本发明涉及生物制药技术领域，具体的说，是一种制备红链霉素龙胆二糖苷的方法。
背景技术：
决明子，中药名。是豆科植物决明或小决明的干燥成熟种子，以其有明目之功而名之。秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。决明子味苦、甘、咸，性微寒，入肝、肾、大肠经；润肠通便，降脂明目，治疗便秘及高血脂，高血压。清肝明目，利水通便，有缓泻作用，降血压降血脂。
技术实现要素：
本发明的目的在于设计出一种制备红链霉素龙胆二糖苷的方法，采用醇提取方式和真空干燥相结合的方式从决明子中提取制备出红链霉素龙胆二糖苷，整个工艺真空制备环节中能够有效避免二次污染，使得制备出来的红链霉素龙胆二糖苷更纯。
本发明通过下述技术方案实现：一种制备红链霉素龙胆二糖苷的方法，包括以下步骤：
1）取决明子药材，加入按药材重量计15~20倍的60~95％甲醇，加热回流提取3~4h，静置，过滤；药渣用同样方法再提取1～3次，合并提取液，30~40℃水浴减压回收溶剂，得决明子提取物浸膏；
2）经步骤1）后，取决明子提取物浸膏，加入按决明子提取物浸膏重量计10~50倍的乙醇，回流提取3~5次，每次提取0.5~2h，过滤，取上清液，回收溶剂得乙醇提取物；
3）经步骤2）后，取乙醇提取物，加入按乙醇提取物质量计6~8倍体积份的乙醇溶解，按乙醇提取物与硅胶质量比1：3.5~5拌入80~180目的硅胶，真空干燥，得到拌样硅胶，另按乙醇提取物与硅胶质量比1：80~120取100~150目的硅胶，干法装柱，色谱柱径高比1：6~8；将拌样硅胶装于柱顶，以体积比为9~12：1~3：1~5的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，下行法进行干柱层析，洗脱4~6倍柱体积，置阴凉避光处挥干展开剂，自柱头而底部平均切割为18~22份，各切割份用乙醇洗脱，乙醇洗脱液用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的12~15至16~20份乙醇洗脱液，回收溶剂，得红链霉素龙胆二糖苷粗品；
4）取红链霉素龙胆二糖苷粗品用丙酮溶解，按红链霉素龙胆二糖苷粗品与硅胶的质量比1：2~6拌入100~180目的硅胶，真空冷法干燥，得到粗品拌样硅胶，另按红链霉素龙胆二糖苷粗品与硅胶质量比1：80~100取60~150目的硅胶，干法装柱，色谱柱径高比1：6~9；将粗品拌样硅胶加于柱顶，以体积比为9~12：1~3：1~5的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，下行法进行干柱层析，分份收集，洗脱液用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的流份，回收溶剂，得红链霉素龙胆二糖苷半成品；
5）取步骤4）中红链霉素龙胆二糖苷半成品，用按红链霉素龙胆二糖苷半成品质量计为2~4体积份的50~80％乙醇溶解，采用C18反相色谱柱纯化，径高比1：9~12，以20％~50％乙醇洗脱，采用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的流份，回收溶剂得黄色粉末，即为红链霉素龙胆二糖苷。
进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：在步骤1）中，所述水浴减压回收溶剂时的温度为37.6℃。
进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：在所述步骤3）中，真空干燥时，真空度为10-2Pa，且干燥温度为20~40℃。
进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：在所述步骤4）中，真空冷法干燥时，真空度为10-2Pa，且干燥温度为-8~-20℃。
进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：在所述步骤4）中，真空冷法干燥时，真空度为10-2Pa，且干燥温度为-8~-20℃。
本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：
本发明采用醇提取方式和真空干燥相结合的方式从决明子中提取制备出红链霉素龙胆二糖苷，整个工艺真空制备环节中能够有效避免二次污染，使得制备出来的红链霉素龙胆二糖苷更纯。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：
一种制备红链霉素龙胆二糖苷的方法，采用醇提取方式和真空干燥相结合的方式从决明子中提取制备出红链霉素龙胆二糖苷，整个工艺真空制备环节中能够有效避免二次污染，使得制备出来的红链霉素龙胆二糖苷更纯，包括以下步骤：
1）取决明子药材，加入按药材重量计15~20倍的60~95％甲醇，加热回流提取3~4h，静置，过滤；药渣用同样方法再提取1～3次，合并提取液，30~40℃水浴减压回收溶剂，得决明子提取物浸膏；
2）经步骤1）后，取决明子提取物浸膏，加入按决明子提取物浸膏重量计10~50倍的乙醇，回流提取3~5次，每次提取0.5~2h，过滤，取上清液，回收溶剂得乙醇提取物；
3）经步骤2）后，取乙醇提取物，加入按乙醇提取物质量计6~8倍体积份的乙醇溶解，按乙醇提取物与硅胶质量比1：3.5~5拌入80~180目的硅胶，真空干燥，得到拌样硅胶，另按乙醇提取物与硅胶质量比1：80~120取100~150目的硅胶，干法装柱，色谱柱径高比1：6~8；将拌样硅胶装于柱顶，以体积比为9~12：1~3：1~5的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，下行法进行干柱层析，洗脱4~6倍柱体积，置阴凉避光处挥干展开剂，自柱头而底部平均切割为18~22份，各切割份用乙醇洗脱，乙醇洗脱液用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的12~15至16~20份乙醇洗脱液，回收溶剂，得红链霉素龙胆二糖苷粗品；
4）取红链霉素龙胆二糖苷粗品用丙酮溶解，按红链霉素龙胆二糖苷粗品与硅胶的质量比1：2~6拌入100~180目的硅胶，真空冷法干燥，得到粗品拌样硅胶，另按红链霉素龙胆二糖苷粗品与硅胶质量比1：80~100取60~150目的硅胶，干法装柱，色谱柱径高比1：6~9；将粗品拌样硅胶加于柱顶，以体积比为9~12：1~3：1~5的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，下行法进行干柱层析，分份收集，洗脱液用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的流份，回收溶剂，得红链霉素龙胆二糖苷半成品；
5）取步骤4）中红链霉素龙胆二糖苷半成品，用按红链霉素龙胆二糖苷半成品质量计为2~4体积份的50~80％乙醇溶解，采用C18反相色谱柱纯化，径高比1：9~12，以20％~50％乙醇洗脱，采用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的流份，回收溶剂得黄色粉末，即为红链霉素龙胆二糖苷。
实施例2：
本实施例是在上述实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：在步骤1）中，所述水浴减压回收溶剂时的温度为37.6℃。
实施例3：
本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：在所述步骤3）中，真空干燥时，真空度为10-2Pa，且干燥温度为20~40℃。
实施例4：
本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：在所述步骤4）中，真空冷法干燥时，真空度为10-2Pa，且干燥温度为-8~-20℃。
实施例5：
本实施例是在上述任一实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好的实现本发明，特别采用下述设置方式：一种制备红链霉素龙胆二糖苷的方法，包括以下步骤：
1）取决明子药材，加入按药材重量计15~20倍的60~95％甲醇，加热回流提取3~4h，静置，过滤；药渣用同样方法再提取1～3次，合并提取液，37℃水浴减压回收溶剂，得决明子提取物浸膏；
2）经步骤1）后，取决明子提取物浸膏，加入按决明子提取物浸膏重量计10~50倍的乙醇，回流提取3~5次，每次提取0.5~2h，过滤，取上清液，回收溶剂得乙醇提取物；
3）经步骤2）后，取乙醇提取物，加入按乙醇提取物质量计6~8倍体积份的乙醇溶解，按乙醇提取物与硅胶质量比1：3.5~5拌入80~180目的硅胶，在真空度为10-2Pa，且干燥温度为36.5℃条件下进行真空干燥，得到拌样硅胶，另按乙醇提取物与硅胶质量比1：80~120取100~150目的硅胶，干法装柱，色谱柱径高比1：6~8；将拌样硅胶装于柱顶，以体积比为9~12：1~3：1~5的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，下行法进行干柱层析，洗脱4~6倍柱体积，置阴凉避光处挥干展开剂，自柱头而底部平均切割为18~22份，各切割份用乙醇洗脱，乙醇洗脱液用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的12~15至16~20份乙醇洗脱液，回收溶剂，得红链霉素龙胆二糖苷粗品；
4）取红链霉素龙胆二糖苷粗品用丙酮溶解，按红链霉素龙胆二糖苷粗品与硅胶的质量比1：2~6拌入100~180目的硅胶，在真空度为10-2Pa，且干燥温度为-18℃条件下进行真空冷法干燥，得到粗品拌样硅胶，另按红链霉素龙胆二糖苷粗品与硅胶质量比1：80~100取60~150目的硅胶，干法装柱，色谱柱径高比1：6~9；将粗品拌样硅胶加于柱顶，以体积比为9~12：1~3：1~5的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，下行法进行干柱层析，分份收集，洗脱液用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的流份，回收溶剂，得红链霉素龙胆二糖苷半成品；
5）取步骤4）中红链霉素龙胆二糖苷半成品，用按红链霉素龙胆二糖苷半成品质量计为2~4体积份的50~80％乙醇溶解，采用C18反相色谱柱纯化，径高比1：9~12，以20％~50％乙醇洗脱，采用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的流份，回收溶剂得黄色粉末，即为红链霉素龙胆二糖苷。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。