本发明涉及医药领域，具体涉及苦豆碱衍生物、其制备方法及用途。
背景技术：
苦豆子属于豆科槐属植物，多年生草本植物，别名苦豆根、苦甘草、西豆根、苦豆参、欧苦参等，具有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫、平喘止咳等功效。临床上多用于治疗痢疾、疮疖、外伤化脓、湿疹、顽癣、滴虫及胃病等各种疾病，苦豆子主要由2种化学成分组成：生物碱和黄酮。其主要有效成分为具有广泛生物活性的生物碱，通过各种实验技术，已经成功从苦豆碱中分离出20多种生物碱，其中有8种研究比较深入,它们是苦参碱(matrine)，氧化苦参碱(oxymatrine)，槐果碱(sophocarpine)，氧化槐果碱(oxysophocarpine)，槐胺碱(sophoramine)，槐啶碱(sophoridine)，莱曼碱(1ehmannine)，苦豆碱(aloperine)。其中苦豆碱具有如下结构式：
研究表明，苦豆碱具有包括抗心律失常、负性肌力、抗菌、抗病毒、抗炎、舒张平滑肌、免疫抑制、抗癌、清除自由基、毒副作用、杀虫作用等多种生理活性。
中国专利第CN101209252A号公布了苦豆碱在治疗慢性乙型肝炎药物中的用途，其特征是在HepG2.2.15细胞实验中，苦豆碱在体外具有良好的抗HBV作用，尤其对乙肝病毒蛋白具有良好的抑制作用，其对乙肝病毒蛋白的抑制作用优于同类的苦参碱和氧化苦参碱，也优于拉米呋定。而且苦豆碱与抑制HBV DNA复制的药物联用，能提高抗HBV疗效，可以进一步制备治疗慢性乙型肝炎药物。
但是人们仍然期待发现新的且有效的抗病毒药物用于抗病毒治疗。
技术实现要素：
本发明的发明人通过对苦豆碱进行结构修饰得到一类结构新颖的具有优异抗病毒活性的化合物，本发明即是基于以上而完成。
本发明第一方面提供式I所示化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐，
其中，
X基团为-CH2-、-C(O)-或-S(O)a-，其中a为1或2；
Y基团为C1-10烷基、或由选自C、N、O和S的原子形成的3-15元环烷基、芳基或杂环基；任选地，其中所述C1-10烷基、3-15元环烷基、芳基或杂环基各自独立地被一个或多个选自卤素、氨基、氰基、硝基、羧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷基酰基、C1-6烷基胺酰基、C1-6烷基酰氨基、C1-6烷基磺酰基和8-15元苯并杂环基的取代基取代。
在本发明的一个实施方案中，所述式I化合物中，
X基团为-CH2-、-C(O)-或-S(O)a-，其中a为1或2；
Y基团为C1-10烷基、或由选自C、N、O和S的原子形成的3-15元环烷基、芳基(例如苯基或稠环芳基)、脂杂环基或芳杂环基(例如单芳杂环基或稠芳杂环基)；任选地，其中所述C1-10烷基、3-15元环烷基、芳基(例如苯基或稠环芳基)、脂杂环基或芳杂环基(例如单芳杂环基或稠芳杂环基)各自独立地被一个或多个选自卤素、氨基、氰基、硝基、羧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷基酰基、C1-6烷基胺酰基、C1-6烷基酰氨基、C1-6烷基磺酰基和8-15元苯并杂环基的取代基取代。
在本发明的一个实施方案中，所述式I化合物中，
X基团为-CH2-、-C(O)-或-S(O)a-，其中a为1或2；
Y基团为C1-6烷基、或由选自C、N、O和S的原子形成的3-8元环烷基、苯基、萘基、3-8元脂杂环基、3-8元单芳杂环基或8-12元稠芳杂环基，任选地，其中所述C1-6烷基、3-8元环烷基、苯基、萘基、3-8元脂杂环基、3-8元单芳杂环基或8-12元稠芳杂环基各自独立地被一个或多个选自卤素、氨基、氰基、硝基、羧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代 C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、C1-4烷基酰基、C1-4烷基胺酰基、C1-4烷基酰氨基、C1-4烷基磺酰基或8-12元苯并杂环基的取代基取代。
在本发明的一个实施方案中，所述式I化合物中，
X基团为-CH2-、-C(O)-或-S(O)a-，其中a为1或2；
Y基团为C1-6烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、萘基、环氧乙烷基、氧代环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、吡喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、苯并呋喃基、吲哚基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁二唑基、苯并三氮唑基、苯并噻二唑基、嘌呤基、喹啉基、苯并四氢呋喃基、苯并四氢吡咯基、苯并四氢吡喃基、苯并哌啶基、苯并二氧六环基或苯并哌嗪基，任选地，上述基团被一个或多个选自卤素、氨基、氰基、硝基、羧基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷基、卤代C1-4烷氧基、C1-4烷氧羰基、C1-4烷基酰基、C1-4烷基胺酰基、C1-4烷基酰氨基、C1-4烷基磺酰基和邻苯二甲酰亚氨基的基团取代。
在本发明的一个实施方案中，所述式I化合物选自以下化合物：
12-N-(2-氰基苄基)苦豆碱(N-KD-1)；
12-N-(2-甲基苄基)苦豆碱(N-KD-2)；
12-N-(4-甲氧基苄基)苦豆碱(N-KD-3)；
12-N-苄基苦豆碱(N-KD-4)；
12-N-(4-硝基苄基)苦豆碱(N-KD-5)；
12-N-(吡啶-4-甲基)苦豆碱(N-KD-13)；
12-N-(4-三氟甲氧基苄基)苦豆碱(N-KD-14)；
12-N-(3-甲氧基苄基)苦豆碱(N-KD-15)；
12-N-(2-甲氧基苄基)苦豆碱(N-KD-16)；
12-N-(4-氟苄基)苦豆碱(N-KD-17)；
12-N-(3,4-二氯苄基)苦豆碱(N-KD-18)；
12-N-(4-甲氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-19)；
12-N-(4-甲氧羰基苯甲酰基)苦豆碱(N-KD-20)；
12-N-(4-乙酰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-21)；
12-N-(4-甲氧基苯甲酰基)苦豆碱(N-KD-22)；
12-N-(3-氰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-23)；
12-N-(吡啶-4-磺酰基)苦豆碱(N-KD-24)；
12-N-(2-噻吩磺酰基)苦豆碱(N-KD-25)；
12-N-(4-乙酰氨基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-26)；
12-N-(3,4-二甲氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-27)；
12-N-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)苦豆碱(N-KD-29)；
12-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-30)；
12-N-(3-甲基-4-甲氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-31)；
12-N-(2-邻苯二甲酰亚氨基乙磺酰基)苦豆碱(N-KD-32)；
12-N-(2-甲氧基-5-氯苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-33)；
12-N-(4-甲基磺酰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-34)；
12-N-(8-喹啉磺酰基)苦豆碱(N-KD-35)；
12-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二氧六环-6-磺酰基)苦豆碱(N-KD-36)；
12-N-(4-氨基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-38)；
12-N-(4-羧基苯甲酰基)苦豆碱(N-KD-39)；
12-N-(2-甲氧羰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-40)；
12-N-(2-羧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-41)；
12-N-(4-甲氧羰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-42)；
12-N-(4-羧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-43)；
12-N-(2-氨基乙磺酰基)苦豆碱(N-KD-44)；
12-N-(2-氰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-45)；
12-N-(2-乙酰氨基-4-甲基-5-噻唑磺酰基)苦豆碱(N-KD-46)；
12-N-(4-氰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-47)；
12-N-(2-氨基-4-甲基-5-噻唑磺酰基)苦豆碱(N-KD-48)；
12-N-(1-甲基-1H-咪唑-4-磺酰基)苦豆碱(N-KD-49)；
12-N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-50)；
12-N-(2,1,3-苯并噻二唑-4-磺酰基)苦豆碱(N-KD-51)；
12-N-(2,3-二氢苯并呋喃-5-磺酰基)苦豆碱(N-KD-52)；和
12-N-(4-甲基-1-哌嗪磺酰基)苦豆碱(N-KD-53)。
本发明第二方面涉及本发明第一方面任一项所述化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐的制备方法，其包括以下步骤：
将苦豆碱(1)与L-X-Y在碱的存在下发生亲核取代反应得到式I化合物；
其中，L代表离去基团，例如卤素、-OTs或-OCOR；
所述碱为有机或无机碱，例如K2CO3、Na2CO3、Cs2CO3、Et3N、DIPEA、DMAP或NaH；
其余各基团定义如本发明第一方面任一项所述。
本发明第三方面涉及一种药物组合物，其包含本发明第一方面任一项所述的化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐，以及药学可接受的载体或赋形剂。
本发明第四方面涉及本发明第一方面任一项所述的化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐、或本发明第三方面任一项所述的药物组合物在制备抗病毒药物中的用途。
在本发明的一个实施方案中，其中所述病毒选自乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、埃博拉病毒(EBOV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS病毒)和流感病毒(优选甲型流感病毒，更优选H5N1、H5N2、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N7等病毒)。
本发明的第五方面涉及本发明第一方面任一项所述的化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐、或本发明第三方面任一项所述的药物组合物在制备治疗乙型肝炎、丙型肝炎、埃博拉出血热、中东呼吸综合征或流感(例如禽流感，优选H7N9型禽流感)的药物中的用途。
本发明的另一方面涉及本发明第一方面任一项所述的化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐、或本发明第三方面任一项所述的药物组合物，其用于抗病毒。
在本发明的一个实施方案中，其中所述病毒选自乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、埃博拉病毒(EBOV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS病毒)和流感病毒(优选甲型流感病毒，更优选H5N1、 H5N2、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N7等病毒)。
本发明的另一方面涉及本发明第一方面任一项所述的化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐、或本发明第三方面任一项所述的药物组合物，其用于治疗乙型肝炎、丙型肝炎、埃博拉出血热、中东呼吸综合征或流感(例如禽流感，优选H7N9型禽流感)。
本发明的另一方面涉及一种抗病毒方法，其包括向有需要的受试者施用本发明第一方面任一项所述的化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐、或本发明第三方面任一项所述的药物组合物。
在本发明的一个实施方案中，其中所述病毒选自乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、埃博拉病毒(EBOV)、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS病毒)和流感病毒(优选甲型流感病毒，更优选H5N1、H5N2、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N7等病毒)。
在本发明的一个实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
本发明的另一方面涉及一种治疗乙型肝炎、丙型肝炎、埃博拉出血热、中东呼吸综合征或流感(例如禽流感，优选H7N9型禽流感)的方法，其包括向有需要的受试者施用本发明第一方面任一项所述的化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐、或本发明第三方面任一项所述的药物组合物。
在本发明的一个实施方案中，所述受试者为哺乳动物，例如牛科动物、马科动物、羊科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物、啮齿类动物、灵长类动物；其中，特别优选的受试者为人。
术语解释
本发明中所用术语“烷基”是指直链或支链饱和烃基，例如C1-10烷基、C1-6烷基或C1-4烷基，烷基的非限制性实施例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基等。所述烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基选自卤素、氨基、烷氧基等，取代烷基的非限制性实施例包括三氟甲基、三氟乙基、羟甲基、羟基乙基、 氨基甲基、氨基乙基等。
本文所用术语“烷氧基”是指具有“R-O-”结构的基团，其中R为烷基，例如C1-10烷氧基、C1-6烷氧基或C1-4烷氧基，烷氧基的非限制性实施例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和叔丁氧基等。当烷氧基中的烷基被卤素取代后得到本发明所述的“卤代烷基”，卤代烷基的非限制性实施包括三氟甲氧基、三氟乙氧基等。
本发明所用术语“烷氧羰基”是指具有“R-O-C(O)-”结构的基团，其中R为烷基，所述烷氧羰基可为C1-6烷氧羰基、C1-4烷氧羰基等，烷氧羰基的非限制性实施例包括甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、叔丁氧羰基等。
本发明所用术语“烷基酰基”是指具有“R-C(O)-”结构的基团，其中R为烷基，所述烷基酰基可为C1-6烷基酰基、C1-4烷基酰基等，烷基酰基的非限制性实施例包括乙酰基、丙酰基、丁酰基等。
本发明所用术语“烷基胺酰基”是指具有“RR’N-C(O)-”结构的基团，其中R和R’为烷基，所述烷基胺酰基可为C1-6烷基胺酰基、C1-4烷基胺酰基等，烷基胺酰基的非限制性实施例包括甲氨酰基、乙氨酰基、N,N-二甲氨酰基、N,N-二乙氨酰基等。
本发明所用术语“烷基酰氨基”是指具有“R-C(O)NH-”结构的基团，其中R为烷基，所述烷基酰氨基可为C1-6烷基酰氨基、C1-4烷基酰氨基等，烷基酰氨基的非限制性实施例包括甲酰氨基、乙酰氨基等。
本发明所用术语“烷基磺酰基”是指具有“R-S(O)2-”结构的基团，其中R为烷基，所述烷基磺酰基可为C1-6烷基磺酰基、C1-4烷基磺酰基等，烷基磺酰基的非限制性实施例包括甲磺酰基、乙磺酰基等。
本发明中所用术语“环烷基”是指饱和或部分饱和的环状烃基，组成环烷基的碳原子数可为3-15个，例如3-8个。具体的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。
本发明中所用术语“芳基”是指任何从苯或稠合芳香环衍生出的官能团或取代基，例如3-15元芳基，芳基的非限制性实施例包括但不限于苯基，萘基，蒽基，菲基，芴基等。
本发明中所用术语“杂环基”是指构成环的原子除碳原子外，还至少含有一个选自N、O或S的杂原子，可分为脂杂环基、芳杂环基，其中芳杂环基又包括单芳杂环基和由苯环和一个或两个以上单杂环稠合而成的稠芳杂环基。例如3-15元杂环基(包括3-15元脂杂环基和芳杂环基)，例如 3-8元杂环基，例如3-8元脂杂环基，例如3-8元单芳杂环基，又例如8-12元稠芳杂环基。杂环基的非限制性实施包括但不限于环氧乙烷基、氧代环丁基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、噁唑基、咪唑基、噻唑基、吡喃基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、苯并呋喃、吲哚、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并咪唑、苯并噻唑、苯并噁二唑、苯并三氮唑、苯并噻二唑、喹啉、苯并四氢呋喃、苯并四氢吡咯、苯并四氢吡喃、苯并哌啶、苯并二氧六环、苯并二甲酰亚氨基、苯并哌嗪或嘌呤等。
本发明所用术语“异构体”包括本发明通式I化合物的所有可能的异构体(例如对映异构体、非对映异构体、几何异构体、构象异构体、差向异构体和旋转异构体等)形式。例如，不对称中心各自的R和S构型、(Z)和(E)双键异构体和(Z)和(E)构象异构体均在本发明的保护范围内。
本发明式Ⅰ化合物或其药学可接受的盐还可以形成溶剂合物，例如水合物、醇合物等。一般来说，与药学可接受的溶剂如水、乙醇等形成的溶剂合物形式与非溶剂合物形式相当。
本发明式Ⅰ化合物还可以是前药或可在体内代谢变化后释放出所述活性成分的形式。选择和制备适当的前药衍生物是本领域技术人员公知技术，本发明对此不做限制。
本发明式Ⅰ化合物或其药学可接受的盐还可以以晶体存在，所述晶体是指构成化合物的分子、原子或离子在空间按一定规律周期重复的排列，其排列具有三维空间的周期性，隔一定的距离重复出现。化合物均可以两种或多种结晶状态存在，结构相同的分子结晶成不同的固体形式，称为“polymorph”，即为多晶型物或多晶形等。当涉及具体结晶形式或多晶型时，统称“crystal form”，即为本发明中使用的术语“晶型”，本发明包含所述式I化合物或其药学可接受的盐的任意晶型。
本文所用术语“有效量”是指足以实现所需预防和/或治疗效果的量，例如，实现预防或减轻与待治疗疾病相关的症状的量。
本文所用的术语“治疗”是指治疗性处理和预防性措施，其目的是预防或延缓(减轻)所针对的疾病状态或病症。如果受试者按照本文所述方法接受了治疗量的式I所示化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐，该受试者一种或多种指征和症状表现出可观察到的和/或可检测出的降低或改善，则受试者被成功地“治疗”了。还应当理解，所述的疾病状态或 病症的预防或治疗的不仅包括完全地预防或治疗，还包括未达到完全地预防或治疗，但实现了一些生物学或医学相关的结果。
本文所用术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述式I所示化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐，以及其他组分例如药学可接受的载体或赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。这里所述的载体包括但不限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛脂。所述赋形剂是指在药物制剂中除主药以外的附加物。其性质稳定，与主药无配伍禁忌，不产生副作用，不影响疗效，在常温下不易变形、干裂、霉变、虫蛀、对人体无害、无生理作用，不与主药产生化学或物理作用，不影响主药的含量测定等。如片剂中的黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂；中药丸剂中的酒、醋、药汁等；半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分；液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂等均可称为赋形剂。
本发明的式I所示化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐可以通过以下途径给药：胃肠外、局部、静脉内、口服、皮下、动脉内、真皮内、经皮、直肠、颅内、腹膜内、鼻内、肌内途径或作为吸入剂。所述组合物可以任选地与在治疗各种疾病中至少有一定效果的其它试剂联合给药。
本发明的式I所示化合物、其光学异构体、溶剂合物或药学可接受的盐可根据给药途径配成各种适宜的剂型。
当口服用药时，本发明化合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊、水溶液或水悬浮液。其中，片剂使用的载体一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入润滑剂如硬脂酸镁。胶囊制剂使用的稀释剂一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳化剂和悬浮剂混合使用。任选地，以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂、芳香剂或着色剂。
当皮肤局部施用时，本发明化合物可制成适当的软膏、洗剂或霜剂制 剂形式，其中将活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体中。软膏制剂可使用的载体包括但不限于：矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、乳化蜡和水；洗剂或霜剂可使用的载体包括但不限于：矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、吐温60、十六烷酯蜡、十六碳烯芳醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
本发明化合物还可以无菌注射制剂形式用药，包括无菌注射水或油悬浮液或无菌注射溶液，也可以是冻干形式。其中，可使用的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。
本发明的药物制剂包括药学上可实施的任何制剂，例如口服制剂、肠胃外给药制剂等。
本发明的药物组合物和药物制剂可以含有0.01-2000mg的本发明化合物，优选含有0.1-1000mg本发明化合物，优选含有1-800mg本发明化合物，更优选含有10-600mg本发明化合物，特别优选含有50-500mg本发明化合物。
在本发明的实施方案中，进行合适的体外或体内测定来确定本发明组合物的效果以及给药是否适用于治疗个体所患疾病或医学疾病状态。这些测定的实例在下文非限制性实施例结合具体疾病或医学治疗进行了描述。通常，足以实现预防或治疗效果的本发明组合物的有效量为约0.001mg/千克体重/天至约10,000mg/千克体重/天。合适的情况下，剂量为约0.01mg/千克体重/天至约1000mg/千克体重/天。剂量范围可以为每天、每两天或每三天约0.01至1000mg/kg宿主体重，更通常为0.1至500mg/kg宿主体重。示例性的治疗方案为每两天一次或每周一次或每月一次给药。通常多次给予所述试剂，单次剂量之间的间隔可以是每天、每周、每月或每年。或者，可以以缓释制剂的形式给予所述试剂，在这种情况下，需要较少的给药频率。剂量和频率根据试剂在受试者中的半衰期而不同。也可以根据是预防性处理还是治疗性处理而不同。在预防性应用中，以相对低频率的间隔长期给予相对低的剂量。在治疗性应用中，有时需要以相对短的间隔给予相对高的剂量，直至疾病的进展被延缓或停止，并优选地直至个体表现出疾病症状的部分或完全改善，在此之后，可以给予患者预防方案。
发明的有益效果
本发明通过对苦豆碱12位N进行修饰得到一系列具有优异抗病毒活性的化合物，在本发明的实施方案中，所述化合物对乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、埃博拉病毒(EBOV)、中东呼吸综合征病毒(MERS病毒)和流感病毒(例如H7N9型禽流感病毒)均表现出较高的抑制活性，并且具有良好的成药性，这为开发结构新颖的抗病毒药物提供了更多选择。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
12-N取代苦豆碱衍生物的合成通用方法1
取苦豆碱(1)0.5g(0,002mol)，加入20ml乙腈中，再向反应液中依次加入1.8g(0.006mol)无水碳酸钾和取代的溴苄或氯苄(0.003mol)，室温搅拌。TLC检测，直至反应完全。有机相浓缩蒸干，加二氯甲烷溶剂溶解，依次经水、饱和食盐水洗涤。二氯甲烷层干燥，用旋转蒸发仪蒸干溶剂，得12-N-苄基苦豆碱衍生物粗品，加20ml二氯甲烷溶剂溶解，拌硅胶，再经柱层析分离，得到12-N-苄基苦豆碱衍生物纯品(2)。所得化合物加入5ml乙醚溶解，再用1N HCl/Et2O调PH＝6-7，过滤，得12-N-苄基苦豆碱衍生物纯品的盐酸盐。
12-N取代苦豆碱衍生物的合成通用方法2：
在0℃条件下，取苦豆碱(1)0.5g(0.002mol)，加入20ml二氯甲烷中，再向反应液中依次加入1.8g(0.006mol)无水碳酸钾和取代基的苯磺酰氯或苯酰氯(0.0018mol)，室温搅拌。TLC检测，直至反应完全。有机相浓缩蒸干，加二氯甲烷溶剂溶解，依次经水、饱和食盐水洗涤。二氯甲烷层干燥，用旋转蒸发仪蒸干溶剂，得12-N酰基或磺酰基苦豆碱衍生物粗品，加20ml二氯甲烷溶剂溶解，拌硅胶，再经柱层析分离，得到12-N-酰基或磺酰基苦豆碱纯品3或4。
实施例1 12-N-(2-氰基苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-1)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.6g邻氰基溴苄，得到黄色固体(767mg，85％)，熔点：198℃分解。1H NMR(400MHz,DMSO):δ11.56(s,1H),8.13(d,J＝7.8Hz,1H),8.09(s,1H),8.00(d,J＝7.6Hz,1H),7.85(t,J＝7.6Hz,1H),7.70(t,J＝7.6Hz,1H),5.88(d,J＝5.5Hz,1H),4.98(d,J＝13.6Hz,4H),4.55(s,1H),4.26(d,J＝12.3Hz,1H),3.87(t,J＝11.7Hz,1H),3.64(dd,J＝24.9,12.9Hz,2H),3.45(d,J＝13.0Hz,1H),3.28(d,J＝12.7Hz,1H),3.16(s,1H),3.06(s,1H),2.48(s,1H),2.41(s,1H),2.35–2.15(m,3H),1.83–1.76(m,1H),1.68(dd,J＝23.9,14.2Hz,4H),1.45(d,J＝12.6Hz,1H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ134.8,134.2,134.0,133.8,131.0,128.6,117.8,114.5,110.0,65.7,58.9,54.4,54.2,52.5,45.5,32.9,30.6,27.6,23.4,23.3,22.5,20.8,18.2； HRMS:calcd for C23H30N3·2HCl[M-2HCl+H]+:348.2434，found:348.2436。
实施例2 12-N-(2-甲基苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-2)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.6g邻甲基溴苄，得到浅黄色固体(630mg，87％)，熔点：130-132℃。1H NMR(400MHz,DMSO):δ10.92(d,J＝7.2Hz,1H),8.32(s,1H),7.75(d,J＝7.5Hz,1H),7.38–7.25(m,3H),5.87(d,J＝6.0Hz,1H),4.69(dd,J＝12.2,10.4Hz,4H),4.63–4.53(m,1H),4.27(dd,J＝13.5,9.5Hz,1H),3.93–3.80(m,1H),3.62(d,J＝12.3Hz,1H),3.51(d,J＝13.6Hz,1H),3.31–3.20(m,1H),3.20–3.10(m,1H),3.05(s,2H),2.48(s,3H),2.41(s,1H),2.32–2.12(m,3H),1.85–1.59(m,6H),1.48(dd,J＝17.8,8.3Hz,1H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ139.1,135.3,132.9,131.4,130.0,128.8,128.1,126.7,66.0,59.0,54.5,53.4,51.5,45.6,32.9,30.7,27.5,23.5,23.4,22.4,20.6,20.2,18.3；HRMS:calcd for C23H33N2·2HCl[M-2HCl+H]+:337.2638,found:337.2633。
实施例3 12-N-(4-甲氧基苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-3)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.6g 4-甲氧基溴苄，得到白色固体(804mg，88％)，熔点：112-114℃。1H NMR(400MHz,DMSO):δ11.15(d,J＝7.3Hz,1H),8.06(s,1H),7.55(d,J＝8.7Hz,2H),7.01(d,J＝8.7Hz,2H),5.85(d,J＝6.0Hz,1H),4.62(d,J＝12.0Hz,1H),4.27(s,4H),4.10(dd,J＝13.2,8.0Hz,1H),3.79(s,3H),3.65–3.55(m,2H),3.47(d,J＝13.1Hz,1H),3.30–3.22(m,1H),3.17(d,J＝11.9Hz,1H),2.98(dd,J＝12.3,9.6Hz,2H),2.48–2.38(m,2H),2.28–2.10(m,3H),1.83–1.62(m,5H),1.53–1.41(m,1H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ160.5,135.0,133.7,133.7,128.5,121.5,114.6,114.6,64.6,58.8,55.7,55.3,54.4,51.8,45.6,32.9,30.8,27.6,23.4,23.2,22.5,20.8,18.2.HRMS:calcd for C23H33N2O·2HCl[M-2HCl+H]+:353.2587,found:353.2586。
实施例4 12-N-苄基苦豆碱盐酸盐(N-KD-4)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.5g溴苄，得到浅黄色固体(704mg，83％)，熔点：113-115℃。1H NMR(400MHz,DMSO)；δ11.23(s,1H),8.09(s,1H),7.70–7.59(m,2H),7.50–7.41(m,3H),5.86(d,J＝5.8Hz,1H),5.24(s,2H),4.73(d,J＝12.6Hz,1H),4.38(s,1H),4.18(dd,J＝13.1,8.4Hz,1H),3.86(t,J＝11.2Hz,1H),3.60(d,J＝13.2Hz,1H),3.47(d,J＝13.1Hz,1H),3.25(t,J＝13.1Hz,1H),3.13(t,J＝11.5Hz,1H),3.05(d,J＝21.1Hz,1H),2.43(dd,J＝15.5,10.3Hz,3H),2.30–2.12(m,3H),1.80(d,J＝8.1Hz,2H),1.68(dd,J＝24.8,13.3Hz,4H),1.47(dd,J＝17.9,8.3Hz,1H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ135.0,132.1,132.1,130.0,129.9,129.2,129.2,128.5,65.0,58.8,55.9,54.4,52.0,45.6,32.9,30.7,27.6,23.4,23.2,22.5,20.7,18.2；HRMS:calcd for C22H33N2·2HCl[M-2HCl+H]+:323.2482,found:323.2481。
实施例5 12-N-(4-硝基苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-5)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.7g 4-硝基溴苄，得到黄色固体(765mg，80％)，熔点154-156℃。1H NMR(400MHz,DMSO):δ11.53(s,1H),8.31(d,J＝8.6Hz,2H),7.98(d,J＝8.5Hz,2H),7.95–7.89(m,1H),5.87(d,J＝5.5Hz,1H),4.89(d,J＝12.8Hz,1H),4.43(s,2H),3.92–3.81(m,1H),3.60(d,J ＝12.4Hz,1H),3.49(d,J＝13.0Hz,1H),3.39(s,1H),3.27(t,J＝12.6Hz,1H),3.12(s,2H),3.01(s,1H),2.50–2.39(m,3H),2.21(dd,J＝31.3,13.3Hz,3H),1.83–1.62(m,6H),1.46(t,J＝12.8Hz,1H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ148.6,137.5,134.7,133.7,128.7,124.0,63.3,58.8,54.8,54.3,52.4,45.6,33.0,30.7,27.7,23.4,23.2,22.5,20.8,18.2；HRMS:calcd for C22H30N3O2·2HCl[M-2HCl+H]+:368.2333,found:368.2329。
实施例6 12-N-(吡啶-4-甲基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-13)的合成：
参照上述12位N-苄基取代苦豆碱的合成通用方法，加入0.4g 4-氯甲基吡啶，催化量的碘化钾，得到浅黄色固体。(665mg，78％)，熔点：236℃分解。1H NMR(400MHz,DMSO):δ11.79(s,1H),9.01(d,J＝6.2Hz,2H),8.31(d,J＝5.8Hz,2H),7.88(s,1H),5.88(d,J＝4.7Hz,1H),5.02(d,J＝11.3Hz,1H),4.53(d,J＝65.5Hz,2H),3.84(t,J＝11.1Hz,1H),3.76–3.52(m,2H),3.46(d,J＝12.9Hz,1H),3.33–3.14(m,3H),2.96(s,1H),2.48–2.39(m,2H),2.21(dd,J＝27.9,13.0Hz,3H),1.85–1.60(m,7H),1.46(t,J＝12.7Hz,1H)；13C NMR(500MHz,DMSO):δ148.9,142.9(2),134.5,129.9(2),129.0,65.6,58.7,54.2,54.2,53.0,45.6,33.0,30.6,27.7,23.2,23.2,22.5,21.0,18.1；HRMS:calcd for C21H30N3·2HCl[M-2HCl+H]+:324.2434,found:324.2433。
实施例7 12-N-(4-三氟甲氧基苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-14)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.8g 4-三氟甲氧基溴苄，得到白色固体(836mg，81％)，熔点：138-140℃。1H NMR(400MHz,DMSO):δ11.38(s,1H),7.98(s,1H),7.81(d,J＝8.1Hz,2H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),5.87(d,J＝ 5.2Hz,1H),4.76(d,J＝11.9Hz,1H),4.34(s,1H),4.24(s,1H),3.85(d,J＝11.7Hz,1H),3.68–3.55(m,2H),3.47(d,J＝13.0Hz,1H),3.26(t,J＝11.3Hz,1H),3.19–2.90(m,3H),2.47–2.35(m,3H),2.20(d,J＝21.7Hz,3H),1.84–1.61(m,6H),1.44(d,J＝11.1Hz,1H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ149.5(2),134.8,134.4(2),129.4,128.7,124.3,122.5,121.7,121.6,120.1,119.2,65.1,58.8,54.9,54.3,52.1,45.6,32.9,30.7,27.6,23.4,23.2,22.5,20.8,18.2；HRMS:calcd for C23H30F3N2O·2HCl[M-2HCl+H]+:407.2305,found:407.2302。
实施例8 12-N-(3-甲氧基苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-15)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.6g 3-甲氧基溴苄，得到白色固体(695mg，82％)，熔点：151-153℃。1H NMR(400MHz,DMSO):δ11.21(s,1H),8.09(s,1H),7.36(dd,J＝16.2,8.3Hz,2H),7.15(d,J＝7.3Hz,1H),7.05–7.00(m,1H),5.86(d,J＝5.5Hz,1H),4.71(d,J＝12.6Hz,1H),4.33(s,1H),4.09(d,J＝8.6Hz,2H),3.81(s,3H),3.60(d,J＝12.9Hz,2H),3.46(d,J＝13.0Hz,1H),3.25(t,J＝12.7Hz,1H),3.14(d,J＝11.5Hz,1H),3.01(d,J＝19.3Hz,2H),2.49–2.36(m,3H),2.20(dd,J＝23.4,11.7Hz,3H),1.85–1.61(m,6H),1.44(d,J＝12.2Hz,1H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ159.8,134.9,131.5,130.4,128.5,124.0,117.1,115.7,65.2,58.8,56.1,55.8,54.4,52.2,45.5,32.9,30.7,27.6,23.4,23.2,22.5,20.8,18.2；HRMS:calcd for C23H33N2O·2HCl[M-2HCl+H]+:353.2587,found:353.2584。
实施例9 12-N-(2-甲氧基苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-16)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.5g 2-甲氧基氯苄，得到白色固体(700mg，83％)，熔点：211-213℃。1H NMR(400MHz,DMSO):δ10.45(d,J＝6.7Hz,1H),8.56(s,1H),7.53(dd,J＝7.4,1.4Hz,1H),7.51–7.45(m,1H),7.13(d,J＝8.1Hz,1H),7.03(t,J＝7.3Hz,1H),5.85(d,J＝5.9Hz,1H),4.63(d,J＝11.7Hz,3H),4.36(s,1H),4.06(dd,J＝12.9,8.9Hz,1H),3.86(d,J＝6.4Hz,3H),3.56(t,J＝14.4Hz,2H),3.26(dd,J＝31.3,17.5Hz,2H),3.09(s,2H),2.60(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),2.48–2.36(m,2H),2.31–2.10(m,3H),1.86–1.61(m,6H),1.46(d,J＝13.1Hz,1H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ158.4,135.3,134.2,132.2,128.2,120.9,117.6,111.8,65.3,58.8,56.0,54.7,52.4,51.7,44.8,32.9,30.8,27.6,23.6,23.2,22.5,20.6,18.3；HRMS:calcd for C23H33N2O·2HCl[M-2HCl+H]+:353.2587,found:353.2586。
实施例10 12-N-(4-氟苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-17)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.5g 4-氟溴苄，得到黄色固体(660mg，80％)，熔点：198-200℃。1H NMR(400MHz,DMSO):δ11.30(s,1H),8.00(s,1H),7.71(dd,J＝8.5,5.5Hz,2H),7.30(dd,J＝15.6,6.8Hz,2H),5.86(d,J＝5.9Hz,1H),4.71(d,J＝12.8Hz,1H),4.35(s,1H),4.21(dd,J＝13.0,8.2Hz,1H),3.84(t,J＝11.5Hz,1H),3.61(t,J＝13.3Hz,2H),3.47(d,J＝13.0Hz,1H),3.26(dd,J＝17.9,8.1Hz,1H),3.18–2.96(m,3H),2.41(dd,J＝26.3,13.5Hz,3H),2.19(dd,J＝31.3,13.1Hz,3H),1.87–1.59(m,6H),1.51–1.37(m,1H)；13C NMR(500MHz,DMSO):δ150.8,134.9,134.6,134.6,128.6,126.3,116.2,116.0,64.9,58.8,54.96,54.3,51.9,45.6,32.9,30.7,27.6,23.4,23.2,22.5,20.8,18.2；HRMS:calcd for C23H30FN2·2HCl[M-2HCl+H]+:341.2388,found:341.2388。
实施例11 12-N-(3,4-二氯苄基)苦豆碱盐酸盐(N-KD-18)的合成：
参照上述合成通用方法1，加入0.7g 3,4-二氯溴苄，得到黄色固体(750mg，82％)，熔点：181-183℃。1H NMR(500MHz,DMSO):δ11.46(s,1H),8.03(s,1H),7.89(s,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,1H),7.65(d,J＝7.9Hz,1H),5.87(d,J＝5.1Hz,1H),4.75(d,J＝11.1Hz,1H),4.28(d,J＝45.5Hz,2H),3.82(s,1H),3.68(d,J＝12.4Hz,1H),3.60(d,J＝12.0Hz,1H),3.49(d,J＝12.8Hz,1H),3.27(t,J＝12.8Hz,1H),3.16(d,J＝6.5Hz,1H),3.09(s,1H),2.97(s,1H),2.50–2.32(m,3H),2.22(t,J＝18.0Hz,3H),1.87–1.61(m,6H),1.45(d,J＝12.1Hz,1H)；13C NMR(500MHz,DMSO)δ134.7,134.2,132.9,132.6,131.8,131.3,131.0,128.8,65.2,58.8,54.5,54.3,52.2,45.6,33.0,30.7,27.7,23.4,23.2,22.5,20.9,18.2；HRMS:calcd for C23H29Cl2N2·2HCl[M-2HCl+H]+:391.1702,found:391.1710。
实施例12 12-N-(4-甲氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-19)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 4-甲氧基苯磺酰氯，得到黄色固体(623mg，80％)，熔点：139-141℃。1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.84(d,J＝8.7Hz,2H),7.12(d,J＝8.7Hz,2H),5.53(d,J＝5.2Hz,1H),4.19(d,J＝5.2Hz,1H),3.86(s,3H),3.57(dd,J＝14.2,7.3Hz,1H),3.45–3.36(m,1H),3.04(dd,J＝11.4,3.5Hz,1H),2.74(d,J＝12.8Hz,1H),2.62(dd,J＝25.0,12.1Hz,2H),2.45(d,J＝11.6Hz,1H),2.08(s,1H),1.97–1.88(m,2H),1.86–1.74(m,3H),1.65(d,J＝13.0Hz,1H),1.59–1.46(m,2H),1.43–1.30(m,2H),1.26–1.17(m,1H),1.06(dd,J＝27.5,13.9Hz,2H)；13C NMR(500MHz,DMSO):δ162.8,135.1,132.7,129.5,129.5,128.2,114.8,114.8,60.2,59.3,56.1,54.3,46.7,41.6,35.3,34.7,27.5,26.1,24.9,24.1,23.8,19.4；HRMS:calcd for C22H31N2O3S[M+H]+:403.2050,found:403.2058。
实施例13 12-N-(4-甲氧羰基苯甲酰基)苦豆碱(N-KD-20)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g对氯羰基苯甲酸甲酯，得到黄色固体(553mg，78％)，熔点：76-78℃。1H NMR(500MHz,DMSO):δ8.03(d,J＝8.1Hz,2H),7.53(d,J＝8.1Hz,2H),5.64(s,1H),4.71(s,1H),3.89(d,J＝7.0Hz,3H),3.60–3.47(m,1H),3.20–3.03(m,2H),2.79(d,J＝12.9Hz,1H),2.67(t,J＝12.3Hz,1H),2.56(d,J＝11.7Hz,1H),2.47(d,J＝16.7Hz,1H),2.28–2.13(m,2H),1.99(d,J＝12.4Hz,1H),1.94–1.72(m,4H),1.65(dd,J＝25.9,12.5Hz,2H),1.56–1.33(m,2H),1.00–1.25(m,3H)；13C NMR(500MHz,DMSO):δ169.2,166.2,142.1,135.8,130.4,129.9,129.9,128.1,127.1,127.1,59.2,58.3,54.2,52.8,46.5,43.4,34.8,31.2,27.8,26.2,24.9,24.7,23.8,19.2；HRMS:calcd for C24H31N2O3[M+H]+:395.2329,found:395.2335。
实施例14 12-N-(4-乙酰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-21)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 4-乙酰基苯磺酰氯，得到浅黄色固体(596mg，80％)，熔点：126-128℃。1H NMR(500MHz,DMSO):δ8.16–8.13(m,2H),8.08–8.04(m,2H),5.54(d,J＝5.5Hz,1H),4.28(d,J＝5.6Hz,1H),3.65(dd,J＝14.2,7.5Hz,1H),3.53–3.42(m,1H),3.05(dd,J＝11.5,3.5Hz,1H),2.74(d,J＝13.2Hz,1H),2.66(s,3H),2.64(d,J＝2.6Hz,1H),2.59(dd,J＝18.9,7.0Hz,1H),2.46(d,J＝11.7Hz,1H),2.11(s,1H),1.97–1.90(m,2H),1.87–1.74(m,3H),1.70–1.56(m,2H),1.55–1.44(m,1H),1.39(dd,J＝9.4,4.0Hz,2H),1.23–1.12(m,1H),1.05(dd,J＝25.1,13.0Hz,2H)；13C NMR(500MHz,DMSO)δ197.8,144.6,140.1,134.8,129.6(2),128.5,127.7(2),60.4,59.1,54.2,46.5,41.8,35.3,34.7,27.5,27.4,26.1,24.8,24.0,23.7,19.3；HRMS:calcd for C23H31N2O3S[M+H]+:415.2050,found:415.2054。
实施例15 12-N-(4-甲氧基苯甲酰基)苦豆碱(N-KD-22)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.3g 4-甲氧基苯甲酰氯，得到浅黄色固体(520mg，79％)，熔点：141-143℃。1H NMR(400MHz,DMSO):δ7.33(d,J＝8.6Hz,2H),6.98(d,J＝8.6Hz,2H),5.62(d,J＝4.8Hz,1H),4.65(s,1H),3.80(d,J＝9.6Hz,3H),3.50(s,1H),3.40(s,1H),3.06(dd,J＝11.4,2.9Hz,1H),2.78(d,J＝12.8Hz,1H),2.67(t,J＝12.1Hz,1H),2.55(d,J＝11.7Hz,1H),2.47(d,J＝11.5Hz,2H),2.26–2.08(m,2H),1.95(s,1H),1.82(dd,J＝22.5,11.6Hz,4H),1.66(d,J＝13.0Hz,1H),1.56(s,2H),1.40(dd,J＝26.3,13.2Hz,1H),1.06(t,J＝10.1Hz,2H)；13C NMR(400MHz,DMSO):δ170.4,160.2,136.1,129.7,128.6(2),127.8,114.1(2),59.3,58.3,55.6(2),54.2,46.6,34.8,31.3,27.9,26.2,24.9,24.8,23.8,19.2；HRMS:calcd for C23H31N2O2[M+H]+:367.2380,found:367.2375。
实施例16 12-N-(3-氰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-23)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 3-氰基苯磺酰氯，得到白色固体(571mg，80％)，熔点：177-179℃。1H NMR(400MHz,DMSO-D6):δ8.44(d,J＝1.6Hz,1H),8.26–8.23(m,1H),8.18–8.14(m,1H),7.81(dd,J＝11.6,4.2Hz,1H),5.53(d,J＝5.3Hz,1H),4.34(d,J＝5.4Hz,1H),3.70–3.61(m,1H),3.50–3.40(m,1H),3.04(dd,J＝11.5,3.5Hz,1H),2.72(d,J＝12.4Hz,1H), 2.65(dd,J＝13.0,2.4Hz,1H),2.54(d,J＝11.4Hz,1H),2.46(d,J＝11.8Hz,1H),2.08(s,1H),1.98–1.89(m,2H),1.86–1.73(m,3H),1.68–1.56(m,2H),1.45–1.29(m,3H),1.16–0.97(m,3H)；13C NMR(400MHz,DMSO-D6):δ142.4,136.9,134.9,131.8,131.3,131.1,128.5,118.1,113.1,60.5,59.1,54.3,46.5,41.8,35.4,34.7,27.4,26.2,24.8,24.0,23.6,19.3；HRMS:calcd for C22H28N3O2S[M+H]+:398.1897，found:398.1914。
实施例17 12-N-(吡啶-4-磺酰基)苦豆碱(N-KD-24)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.3g 4-吡啶磺酰氯，得到白色固体(543mg，81％)，熔点：100-102℃。1H NMR(400MHz,DMSO-D6):δ9.07(d,J＝2.1Hz,1H),8.85(dd,J＝4.8,1.5Hz,1H),8.38–8.31(m,1H),7.70–7.58(m,1H),5.53(d,J＝5.4Hz,1H),4.29(d,J＝5.4Hz,1H),3.71–3.59(m,1H),3.52–3.39(m,1H),3.03(dd,J＝11.5,3.6Hz,1H),2.72(d,J＝13.4Hz,1H),2.67–2.58(m,1H),2.53(d,J＝11.4Hz,1H),2.49–2.42(m,1H),2.07(s,1H),1.98–1.88(m,2H),1.80(t,J＝13.4Hz,3H),1.66–1.55(m,2H),1.48–1.33(m,3H),1.20–0.96(m,3H)；13C NMR(101MHz,DMSO-D6):δ153.9,147.8,137.5,135.4,134.7,128.6,124.9,60.4,59.1,54.3,46.5,41.7,35.3,34.7,27.4,26.2,24.8,24.0,23.7,19.3；HRMS:calcd for C20H28N3O2S[M+H]+:374.1897，found:374.1908。
实施例18 12-N-(2-噻吩磺酰基)苦豆碱(N-KD-25)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.3g 2-噻吩磺酰氯，得到浅红色固体(544mg，80％)，熔点：133-135℃。1H NMR(400MHz,DMSO-D6):δ7.98(dd, J＝5.0,1.3Hz,1H),7.76(dd,J＝3.7,1.3Hz,1H),7.22(dd,J＝5.0,3.7Hz,1H),5.55(d,J＝5.1Hz,1H),4.24(d,J＝5.7Hz,1H),3.62(dd,J＝14.2,7.5Hz,1H),3.50–3.41(m,1H),3.05(dd,J＝11.5,3.5Hz,1H),2.73(d,J＝12.8Hz,1H),2.67–2.55(m,2H),2.46(d,J＝11.6Hz,1H),2.11(s,1H),2.02–1.89(m,2H),1.88–1.73(m,3H),1.68–1.52(m,3H),1.46–1.24(m,3H),1.05(t,J＝15.0Hz,2H)；13C NMR(400MHz,DMSO-D6):δ141.2,134.8,133.3,132.6,128.6,128.6,60.5,59.2,54.3,46.7,42.1,35.2,34.7,27.6,26.2,24.9,24.1,23.6,19.4；HRMS:calcd for C19H27N2O2S2[M+H]+:379.1509,found:379.1540。
实施例19 12-N-(4-乙酰氨基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-26)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 4-乙酰氨基苯磺酰氯，得到白色固体(633mg，82％)，熔点：120-122℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.13(s,1H),7.82(d,J＝8.7Hz,2H),7.71(d,J＝8.6Hz,2H),5.54(d,J＝4.9Hz,1H),4.24(d,J＝4.7Hz,1H),3.65(dd,J＝14.2,7.4Hz,1H),3.62–3.48(m,1H),3.08(dd,J＝11.4,2.9Hz,1H),2.80(d,J＝12.6Hz,1H),2.72(d,J＝10.0Hz,1H),2.50(d,J＝7.5Hz,1H),2.23(s,4H),2.01–1.78(m,6H),1.73–1.57(m,3H),1.52–1.36(m,3H),1.12(dd,J＝34.7,11.3Hz,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3)δ169.1,142.0,135.4,134.9,128.2(3),119.2(2),60.4,59.5,54.3,46.7,42.0,35.1,34.8,27.8,26.0,24.9,24.7,24.4,23.8,19.5；HRMS:calcd for C23H32N3O3S[M+H]+:430.2159,found:430.2178。
实施例20 12-N-(3,4-二甲氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-27)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 3,4-二甲氧基苯磺酰氯，得到白色固体(583mg，75％)，熔点：197-199℃。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ7.54(d,J＝8.4Hz,1H),7.39(s,1H),6.96(d,J＝8.5Hz,1H),5.57(s,1H),4.29(s,1H),3.97(d,J＝6.7Hz,6H),3.77–3.50(m,2H),3.10(d,J＝9.3Hz,1H),2.83(d,J＝11.3Hz,1H),2.72(dd,J＝30.9,12.2Hz,2H),2.51(d,J＝11.0Hz,1H),2.27(s,1H),2.04–1.81(m,5H),1.68(dd,J＝28.8,11.1Hz,3H),1.46(s,4H),1.13(dd,J＝26.5,9.4Hz,1H)；13C NMR(500MHz,CDCl3)δ152.8,149.2,137.2,131.2,126.0,121.2,110.6,109.7,59.0,57.8,56.4(2),56.2(2),54.6,45.4,43.8,33.8,27.6,23.8,22.4,21.2,18.7；HRMS:calcd for C23H33N2O4S[M+H]+:433.2156,found:433.2157。
实施例21 12-N-(3,4,5-三甲氧基苯甲酰基)苦豆碱(N-KD-29)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯，得到白色固体(654mg，79％)，熔点：75-77℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ6.63(s,2H),5.65(s,1H),4.84(s,1H),3.91–3.81(m,9H),3.70–3.37(m,2H),3.13(d,J＝11.2Hz,1H),2.76(d,J＝7.4Hz,2H),2.61(d,J＝11.6Hz,2H),2.51(d,J＝10.8Hz,1H),2.28(dd,J＝23.9,12.9Hz,2H),1.99(s,1H),1.88(d,J＝10.6Hz,4H),1.77–1.60(m,3H),1.50–1.38(m,1H),1.17–1.03(m,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3):δ170.3,153.2(2),138.7,135.8,132.8,128.0,103.7(2),60.9,59.4,58.6,56.2(2),54.4,46.9,43.6,35.0,31.1,28.0,26.2,25.2,24.9,24.0,19.2；HRMS:calcd for C25H35N2O4[M+H]+:427.2591，found:427.2601。
实施例22 12-N-(4-异丙氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-30)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 4-异丙氧基苯磺酰氯，得到黄色固体(642mg，83％)，熔点：59-61℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.81(d,J＝8.8Hz,2H),6.94(d,J＝8.7Hz,2H),5.53(s,1H),4.64(m,J＝12.1,6.0Hz,1H),4.26(s,1H),3.72–3.63(m,1H),3.55(d,J＝8.4Hz,1H),3.06(d,J＝9.8Hz,1H),2.80(d,J＝12.0Hz,1H),2.75–2.59(m,2H),2.48(d,J＝11.4Hz,1H),2.25(s,1H),2.02–1.77(m,5H),1.74–1.57(m,3H),1.44(s,3H),1.38(d,J＝6.1Hz,6H),1.10(dd,J＝34.7,11.4Hz,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3):δ161.0,135.2,132.5,129.2,129.2,128.1,115.5,115.5,70.3,60.3,59.5,54.3,46.7,41.7,35.1,34.9,27.8,26.1,25.0,24.4,23.9,21.9,21.8,19.5；HRMS:calcd for C24H35N2O3S[M+H]+:431.2363，found:431.2369。
实施例23 12-N-(3-甲基-4-甲氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-31)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 3-甲基-4-甲氧基苯磺酰氯，得到白色固体(614mg，82％)，熔点：138-140℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.72(dd,J＝8.6,2.3Hz,1H),7.66(s,1H),6.88(d,J＝8.6Hz,1H),5.54(s,1H),4.25(s,1H),3.90(s,3H),3.66(s,1H),3.54(s,1H),3.07(d,J＝7.2Hz,1H),2.86–2.60(m,3H),2.48(d,J＝10.5Hz,1H),2.27(d,J＝12.7Hz,4H),2.04–1.77(m,5H),1.66(dd,J＝38.7,10.3Hz,3H),1.43(s,3H),1.21–1.01(m,2H)； 13C NMR(500MHz,CDCl3):δ160.8,135.3,132.3,129.3,128.1,127.5,126.9,109.4,60.3,59.6,55.6,54.3,46.8,41.7,35.1,34.9,27.8,26.1,24.9,24.5,23.9,19.5,16.3；HRMS:calcd for C23H33N2O3S[M+H]+:417.22064,found:417.22100。
实施例24 12-N-(2-邻苯二甲酰亚氨基乙磺酰基)苦豆碱(N-KD-32)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.5g 2-邻苯二甲酰亚氨基乙磺酰氯，得到黄色固体(709mg，84％)，熔点：89-91℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.88(dd,J＝5.4,3.0Hz,2H),7.76–7.72(m,2H),5.63(d,J＝4.6Hz,1H),4.37(d,J＝5.2Hz,1H),4.26–4.13(m,2H),3.65–3.55(m,2H),3.47–3.38(m,1H),3.36–3.28(m,1H),3.12(dd,J＝11.7,3.3Hz,1H),2.82(d,J＝13.2Hz,1H),2.74–2.70(m,1H),2.54(d,J＝11.9Hz,1H),2.31–2.24(m,1H),2.23–2.15(m,2H),2.11–2.01(m,1H),1.95(s,1H),1.86(t,J＝11.3Hz,2H),1.66(dd,J＝28.6,13.1Hz,3H),1.44(d,J＝6.6Hz,3H),1.10(dd,J＝29.4,12.9Hz,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3):δ167.7(2),134.9,134.2(2),132.0,128.6,123.5(2),60.5,59.3,54.2,49.7,46.6,41.8,34.9,34.9,32.8,28.0,26.9(2),26.1,24.9,24.2,19.3；HRMS:calcd for C25H32N3O4S[M+H]+:470.2108，found:470.2114。
实施例25 12-N-(2-甲氧基-5-氯苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-33)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 2-甲氧基-5-氯苯磺酰氯，得到白色固体(637mg，81％)。熔点：158-160℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.97(d,J＝2.7Hz,1H),7.46(dd,J＝8.8,2.5Hz,1H),6.95(d,J＝8.8Hz,1H),5.57(s,1H),4.61(s,1H),3.95(s,3H),3.68(dd,J＝13.8,7.5Hz,1H),3.57(dd,J＝11.6,4.6Hz,1H),2.95(d,J＝9.4Hz,1H),2.77(d,J＝12.1Hz,1H),2.72–2.55(m,2H),2.47(d,J＝11.4Hz,1H),2.12(d,J＝12.5Hz,2H),1.96–1.74(m,5H),1.64(dd,J＝26.2,12.4Hz,3H),1.45(dd,J＝34.7,21.9Hz,2H),1.11(dd,J＝31.6,11.8Hz,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3)δ155.2,135.3,133.6, 131.1,130.9,128.1,125.4,113.3,60.6,59.6,56.2,54.4,46.7,42.0,34.9,34.8,28.0,26.1,24.8,24.6,24.5,19.6；HRMS:calcd for C22H30N2O3S[M+H]+:437.1660，found:437.1650。
实施例26 12-N-(4-甲基磺酰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-34)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.5g 4-甲基磺酰基苯磺酰氯，得到白色固体(640mg，79％)，熔点：221-223℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.11(s,3H),5.56(d,J＝4.2Hz,1H),4.29(d,J＝4.6Hz,1H),3.72(dd,J＝14.0,7.6Hz,1H),3.64(dd,J＝12.2,6.1Hz,1H),3.12(s,3H),3.10–3.03(m,1H),2.79(d,J＝12.9Hz,1H),2.68(dd,J＝17.9,12.5Hz,2H),2.51(d,J＝11.9Hz,1H),2.24(s,1H),2.05–1.98(m,1H),1.94(s,1H),1.91–1.80(m,3H),1.73–1.55(m,4H),1.53–1.39(m,2H),1.32(d,J＝10.9Hz,1H),1.10(dd,J＝33.6,12.7Hz,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3)δ146.5,143.7,134.2,128.9,128.3,128.3,128.1,128.1,61.0,59.2,54.2,46.5,44.4,42.0,35.2,34.8,27.7,26.1,24.9,24.1,23.8,19.3；HRMS:calcd for C22H31N2O3S2[M+H]+:451.1720，found:451.1713。
实施例27 12-N-(8-喹啉磺酰基)苦豆碱(N-KD-35)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 8-喹啉磺酰氯，得到白色固体(640mg，79％)，熔点：194-196℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ9.12(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),8.56(dd,J＝7.3,1.2Hz,1H),8.25(dd,J＝8.3,1.6Hz,1H),8.06–8.00(m,1H),7.62(t,J＝7.8Hz,1H),7.53(dd,J＝8.3,4.2Hz,1H),5.50 (d,J＝4.4Hz,1H),5.24(d,J＝4.4Hz,1H),3.90(dd,J＝14.1,7.2Hz,1H),3.67–3.55(m,1H),2.86(dd,J＝11.7,3.8Hz,1H),2.70(d,J＝12.9Hz,1H),2.61(dd,J＝15.8,5.9Hz,2H),2.43(d,J＝11.9Hz,1H),2.34(d,J＝15.2Hz,1H),1.95–1.80(m,4H),1.79–1.72(m,1H),1.68(d,J＝12.9Hz,1H),1.65–1.57(m,1H),1.52(dd,J＝20.5,10.4Hz,1H),1.44–1.32(m,2H),1.28(dd,J＝20.4,10.6Hz,1H),1.13–1.02(m,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3):δ151.1,144.2,139.6,136.5,135.9,133.0,132.7,129.0,127.8,125.6,121.9,60.6,59.8,54.3,47.0,42.1,35.1,35.0,28.0,26.1,24.9,24.8,24.3,19.7；HRMS:calcd for C24H30N3O2S[M+H]+:424.2053，found:424.2043。
实施例28 12-N-(2,3-二氢-1,4-苯并二氧六环-6-磺酰基)苦豆碱(N-KD-36)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 2,3-二氢-1,4-苯并二氧六环-6-磺酰氯，得到白色固体(619mg，80％)，熔点：205-207℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.43(d,J＝1.2Hz,1H),7.39(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H),6.96(d,J＝8.4Hz,1H),5.55(s,1H),4.33(dd,J＝12.5,4.9Hz,4H),4.25(s,1H),3.60(d,J＝52.2Hz,2H),3.07(s,1H),2.84–2.65(m,2H),2.49(d,J＝7.6Hz,1H),2.34–2.18(m,1H),2.01(s,1H),1.96–1.80(m,4H),1.66(d,J＝29.5Hz,4H),1.46(s,3H),1.27(s,1H),1.11(d,J＝29.5Hz,1H)；13C NMR(500MHz,CDCl3):δ147.1,143.4,135.2,133.8,128.2,120.8,117.7,116.8,64.5,64.2,60.4,59.5,54.3,46.6,41.8,35.0,27.8,26.0,24.9,24.4,23.9,22.4,19.4；HRMS:calcd for C23H31N2O4S[M+H]+:431.1999，found:431.1995。
实施例29 12-N-(4-氨基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-38)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 4-乙酰氨基苯磺酰氯，得到白色固体N-KD-26,将白色固体在20％NaOH水溶液条件下加热水解，得浅黄色固体(253mg，80％)，熔点：220℃分解。1H NMR(500MHz,DMSO):δ7.49(d,J＝8.7Hz,2H),6.61(d,J＝8.7Hz,2H),5.99(s,2H),5.50(d,J＝5.4Hz,1H),4.10(d,J＝5.3Hz,1H),3.49(dd,J＝14.2,7.4Hz,1H),3.40–3.29(m,1H),3.01(dd,J＝11.4,3.7Hz,1H),2.73(d,J＝13.2Hz,1H),2.62(dd,J＝21.1,7.6Hz,2H),2.43(d,J＝11.6Hz,1H),2.03(s,1H),1.97–1.86(m,2H),1.85–1.72(m,3H),1.70–1.50(m,3H),1.43–1.24(m,3H),1.05(dd,J＝27.2,12.1Hz,2H)；13C NMR(500MHz,DMSO):δ153.2,135.5,129.2(2),127.8,125.9,113.2(2),59.8,59.3,54.3,46.7,41.5,35.2,34.8,27.6,26.2,24.9,24.2,23.8,19.5；HRMS:calcd for C21H30N3O2S[M+H]+:388.2053，found:388.2049。
实施例30 12-N-(4-羧基苯甲酰基)苦豆碱(N-KD-39)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g对氯羰基苯甲酸甲酯，得到黄色固体N-KD-20,将黄色固体在20％NaOH水溶液条件下水解，得白色固体(237mg，62％)，熔点：206-208℃。1H NMR(500MHz,DMSO):δ8.00(d,J＝8.2Hz,2H),7.57(d,J＝7.9Hz,2H),7.41(s,1H),5.65(s,1H),4.79(s,1H),3.53(d,J＝20.1Hz,2H),3.34–3.26(m,1H),3.22(s,1H),3.11(s,3H),2.72(s,1H),2.38–2.20(m,3H),2.13(s,1H),2.00(d,J＝9.5Hz,1H),1.85–1.61(m,5H),1.55(d,J＝10.8Hz,2H),1.49–1.37(m,1H)；13C NMR(500MHz,DMSO)δ170.1,167.2(2),141.1,132.0,129.8(3),127.3(2),63.3,57.3,54.1,49.0,45.8(2),44.6,33.6,29.6,27.4,23.4,22.5,19.0；HRMS:calcd for C23H29N2O3[M+H]+: 381.21727，found:381.21685
实施例31 12-N-(2-甲氧羰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-40)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 2-氯磺酰基苯甲酸甲酯，得到浅黄色固体(657mg，85％),熔点：155-157℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.98–7.93(m,1H),7.60–7.53(m,2H),7.44(dd,J＝7.2,1.7Hz,1H),5.54(s,1H),4.53(s,1H),3.93(d,J＝4.6Hz,3H),3.76(dd,J＝14.0,7.2Hz,1H),3.60(d,J＝20.9Hz,1H),3.02(d,J＝9.5Hz,1H),2.74(dd,J＝50.2,10.1Hz,3H),2.50(d,J＝10.0Hz,1H),2.14(s,1H),2.05–1.96(m,1H),1.84(dd,J＝38.6,28.1Hz,4H),1.66(dd,J＝25.5,12.2Hz,4H),1.43(dd,J＝25.1,10.8Hz,2H),1.14–0.99(m,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3)δ168.8,138.8,135.2,133.1,132.0,130.1,128.6,127.98(2),60.5,59.3,54.2,53.1,46.4,41.7,35.0,34.9,27.7,26.1,25.0,24.2,24.0,19.3；HRMS:calcd for C23H31N2O4S[M+H]+:431.1999，found:431.1994。
实施例32 12-N-(2-羧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-41)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 2-氯磺酰基苯甲酸甲酯，得到浅黄色固体N-KD-40,将黄色固体在20％NaOH水溶液条件下水解，得白色固体(300mg，72％)，熔点：226-228℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.90(s,1H),7.97(d,J＝5.5Hz,1H),7.57(dd,J＝30.1,20.1Hz,3H),5.73(s,1H),4.60(s,1H),3.73(d,J＝14.5Hz,4H),3.47(s,2H),3.34(t,J＝14.2Hz,1H),2.68(s,1H),2.46–2.25(m,2H),2.16–1.96(m,3H),1.92–1.62(m,7H),1.54(s,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3):δ169.0,137.8,136.2,134.0,133.1,130.0, 128.7,128.4,125.7,59.4,58.0,54.48,45.6,45.2,33.6,33.2,28.4,23.7,22.6,22.4,21.6,18.6；HRMS:calcd for C22H29N2O4S[M+H]+:417.1843，found:417.1839。
实施例33 12-N-(4-甲氧羰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-42)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g4-氯磺酰基苯甲酸甲酯，得到浅黄色固体(642mg，83％)，熔点：67-69℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.16(d,J＝8.4Hz,2H),7.99–7.95(m,2H),5.53(d,J＝4.8Hz,1H),4.28(d,J＝5.2Hz,1H),3.96(s,3H),3.71(dd,J＝14.3,7.6Hz,1H),3.62–3.54(m,1H),3.05(dd,J＝11.7,3.4Hz,1H),2.78(d,J＝13.4Hz,1H),2.68(d,J＝12.7Hz,2H),2.49(d,J＝11.9Hz,1H),2.23(s,1H),2.00–1.75(m,5H),1.71–1.53(m,3H),1.49–1.37(m,2H),1.35–1.26(m,1H),1.08(dd,J＝33.9,12.9Hz,2H)； 13C NMR(500MHz,CDCl3)δ165.78,145.16,134.62,133.39,130.22,128.49,127.05,60.73,59.28,54.21,52.63,46.53,41.83,35.17,34.84,27.65,26.10,24.93,24.15,23.82,19.31；HRMS:calcd for C23H31N2O4S[M+H]+:431.1999，found:431.1995。
实施例34 12-N-(4-羧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-43)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 2-氯磺酰基苯甲酸甲酯，得到浅黄色固体N-KD-42,将黄色固体在20％NaOH水溶液条件下水解，得浅黄色固体(293mg，71％)，熔点：245-247℃。1H NMR(500MHz,DMSO):δ8.12 (d,J＝8.3Hz,2H),8.00(d,J＝8.3Hz,2H),5.54(d,J＝4.4Hz,1H),4.26(d,J＝3.7Hz,1H),3.62–3.58(m,1H),3.49–3.41(m,2H),3.19(d,J＝3.4Hz,1H),2.86(s,1H),2.82–2.70(m,2H),2.64(s,1H),2.21(s,1H),2.02–1.89(m,3H),1.81(dd,J＝22.8,12.8Hz,2H),1.65(dd,J＝43.4,12.8Hz,2H),1.39(d,J＝12.6Hz,3H),1.20(dd,J＝21.5,12.6Hz,3H)；13C NMR(500MHz,DMSO)δ172.2,148.0,139.8,135.3(3),132.8,132.2(2),64.8,64.0,58.9,53.8,51.1,47.0,39.5,39.0,32.2,29.8,28.8,27.8,24.0；HRMS:calcd for C22H29N2O4S[M+H]+:417.1843,found:417.1840。
实施例35 12-N-(2-氨基乙磺酰基)苦豆碱(N-KD-44)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.5g 2-邻苯二甲酰亚氨基乙磺酰氯，得到N-KD-32，再加入3滴水合肼，经柱层析得到白色固体(390mg，64％)。熔点：117-119℃。1H NMR(500MHz,CDCl3)；δ5.61–5.54(m,1H),4.27(d,J＝5.6Hz,1H),3.55–3.47(m,2H),3.22–3.13(m,3H),3.09–2.96(m,2H),2.79–2.74(m,1H),2.65(dd,J＝18.6,7.7Hz,2H),2.49(d,J＝12.0Hz,1H),2.27–2.18(m,1H),2.13–2.01(m,3H),2.00–1.94(m,1H),1.90(s,1H),1.86–1.77(m,2H),1.69–1.53(m,3H),1.43–1.33(m,1H),1.06(dd,J＝30.8,12.8Hz,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3)δ134.8,128.6,60.2,59.3,55.3,54.2,46.6,41.6,37.1,35.0,34.8,28.0,26.0,24.8,24.7,24.2,19.3；HRMS:HRMS:calcd for C17H30N3O2S[M+H]+:340.2053,found:340.2051。
实施例36. 12-N-(2-氰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-45)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 2-氰基苯磺酰氯，得到白色固体(605 mg，85％)，熔点：171-173℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.14(d,J＝7.8Hz,1H),7.88(d,J＝7.5Hz,1H),7.75(t,J＝7.5Hz,1H),7.68(t,J＝7.3Hz,1H),5.58(s,1H),4.52(s,1H),3.82(s,1H),3.69(d,J＝8.2Hz,1H),2.99(d,J＝9.8Hz,1H),2.80(d,J＝11.0Hz,1H),2.67(d,J＝10.4Hz,2H),2.50(d,J＝10.2Hz,1H),2.10(s,2H),1.93(s,1H),1.87–1.55(m,8H),1.42(d,J＝12.1Hz,1H),1.09(dd,J＝34.0,9.5Hz,2H)；13C NMR(600MHz,CDCl3)δ144.0,135.5,134.5,133.0,132.4,129.8,128.6,116.7,110.2,65.8,61.0,59.2,54.2,46.5,42.3,34.8,27.8,26.2,24.9,24.4,24.2,19.3；HRMS:calcd for C22H28N3O2S[M+H]+:398.1897,found:398.1893。
实施例37 12-N-(2-乙酰氨基-4-甲基-5-噻唑磺酰基)苦豆碱(N-KD-46)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.5g 2-乙酰氨基-4-甲基-5-噻唑磺酰氯，得到浅黄色固体(631mg，78％)，熔点：132-134℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ5.59(s,1H),4.38(s,1H),3.66(s,2H),3.09(s,1H),2.71(s,3H),2.58(s,3H),2.49(s,1H),2.33(s,3H),2.27–2.20(m,1H),2.13–2.03(m,1H),1.98–1.83(m,4H),1.76(dd,J＝47.4,30.3Hz,5H),1.59–1.38(m,2H),1.10(dd,J＝15.0,7.6Hz,2H)；13C NMR(151MHz,cd3od)δ170.1,159.5,151.3,134.5,128.3,123.2,60.6,59.8,54.2,46.7,41.9,35.0,34.8,27.8,25.6,24.5,24.4,23.7,21.5,19.4,15.7；HRMS:calcd for C21H31N4O3S2[M+H]+:451.1832,found:451.1828。
实施例38 12-N-(4-氰基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-47)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 4-氰基苯磺酰氯，得到白色固体(614mg，86％)，熔点：155-157℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.02(d,J＝8.4Hz,2H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),5.55(d,J＝4.9Hz,1H),4.27(d,J＝5.3Hz,1H),3.70(dd,J＝14.3,7.6Hz,1H),3.66–3.55(m,1H),3.06(dd,J＝11.8,3.4Hz,1H),2.77(d,J＝13.3Hz,1H),2.72–2.58(m,2H),2.50(d,J＝12.0Hz,1H),2.22(s,1H),2.06–1.75(m,5H),1.71–1.55(m,3H),1.51–1.37(m,2H),1.35–1.24(m,1H),1.08(dd,J＝33.6,13.0Hz,2H)；13C NMR(600MHz,CDCl3):δ145.5,134.2,132.8(2),128.8,127.6(2),117.5,115.9,60.9,59.2,54.2,46.5,41.9,35.1,34.8,27.6,26.1,24.9,24.1,23.9,19.3；HRMS:calcd for C22H28N3O2S[M+H]+:398.1897,found:398.1892。
实施例39 12-N-(2-氨基-4-甲基-5-噻唑磺酰基)苦豆碱(N-KD-48)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.5g 2-乙酰氨基-4-甲基-5-噻唑磺酰氯，得到浅黄色固体N-KD-46，再将黄色固体在20％NaOH水溶液条件下水解，得浅黄色固体(473mg，58％)，熔点：186-188℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ5.87(s,2H),5.62(s,1H),4.32(s,1H),3.60(s,2H),3.12(s,1H),2.78(d,J＝61.0Hz,3H),2.47(s,4H),2.17(s,1H),1.89(s,7H),1.74–1.40(m,5H),1.19–1.06(m,1H).HRMS:calcd for C19H29N4O2S2[M+H]+:409.1726,found:409.1722。
实施例40 12-N-(1-甲基-1H-咪唑-4-磺酰基)苦豆碱(N-KD-49)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.3g 1-甲基-1H-咪唑-4-磺酰氯，得到白色固体(540mg，80％)，熔点：152-154℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.49–7.45(m,1H),7.41(d,J＝4.0Hz,1H),5.53(s,1H),4.32(s,1H),3.80–3.66(m,4H),3.54(s,1H),3.04(s,1H),2.72(d,J＝65.2Hz,3H),2.46(s,1H),2.27(s,1H),2.00(s,1H),1.84(t,J＝26.0Hz,5H),1.72–1.53(m,3H),1.41(dd,J＝12.6,9.3Hz,2H),1.08(d,J＝26.3Hz,2H)；13C NMR(500MHz,CDCl3)δ140.7,138.9,135.7,128.0,123.5,77.3,60.3,59.6,54.3,46.8,42.3,34.9,34.0,27.8,26.1,24.9,24.4,23.8,19.5.HRMS:calcd for C19H29N4O2S[M+H]+:377.2006,found:377.2002。
实施例41 12-N-(4-三氟甲氧基苯磺酰基)苦豆碱(N-KD-50)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.5g 4-三氟甲氧基苯磺酰氯，得到白色固体(697mg，85％)，熔点：93-95℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.96(d,J＝8.7Hz,2H),7.34(d,J＝8.2Hz,2H),5.55(s,1H),4.27(s,1H),3.78–3.54(m,2H),3.06(d,J＝10.1Hz,1H),2.79(d,J＝12.1Hz,1H),2.68(s,2H),2.50(d,J＝11.4Hz,1H),2.24(s,1H),2.03–1.78(m,5H),1.65(dd,J＝30.3,12.2Hz,3H),1.53–1.31(m,3H),1.09(dd,J＝33.3,11.7Hz,2H)；13C NMR(600MHz,CDCl3)δ151.8,139.7,134.6,129.1(2),128.5,121.1,120.8(2),60.6,59.3,54.2,46.6,41.8,35.0,34.8,27.6,26.1,24.9,24.2,23.9,19.3；HRMS:calcd for C22H28F3N2O3S[M+H]+:457.1767,found:457.1760。
实施例42 12-N-(2,1,3-苯并噻二唑-4-磺酰基)苦豆碱(N-KD-51)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 2,1,3-苯并噻二唑-4-磺酰氯，得到亮黄色固体(640mg，83％)，熔点：198-200℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ8.30(dd,J＝7.0,0.8Hz,1H),8.21(dd,J＝8.8,0.8Hz,1H),7.70(dd,J＝8.8,7.1Hz,1H),5.50(d,J＝5.3Hz,1H),4.94(d,J＝5.5Hz,1H),3.87(dd,J＝14.2,6.6Hz,1H),3.68–3.56(m,1H),2.94(dd,J＝11.7,3.8Hz,1H),2.76–2.55(m,3H),2.45(d,J＝12.0Hz,1H),2.31(s,1H),1.95–1.73(m,5H),1.72–1.56(m,2H),1.46–1.32(m,2H),1.32–1.23(m,2H),1.06(dd,J＝24.9,13.6Hz,2H)；13C NMR(126MHz,CDCl3):δ155.6,149.6,135.0,133.8,131.4,128.4,128.3,125.9,60.8,59.4,54.2,46.7,41.9,35.2,34.9,27.8,26.1,24.9,24.3,24.2,19.4；HRMS:calcd for C21H27N4O2S2[M+H]+:431.1570,found:431.1563。
实施例43 12-N-(2,3-二氢苯并呋喃-5-磺酰基)苦豆碱(N-KD-52)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 2,3-二氢苯并呋喃-5-磺酰氯，得到浅黄色固体(610mg，82％)，熔点：171-173℃。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ7.70(s,1H),7.66(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),6.82(d,J＝8.4Hz,1H),5.53(s,1H),4.67(t,J＝8.8Hz,2H),4.22(s,1H),3.60(dd,J＝34.5,27.9Hz,2H),3.26(t,J＝8.8Hz,2H),3.04(s,1H),2.85–2.60(m,3H),2.46(d,J＝9.2Hz,1H),2.23(s,1H),2.04–1.75(m,5H),1.63(t,J＝25.5Hz,3H),1.50–1.34(m,3H),1.18–1.00(m,2H)；13C NMR(151MHz,CDCl3)δ163.4,135.2,132.9,128.4,128.0,124.3,109.3(2),72.2,60.3,59.5,54.3,46.7,41.7,35.0,34.9,29.1,27.9, 26.0,24.9,24.4,23.9,19.5；HRMS:calcd for C23H31N2O3S[M+H]+:415.2050,found:415.2047。
实施例44 12-N-(4-甲基-1-哌嗪磺酰基)苦豆碱(N-KD-53)的合成：
参照上述合成通用方法2，加入0.4g 4-甲基-1-哌嗪磺酰氯，得到黄色油状化合物(565mg，80％)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ5.46(d,J＝4.9Hz,1H),4.20(d,J＝5.0Hz,1H),3.34(m,J＝21.3,13.8,6.6Hz,2H),3.12(d,J＝5.1Hz,4H),2.98(dd,J＝11.6,3.8Hz,1H),2.68(d,J＝13.3Hz,1H),2.58(t,J＝12.1Hz,2H),2.42–2.30(m,5H),2.19(s,3H),2.10(dd,J＝25.0,14.9Hz,3H),2.01–1.91(m,1H),1.82(s,1H),1.74(d,J＝11.7Hz,2H),1.69–1.62(m,1H),1.61–1.44(m,3H),1.37–1.24(m,1H),0.99(dd,J＝28.8,13.1Hz,2H)； 13C NMR(500MHz,CDCl3):δ135.5,127.6,65.7,60.8,59.4,54.4,54.2,46.8,46.0,45.8,42.4,34.8,34.1,27.8,26.0,24.8,24.6,24.3,19.4,15.2；HRMS:calcd for C20H35N4O2S[M+H]+:395.2475，found:395.2492。
生物学活性
实验例1本发明化合物抗丙型肝炎病毒活性
测试原理：以huh7.5细胞为丙型肝炎病毒载体，测定样品抑制丙型肝炎病毒进行DNA复制。
测试材料和方法：
1.细胞株：huh7.5细胞；由本室保存。
2.样品处理：本发明实施例化合物用DMSO配成50mM、20mM母液，最高浓度为500μM(200μM)，后用培养液作3倍稀释，各8个稀释度。
3.阳性对照药：苦豆碱，最高浓度为200μM，用培养液作5倍稀释，各8个稀释度。4℃保存。
4.主要试剂：DNA提取试剂盒为北京全式金生物技术有限公司产品。
5.测试方法：
MTT：huh7.5细胞种96孔培养板，种板48小时后按以上稀释度分别加入样品及阳性对照药，同时设细胞对照孔，50μl药液+50μl培养基，加药后3天，每孔加10μlMTT，37℃放置3-4h，吸掉液体，每孔加100μl DMSO，振荡10min，在紫外分析仪测OD值，进行数据分析，计算CC50。
药效：huh7.5细胞种96孔培养板，种板48小时后按以上稀释度分别加入样品及阳性对照药，同时设病毒对照孔，50μl药液+50μl病毒液，3天后，提取RNA。采用Real time PCR的方法检测细胞中HCV DNA，分别计算EC50及SI。
以上数据表明，本发明化合物对于丙型肝炎病毒(HCV)具有很好的抑制活性以及较低的细胞毒性，尤其是化合物N-KD-1-5、14、18、23、25、30、33、44、50、51、53、45和47，其HCV抑制活性明显优于先导化合物苦豆碱本身。
实验例2本发明化合物抗乙型肝炎病毒活性
测试原理：以2.2.15细胞为乙型肝炎病毒载体，测定样品抑制乙型肝炎 病毒进行DNA复制。
测试材料和方法：
1.细胞株：2.2.15细胞；由本室保存。
2.样品处理：样品DMSO配成20mg/ml母液，临用前用培养液作3倍稀释，各8个稀释度。
3.阳性对照药：拉米夫定(3TC)，由北京诺德恒信化工技术有限公司生产，批号为NDS0111122，4℃保存；
苦豆碱。
4.主要试剂：DNA提取试剂盒为北京全式金生物技术有限公司产品。
5.测试方法：
药效：2.2.15细胞种96孔培养板，48小时后按以上稀释度分别加入样品及阳性对照药，同时设细胞对照孔，加药后3天后分别更换含不同稀释浓度样品的培养液，于加药6天后2.2.15细胞，采用Real time PCR的方法检测细胞中HBV DNA，分别计算IC50及SI。
MTT:取指数生长期的2.2.15细胞接种于96孔培养板，2×105个细胞/孔，加入含不同浓度倍比稀释的PFA的培养液，每个稀释度重复3孔，置37℃CO2孵箱培养48小时；弃上清，加入100μl培养液配制的MTT(0.5mg/ml)，37℃继续培养4小时；每孔加入100μl 50％DMF-20％SDS脱色液，37℃过夜；在酶标仪上测定波长为570nm的吸收值(OD570)。
每次试验均设细胞对照及空白对照各3孔，结果以公式：(细胞对照OD570-加药细胞OD570)/细胞对照OD570，计算细胞死亡率(％)，用Reed-Muench法计算半数有毒浓度CC50。
以上结果表明，本发明化合物抗乙型肝炎病毒(HBV)活性与阳性药物3TC相当。
实验例3本发明化合物的抗H7N9活性
测试原理：化学发光法
测试方法：化合物从1：40到1：25000范围内配成五五倍稀释液梯度，配置的浓度依赖于想评价的药效程度。每个EP管中加入550μL的上述稀释液和等量的带有病毒的溶液混合。在37℃，5％CO2的条件下培育一小时，然后取500μL加入铺有Vero细胞的板上，重复各个梯度，然后在37℃，5％CO2的条件下震荡培养2小时，另外加入3毫升含0.5％琼脂糖的覆盖介质。在第四天，病毒斑在PBS上(含0.2％甲醛)用0.1％结晶紫染色并显色及计数。NT50被定义为在病毒斑块上病毒减少50％时化合物浓度的倒数。IC50是指NT50的倒数。
以上结果表明，本发明化合物经过结构修饰后，具有一定的抗流感活性。
实验例4本发明化合物抗EBOV活性
测试原理：化学发光法；
阳性对照药：苦豆碱；
测试方法：化合物从1：40到1：25000范围内配成五五倍稀释液梯度，配置的浓度依赖于想评价的药效程度。每个EP管中加入550μL的上述稀释液和等量的带有病毒的溶液混合。在37℃，5％CO2的条件下培育一小时，然后取500μL加入铺有Vero细胞的板上，重复各个梯度，然后在37℃，5％CO2的条件下震荡培养2小时，另外加入3毫升含0.5％琼脂糖的覆盖介质。在第四天，病毒斑在PBS上(含0.2％甲醛)用0.1％结晶紫染色并显色及计数。NT50被定义为在病毒斑块上病毒减少50％时化合物稀释要求的倒数。
12-N-取代苦豆碱衍生物对EBOV具有中等偏上的活性，其中N-KD-16，N-KD-17，N-KD-18对EBOV病毒的抑制活性较强。
实验例5本发明化合物抗MERS活性
测试原理：化学发光法
测试方法：化合物从1：40到1：25000范围内配成五五倍稀释液梯度，配置的浓度依赖于想评价的药效程度。每个EP管中加入550μL的上述稀释液和等量的带有病毒的溶液混合。在37℃，5％CO2的条件下培育一小时，然后取500μL加入铺有Vero细胞的板上，重复各个梯度，然后在37℃，5％CO2的条件下震荡培养2小时，另外加入3毫升含0.5％琼脂糖的覆盖介质。在第四天，病毒斑在PBS上(含0.2％甲醛)用0.1％结晶紫染色并显色及计数。NT50被定义为在病毒斑块上病毒减少50％时化合物稀释要求的倒数。
经活性测评后，此类化合物具有一定的抗MERS活性。
实验例6本发明化合物的急性毒性
昆明种小鼠(购自中国医学科学院动物研究所)18-20g，称体重后随机分组，每组10只，雌雄各半，记录体重，给药前禁食5小时。分别一次性灌胃给药250mg/kg、500mg/kg和1000mg/kg，以等量生理盐水为空白对照组，密切观察7天，记录体重和死亡情况。由各个剂量的累计死亡量用SPSS软件计算LD50值。
以上结果表明，本发明化合物单次用药在500mg/kg以内均比较安全，其中，N-KD-23、N-KD-49、N-KD-53的单次用药安全范围可达1000mg/kg。
实验例7本发明化合物的药代动力学研究
取健康雄性SD大鼠每组3只(雄性，体重200-250g)，分别口服给药25mg/kg，给药体积为10ml/kg。给药溶液为给药前一小时配置。给药后按规定时间点(0.25h，0.5h，1.5h，2h，4h，6h，24h)经颈静脉插管取全 血约0.3ml，置含有K3EDTA为抗凝剂的离心管中，全血样品采出后离心分离血浆。血浆样品经有机溶剂处理后采用液相-色谱串联质谱法测定。并计算药动学参数出样品分析期间，血浆样品收集后置于-20℃冰箱保存。
以上结果表明，本发明化合物具有优秀的药代性质，尤以N-KD-44，N-KD-50以及N-KD-53较为突出。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。