人类Y染色体30个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用的制作方法

文档序号:11809859阅读:来源:国知局

技术特征:

1.人类Y染色体30个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含30对STR基因座的特异性扩增引物,其中STR基因座为:DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b、DYS522、DYS391、DYS456、DYS19、DYS388、DYS448、DYS385a、DYS385b、DYS481、DYS437、DYS390、DYS460、DYS533、DYS458、DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643、DYS549、DYS557、DYS520。

2.根据权利要求1所述的人类Y染色体30个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒,其特征在于,所述30对STR基因座的特异性扩增引物的序列如下:DYS392、SEQ ID NO:1~2;DYS389I和DYS389II、SEQ ID NO:3~4;DYS447、SEQ ID NO:5~6;DYS438、SEQ ID NO:7~8;DYS527a和DYS527b、SEQ ID NO:9~10;DYS522、SEQ ID NO:11~12;DYS391、SEQ ID NO:13~14;DYS456、SEQ ID NO:15~16;DYS19、SEQ ID NO:17~18;DYS388、SEQ ID NO:19~20;DYS448、SEQ ID NO:21~22;DYS385a和DYS385b、SEQ ID NO:23~24;DYS481、SEQ ID NO:25~26;DYS437、SEQ ID NO:27~28;DYS390、SEQ ID NO:29~30;DYS460、SEQ ID NO:31~32;DYS533、SEQ ID NO:33~34;DYS458、SEQ ID NO:35~36;DYS393、SEQ ID NO:37~38;Y_GATA_H4、SEQ ID NO:39~40;DYS439、SEQ ID NO:41~42;DYS635、SEQ ID NO:43~44;DYS444、SEQ ID NO:45~46;DYS643、SEQ ID NO:47~48;DYS549、SEQ ID NO:49~50;DYS557、SEQ ID NO:51~52;DYS520、SEQ ID NO:53~54。

3.根据权利要求1或2所述的人类Y染色体30个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒,其特征在于,所述30对STR基因座的特异性扩增引物的浓度如下:DYS392、0.06μM;DYS389I和DYS389II、0.07μM;DYS447、0.12μM;DYS438、0.07μM;DYS527a和DYS527b、0.11μM;DYS522、0.14μM;DYS391、0.07μM;DYS456、0.06μM;DYS19、0.15μM;DYS388、0.15μM;DYS448、0.09μM;DYS385a和DYS385b、0.12μM;DYS4810.11μM;DYS437、0.07μM;DYS390、0.08μM;DYS460、0.12μM;DYS533、0.15μM;DYS458、0.17μM;DYS393、0.11μM;Y_GATA_H4、0.13μM;DYS439、0.14μM;DYS635、0.17μM;DYS444、0.18μM;DYS643、0.20μM;DYS549、0.17μM;DYS557、0.20μM;DYS520 0.18μM。

4.根据权利要求1或2所述的人类Y染色体30个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒,其特征在于,所述30对STR基因座的特异性扩增引物分为五组:第一组,DYS392、DYS389I、DYS447、DYS389II、DYS438、DYS527a、DYS527b、DYS522;第二组,DYS391、DYS456、DYS19、DYS388、DYS448、DYS385a、DYS385b;第三组,DYS481、DYS437、DYS390、DYS460、DYS533、DYS458;第四组,DYS393、Y_GATA_H4、DYS439、DYS635、DYS444、DYS643;第五组,DYS549,DYS557,DYS520;每对引物中至少一条采用荧光染料标记其5’端。

5.根据权利要求4所述的人类Y染色体30个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒,其特征在于,所述荧光染料为6-FAM、HEX、TAMRA、ROX、VIG中任意一种,且每组采用的荧光标记不同。

6.根据权利要求1所述的人类Y染色体30个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括反应混合液、30对STR基因座的特异性扩增引物、30个基因座的等位基因、热启动Taq酶、DNA标准品、sdH2O和荧光分子量内标;其中反应混合液的组成为:MgCl2 7.5mM,Tris-HCl 125mM,KCl 125mM,dNTPs 7.5mM,BSA 2g/L。

7.权利要求1所述的人类Y染色体30个STR基因座的荧光标记复合扩增试剂盒在法医鉴定、亲权鉴定和DNA家谱构建中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述应用的程序为将试剂盒内试剂与样品DNA装入PCR扩增管,置于热循环仪上,进行PCR扩增,扩增程序为:95℃2min;94℃30s、59℃1min、72℃1min,共29个循环;60℃终延伸30min;4℃保温得到扩增产物,将扩增产物在遗传分析仪上进行荧光检测,再用片段分析软件GeneMapper分析基因测序仪上检测到的数据。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述样品DNA包括利用Chelex法、磁珠提取法或有机抽提法中任意一种方法提取的人基因组DNA;或采用免提取的滤纸、FTA卡、棉签、纱布中任意一种载体收集的人类血液或口腔细胞。

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