1.一种单细胞基因表达定量分析的方法,其特征在于,所述方法包括:在反应容器中加入单细胞,裂解该单细胞,在反应容器中加入反应体系,执行多位点RT,以该多位点RT获得的cDNA为模板执行多位点PCR扩增,最后以多位点PCR扩增获得的序列为底物,加入特异性引物执行特异性定量PCR来分析该单细胞中特定基因的表达量,其中在反应容器中加入的反应体系包括反应混合物、引物池、逆转录酶/聚合酶及无核酸酶去离子水,引物池中包含至多500对的多对引物,其中所述反应混合物包括缓冲体系、dNTP和特异性增强因子。
2.如权利要求1所述的单细胞基因表达定量分析的方法,其特征在于,执行多位点RT与执行多位点PCR所用的反应体系为向反应容器中加入的同一套反应体系,并且该两个反应是在一个步骤中同时执行。
3. 如权利要求1所述的单细胞基因表达定量分析的方法,其特征在于,所述反应混合物中的缓冲体系包括:50-100 mM Tris-HCl pH8.5,10-50 mM KCl,10-50 mM (NH4)2SO4,2-5 mM MgCl2,浓度以终反应体积计。
4.如权利要求1所述的单细胞基因表达定量分析的方法,其特征在于,所述反应混合物中的特异性增强因子是由以下成分组成:0.2-0.4M海藻糖+0-0.2M甜菜碱+1%-3%甘油+0-20mM山梨醇+0-50mM精氨酸,浓度以终反应体积计。
5.如权利要求4所述的单细胞基因表达定量分析的方法,其特征在于,所述反应混合物中的特异性增强因子是由以下成分组成:1%-3%甘油+0.2-0.4M海藻糖+0-25mM精氨酸,浓度以终反应体积计。
6. 如权利要求2所述的单细胞基因表达定量分析的方法,其特征在于,反应体系中每一个引物的浓度为0.1μM,反应的过程为50℃ 60min、95℃ 3min,然后执行20个循环,每个循环为95℃ 15sec、60℃ 15min。
7.如权利要求1所述的单细胞基因表达定量分析的方法,其特征在于,单细胞的裂解是在加入反应体系后封口冷冻裂解,然后离心以释放细胞内容物。
8.如权利要求6所述的单细胞基因表达定量分析的方法,其特征在于,冷冻裂解条件为在反应容器中加入反应体系后加入单细胞,封口,置于-80℃下5分钟,然后3000rpm离心2分钟。