多交叉扩增结合金纳米生物传感检测副溶血性弧菌的方法与流程

文档序号:12412746阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种多交叉恒温扩增结合金纳米生物传感检测目的基因的方法,所述方法包括以下步骤:

(1)提取待检测样品的基因组;

(2)提供置换引物F1和F2,提供交叉引物CP1和CP2,同时提供在交叉引物CP1或CP2的5’端标记有生物素的交叉引物CP1*或CP2*;提供扩增引物C1和C2,D1和D2,R1和R2,同时提供在所述扩增引物C1或C2的5’端标记半抗原的扩增引物C1*或C2*;

(4)在链移位型聚合酶、解链温度调节剂、引物存在下,使用待检测样品的基因组的核酸作为模板恒温扩增DNA;

(5)使用金纳米生物传感器检测步骤(4)的扩增产物。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在所述扩增引物C1*或C2*的5’端所标记的半抗原为荧光素。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,在交叉引物CP1*的5’端标记生物素,在所述扩增引物C1*的5’端标记荧光素。

4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述金纳米生物传感器包括一背板,在所述背板上依次设置装有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜及吸水垫,在所述硝酸纤维素膜上依次设置检测线及控制线,在金标垫、检测线及控制线区域依次包被有金纳米粒子偶联的链霉素亲和素、抗荧光素抗体及生物素偶联的牛血清蛋白。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述恒温扩增是在61-64℃的环境中进行的。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述恒温扩增是在62℃的环境中进行的。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法,其特征在于,所述目的基因为副溶血性弧菌的toxR。

8.根据权利要求7的所述的方法,其特征在于,所述置换引物F1的序列如SEQ ID NO:1所示,所述置换引物F2的序列如SEQ ID NO:2所示;所述交叉引物CP1的序列如SEQ ID NO:3所示,在所述交叉引物CP1的5’端标记有生物素的所述交叉引物CP1*的序列如SEQ ID NO:4所示,所述交叉引物CP2的序列如SEQ ID NO:5所示,引物C1的序列如SEQ ID NO:6所示,在所述引物C1的5’端标记有荧光素的引物C1*的序列如SEQ ID NO:7所示,引物C2的序列如SEQ ID NO:8所示,引物D1的序列如SEQ ID NO:9所示,引物D2的序列如SEQ ID NO:10所示,引物R1的序列如SEQ ID NO:11所示,引物R2的序列如SEQ ID NO:12所示。

9.一组用于恒温扩增副溶血性弧菌的toxR基因的引物序列,其特征在于,所述序列包括:如SEQ ID NO:1所示的置换引物F1,如SEQ ID NO:2所示的置换引物F2,如SEQ ID NO:3所示的交叉引物CP1,如SEQ ID NO:5所示的交叉引物CP2,如SEQ ID NO:6所示的扩增引物C1,如SEQ ID NO:8所示的扩增引物C2,如SEQ ID NO:9所示的扩增引物D1,如SEQ ID NO:10所示的扩增引物D2,如SEQ ID NO:11所示的扩增引物R1,如SEQ ID NO:12所示的扩增引物R2,同时提供在交叉引物CP1或CP2的5’端标记有生物素的交叉引物CP1*或CP2*,以及在所述扩增引物C1或C2的5’端标记半抗原的扩增引物C1*或C2*。

10.根据权利要求9所述的引物序列,其特征在于,在交叉引物CP1*的5’端标记生物素,在扩增引物C1*的5’端标记有荧光素。

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