1.一种表征急性毒性的重组质粒,其特征在于,所述的重组质粒含有卡那霉素抗性基因片段与报道基因片段,所述的报道基因片段具有独立的启动子,所述的启动子为组成型表达。
2.根据权利要求1所述的一种表征急性毒性的重组质粒,其特征在于,所述的重组质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的一种表征急性毒性的重组质粒,其特征在于,所述卡那霉素抗性基因片段的核苷酸序列为SEQ ID NO.1自5'末端第11179-12287位核苷酸片段。
4.根据权利要求1所述的一种表征急性毒性的重组质粒,其特征在于,所述的报道基因为发光基因luxCDABE,所述luxCDABE基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1自5'末端第384-6181位核苷酸片段。
5.一种如权利要求1-4中任一项所述的表征急性毒性的重组质粒的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)卡那霉素抗性基因片段的获得:
以pRMJ1质粒为模板,PCR获得卡那霉素抗性基因,两个引物所设置的酶切位点与质粒pWH1274的AhdI和AatII相匹配,PCR反应后进行纯化,将纯化的PCR产物用限制性内切酶AhdI和AatII进行双酶切,获得卡那霉素抗性基因片段;
2)含有卡那霉素抗性基因的重组表达载体pWHkm的获得:
用限制性内切酶AhdI和AatII酶切质粒pWH1274,用T4DNA连接酶将卡那霉素抗性基因片段与酶切的质粒pWH1274片段连接,获得含有卡那霉素抗性基因的重组表达载体pWHkm,将其转化入感受态细胞,通过含有卡那霉素的LB培养基筛选得到重组表达载体pWHkm;
3)报道基因片段的获得:
以pSalAR_lux质粒为模板,PCR获得报道基因luxCDABE片段,两个引物所设置的酶切位点为质粒pWH1274的BamHI,PCR反应后进行纯化,将纯化的PCR产物用限制性内切酶BamHI进行酶切,获得报道基因luxCDABE片段;
4)含有报道基因能够表征急性毒性的重组质粒pWHKm-lux的构建:
用限制性内切酶BamHI来酶切步骤2)所得重组表达载体pWHkm,用T4DNA连接酶将报道基因片段与酶切的重组表达载体pWHkm片段连接,获得含有报道基因能够表征急性毒性的重组质粒pWHKm-lux,重组质粒pWHKm-lux转化入感受态细胞,在含有卡那霉素的LB培养基上筛选发光的菌落,提取质粒即为表征急性毒性的重组质粒。
6.一种表征急性毒性的重组菌,其特征在于,由权利要求1-4中任一项所述表征急性毒性的重组质粒转化导入不动杆菌Acinetobacter baylyi ADP1中获得。
7.根据权利要求6所述的一种表征急性毒性的重组菌,其特征在于,所述的重组菌命名为Acinetobacter baylyi HesenATox,已于2016年10月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编100101),保藏编号为CGMCC No.13117。
8.一种如权利要求6或7所述的表征急性毒性的重组菌的应用,其特征在于,所述的重组菌作为急性毒性物质的生物检测器。
9.根据权利要求8所述的表征急性毒性的重组菌的应用,其特征在于,所述的急性毒性物质包括含铬物质。