实现植物基因组外源序列定点整合的方法与流程

文档序号:12457362阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种实现植物基因组外源基因定点整合的方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤一、构建能够在植株基因组的目的整合位点区域进行基因组编辑的打靶载体,该打靶载体包括整合靶位点序列和Cas9核酸酶表达元件;

步骤二、构建外源基因转化载体,并将该外源基因转化载体随机整合到植株的基因组中,得到转化有该外源基因的转基因株系,其中,所述外源基因转化载体包含整合位点序列和;和与所述目的整合位点两翼相同的同源臂序列,且该同源臂序列位于所述整合位点序列和所述外源基因之间;

步骤三、将步骤一中构建的所述打靶载体转化导入步骤二中得到的转基因株系内,筛选得到只含有定点整合到所述目的整合位点区域的株系。

2.如权利要求1所述的实现植物基因组外源基因定点整合的方法,其特征在于,步骤一和步骤二中的同源臂序列的长度为500~1000bp。

3.如权利要求1所述的实现植物基因组外源基因定点整合的方法,其特征在于,步骤一中,所述打靶载体的筛选标记基因为潮霉素基因。

4.如权利要求1所述的实现植物基因组外源基因定点整合的方法,其特征在于,步骤二中,所述外源基因转化载体的筛选标记基因为抗除草剂基因。

5.如权利要求1所述的实现植物基因组外源基因定点整合的方法,其特征在于,步骤三中,通过杂交进行定点整合到所述目的整合位点区域的株系的筛选。

6.如权利要求1所述的实现植物基因组外源基因定点整合的方法,其特征在于,所述植物基因组为水稻基因组。

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