一种诱导骨骼肌肌源性干细胞成脂分化的培养基及其应用和成脂分化方法与流程

文档序号:12411360阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种诱导骨骼肌肌源性干细胞成脂分化的培养基,其特征在于,在基础培养基中包含3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素、吲哚美辛、地塞米松、吡格列酮和FBS。

2.根据权利要求1所述培养基,其特征在于,在基础培养基中包含0.1mM3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、5mg/L胰岛素、0.1mM吲哚美辛、1μM地塞米松、5-15μM吡格列酮、体积分数10%的FBS。

3.根据权利要求2所述培养基,其特征在于,在基础培养基中包含0.1mM3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、5mg/L胰岛素、0.1mM吲哚美辛、1μM地塞米松、5-15μM吡格列酮、体积分数10%的FBS。

4.根据权利要求1-3任意一项所述培养基,其特征在于,所述基础培养基为高糖DMEM培养基。

5.权利要求1-4任意一项所述培养基在诱导骨骼肌肌源性干细胞成脂分化和/或制备诱导骨骼肌肌源性干细胞成脂分化培养基中的应用。

6.一种诱导骨骼肌肌源性干细胞成脂分化的方法,其特征在于,将骨骼肌肌源性干细胞接种至权利要求1-4任意一项所述培养基中诱导分化。

7.根据权利要求6所述方法,其特征在于,所述诱导分化为在5%二氧化碳、37℃下诱导分化21天。

8.根据权利要求6所述方法,其特征在于,所述骨骼肌肌源性干细胞的接种密度为2×104cells/mL。

9.根据权利要求6所述方法,其特征在于,所述骨骼肌肌源性干细胞按照如下方法制备:

将肌肉组织剪成碎块并清洗,然后加入2倍的体积的混合酶,包括2.4u/mL Dispase II、1%I型胶原酶,2.5mmol/L CaCl2,混匀后置37℃恒温摇床中消化60min左右,直到试管中的肌肉碎块消化为肌糜,肉眼看不到肌块;消化结束后,1000r/min离心5min,弃上清;加入2~3倍体积的0.25%胰蛋白酶-EDTA,混匀后置37℃恒温摇床中消化15min,消化结束后,1000r/min离心5min,弃上清;加入PBS重悬,1000r/min离心5min,弃上清;加入3倍肌糜体积的PBS反复吹打后经200目滤网过滤,收集的滤液1000r/min离心5min,弃上清;含20%FBS的DMEM/F12重悬细胞,采用差速贴壁分离技术对MDSCs进行分离,然后进行正常培养、传代。

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