本发明涉及一种有效延长乳酸菌存活期的培养基及其制备方法。
背景技术：
自俄国生物学家梅契尼柯夫发现乳酸菌的重要作用以来，乳酸菌及乳酸菌饮料在世界各国的应用已经相当普及，人们对它的认识越来越深入。国内外大量动物和临床试验证明，乳酸菌对人和动物都有较好的保健和治疗功效，其主要作用有：改善胃肠道功能，维持肠道菌群平衡。乳酸菌是肠道常在菌，可以改变动物肠道内环境，抑制有害菌繁殖，调整胃肠道菌群平衡。畜禽服用乳酸菌后，乳酸菌通过黏附素与肠黏膜细胞紧密结合，在肠黏膜表面定植占位，成为生理屏障的主要组成部分，从而达到恢复宿主抵抗力，修复肠道菌群屏障、治愈肠道疾病的作用。如果这个屏障遭到抗生素或其他因素的破坏，宿主丧失了对外来菌抵抗力，会使具有耐药性的肠内菌异常增殖而取代优势菌的位置，造成肠道内微生态平衡的失调。其次，乳酸菌能够为机体提供营养物质，促进机体生长，乳酸菌能直接为宿主提供可利用的必需氨基酸和各种维生素，还可提高矿物元素的生物活性，进而达到为宿主提供必需营养物质、增强动物的营养代谢、直接促其生长的作用，也可以加强动物机体对营养物质的吸收。再次，乳酸菌具有提高免疫力的作用，一方面能明显激活巨噬细胞的吞噬作用，另一方面由于它能在肠道定植，相当于天然自动免疫，还能刺激腹膜巨噬细胞、诱导产生干扰素、促进细胞分裂、产生抗体及促进细胞免疫等，所以能增强机体的非特异性和特异性免疫反应，提高机体的抗病能力。最后，乳酸菌对一些低温菌和腐败菌有很好的抑制作用，可用于防治腹泻、下痢、肠炎、便秘和由于肠道功能紊乱引起的多种疾病以及皮肤炎症。
综上，乳酸菌对动物体的健康起到举足轻重的作用，然而乳酸菌在动物肠道内要充分发挥其作用，必须保证乳酸菌是活性菌。而目前市售的乳酸菌产品保质时间短，常温下活菌量下降迅速，动物饮用后收不到良好的效果，不能满足人们对液态乳酸菌的需求。而现有技术中，为了避免这些问题，往往采用培养基来延长乳酸菌活菌的存活期、提高乳酸菌的生物活性。培养基是供微生物、植物组织和动物组织生长和维持用的人工配制养料，一般含有碳水化合物、含氮物质、无机盐、维生素和水等，有的还含有抗菌素、色素、激素和血清。而现有的用来延长乳酸菌活菌存活期的培养基的效果不甚理想，远远不能满足人们的需求。所以，亟需一种可以有效延长乳酸菌存活期的培养基。
技术实现要素：
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种操作简便、成本低廉、能使乳酸菌的性质更稳定、生物活性更强、储存更长久的有效延长乳酸菌存活期的培养基及其制备方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种有效延长乳酸菌存活期的培养基，其活性成分由以下重量份数的原料制成：蛋白胨0.08-0.12份、酵母浸粉0.08-0.12份、甘露寡糖1.5-2.5份、脱脂奶粉0.16-0.24份、脱脂豆粕0.5-0.7份、七水硫酸镁0.05-0.07份、七水硫酸锰0.025-0.035份、玉米浆干粉1.5-2.5份、复合添加剂0.008-0.012份、磷酸二氢钠0.025-0.035份、柠檬酸钠0.25-0.35份、柠檬酸0.2-0.3份、乙酸钠0.08-0.12份、吐温80为0.08-0.12份、酿酒酵母0.04-0.06份；所述复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物，且质量比为羧甲基纤维素钠：海藻酸钠：骨粉：王浆酸：瓜尔豆胶：黄原胶＝2：2：3：1：1：2；所述酿酒酵母的菌落密度为2×105cfu/g。
优选的，各活性成分的重量份数为：蛋白胨0.1份、酵母浸粉0.1份、甘露寡糖2份、脱脂奶粉0.2份、脱脂豆粕0.6份、七水硫酸镁0.06份、七水硫酸锰0.03份、玉米浆干粉2份、复合添加剂0.01份、磷酸二氢钠0.03份、柠檬酸钠0.3份、柠檬酸0.25份、乙酸钠0.1份、吐温80为0.1份、酿酒酵母0.05份；所述复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物，且质量比为羧甲基纤维素钠：海藻酸钠：骨粉：王浆酸：瓜尔豆胶：黄原胶＝2：2：3：1：1：2；所述酿酒酵母的菌落密度为2×105cfu/g。
上述有效延长乳酸菌存活期的培养基的制备方法，包括如下步骤：
(1)将玉米浆干粉置于搅拌槽中，加入4-6倍玉米浆干粉质量的8℃-12℃的净化水，搅拌成糊状，放置20-30分钟后，加入2-4倍玉米浆干粉质量的15℃-20℃的净化水，搅拌均匀；
(2)依次将蛋白胨、酵母浸粉、甘露寡糖、脱脂奶粉、脱脂豆粕、七水硫酸镁、七水硫酸锰、步骤(1)所得产物、磷酸二氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸钠、吐温80和酿酒酵母放入烧杯中，加入0.6-0.8倍混合物质量的15℃-18℃的净化水，搅拌均匀，得混合液；
(3)将复合添加剂中的羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶按质量比为2：2：3：1：1：2的比例混合均匀，加入到80-100倍复合添加剂质量的纯净水中，充分混匀溶解；
(4)将步骤(3)中所得产物加入到步骤(2)中盛有混合液中的烧杯中，混合均匀，将混合均匀后的盛有混合物料的烧杯置于铺有石棉网的电炉上，小火加热，边加热边用玻璃棒顺时针搅拌25-35分钟，停止加热；
(5)往步骤(4)所得产物中加入质量浓度为5％-7％的HCl溶液，调节pH值为5.4-5.8；
(6)将步骤(5)所得产物高压灭菌18-22分钟，即得该有效延长乳酸菌存活期的培养基。
所述复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物，且质量比为羧甲基纤维素钠：海藻酸钠：骨粉：王浆酸：瓜尔豆胶：黄原胶＝2：2：3：1：1：2。
所述酿酒酵母的菌落密度为2×105cfu/g，是将酿酒酵母置于酿酒酵母液体培养基中培养所得，其中酿酒酵母液体培养基的成分为蛋白胨0.5份、甘露寡糖1份、酵母浸出物0.3份、麦芽汁0.3份。
步骤(6)的高压灭菌具体步骤为：待蒸气压力为1.05kg/cm2-1.15kg/cm2时保持恒压，待水蒸气的温度上升至120℃-122℃时，保持恒温下灭菌18-22分钟，停止加压，待压力降为0后释放水蒸气。
用法：将一种或多种乳酸菌的种子液加入到本发明有效延长乳酸菌存活期的培养基中，在35℃-40℃的温度下培养。
本发明所采用的各活性成分的药用性能如下所示：
蛋白胨：蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的粉剂，富含有机氮化合物、维生素和糖类，可以作为微生物培养基的主要原料，为微生物提供C源、N源、生长因子等营养物质。
酵母浸粉：酵母浸粉是以高蛋白面包酵母或啤酒酵母为原料，经自溶、酶解、浓缩、干燥等工艺制成的一种富含蛋白质、氨基酸、多肽、核酸、维生素及微量元素等营养成分的生物培养基产品。酵母浸粉营养成分比例协调，能为微生物发酵培养提供全面均衡的营养。
甘露寡糖：甘露寡糖是从酵母培养细胞壁中提取的一类新型抗原活性物质，不仅具有低热、稳定、安全无毒的良好理化性质，而且具有保护肠道和提高免疫力的作用。
脱脂奶粉：脱脂奶粉是将鲜牛奶脱去脂肪再干燥而成的粉末状产品，所含蛋白质不低于非脂乳固体的34％，含有丰富的营养因子。脱脂奶粉的脂肪含量较少，易保存，不易发生氧化作用。
脱脂豆粕：脱脂豆粕是指大豆经浸油后剩余的副产品，含有46％的蛋白质、钾、钙等无机盐和碳水化合物，利用它可制成多种多样的特色食品。脱脂豆粕作为一种高蛋白质，是制作牲畜与家禽饲料的主要原料，还可以用于制作糕点食品，健康食品以及化妆品和抗菌素原料。
七水硫酸镁：七水硫酸镁为四角粒状或菱形晶体，无色透明，易溶于水，微溶于乙醇和甘油。在本发明中与七水硫酸锰一起为培养乳酸菌提供必需的微量元素。
七水硫酸锰：七水硫酸锰是采用氧化锰和碳酸锰浸取提液浓缩而成的粉红色的粉末。在本发明中与七水硫酸镁一起为培养乳酸菌提供必需的微量元素。
玉米浆干粉：玉米浆干粉是以鲜玉米浆为原料经低温瞬间加热喷雾干燥而成的粉末，其蛋白质、微量元素含量高。玉米浆是微生物生长很普遍应用的有机氮源，它还能促进青霉素等抗生素的生物合成。在生物发酵过程中作水溶性植物蛋白及水溶性维生素等营养元素补充剂。
复合添加剂：本发明中的复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶按照质量比为2：2：3：1：1：2的比例混合而成。羧甲基纤维素钠本身是一种增稠剂，可有效提高产品的均一度，羧甲基纤维素钠与明胶及果胶可以形成共凝聚物，也可以与胶原形成复合物，能沉淀某些带正电的蛋白。骨粉是将哺乳动物组织和骨头经过炼油、干燥和粉碎后的产品，主要成分是磷酸三钙、骨胶和脂肪。海藻酸钠凝胶小球内部为蜂窝状结构，乳酸菌经其部分包埋后，其热稳定性和耐久储存性都明显提高。王浆酸(10-HDA)是从蜂王浆中分离出一种有机酸，是一种特殊的不饱和有机酸，是一种白色晶体，熔点64℃，性质比较稳定，有很好的杀菌、抑菌作用和抗癌、抗放射的功能，在低温或高温的环境中可以长时间的存放且其结构也不会出现破坏或消失的现象。本发明中将羧甲基纤维素钠与海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶混合使用，单位粘度要比羧甲基纤维素钠高2-3倍。
磷酸二氢钠：本发明所用的磷酸二氢钠为酸碱缓冲剂，磷酸二氢钠为无色斜方晶结晶，主要用于制革、处理锅炉水，作为品质改良剂和制焙粉，在食品工业、发酵工业中作缓冲剂和发酵粉原料，还用作饲料添加剂、洗涤剂及染助剂等。
柠檬酸钠：柠檬酸钠是一种白色晶体状的有机化合物，在食品、饮料工业中用作风味剂、稳定剂；在医药工业中用作抗血凝剂、化痰药和利尿药；在洗涤剂工业中作为无毒洗涤剂的助剂等。在本发明中与柠檬酸和乙酸钠等一同为培养乳酸菌提供生长因子,其有效成分还能维持均衡渗透压，抑制杂菌。
柠檬酸：柠檬酸是一种重要的有机酸，在室温下为无色半透明晶体或白色颗粒或白色结晶性粉末，无臭，易溶于水。在本发明中与柠檬酸钠和乙酸钠等一同为培养乳酸菌提供生长因子,其有效成分还能维持均衡渗透压，抑制杂菌。
乙酸钠：乙酸钠是无色无味的结晶体，主要用于印染工业、医药、照相、电镀、化学试剂及有机合成等。在本发明中与柠檬酸钠和柠檬酸等一同为培养乳酸菌提供生长因子,其有效成分还能维持均衡渗透压，抑制杂菌。
吐温80：吐温80在本发明中为表面活性剂，吐温80为淡黄色至橙黄色的粘稠液体，味微苦略涩，吐温80中的亲脂成份包括不饱和脂肪酸等。
酿酒酵母：酿酒酵母是发酵中最常用的生物种类，传统上用于制作面包和馒头等食品及酿酒。在本发明中为培养乳酸菌提供碳源、氮源。
本发明的有益技术效果：该有效延长乳酸菌存活期的培养基，以蛋白胨、酵母浸粉、甘露寡糖、脱脂奶粉、脱脂豆粕、七水硫酸镁、复合添加剂、柠檬酸、乙酸钠、酿酒酵母等原料精制而成。其中，酿酒酵母与甘露寡糖等一起为培养乳酸菌提供碳源和氮源；七水硫酸镁和七水硫酸锰一起为培养乳酸菌提供多种必需的微量元素；柠檬酸钠、柠檬酸和乙酸钠为培养乳酸菌提供生长因子,其成分还能维持均衡渗透压，抑制杂菌。诸原料相互协同，能使液态乳酸菌在常温下长时间都能保持较高活菌量，且操作简便，原料易得，成本低廉，能使乳酸菌的性质更稳定、生物活性更强、储存更长久。
该有效延长乳酸菌存活期的培养基，使用的酿酒酵母能分泌营养物质并增强乳酸菌的活力，延缓乳酸菌的衰亡时间，同时与甘露寡糖等一起为培养乳酸菌提供碳源和氮源，而且甘露寡糖同时具有β-1，3葡聚糖和β-1，6葡聚糖功能的，有效增加了乳酸菌摄取碳源的渠道，从而增加了活菌量。该有效延长乳酸菌存活期的培养基，使用脱脂奶粉的同时也配合使用了脱脂豆粕，不但能满足乳酸菌生长过程中所需的蛋白质，而且能够为乳酸菌的生长提供足够的丰富的营养因子，从而在保证乳酸菌营养成分的同时，有效地降低了成本，同时提高了培养效果。该有效延长乳酸菌存活期的培养基，使用了搭配合理的复合添加剂，所述复合添加剂为一定比例的羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物。羧甲基纤维素钠是一种增稠剂，可有效提高产品的均一度，羧甲基纤维素钠与明胶及果胶可以形成共凝聚物，也可以与胶原形成复合物，能沉淀某些带正电的蛋白，海藻酸钠凝胶小球内部为蜂窝状结构，乳酸菌经其部分包埋后，其热稳定性和耐久储存性明显提高；王浆酸有很好的杀菌、抑菌作用和抗癌、抗放射的功能，在低温或高温的环境中可以长时间的存放且其结构也不会出现破坏或消失的现象，本发明中使用王浆酸可以对大肠杆菌等杂菌产生抑制作用，而乳酸菌本身耐酸性较好，不会受到影响，王浆酸的使用不但保证了食品安全性，而且防止了有害菌对营养物质的竞争，从而促进了乳酸菌活菌数的增长；本发明中将羧甲基纤维素钠与海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶混合使用，单位粘度要比羧甲基纤维素钠高2-3倍，而且可有效避免出现营养物质和乳酸菌处于悬浮状态的现象，从而使营养物质被充分利用，进而延长了活性乳酸菌的保存期。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于此。
实施例1：该有效延长乳酸菌存活期的培养基，取下述重量份数的原料制备而成(每份取30g)：蛋白胨0.08份、酵母浸粉0.08份、甘露寡糖1.5份、脱脂奶粉0.8份、脱脂豆粕0.5份、七水硫酸镁0.05份、七水硫酸锰0.025份、玉米浆干粉1.5份、复合添加剂0.008份、磷酸二氢钠0.025份、柠檬酸钠0.25份、柠檬酸0.2份、乙酸钠0.08份、吐温80为0.08份、酿酒酵母0.04份；所述复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物，且质量比为羧甲基纤维素钠：海藻酸钠：骨粉：王浆酸：瓜尔豆胶：黄原胶＝2：2：3：1：1：2；所述酿酒酵母的菌落密度为2×105cfu/g。
上述有效延长乳酸菌存活期的培养基的制备方法，采用如下步骤：
(1)将玉米浆干粉置于搅拌槽中，加入4倍玉米浆干粉质量的8℃的净化水，搅拌成糊状，放置20分钟后，加入2倍玉米浆干粉质量的15℃的净化水，搅拌均匀；
(2)依次将蛋白胨、酵母浸粉、甘露寡糖、脱脂奶粉、脱脂豆粕、七水硫酸镁、七水硫酸锰、步骤(1)所得产物、磷酸二氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸钠、吐温80和菌落密度为2×105cfu/g的酿酒酵母(是将酿酒酵母置于酿酒酵母液体培养基中培养所得，其中酿酒酵母液体培养基的成分为蛋白胨0.5份、葡萄糖1份、酵母浸出物0.3份、麦芽汁0.3份)放入烧杯中，加入0.6倍混合物质量的17℃的净化水，搅拌均匀，得混合液；
(3)将复合添加剂中的羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶按质量比为2：2：3：1：1：2的比例混合均匀，加入到80倍复合添加剂质量的纯净水中，充分混匀溶解；
(4)将步骤(3)中所得产物加入到步骤(2)中盛有混合液中的烧杯中，混合均匀，将混合均匀后的盛有混合物料的烧杯置于铺有石棉网的电炉上，小火加热，边加热边用玻璃棒顺时针搅拌25分钟，停止加热；
(5)往步骤(4)所得产物中加入质量浓度为5％的HCl溶液，调节pH值为5.4；
(6)将步骤(5)所得产物高压灭菌(待蒸气压力为1.08kg/cm2时保持恒压，待水蒸气的温度上升至120℃时，保持恒温下灭菌18分钟，停止加压，待压力降为0后释放水蒸气)18分钟，即得该有效延长乳酸菌存活期的培养基。
用法：将某种或多种乳酸菌的种子液加入到所得的有效延长乳酸菌存活期的培养基中，在37℃的温度下培养。
实施例2：该有效延长乳酸菌存活期的培养基，其活性成分由以下重量的原料制成(每份取15g)：蛋白胨0.12份、酵母浸粉0.12份、甘露寡糖2.5份、脱脂奶粉1.2份、脱脂豆粕0.7份、七水硫酸镁0.07份、七水硫酸锰0.035份、玉米浆干粉2.5份、复合添加剂0.012份、磷酸二氢钠0.035份、柠檬酸钠0.35份、柠檬酸0.3份、乙酸钠0.12份、吐温80为0.12份、酿酒酵母0.06份；所述复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物，且质量比为羧甲基纤维素钠：海藻酸钠：骨粉：王浆酸：瓜尔豆胶：黄原胶＝2：2：3：1：1：2；所述酿酒酵母的菌落密度为2×105cfu/g。
(1)将玉米浆干粉置于搅拌槽中，加入6倍玉米浆干粉质量的12℃的净化水，搅拌成糊状，放置30分钟后，加入4倍玉米浆干粉质量的20℃的净化水，搅拌均匀；
(2)依次将蛋白胨、酵母浸粉、甘露寡糖、脱脂奶粉、脱脂豆粕、七水硫酸镁、七水硫酸锰、步骤(1)所得产物、磷酸二氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸钠、吐温80和菌落密度为2×105cfu/g的酿酒酵母(是将酿酒酵母置于酿酒酵母液体培养基中培养所得，其中酿酒酵母液体培养基的成分为蛋白胨0.5份、葡萄糖1份、酵母浸出物0.3份、麦芽汁0.3份)放入烧杯中，加入0.7倍混合物质量的17℃的净化水，搅拌均匀，得混合液；
(3)将复合添加剂中的羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶按质量比为2：2：3：1：1：2的比例混合均匀，加入到100倍复合添加剂质量的纯净水中，充分混匀溶解；
(4)将步骤(3)中所得产物加入到步骤(2)中盛有混合液中的烧杯中，混合均匀，将混合均匀后的盛有混合物料的烧杯置于铺有石棉网的电炉上，小火加热，边加热边用玻璃棒顺时针搅拌35分钟，停止加热；
(5)往步骤(4)所得产物中加入质量浓度为7％的HCl溶液，调节pH值为5.8；
(6)将步骤(5)所得产物高压灭菌(待蒸气压力为1.13kg/cm2时保持恒压，待水蒸气的温度上升至122℃时，保持恒温下灭菌22分钟，停止加压，待压力降为0后释放水蒸气)22分钟，即得该有效延长乳酸菌存活期的培养基。
用法同实施例1。
实施例3：该有效延长乳酸菌存活期的培养基，其活性成分由以下重量的原料制成(每份取25kg)：蛋白胨0.09份、酵母浸粉0.09份、甘露寡糖1.8份、脱脂奶粉0.9份、脱脂豆粕0.55份、七水硫酸镁0.055份、七水硫酸锰0.028份、玉米浆干粉1.8份、复合添加剂0.009份、磷酸二氢钠0.028份、柠檬酸钠0.28份、柠檬酸0.23份、乙酸钠0.09份、吐温80为0.09份、酿酒酵母0.045份；所述复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物，且质量比为羧甲基纤维素钠：海藻酸钠：骨粉：王浆酸：瓜尔豆胶：黄原胶＝2：2：3：1：1：2；所述酿酒酵母的菌落密度为2×105cfu/g。
(1)将玉米浆干粉置于搅拌槽中，加入5倍玉米浆干粉质量的10℃的净化水，搅拌成糊状，放置25分钟后，加入3倍玉米浆干粉质量的18℃的净化水，搅拌均匀；
(2)依次将蛋白胨、酵母浸粉、甘露寡糖、脱脂奶粉、脱脂豆粕、七水硫酸镁、七水硫酸锰、步骤(1)所得产物、磷酸二氢钠、柠檬酸钠、柠檬酸、乙酸钠、吐温80和菌落密度为2×105cfu/g的酿酒酵母(是将酿酒酵母置于酿酒酵母液体培养基中培养所得，其中酿酒酵母液体培养基的成分为蛋白胨0.5份、葡萄糖1份、酵母浸出物0.3份、麦芽汁0.3份)放入烧杯中，加入0.7倍混合物质量的17℃的净化水，搅拌均匀，得混合液；
(3)将复合添加剂中的羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶按质量比为2：2：3：1：1：2的比例混合均匀，加入到90倍复合添加剂质量的纯净水中，充分混匀溶解；
(4)将步骤(3)中所得产物加入到步骤(2)中盛有混合液中的烧杯中，混合均匀，将混合均匀后的盛有混合物料的烧杯置于铺有石棉网的电炉上，小火加热，边加热边用玻璃棒顺时针搅拌30分钟，停止加热；
(5)往步骤(4)所得产物中加入质量浓度为6％的HCl溶液，调节pH值为5.6；
(6)将步骤(5)所得产物高压灭菌(待蒸气压力为1.1kg/cm2时保持恒压，待水蒸气的温度上升至121℃时，保持恒温下灭菌20分钟，停止加压，待压力降为0后释放水蒸气)20分钟，即得该有效延长乳酸菌存活期的培养基。
用法同实施例1。
实施例4：该有效延长乳酸菌存活期的培养基，其活性成分由以下重量的原料制成(每份取25kg)：蛋白胨0.11份、酵母浸粉0.11份、甘露寡糖2.2份、脱脂奶粉1.1份、脱脂豆粕0.65份、七水硫酸镁0.065份、七水硫酸锰0.032份、玉米浆干粉2.2份、复合添加剂0.011份、磷酸二氢钠0.032份、柠檬酸钠0.32份、柠檬酸0.27份、乙酸钠0.11份、吐温80为0.11份、酿酒酵母0.055份；所述复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物，且质量比为羧甲基纤维素钠：海藻酸钠：骨粉：王浆酸：瓜尔豆胶：黄原胶＝2：2：3：1：1：2；所述酿酒酵母的菌落密度为2×105cfu/g。
制备方法与用法同实施例3。
实施例5：该有效延长乳酸菌存活期的培养基，其活性成分由以下重量的原料制成(每份取25kg)：蛋白胨0.1份、酵母浸粉0.1份、甘露寡糖2份、脱脂奶粉1份、脱脂豆粕0.6份、七水硫酸镁0.06份、七水硫酸锰0.03份、玉米浆干粉2份、复合添加剂0.01份、磷酸二氢钠0.03份、柠檬酸钠0.3份、柠檬酸0.25份、乙酸钠0.1份、吐温80为0.1份、酿酒酵母0.05份；所述复合添加剂为羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、骨粉、王浆酸、瓜尔豆胶和黄原胶的混合物，且质量比为羧甲基纤维素钠：海藻酸钠：骨粉：王浆酸：瓜尔豆胶：黄原胶＝2：2：3：1：1：2；所述酿酒酵母的菌落密度为2×105cfu/g。
制备方法与用法同实施例3。
试验例：
针对本发明所得一种有效延长乳酸菌存活期的培养基，发明人做了效果对比实验。
将保加利亚乳杆菌置于乳酸菌种子液体培养基中，进行培养，得乳酸菌种子液。其中乳酸菌种子液体培养基的具体成分为：蛋白胨1份、牛肉膏1份、酵母提取物0.5份、磷酸氢二钾0.2份、柠檬酸三铵0.2份、乙酸钠0.5份、葡萄糖2份、吐温80 0.1份、七水硫酸镁0.06份、四水硫酸锰0.025份。
分别取本发明所得有效延长乳酸菌存活期的培养基(实施例1-5)作为实验组，对照组采用3种形式的培养基，分别为：对照组1采用经典配方MRS乳酸细菌培养基，每升MRS乳酸细菌培养基配方(g/L)：蛋白胨10.0g、牛肉膏10.0g、酵母膏5.0g、柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]2.0g、葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g、吐温80为1.0mL、乙酸钠(CH3COONa·3H2O)5.0g、磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)2.0g、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.58g、硫酸锰(MnSO4·H2O)0.25g、琼脂18.0g、蒸馏水1000mL；pH为6.2-6.6。对照组2所用培养基是购自青岛海博生物技术有限公司的，其配方为(g/L)：蛋白胨10.0；牛肉浸粉5.0；酵母浸粉4.0；葡萄糖20.0；磷酸氢二钾2.0；柠檬酸三铵2.0；醋酸钠5.0；硫酸镁0.2；硫酸锰0.05；琼脂15.0；吐温80为1.0；pH6.2±0.2；25℃。对照组3所用培养基是在本发明培养基的成分中减去羧甲基纤维素钠和王浆酸后所制备而成的。
1.1本发明培养基对乳酸菌菌量的影响
分别将0.25倍培养基质量的混合乳酸菌种子液加入到实验组和对照组的相应的培养基中，在37℃的温度下培养36小时，无菌分装，同时分别测定乳酸菌菌落数，然后分别在25℃、4℃、37℃环境下储存9个月，在每个设定的时间点测定乳酸菌菌量，同时测定25℃杂菌生长情况(以大肠杆菌作为杂菌代表进行统计)；在25℃第4天时选取发酵液，分别于底部、1/4、2/4、/3/4、顶部5个高度抽样，测定该部位发酵产品密度，并求平均值，具体情况见表1-表5所示：
表1不同时间点的乳酸菌菌量(单位：cfu/g，25℃)
由表1，在25℃下，经统计学处理实验组和对照组的效果，两组效果有显著性差异(p＜0.05)，实验组中的乳酸菌的死亡率与对照组的相比有大幅下降，其中，采用实施例5所得的有效延长乳酸菌存活期的培养基培养混合乳酸菌种子液后第270天时，乳酸菌活菌数仍为5.8×107cfu/g，符合GB 19302-2010食品安全国家标准《发酵乳》相关标准；而采用对照组所使用的培养基培养混合乳酸菌种子液后第270天时，乳酸菌活菌数分别降低为0、1.2×102cfu/g和9.8×102cfu/g。显然，本发明所得一种有效延长乳酸菌存活期的培养基比现有的MRS乳酸细菌培养基以及现有技术中改良的MRS乳酸细菌培养基的延长乳酸菌存活期效果显著。同时，对比实验组与对照组3的具体情况，实验组(实施例1-5)所用的培养基中添加了羧甲基纤维素钠和王浆酸，而对照组3所用的培养基中未添加这些成分，由表1中的具体数值可以看出，使用本发明所得培养基(实施例1-5)的乳酸菌活菌在每个设定的时间点都有较高的含量，乳酸菌的死亡率与对照组3相比有大幅下降。
表2不同时间点的乳酸菌菌量(单位：cfu/g，4℃)
由表2，在4℃下，经统计学处理实验组和对照组的效果，两组效果有显著性差异(p＜0.05)，实验组中的乳酸菌的死亡率与对照组的相比有大幅下。其中，采用实施例5所得的有效延长乳酸菌存活期的培养基培养混合乳酸菌种子液后第270天时，乳酸菌活菌数仍为6.3×107cfu/g，符合GB 19302-2010食品安全国家标准《发酵乳》相关标准；而采用对照组所使用的培养基培养混合乳酸菌种子液后第270天时，乳酸菌活菌数分别降低为0、1.5×102cfu/g和1.3×103cfu/g。显然，本发明所得一种有效延长乳酸菌存活期的培养基比现有的MRS乳酸细菌培养基以及现有技术中改良的MRS乳酸细菌培养基的延长乳酸菌存活期效果显著。同时，对比实验组与对照组3的具体情况，实验组(实施例1-5)所用的培养基中添加了羧甲基纤维素钠和王浆酸，而对照组3所用的培养基中未添加这些成分，由表2中的具体数值可以看出，使用本发明所得培养基(实施例1-5)的乳酸菌活菌在每个设定的时间点都有较高的含量，乳酸菌的死亡率与对照组3相比有大幅下降。
表3不同时间点的乳酸菌菌量(单位：cfu/g，37℃)
由表3，在37℃下，经统计学处理实验组和对照组的效果，两组效果有显著性差异(p＜0.05)，实验组中的乳酸菌的死亡率与对照组的相比有大幅下。其中，采用实施例5所得的有效延长乳酸菌存活期的培养基培养混合乳酸菌种子液后第21天时，乳酸菌活菌数仍为5.7×106cfu/g，而采用对照组所使用的培养基培养混合乳酸菌种子液后第17天时，乳酸菌活菌数就均降低为0。显然，本发明所得一种有效延长乳酸菌存活期的培养基比现有的MRS乳酸细菌培养基、现有技术中改良的MRS乳酸细菌培养基以及其他组份的培养基的延长乳酸菌存活期效果显著。由表3中的具体数值可以看出，使用本发明所得培养基(实施例1-5)的乳酸菌活菌在每个设定的时间点都有较高的含量。
综上，由表1-3可以看出，无论是在25℃、4℃还是37℃的温度下，本发明所得一种有效延长乳酸菌存活期的培养基均比现有的MRS乳酸细菌培养基、现有技术中改良的MRS乳酸细菌培养基以及其他培养基的延长乳酸菌存活期效果显著。而且，由表3可知，本发明所得培养基可以在极端温度(37℃)的条件下将保质期提高到3个周，大大方便了用户的使用。
表4不同时间点的大肠菌群数(单位：cfu/g，25℃)
注：-表示严重超标，不再计数。
经统计学处理实验组和对照组的效果，两组效果有显著性差异(p＜0.05)，由表4可以看出，实验组中的大肠菌群数远比对照组的大肠菌群数少。其中，在第5天时，本发明所的培养基均未出现大肠菌，第7天时也只有实施例3所得培养基中有少量大肠菌出现，而对照组在第3天就有大肠菌出现，且在第5天数时就有大量的大肠菌出现。可以推断出王浆酸的加入使得本发明所得培养基控制大肠杆菌增殖效果更加显著(羧甲基纤维素钠是一种增稠剂，王浆酸有很好的杀菌、抑菌作用，本发明中使用王浆酸可以对大肠杆菌等杂菌产生抑制作用，而乳酸菌本身耐酸性较好，不会受到影响)，有效防止了有害菌对营养物质的竞争，从而促进乳酸菌活菌数的增长。
表5发酵液不同高度产品密度(25℃，第4天)
经统计学处理实验组和对照组的效果，两组效果有显著性差异(p＜0.05)，在第4天时选取发酵液，分别于底部、1/4、2/4、/3/4、顶部5个高度抽样，测定该部位发酵产品密度。从标准差大小可以明显看出，实验组各高度的密度基本相同，其差异来自于测量误差，而且符合正态分布。而对照组随高度的升高，密度逐渐下降，趋势十分明显，标准差为1.9×10-3-2.2×10-3，明显大于实验组的0.3×10-3-0.4×10-3。可见，由于羧甲基纤维素钠的加入大大增加了发酵产物的均一性(王浆酸有很好的杀菌、抑菌作用，本发明中使用王浆酸可以对大肠杆菌等杂菌产生抑制作用；而羧甲基纤维素钠是一种增稠剂，可有效提高产品的均一度，羧甲基纤维素钠与明胶及果胶可以形成共凝聚物，也可以与胶原形成复合物，能沉淀某些带正电的蛋白，海藻酸钠凝胶小球内部为蜂窝状结构，乳酸菌经其部分包埋后，其热稳定性和耐久储存性明显提高)，防止了底部菌体密度过大造成营养竞争，而使营养物质均充分利用。
综上，从表1-表5可以得出，本发明所得有效延长乳酸菌存活期的培养基能有效提高液态乳酸菌中乳酸菌的存活率，能使乳酸菌的性质更稳定、生物活性更强、储存更长久，易于储存，在使用过程中因含有足够的活性乳酸菌而充分发挥其治疗及保健作用。本发明所得有效延长乳酸菌存活期的培养基对在保健食品和动物添加剂领域的推广和使用具有重要意义。
最后应说明的是，实施例只是本发明最优的具体实施方式而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。