一种测定大量抗生素样品生物效价的装置及方法与流程

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种测定大量抗生素样品生物效价的装置及方法，该装置更具体为一种方形玻璃培养皿及其放置架，以及利用该装置测定大量抗生素样品生物效价的方法。

背景技术：

管碟法是目前各国测定抗生素生物效价的主要方法，主要有一剂量法、二剂量法、三剂量法等，以二剂量法最为常用。

二剂量法系将抗生素标准品和样品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一培养皿上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算样品的生物效价。其具体操作是将固体培养基放在水浴上融化后倒在培养皿上，待其凝固后在上面再倒一层混有高度敏感性试验菌的融化培养基，制成双碟。待上层培养基凝固后，在表面上均匀放置4个牛津杯，向牛津杯中加满抗生素的稀释液。在适宜温度培养适宜时间后，培养基表面出现中间透明的抑菌圈。通过量取标准品和样品两者对试验菌的抑菌圈直径来测定样品的生物效价。

在测定少量样品时，采用上面的管碟法使用少数培养皿就能完成测定。但当测定大量抗生素样品时，培养皿的使用量就会大幅增加，操作效率低下，难以在同一培养皿中测出多个样品的生物效价。现有技术中可以测定大量抗生素样品生物效价的方法鲜有研究。

技术实现要素：

为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种测定大量抗生素样品生物效价的装置，包括方形玻璃培养皿和放置架，所述方形玻璃培养皿包括：方形玻璃扁平容器1，其上面敞口，四侧高度一致，其上具有玻璃盖板2，玻璃盖板2能完全盖住玻璃扁平容器1，且四周多余的尺寸基本一致；所述放置架包括：方形基座3，四角垂直固定有支架4，支架4刻有固定孔5，用支撑板6分别固定在四个支架4上的固定孔5处，支撑板6保持水平。

优选地，所述方形玻璃扁平容器1下面依照容器内尺寸设置一张方格纸，用于指示牛津杯的放置位置。

优选地，四个支架4的顶端用与方形基座3相同形状的装置7固定，以方便所述方形玻璃培养皿的推入和抽出。

优选地，每个支架4上均匀刻有若干个固定孔5，能放置多个支撑板6，上下两层的支撑板6的距离大于所述方形玻璃培养皿的高度，从而可以放置多个所述方形玻璃培养皿。

优选地，方形基座3四角底部安装有水平调节装置8，用于调节水平。

本发明一种测定大量抗生素样品生物效价的方法，采用所述的装置实施。

更进一步的，所述的测定大量抗生素样品生物效价的方法具体包括以下步骤：

（1）准确称取抗生素标准品，溶解稀释成浓度梯度；

（2）准确称取抗生素样品，溶解稀释；

（3）在水平台面上，先吸取热融的下层培养基加入方形玻璃培养皿中，迅速铺平，凝固后再吸取混有指示菌的上层培养基加入方形玻璃培养皿中，迅速铺平，充分凝固后即得平板；

（4）将牛津杯均匀一致、平稳地放到步骤（3）所得的平板上，牛津杯在琼脂内稍下沉稳定后，按顺序滴加步骤（1）和步骤（2）所得的抗生素溶液，滴加完毕，小心盖好玻璃盖板；

（5）将步骤（4）得到的平板进行培养；

（6）测量抑菌圈直径，计算出抑菌圈直径的平均值，判断制备平板的质量，根据标准溶液抑菌圈直径平均值得出标准曲线，依据该标准曲线计算出样品的生物效价。

优选地，标准品的浓度梯度至少为3-4个浓度，这样能准确计算出抑菌圈直径与生物效价的对数间所呈现的标准曲线，并可以判断标准曲线的质量和制备平板的质量。

优选的，步骤（1）和（2）中采用的溶剂为去离子水、蒸馏水或0.05—1.0mol/L磷酸缓冲液。

优选地，为了获得更准确的样品生物效价，将抗生素样品溶解稀释为各两种稀释倍数。如果只是测定大概生物效价，则只需稀释为各一种稀释倍数即可。

优选地，为了获得更准确的标准曲线，滴加标准溶液的各个牛津杯要交叉均匀放置。

优选的，步骤（5）所述的培养的温度为25—40℃，时间为15-48h。

与传统方法比较，采用本发明测定大量抗生素样品生物效价的装置和方法，节省了操作时间，提高操作效率，非常适合同时测定大量抗生素样品得生物效价。另外，与该方法配合使用的装置结构简单，但是设计巧妙，可以同时容纳多个方形玻璃培养皿，满足同一时间测定大量样品的需求，节省操作空间。

附图说明

图1是本发明的方形玻璃培养皿的示意图；

其中，各部分如下：方形玻璃扁平容器1，为玻璃盖板2。

图2是本发明的方形玻璃培养皿放置架的示意图；

其中，各部分如下：方形基座3，支架4，固定孔5，支撑板6，固定装置7，水平调节装置8。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，而不构成对本发明的限制。

实施例1

将11个春雷霉素样品溶解为样品溶液，称取标准品溶解稀释为100U/mL、50U/mL、25U/mL和12.5U/mL浓度梯度标准溶液。用枯草芽孢杆菌做指示菌。在操作台面上平铺一张方格纸，在5×6方格纸上制备1个平板，待平板凝固充分后，在平板各个方格中心位置上小心放置牛津杯，每个平板向牛津杯中分别加入标准溶液平行样（4×2=8个）和11个样品溶液平行样（11×2=22个），共30个。经37℃培养16—18小时，测量各抑菌圈直径，计算出各抑菌圈直径平均值，进而算出每个平板的标准曲线，最后根据各样品溶液的抑菌圈直径算出各样品的生物效价。

实施例2

将51个宁南霉素样品溶解为样品溶液，称取标准品溶解稀释为100U/mL、50U/mL、25U/mL和12.5U/mL浓度梯度标准溶液。用蜡状芽孢杆菌做指示菌。在操作台面上平铺一张方格纸，在6×7方格纸上制备3个平板，待平板凝固充分后，在每个平板各个方格中心位置上小心放置牛津杯，每个平板向牛津杯中分别加入标准溶液平行样（4×2=8个）和17个样品溶液平行样（17×2=34个），共42个。将3个平板平滑推入放置架，经35℃培养16—18小时，测量各抑菌圈直径，计算出各抑菌圈直径平均值，进而算出每个平板的标准曲线，最后根据各样品溶液的抑菌圈直径算出各样品的生物效价。

实施例3

称取标准品溶解稀释为100U/mL、50U/mL、25U/mL和12.5U/mL浓度梯度标准溶液。以烟草赤星病病原菌做指示菌。在操作台面上平铺一张方格纸，在6×7方格纸上制备平板，待平板凝固充分后，在每个平板各个方格中心位置上小心放置牛津杯，每个平板向牛津杯中分别加入标准溶液平行样（4×2=8个）和34个多抗霉素产生菌筛出菌株所得的发酵过滤液，共42个。经28℃培养16—18小时，测量各抑菌圈直径，进而算出平板的标准曲线，最后算出各样品的生物效价。

实施例4

以枯草芽孢杆菌做指示菌。在操作台面上平铺一张方格纸，在6×7方格纸上制备平板，待平板凝固充分后，在每个平板各个方格中心位置上小心放置春雷霉素单菌落琼脂快，共42个。经37℃培养16—18小时，测量各抑菌圈直径，经肉眼观察比较得出抑菌圈直径较大的单菌落，即为初筛获得的高产菌株。

当然，上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内作出的变化，都应属于本发明的保护范围。