背景技术：
工业培养的有用菌种，需要经过菌种分离、初筛和复筛等步骤，最终挑选出具有某种能力的有用菌种，即纯种。固氮生物肥料生产过程中，需要将来源于自然界的微生物分离并筛选出有用的固氮菌种，再加以改良、培养后经过培养罐培养，获得大量的固氮细菌，最后用于固氮生物肥料的生产。其中，在复筛步骤中，需要进行固氮细菌的摇瓶培养，测定固氮能力，挑选固氮能力强者作生产菌种的出发菌株。
当前在固氮细菌的培养过程中，都是采用摇瓶培养进行中试的。固氮细菌喜静而不喜动。因此，摇瓶培养对固氮细菌的培养会带来培养不充分、不稳定因素，测定固氮能力时也存在明显偏差，影响芽孢的生长和挑选，最终影响固氮生物肥料的生产。另外，传统的固氮细菌培养配方采用酵母膏、甘露醇、琼脂原料等构成液体培养基，脱离了其原本生长所依托的土壤环境，不利于固氮细菌呼吸氧气，因此出发菌株的生长也不理想。基于此，本单位在土壤培养及静止培养方面进行了相关的尝试。
技术实现要素：
本发明的目的就是要提供一种固氮细菌菌种土壤培养配方及培养工艺，提高固氮菌培养的准确性，以提高固氮生物肥料生产的质量。
为了达到上述目的，本发明提供的固氮细菌菌种土壤培养配方为：蔗糖5～15克/千克，硫酸镁0.1～1克/千克，磷酸二氢钾0.1～0.5克/千克，钼酸铵0.01～0.5克/千克，磷檬酸钠0.1～1克/千克，净土1000克，蒸馏水1000毫升，其中，净土为普通土壤经过灭菌和去脂处理后获得。
基于上述固氮细菌菌种土壤培养配方的培养工艺，具体包括如下步骤：
①、按上述配方称重后混合均匀，得到混合培养基；
②、用氢氧化钾将混合培养基的PH值调节至7.0～7.2；
③、将混合培养基分装于500毫升广口三角瓶内，装瓶量为60克每瓶；
④、用蒸汽高压锅在121℃和0.11Pa压力下灭菌30分钟，后取出后自然冷却至常温；
⑤、在无菌环境下接种；
⑥、在30～34℃温度条件下静置培养48小时；
⑦、通过显微镜检查和观察，记录固氮菌数量，完成培养工作。
本发明所提供的固氮细菌菌种土壤培养配方基于土壤条件，更加符合固氮菌原本的生长环境和生长所需的营养条件，利于固氮菌呼吸氧气，培养工艺也能够提供固氮菌原本生长所需的洁净环境和静止状态，因此能够促进固氮菌的生长和繁育，提高固氮菌培养的准确性和有效性，以提高固氮生物肥料生产的质量。
具体实施方式 下面根据具体实施例对本发明作进一步的说明，但不意味着限制本发明的保护范围。
实施例1：固氮细菌菌种土壤培养配方为：蔗糖5克/千克，硫酸镁0.1克/千克，磷酸二氢钾0.1克/千克，钼酸铵0.01克/千克，磷檬酸钠0.1克/千克，净土1000克，蒸馏水1000毫升，其中，净土为普通土壤经过灭菌和去脂处理后获得。
基于上述固氮细菌菌种土壤培养配方的培养工艺，具体包括如下步骤：
①、按上述配方称重后混合均匀，得到混合培养基；
②、用氢氧化钾将混合培养基的PH值调节至7.0～7.2；
③、将混合培养基分装于500毫升广口三角瓶内，装瓶量为60克每瓶；
④、用蒸汽高压锅在121℃和0.11Pa压力下灭菌30分钟，后取出后自然冷却至常温；
⑤、在无菌环境下接种；
⑥、在30～34℃温度条件下静置培养48小时；
⑦、通过显微镜检查和观察，记录固氮菌数量，完成培养工作。
实施例2：固氮细菌菌种土壤培养配方为：蔗糖7克/千克，硫酸镁0.3克/千克，磷酸二氢钾0.2克/千克，钼酸铵0.05克/千克，磷檬酸钠0.3克/千克，净土1000克，蒸馏水1000毫升，其中，净土为普通土壤经过灭菌和去脂处理后获得。
基于上述固氮细菌菌种土壤培养配方的培养工艺，具体步骤与实施例1相同。
实施例3：固氮细菌菌种土壤培养配方为：蔗糖9克/千克，硫酸镁0.5克/千克，磷酸二氢钾0.3克/千克，钼酸铵0.1克/千克，磷檬酸钠0.5克/千克，净土1000克，蒸馏水1000毫升，其中，净土为普通土壤经过灭菌和去脂处理后获得。
基于上述固氮细菌菌种土壤培养配方的培养工艺，具体步骤与实施例1相同。
实施例4：固氮细菌菌种土壤培养配方为：蔗糖12克/千克，硫酸镁0.7克/千克，磷酸二氢钾0.4克/千克，钼酸铵0.3克/千克，磷檬酸钠0.7克/千克，净土1000克，蒸馏水1000毫升，其中，净土为普通土壤经过灭菌和去脂处理后获得。
基于上述固氮细菌菌种土壤培养配方的培养工艺，具体步骤与实施例1相同。
实施例5：固氮细菌菌种土壤培养配方为：蔗糖15克/千克，硫酸镁1克/千克，磷酸二氢钾0.5克/千克，钼酸铵0.5克/千克，磷檬酸钠1克/千克，净土1000克，蒸馏水1000毫升，其中，净土为普通土壤经过灭菌和去脂处理后获得。
基于上述固氮细菌菌种土壤培养配方的培养工艺，具体步骤与实施例1相同。
实施例6：本实施例为参照对比例，固氮细菌菌种培养配方为：磷酸二氢钾0.2克/升，磷酸氢钾0.8克/升，硫酸镁0.2克/升，硫酸钙0.1克/升，高锰酸钠0.01克/升，酵母膏0.5克/升，甘露醇20克/升，氯化铁0.01克/升，蒸馏水1000克，琼脂15克/升。
基于上述固氮细菌菌种培养配方的培养工艺，具体包括如下步骤：
①、按上述配方称重后混合均匀，得到混合培养液；
②、用氢氧化钾将混合培养基的PH值调节至7.0～7.2；
③、将混合培养基分装于500毫升广口三角瓶内，装瓶量为60毫升每瓶；
④、用蒸汽高压锅在121℃和0.11Pa压力下灭菌30分钟，后取出后自然冷却至常温；
⑤、在无菌环境下接种；
⑥、在30～34℃温度条件下摇床培养48小时，摇床转速为每分钟180～220转；
⑦、通过显微镜检查和观察，记录固氮菌数量，完成培养工作。
根据上述实施例1-5的有土配方和静止的培养工艺进行培养，对比实施例6的无土配方和摇床培养工艺进行培养，记录每个培养瓶内固氮菌数量，得到了每个实施例的平均数值。上述实施例1-6结果见表1：
表1：实施例1-6的解氮细菌镜检结果
从表1可见，实施例1-5的芽孢数量明细多于对比实施例6，实施例1-5的芽孢形成率较对比实施例6高，且实施例1-5的芽孢外形也比对比实施例6粗壮。实施例1-5之间的平均芽孢数量存在差异，主要是因为每个配方数量的多少导致的。总之，本发明在固氮细菌土壤培养和静止培养方面区别于传统的固氮细菌液体培养和摇床培养工艺，对固氮细菌的培养具有显著的促进效果。
本发明保护范围涉及上面所述的所有变化形式。