技术领域
本发明属于天然产物提取技术领域，具体涉及一种采用蚕蛹蛋白制备寡肽的方法。
背景技术：
功能性肽（bioactive peptides）是指对生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物，是氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，具有免疫调节、激素调节、降血压、降血脂、抗疲劳、抗氧化等生理调节功能。大豆、花生、玉米、小麦、蚕蛹等动植物蛋白的多肽链内部普遍存在着功能区，经适当的蛋白酶水解后都可释放出各种生物活性肽。因此，酶解动植物蛋白以获取特定生物活性肽的研究迅速成为动物营养学和生理学界的研究热点。但目前国内外对天然蛋白活性肽的研究主要集中于大豆活性肽与花生活性肽，而对蚕蛹寡肽的研究才刚刚起步，普遍存在产品水解低、收率低、生物活性低等问题。
蚕蛹是蚕茧抽丝后剩下的主要副产品，产量巨大，我国干蚕蛹年产量高达50多万t。蚕蛹营养价值丰富，蛋白含量约为60%，含有人体必需的8种氨基酸，是一种优质的蛋白资源。但由于蚕蛹蛋白的水溶性、起泡性、乳化性和持水性较差，异味物质与色素往往脱除不彻底，限制了它在食品工业中的应用，造成了优质蛋白资源的极大浪费。将蚕蛹蛋白酶解为寡肽，不仅可改善其蛋白特性，而且可以拓宽其应用领域，提高其资源价值。
技术实现要素：
解决的技术问题：本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种采用蚕蛹蛋白制备寡肽的方法，该方法可显著提高蚕蛹蛋白的水解度和寡肽得率，所得产物主要是低分子寡肽。
技术方案：一种采用蚕蛹蛋白制备寡肽的方法，包括以下步骤：
步骤1，取蚕蛹，洗净、烘干，破碎成粉末；
步骤2，将粉末加至70-85v/v%乙醇溶液中50-70℃浸提1-3h，过滤，得到湿粉；
步骤3，将湿粉通过纤维素酶进行水解处理，灭酶，得到酶解液；
步骤4，将酶解液通过砂滤装置进行过滤后，滤液导入孔径为200-500nm的陶瓷微滤膜，得到透过液；
步骤5，在透过液中加入复合酶进行反应，反应液离心后上清经干燥即得到寡肽。
进一步地，步骤1中粉末粒度在20-40目。
进一步地，步骤2中粉末和乙醇溶液的质量体积比为100g：300-500mL。
进一步地，步骤3中纤维素酶的重量是湿粉重量的3-6%，水解条件为45-55℃、30-70min。
进一步地，步骤5中复合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2组成的混合物。
进一步地，步骤5中复合酶在透过液中的浓度为0.8-1.5wt.%，酶解温度为45-65℃，透过液pH为6-10。
进一步地，步骤2中乙醇溶液中还含有5-8wt.%硅藻土。
有益效果：本发明的制备方法可显著提高蚕蛹蛋白的水解度和寡肽得率，所得产物主要是低分子寡肽，仅有少量游离氨基酸。
具体实施方式
实施例1
一种采用蚕蛹蛋白制备寡肽的方法，包括以下步骤：
步骤1，取蚕蛹，洗净、烘干，破碎成粉末；
步骤2，将粉末加至70v/v%乙醇溶液中50℃浸提3h，过滤，得到湿粉；
步骤3，将湿粉通过纤维素酶进行水解处理，灭酶，得到酶解液；
步骤4，将酶解液通过砂滤装置进行过滤后，滤液导入孔径为200-500nm的陶瓷微滤膜，得到透过液；
步骤5，在透过液中加入复合酶进行反应，反应液离心后上清经干燥即得到寡肽。
其中，步骤1中粉末粒度在20目；步骤2中粉末和乙醇溶液的质量体积比为100g：300mL；步骤3中纤维素酶的重量是湿粉重量的3%，水解条件为45℃、70min；步骤5中复合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2组成的混合物，复合酶在透过液中的浓度为0.8wt.%，酶解温度为45℃，透过液pH为6。
本实施例中蚕蛹蛋白的水解度达29.2%，寡肽得率高达为81.14%；所得寡肽的数均分子量为665.5 Da、重均分子量为726.9 Da、肽含量达74.6%，而游离氨基酸含量仅为7.33%。
实施例2
一种采用蚕蛹蛋白制备寡肽的方法，包括以下步骤：
步骤1，取蚕蛹，洗净、烘干，破碎成粉末；
步骤2，将粉末加至75v/v%乙醇溶液中60℃浸提3h，过滤，得到湿粉；
步骤3，将湿粉通过纤维素酶进行水解处理，灭酶，得到酶解液；
步骤4，将酶解液通过砂滤装置进行过滤后，滤液导入孔径为200-500nm的陶瓷微滤膜，得到透过液；
步骤5，在透过液中加入复合酶进行反应，反应液离心后上清经干燥即得到寡肽。
其中，步骤1中粉末粒度在40目；步骤2中粉末和乙醇溶液的质量体积比为100g：400mL；步骤3中纤维素酶的重量是湿粉重量的5%，水解条件为50℃、40min；步骤5中复合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2组成的混合物，复合酶在透过液中的浓度为1.1wt.%，酶解温度为50℃，透过液pH为8。
本实施例中蚕蛹蛋白的水解度达31.5%，寡肽得率高达为82.43%；所得寡肽的数均分子量为654.7Da、重均分子量为735.2 Da、肽含量达75.9%，而游离氨基酸含量仅为6.54%。
实施例3
一种采用蚕蛹蛋白制备寡肽的方法，包括以下步骤：
步骤1，取蚕蛹，洗净、烘干，破碎成粉末；
步骤2，将粉末加至80v/v%乙醇溶液中70℃浸提2h，过滤，得到湿粉；
步骤3，将湿粉通过纤维素酶进行水解处理，灭酶，得到酶解液；
步骤4，将酶解液通过砂滤装置进行过滤后，滤液导入孔径为200-500nm的陶瓷微滤膜，得到透过液；
步骤5，在透过液中加入复合酶进行反应，反应液离心后上清经干燥即得到寡肽。
其中，步骤1中粉末粒度在20目；步骤2中粉末和乙醇溶液的质量体积比为100g：500mL；步骤3中纤维素酶的重量是湿粉重量的5%，水解条件为55℃、40min；步骤5中复合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2组成的混合物，复合酶在透过液中的浓度为1.3wt.%，酶解温度为60℃，透过液pH为6。
本实施例中蚕蛹蛋白的水解度达27.8%，寡肽得率高达为75.2%；所得寡肽的数均分子量为647.1 Da、重均分子量为722.5 Da、肽含量达69.6%，而游离氨基酸含量仅为6.52%。
实施例4
一种采用蚕蛹蛋白制备寡肽的方法，包括以下步骤：
步骤1，取蚕蛹，洗净、烘干，破碎成粉末；
步骤2，将粉末加至85v/v%乙醇溶液中70℃浸提1h，过滤，得到湿粉；
步骤3，将湿粉通过纤维素酶进行水解处理，灭酶，得到酶解液；
步骤4，将酶解液通过砂滤装置进行过滤后，滤液导入孔径为200-500nm的陶瓷微滤膜，得到透过液；
步骤5，在透过液中加入复合酶进行反应，反应液离心后上清经干燥即得到寡肽。
其中，步骤1中粉末粒度在40目；步骤2中粉末和乙醇溶液的质量体积比为100g：500mL；步骤3中纤维素酶的重量是湿粉重量的6%，水解条件为55℃、30min；步骤5中复合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2组成的混合物，复合酶在透过液中的浓度为1.5wt.%，酶解温度为65℃，透过液pH为10。
本实施例中蚕蛹蛋白的水解度达30.1%，寡肽得率高达为80.25%；所得寡肽的数均分子量为657.8 Da、重均分子量为718.4 Da、肽含量达72.1%，而游离氨基酸含量仅为7.15%。
实施例5
本实施例与实施例2的区别在于：步骤2中乙醇溶液中还含有5-8wt.%硅藻土。
一种采用蚕蛹蛋白制备寡肽的方法，包括以下步骤：
步骤1，取蚕蛹，洗净、烘干，破碎成粉末；
步骤2，将粉末加至75v/v%乙醇溶液中60℃浸提3h，乙醇溶液中含有5wt.%硅藻土，过滤，得到湿粉；
步骤3，将湿粉通过纤维素酶进行水解处理，灭酶，得到酶解液；
步骤4，将酶解液通过砂滤装置进行过滤后，滤液导入孔径为200-500nm的陶瓷微滤膜，得到透过液；
步骤5，在透过液中加入复合酶进行反应，反应液离心后上清经干燥即得到寡肽。
其中，步骤1中粉末粒度在40目；步骤2中粉末和乙醇溶液的质量体积比为100g：400mL；步骤3中纤维素酶的重量是湿粉重量的5%，水解条件为50℃、40min；步骤5中复合酶是胰蛋白酶和中性蛋白酶按1：2组成的混合物，复合酶在透过液中的浓度为1.1wt.%，酶解温度为50℃，透过液pH为8。
本实施例中蚕蛹蛋白的水解度达34.2%，寡肽得率高达为85.62%；所得寡肽的数均分子量为667.8.7Da、重均分子量为742.9Da、肽含量达77.1%，而游离氨基酸含量仅为5.62%。