
奥贝胆酸，化学名为6α-乙基-3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸，其结构式如下：
专利WO02072598A1公开了一种奥贝胆酸以及类似物的制备方法，其合成路线如下：
该合成路线以化合物(III)经过3,4-二氢吡喃保护3位羟基、乙酯保护24位羧基后，用LDA活化6位氢后与溴乙烷反应上乙基，再经过羰基还原，脱乙酯保护得到奥贝胆酸。在此路线的关键步骤用溴乙烷上乙基过程中，实验证明，区域选择性和立体选择性均较差，生成较多的工艺杂质和异构体杂质，收率低，纯化困难，多步反应需要柱纯化，难以工业化。
CN101203526涉及一种3α(β)-7α(β)-二羟基-6α(β)-烷基-5β-胆烷酸的制备方法，路线如下式：
此路线中，甲酯水解过程中，如果pH＜12时，温度低于49～53℃下，MeOH/NaOH溶液中，酯水解不彻底，但是如果在强碱加热条件下，亚乙基又容易降解，最终形成奥贝胆酸中的主要杂质鹅去氧胆酸(CDCA),导致反应杂质较多，收率低。
WO2013192097公开了一种奥贝胆酸的制备方法，以3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(KLCA)，为起始原料，经过甲酯化、羟基保护、亚乙基化、酯水解、催化氢化、羰基还原得到奥贝胆酸晶型C，再加入氢氧化钠水溶液，滴加盐酸，进一步转为奥贝胆酸晶型1。路线如下式：
此路线中，步骤4中亚乙基化反应产物顺反构型为E/Z＝4:1，构型的选择性较低，同样该路线未能解决步骤4碱性酯水解以及步骤5碱液作为溶剂催化氢化过程中亚乙基在碱性条件受热降解成化合物KLCA的问题，最终导致奥贝胆酸中杂质鹅去氧胆酸增大。
为了解决上述问题，本发明提供了一种新的制备奥贝胆酸的方法，在制备过程中，先将 亚乙基催化氢化，再进一步还原7位酮羰基，接着加热强碱水解反应，避免了亚乙基降解和较多杂质生成，同时酯水解反应彻底，提高收率，降低了杂质且立体选择性好。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种低毒性、低污染、安全性高、立体选择性高，杂质低、操作简便的制备奥贝胆酸的方法。
本发明第一个目的，提供一种高纯度奥贝胆酸的制备方法，包括以下步骤：
S1.催化加氢反应，化合物(VI)在催化剂作用下催化氢化反应得到化合物(VII)；
S2.构型转化，化合物(VII)在非亲核性强碱作用下转化构型得到化合(VII’)；
S3.还原反应，化合物(VII’)在还原剂作用下，发生羰基还原反应得到化合物(VIII)；
S4.水解反应，在碱性条件下，化合物(VIII)经过酯水解得到化合物(I)；
上述化合物中R1为C1-C5直连或支链的烷基。
本发明第二个目的，提供一种更具体的高纯度奥贝胆酸的制备方法，其包括以下步骤：
(1)第一步氧化反应，化合物(II)在氧化剂存在下，发生氧化反应得到化合物(III)；
(2)第二步酯化反应，化合物(III)在酯化催化剂存在下，在适当的溶剂中发生酯化反应得到化合物(IV)；
(3)第三步羟基保护反应，在碱性条件下，化合物(IV)与羟基保护试剂反应得到化合物(V)；
(4)第四步亚乙基化反应，化合物(V)在酸性条件下与亚乙基化试剂反应得到化合物(VI)；
(5)第五步催化加氢反应(即S1.步)，化合物(VI)在氢化催化剂作用下氢化反应得到化合物(VII)；
(6)第六步构型转化(即S2.步)，化合物(VII)在非亲核性强碱加热作用下转化构型得到化合(VII’)；
(7)第七步还原反应(即S3.步)，化合物(VII)在还原剂如硼氢化钠、硼氢化钾或者硼烷作用下，在适当溶剂中，化合物(VII)经过还原羰基成羟基得到化合物(VIII)；
(8)第八步还原反应(即S4.步)，化合物(VIII)在碱性条件下，发生酯水解得到化合物(I)。
本发明优选方案，其中第一步所述的氧化剂选自次氯酸钠、氯铬酸吡啶盐、，优选次氯酸钠。
本发明优选方案，其中第二步所述的酯化反应中，酯化催化剂选自二氯亚砜、硫酸、甲磺酸、磺酸叔酯、对苯甲磺酸、间苯甲磺酸、邻苯甲苯酸，优选二氯亚砜、硫酸、甲磺酸、磺酸叔酯、对苯甲磺酸，进一步优选二氯亚砜、硫酸，溶剂选自低级烷基醇(C1～C5)，优选甲醇、乙醇，反应温度为回流反应。
本发明优选方案，其中第三步所述的羟基保护反应，羟基保护试剂选自三甲基氯硅烷、六甲基二硅氮烷、叔丁基二甲基氯硅烷或叔丁基二苯基氯硅烷，优选三甲基氯硅烷，碱选自二异丙基氨基锂，正丁基锂、六甲基二硅基氨基锂，优选二异丙基氨基锂。
本发明优选方案，其中第四步所述的亚乙基化反应，亚乙基化试剂选自乙醛，路易斯酸选自三氟化硼乙醚，溶剂为二氯甲烷。
本发明优选方案，其中第五步所述的催化加氢反应，催化剂选自Pd/C、PtO2、Pt/C、Ru/C、Rh/C或兰尼镍，优选Pd/C。溶剂选自乙酸、甲醇、乙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯一种或者多种混合，优选乙醇，可在上述单一或者溶剂中加入适量水，溶剂含水量不大于10％，另外还可以在上述单一溶剂或者混合溶剂中加入适量盐酸或醋酸钠调节溶剂的pH，保持反应在非强碱体系下。氢化压力为1～10atm，优选3～5atm，氢化反应温度20～80℃。
本发明优选方案，其中第六步所述构型转化反应，所述的非亲核性强碱选择甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾、叔丁醇锂，溶剂选自无水甲醇、无水乙醇、四氢呋喃，温度在室温与溶剂回流温度之间。
本发明优选方案，其中第七步所述的还原反应，所述的还原剂为硼氢化钠、硼氢化钾、三乙酰基硼氢化钠、氰基硼氢化钠或乙硼烷，优选硼氢化钠、硼氢化钾。还原剂为硼氢化钾或硼氢化钠时，溶剂为甲醇、乙醇、四氢呋喃或者甲醇/水、乙醇/水、四氢呋喃/水的混合溶液，优选四氢呋喃、甲醇、乙醇，反应温度为0～50℃，优选10～30℃；或者选择乙硼烷作为 还原剂，无水四氢呋喃或者乙醚作为溶剂，优选无水四氢呋喃，反应温度0～30℃。
本发明优选方案，其中第八步所述的酯水解反应，碱为氢氧化钾、氢氧化钠或者氢氧化锂，优选氢氧化钠；溶剂为甲醇、乙醇、四氢呋喃或者甲醇/水、乙醇/水、四氢呋喃/水的混合溶液，优选甲醇/水、四氢呋喃/水。
本发明另一个目的提供一种改进的高纯度奥贝胆酸的制备方法，上述制备方法中第七步羰基还原和第八步酯水解可以合并为一个步骤，同时完成羰基还原以及酯水解反应，选择浓度为5％～50％氢氧化钠、氢氧化钾或者氢氧化锂溶液作为溶剂，硼氢化钠或者硼氢化钾作为还原剂，反应温度50～100℃。
有益效果
表1本发明制备工艺与现有技术制备奥贝胆酸工艺对比
表2本发明制备工艺与现有技术制备奥贝胆酸杂质对比
本发明提供奥贝胆酸制备方法，以鹅去氧胆酸作为起始物料，原料易得，价格低廉，便于质量控制和降低成本，制备路线中不用到WO02072598A1中的溴乙烷等毒性较大试剂和溶剂，更利于生产过程人员保护和环境保护。与现有技术相比，其主要工艺对比汇总如下表。
通过表1、表2表示内容可知，与现有技术相比，本发明工艺的起始物料廉价易得，降低了成本，通过对关键中间体化合物VII的构型控制降低了成品中异构体，通过工艺路线的 调整，很好控制了碱性条件下亚乙基的降解，从而降低了奥贝胆酸中主要工艺杂质鹅去氧胆酸，从而提高了产品纯度，八步反应总收率达到40～45％，单元操作简单，适合工业化生产。
具体实施方式
下述实施例是为了举例说明本发明的特定优选的实施方案，并不是为了限制本发明的保护范围。所有实施例中，TLC为硅胶HSGF254板，10％磷钼酸乙醇溶液显色，质谱采用Finnigan LCQ ESI-MS质谱仪，1H-NMR采用BRUKER AVANCE AV-500型核磁共振仪，HPLC采用Agilent 1260高效液相色谱仪。
实施例1a 3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(III)的制备
向反应瓶中依次加入鹅去氧胆酸(II)(113g，0.288mol)、溴化钠(1.78g，0.0173mol)、乙酸(30mL)和甲醇(600mL)，室温搅拌至全部溶解，降温至-10℃±2℃，向反应体系中缓慢滴加13％的次氯酸钠溶液(225mL，0.39mol)，控制内温在-10～0℃搅拌反应至HPLC检测原料鹅去氧胆酸(II)含量低于1％。反应完成后，撤去冰浴，反应液自然升至室温，向反应体系中滴加5％的亚硫酸氢钠溶液(25mL)，搅拌30分钟，抽滤、干燥得到3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(III)粗品(115.83g)。将粗品和甲醇(1L)加入到反应瓶中，加热至65℃，回流反应半小时，趁热过滤，将滤液重新加热回流半小时，反应液自然冷却析晶，抽滤、干燥得到白色粉末状的3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(III)(91g，收率80.9％，HPLC：99.64％)。
实施例1b 3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(III)的制备
向反应瓶中依次加入鹅去氧胆酸(II)(100g，0.255mol)、无水硫酸镁(200g)、氯仿(300mL)，室温搅拌，向反应体系滴中加入氯铬酸吡啶盐二氯甲烷溶液(61g氯铬酸吡啶盐溶于 2.5L二氯甲烷)，反应液室温搅拌30min。过滤固体不溶物，滤液依次用水和饱和食盐水洗涤，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(III)(73g，收率73.3％，HPLC检测：97.7％)。
实施例2a 3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(IVa)的制备
向三口瓶中依次加入3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(III)(50g)、甲醇(360mL)搅拌溶解。冷却至10℃以下，滴加氯化亚砜(14mL)，随后加热至65℃，回流反应3h。反应结束，冷却至5℃，向其中加入H2O(360ml)，自然冷却析晶，加入晶种，加快搅拌。有大量固体析出，搅拌3小时，过滤产品，干燥得到IVa(47.3g，收率91.3％)，纯度98.95％。
实施例2b 3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸乙酯(IVb)的制备
向三口瓶中依次加入3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸(III)(50g)、乙醇(400mL)搅拌溶解。加入浓硫酸(0.5mL)，随后加热至80℃，回流反应5h。反应结束，冷却至5℃，向其中加入H2O(400ml)，冷却析晶。有大量固体析出，过滤产品，干燥得到IVb(46.1g，收率86.0％)，纯度97.4％。
实施例3a 3α,7α-二-三甲基甲硅烷氧基-6-烯-5β-胆烷酸甲酯(Va)的制备
氮气保护下向反应瓶中加入无水四氢呋喃(260mL)，干冰乙醇浴冷却至-75℃下滴加二异丙基氨基锂的四氢呋喃溶液(C＝2mol/L，240mL，0.488mol)，滴加完毕后搅拌10分钟，-70℃下滴加三甲基氯硅烷(112mL，0.884mol)，搅拌均匀后，将3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(IVa)(26.0g，0.0643mol)的四氢呋喃(100mL)溶液滴加至反应溶液中，-75℃下反应1小时。反应结束后，撤去冰浴，升温至-30℃，滴加饱和碳酸氢钠溶液(250mL)，控制温度不超过20℃，静置分液，用乙酸乙酯萃取(200mL×2)，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠(300mL×1)、饱和食盐水(500mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤、减压浓缩得到黄色油状的3α,7α-二-三甲基甲硅烷氧基-6-烯-5β-胆烷酸甲酯(Va)粗品(39.2g)，油泵减压蒸馏30min，充氮气保护，直接用于下步反应。
实施例3b 3α,7α-二-叔丁基二甲基硅烷氧基-6-烯-5β-胆烷酸甲酯(Vb)的制备
氮气保护下向反应瓶中加入无水四氢呋喃(150mL)，干冰乙醇浴冷却至-75℃下滴加二六甲基硅基氨基锂的四氢呋喃溶液(C＝1mol/L，322mL，0.322mol)，滴加完毕后搅拌10分钟，-70℃下滴加叔丁基二甲基氯硅烷(60mL，0.322mol)，搅拌均匀后，将3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(IVa)(26.0g，0.0643mol)的四氢呋喃(100mL)溶液滴加至反应溶液中，-75℃下反应2小时。反应结束后，撤去冰浴，升温至-10℃，滴加饱和碳酸氢钠溶液(250mL)，控制温度不超过20℃，静置分液，用乙酸乙酯萃取(200mL×2)，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠(300mL×1)、饱和食盐水(500mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤、减压浓缩得到黄色油状的3α,7α-二-三甲基甲硅烷氧基-6-烯-5β-胆烷酸甲酯(Vb)粗品(41.3g)，油泵减压蒸馏30min，充氮气保护，直接用于下步反应。
实施例3c 3α,7α-二-三甲基甲硅烷氧基-6-烯-5β-胆烷酸乙酯(Vc)的制备
氮气保护下向反应瓶中加入无水四氢呋喃(260mL)，干冰乙醇浴冷却至-75℃下滴加二异丙基氨基锂的四氢呋喃溶液(C＝2mol/L，240mL，0.488mol)，滴加完毕后搅拌10分钟，-75℃下滴加三甲基氯硅烷(112mL，0.884mol)，搅拌均匀后，将3α-羟基-7-酮基-5β-胆烷酸乙酯(IVb)(26.8g，0.064mol)的四氢呋喃(100mL)溶液滴加至反应溶液中，-75℃下反应1小时。反应结束后，撤去冰浴，升温至-30℃，滴加饱和碳酸氢钠溶液(250mL)，控制温度不超过20℃，静置分液，用乙酸乙酯萃取(200mL×2)，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠(300mL×1)、饱和食盐水(500mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤、减压浓缩得到黄色油状的3α,7α-二-三甲基甲硅烷氧基-6-烯-5β-胆烷酸乙酯(Vc)粗品(39.7g)，油泵减压蒸馏30min，充氮气保护，直接用于下步反应。
实施例4a 3α-羟基-6-亚乙基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(VIa)的制备
氮气保护下，向反应瓶中加入3α,7α-二-三甲基甲硅烷氧基-6-烯-5β-胆烷酸甲酯(Va)(39.0g)和二氯甲烷(200mL)，干冰/乙醇浴冷却至-60℃下，向反应瓶中加入乙醛(8.7mL)，搅拌均匀后向反应液中加入三氟化硼乙醚溶液(52.5mL)，滴加完毕后-60℃下反应4小时，升至室温反应3小时。反应结束后，冰水浴冷却至0-5℃下滴加饱和碳酸氢钠溶液(250mL)，搅拌10分钟后，静置分液，用二氯甲烷萃取(200mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(250mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到棕黄色油状的3α-羟基-6-亚乙基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(VIa)，油泵减压蒸馏30min，充氮气保护，直接用于下步反应。直接用于下 步反应。
实施例4b 3α-羟基-6-亚乙基-7-酮基-5β-胆烷酸乙酯(VIb)的制备
氮气保护下，向反应瓶中加入3α,7α-二-三甲基甲硅烷氧基-6-烯-5β-胆烷酸乙酯(Vc)粗品(39.0g)和二氯甲烷(200mL)，干冰/乙醇浴冷却至-60℃下，向反应瓶中加入乙醛(8.7mL)，搅拌均匀后向反应液中加入三氟化硼乙醚溶液(52.5mL)，滴加完毕后-60℃下反应4小时，升至室温反应3小时。反应结束后，冰水浴冷却至0-5℃下滴加饱和碳酸氢钠溶液(250mL)，搅拌10分钟后，静置分液，用二氯甲烷萃取(200mL×3)，合并有机相，用饱和食盐水洗涤(250mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到棕黄色油状的3α-羟基-6-亚乙基-7-酮基-5β-胆烷酸乙酯(VIb)，油泵减压蒸馏30min，充氮气保护，直接用于下步反应。
实施例5a 3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa)的制备
将3α-羟基-6-亚乙基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(VIa)(30g)、溶于乙醇(600ml)和盐酸(10ml)中，搅拌溶解，投入氢化斧，加入10％Pd/C催化剂(0.45g)，氮气置换空气三次，氢气置换氮气三次，在3atm压力下氢化反应(至氢化反应不再吸氢)。反应结束，冷却降温至40℃以下，过滤催化剂，滤液减压浓缩至干，得到类白色3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa)(29.5g)，收率97.8％。HPLC检测构型：化学纯度96.5％，异构体比例α/β＝1:10。
实施例5b 3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa)的制备
将3α-羟基-6-亚乙基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(VIa)(30g)、溶于甲醇(600ml)和四氢呋喃(200ml)中，搅拌溶解，投入氢化斧，加入5％Pd/C催化剂(0.9g)，氮气置换空气三次，氢气置换氮气三次，20～30℃反应，在1atm压力下氢化反应(至氢化反应不再吸氢)。反应结束，过滤催化剂，滤液减压浓缩至干，得到类白色3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa)(28.6g)，收率94.8％。HPLC检测构型：化学纯度95.7％，异构体比例α/β＝1:10。
实施例5c 3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa)的制备
将3α-羟基-6-亚乙基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(VIa)(15g)溶于95％乙醇(600ml)，加入乙酸钠4.5g，环己烯4.5ml，搅拌溶解，投入氢化斧，加入10％Pd/C催化剂(0.9g)，氮气置换空气三次，氢气置换氮气三次，室温反应，在5atm压力下氢化反应(至氢化反应不再吸氢)。反应结束，过滤催化剂，滤液减压浓缩至100ml，滴加至600ml水中，析出大量固体，过滤得到白色3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa)。HPLC检测构型：化学纯度96.3％，异构体比例α/β＝1:11。
实施例5d 3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸乙酯(VIIb)的制备
将3α-羟基-6-亚乙基-7-酮基-5β-胆烷酸乙酯(VIb)(15g)溶于95％乙醇(600ml)，加入乙酸钠4.5g，搅拌溶解，投入氢化斧，加入10％Pd/C催化剂(0.45g)，氮气置换空气三次，氢气置换氮气三次，室温反应，在5atm压力下氢化反应(至氢化反应不再吸氢)。反应结束，过滤催化剂，滤液减压浓缩至至150ml，滴加至900ml水中，析出大量固体，过滤得得到类白色3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸乙酯(VIIb)。HPLC检测构型：化学纯度95.5％，异构体比例α/β＝1:10。
实施例6a 3α-羟基-6α-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa’)的制备
氮气保护下，向反应瓶中加入上步得到的3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β-胆烷酸甲酯(VIa)(25g)、无水甲醇(250ml)，搅拌溶解，加入甲醇钠(9.38g)，升温至回流，反应2～3h。反应结束，反应液冷却至室温，冰浴冷却下，将反应液滴入至1L稀盐酸中，析出大量白色固体，过滤，得到3α-羟基-6α-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯。HPLC检测：化学纯度97.6％，β异构体＜0.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.67(3H,s),3.57(1H,m),2.57(1H,t,J＝11.5Hz),2.37(1H,m),2.24(1H,dd,J＝6.6,9.6Hz),2.20(1H,m),1.22(3H,s),0.93(3H,d,J＝6.2Hz),0.85(3H,t,J＝7.3Hz),0.67(3H,s).13CNMR(100MHz,CDCl3):δ215.1,178.4,71.6,56.3,51.3,50.6,50.4,47.5,46.4,44.4,43.8,40.4,38.2,36.6,36.3,35.2,32.4,32.0,30.6,29.3,25.8,23.5(2C),22.8,18.8,12.5,12.0.HRMS-ESI m/z 433.3323[M+H+]
实施例6b 3α-羟基-6α-乙基-7-酮基-5β胆烷酸乙酯(VIIb’)的制备
氮气保护下，向反应瓶中加入上步得到的3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β-胆烷酸乙酯(VIIb)(25g)、无水乙醇(500ml)，搅拌溶解，加入叔丁醇钾(6.3g)，升温至回流，反应结束，反应液冷却至室温，冰浴冷却下，将反应液滴入至1.5L稀盐酸中，析出大量白色固体，过滤，得到3α-羟基-6α-乙基-7-酮基-5β胆烷酸乙酯。HPLC检测：化学纯度98.6％，β异构体＜0.5％。
实施例7a 3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β胆烷酸甲酯(VIIIa)的制备
向反应瓶中加入3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa)(24.0g)、四氢呋喃(480ml)、纯化水(60ml)，搅拌溶解，冷却至10℃以下，分批次加入硼氢化钠(防止冲料)，加完，于20～30℃反应1～2h。反应结束，浓缩溶剂，得到淡黄色油状物。加水(200ml)和乙酸乙酯(240ml)，冰浴冷却下，用2M盐酸调节pH至3.0，水相再用乙酸乙酯(240ml)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得到类白色固体(22g)。
实施例7b 3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β胆烷酸甲酯(VIIIa)的制备
向反应瓶中加入3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa’)(24.0g)、无水四氢呋喃(360ml)，搅拌溶解，冷却至0℃以下，滴加硼烷四氢呋喃溶液(1mol/L,83ml)，加完，于20～30℃反应5h。反应结束，冷却至0～5℃，缓慢滴加0.1M盐酸(50ml)，同温度下搅拌30min。减压浓缩溶剂，加水乙酸乙酯(240ml*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得到白色固体(21g)。
实施例7c 3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β胆烷酸乙酯(VIIIb)的制备
向反应瓶中加入3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸乙酯(VIIb’)(24.0g)、四氢呋喃(480ml)、纯化水(60ml)，搅拌溶解，冷却至10℃以下，分批次加入硼氢化钠(防止冲料)，加完，于20～30℃反应3h。反应结束，浓缩溶剂，得到淡黄色油状物。加水200ml和乙酸乙酯(240ml)，冰浴冷却下，用2M盐酸调节pH至4.0，水相再用乙酸乙酯(240ml)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得到类白色固体(20.5g)。
实施例8a 6α-乙基-3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸(I,奥贝胆酸)的制备
向反应瓶中加入3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β胆烷酸甲酯(VIIIa)(14.5g)、甲醇(290ml)和30％氢氧化钠溶液(15ml)，升温至回流，反应3～4h。反应结束，减压浓缩溶剂，加水50ml稀释，冷却至0～5℃，滴加浓盐酸调节pH至3。用乙酸乙酯(300ml*3)萃取，合并有机相，依次用纯化水(500ml)和饱和氯化钠(500ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到棕黄色固体，用于重结晶精制。
将上述固体(15g)加入到反应瓶中，加入二氯甲烷(300ml)。升温溶凊后，停止加热，缓慢冷却至室温，再继续冷至0～5℃搅拌2h，过滤得白色固体粉末，干燥得到奥贝胆酸(I)。熔点：105～108℃，比旋度+5.5(c＝15mg/ml,溶甲醇)HPLC检测：99.5％，异构体未检出。
1H NMR(400MHz,CDCl3+CD3OD)d0.67(s,3H,18-CH3),0.90-0.93(m,6H,20-CH3,19-CH3),0.95(d,J＝6.43Hz,3H,21-CH3),3.42(m,1H,3-CH),3.72ppm(s,1H,7-CH)；13C NMR(100.6MHz,CDCl3+CD3OD)d 11.62,11.76,18.23,20.73,22.20,23.12,23.65,28.15,30.46(_2),30.85,33.19,33.79,35.39(_2),39.57,39.99,41.15,42.73,45.16,50.44,55.78,70.90,72.28,178.00ppm.HRMS(+ESI)；[M+1]+421.3316.
实施例8b 6α-乙基-3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸(I,奥贝胆酸)的制备
向反应瓶中加入3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β胆烷酸甲酯(VIIIa)(14.5g)、四氢呋喃(150ml)和50％氢氧化钾溶液(10ml)，升温至回流。反应结束，减压浓缩溶剂，加水50ml稀释，冷却至0～5℃，滴加浓盐酸调节pH至3，控制滴加速度(温度不超过20℃)。用二氯甲烷(300ml*3)萃取，合并有机相，依次用纯化水(500ml)和饱和氯化钠(500ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到棕黄色固体，用于重结晶精制。
将上述固体(15g)加入到反应瓶中，加入二氯甲烷(450ml)。升温溶凊后，停止加热，缓慢冷却至室温，再继续冷至0～5℃搅拌3h，过滤得白色固体粉末，干燥得到奥贝胆酸(I)。HPLC检测：99.6％，异构体未检出。
实施例8c 6α-乙基-3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸(I,奥贝胆酸)的制备
向反应瓶中加入3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β胆烷酸乙酯(VIIIb)(14.5g)、甲醇(290ml)和30％氢氧化钠溶液(15ml)，升温至回流，反应3～4h。反应结束，减压浓缩溶剂，加水50ml 稀释，冷却至0～5℃，滴加浓盐酸调节pH至3。用乙酸乙酯(300ml*3)萃取，合并有机相，依次用纯化水(500ml)和饱和氯化钠(500ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到棕黄色固体，用于重结晶精制。
将上述固体(14.5g)加入到反应瓶中，加入二氯甲烷(300ml)。升温溶凊后，停止加热，缓慢冷却至室温，再继续冷至0～5℃搅拌5h，过滤得白色固体粉末，干燥得到奥贝胆酸(I)。HPLC检测：99.7％，异构体未检出。
实施例9 6α-乙基-3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸(I,奥贝胆酸)的制备
向反应瓶中加入3α-羟基-6-乙基-7-酮基-5β胆烷酸甲酯(VIIa’)(24.0g)、THF(240ml)、30％氢氧化钾(48ml)，冷却至10℃下，分批次加入硼氢化钠(6.3g)，加完，室温反应24h。反应结束，浓缩溶剂，得到淡黄色油状物。加水200ml稀释，冰浴冷却下，用2M盐酸调节pH至3.0，水相再用乙酸乙酯(240ml*2)萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至干得到淡黄色固体(22g)。
将上述固体(20g)加入到反应瓶中，加入二氯甲烷(450ml)。升温溶清后，停止加热，缓慢冷却至室温，再继续冷至0～5℃搅拌2h，过滤得类白色固体粉末，干燥得到奥贝胆酸(I)。HPLC检测：99.6％，异构体未检出。