一种经济快速提取酒醅中微生物基因组DNA的方法与流程

文档序号:11126028阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种经济快速提取酒醅中微生物基因组DNA的方法,包括以下步骤:

1)酒醅中微生物细胞破壁:将研磨剂、酒醅样品和裂解液混和后高速震荡,然后离心;所述的研磨剂为石英砂;进一步地,所述的石英砂粒径为12-20目;

2)核酸纯化。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于所述的石英砂粒径为16目。

3.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)的核酸纯化包含以下步骤:

a)除杂:取步骤1)中离心后的上清液加入P.C.I混匀,离心;

b)过柱:将离心后的上清液与硅胶膜结合液混匀,然后过核酸纯化柱,离心弃滤液;所述的硅胶膜结合液为pH为4-6.5的盐酸胍与乙酸钾的混合液;

c)洗柱:加入洗脱液过核酸纯化柱,然后高速离心甩干核酸纯化柱,自然条件下干燥;

d)洗脱:在核酸提取柱的硅胶膜上加洗脱液溶解DNA,离心洗脱下DNA溶液。

4.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,

研磨剂、酒醅样品和裂解液三者的比例依次为15~22g:6~9g:16~24mL;优选地,为18.5g:7.5g:20mL。

5.如权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)中,

裂解液配方如下:1.5-2.5%CTAB(w/v),90-112mM Tris-HCl(pH 8.0),18-24mM EDTA(pH8.0),1.2-1.6M NaCl;优选2%CTAB(w/v),100mM Tris-HCl(pH 8.0),20mM EDTA(pH8.0),1.4M NaCl。

6.如权利要求3所述的方法,其特征在于步骤a)中,

所述的P.C.I为24-26体积苯酚:23-25体积氯仿:0.5-1.5体积异戊醇;优选25体积苯酚:24体积氯仿:1体积异戊醇;

P.C.I与上清液的体积比为1:0.8~1.2。

7.如权利要求3所述的方法,其特征在于步骤b)中,

上清液与硅胶膜结合液的体积比为1:1.5~2.5;

硅胶膜结合液为pH为5的盐酸胍与乙酸钾的混合液;

盐酸胍与乙酸钾的摩尔质量比为:3-4M:0.5M;优选4M:0.5M。

8.如权利1-7任一项所述的方法,其特征在于,包括以下步骤:

将12~20目的石英砂灭菌烘干后,称取15~22g装入50mL无菌离心管中;

称取6~9g酒醅样品于离心管,加入16~24mL裂解液,均质仪震荡1min,10000rpm离心10min;

转移上清至50mL无菌离心管中,加0.8~1.2mL的P:C:I,摇匀,11000rpm离心20min;所述的P.C.I为25体积苯酚:24体积氯仿:1体积异戊醇;

转移上清至50mL无菌离心管中,加1.5~2.5mL的硅胶膜结合液,摇匀;用15mL核酸纯化柱过滤,弃滤液,滤完为止;

吸附柱中加2.5~3.5mL 70%乙醇,过滤,弃滤液,重复一次;

10000rpm空管离心2min,弃滤液;

纯化柱自然条件下干燥30~60min,加入50~300μL无菌去离子水或TE溶液溶解DNA,过滤,滤液装于1.5mL无菌离心管中,-20℃保存备用。

9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述的裂解液配方为2%CTAB(w/v),100mM Tris-HCl(pH 8.0),20mM EDTA(pH8.0),1.4M NaCl。

10.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述的硅胶膜结合液pH为5;所述的硅胶膜结合液为4M盐酸胍:0.5M乙酸钾。

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