肉制品中动物源性成分的鉴定方法及鉴定试剂盒与流程

技术特征：

1.一种肉制品中动物源性成分的鉴定方法，其特征在于，采用实时荧光重组酶聚合酶扩增技术，所述鉴定方法包括如下步骤：

S1、制备待测样品；

S2、从所述待测样品中提取总DNA；

S3、引物、探针的设计筛选：根据目标动物的基因组DNA序列设计引物和探针；

S4、扩增试剂准备：将步骤S3设计的引物和探针与缓冲溶液、模板DNA、无菌双蒸水混合，得到混合液，再与冻干重组酶聚合酶混合均匀，其中，所述模板DNA包括：阳性对照组、阴性对照组和空白对照组，阳性对照组用目标动物的基因组DNA作为模板DNA，阴性对照组用其他动物的基因组DNA作为模板DNA，空白对照组用去离子水替代基因组DNA作为模板DNA；

S5、实时荧光重组酶聚合酶扩增：进行实时荧光重组酶聚合酶扩增反应，获取阳性对照组、阴性对照组和空白对照组的实时荧光强度曲线，验证所述荧光重组酶聚合酶扩增技术的有效性；

S6、结果鉴定：将待测样品的总DNA、阳性对照组的模板DNA在相同条件下进行实时荧光重组酶聚合酶扩增反应，得到结果。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述目标动物为猪。

3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述目标动物的基因组DNA序列是猪细胞色素b的基因序列。

4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述引物的序列为：

上游引物：SEQ ID NO.1，

下游引物：SEQ ID NO.2。

5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述探针的序列为：SEQ ID NO.3。

6.根据权利要求5所述的鉴定方法，其特征在于，所述混合液包括：

上游引物： 200～600nM；

下游引物： 200～600nM；

探针： 50～150nM。

7.根据权利要求6所述的鉴定方法，其特征在于，所述混合液为：

8.根据权利要求7所述的鉴定方法，其特征在于，所述实时荧光重组酶聚合酶扩增为：加入醋酸镁溶液至反应离心管中使其终浓度为12-21mM，启动反应，反应条件为：反应时间：10min～25min；反应温度：37～40℃之间恒温。

9.根据权利要求1～8任一所述的鉴定方法，其特征在于，所述制备待测样品为：用组织捣碎机将所述待测样品均质成粉状或糜状，或者将所述待测样品切成小块在液氮冷冻的情况下研磨至粉状。

10.一种肉制品中动物源性成分的鉴定试剂盒，包括引物和探针，其特征在于，所述引物的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述探针的序列如SEQ ID NO.3所示。