本发明涉及作为fxr的激动剂的奥贝胆酸，制备奥贝胆酸的方法，包含奥贝胆酸的药物配制品及其治疗用途。本发明涉及使用结晶奥贝胆酸作为合成中间体制备奥贝胆酸的方法。结晶奥贝胆酸选自下组，该组由以下组成：形式a、c、d、f、g和i。本发明进一步涉及用于选择性制备结晶奥贝胆酸的方法。本发明涉及结晶奥贝胆酸形式a，其特征在于x射线衍射图包括在约5.0和5.3度2θ处的特征峰。结晶奥贝胆酸形式a的特征在于x-射线衍射图基本上类似于图41中所示的x-射线衍射图。本发明涉及结晶奥贝胆酸形式c，其特征在于x射线衍射图包括在约4.2、6.4、9.5、12.5和16.7度2θ处的特征峰。结晶奥贝胆酸形式c的特征在于x-射线衍射图基本上类似于图5中所示的x-射线衍射图，并且进一步的特征在于差示扫描量热法(dsc)热谱图具有在约98℃±2℃的吸热值。本发明涉及结晶奥贝胆酸形式d，其特征在于x射线衍射图包括在约4.4、5.2和7.5度2θ处的特征峰。结晶奥贝胆酸形式d的特征在于x-射线衍射图基本上类似于图45中所示的x-射线衍射图。本发明涉及结晶奥贝胆酸形式f，其特征在于x射线衍射图包括在约8.0、13.2和13.8度2θ处的特征峰。结晶奥贝胆酸形式f的特征在于x-射线衍射图基本上类似于图49中所示的x-射线衍射图。本发明涉及结晶奥贝胆酸形式g，其特征在于x射线衍射图包括在约12.9和13.4度2θ处的特征峰。结晶奥贝胆酸形式g的特征在于x-射线衍射图基本上类似于图53中所示的x-射线衍射图。本发明涉及结晶奥贝胆酸形式i，其特征在于x射线衍射图包括在约7.2度2θ处的特征峰。结晶奥贝胆酸形式i的特征在于x-射线衍射图基本上类似于图57中所示x-射线衍射图。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1的步骤。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括如下步骤：使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括如下步骤：使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸；并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括如下步骤：使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯与naoh反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸；并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括如下步骤：使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯与ch3cho反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯；使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯与naoh反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括如下步骤：使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl反应以形成3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯；使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯与ch3cho反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯；使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯与naoh反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括如下步骤：使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与ch3oh和h2so4反应以形成3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯；使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl反应以形成3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯；使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯与ch3cho反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯；使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯与naoh反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸；使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中将结晶奥贝胆酸形式a转化为奥贝胆酸形式1包括将结晶奥贝胆酸形式a溶解在naoh水溶液中并添加hcl的步骤。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中将结晶奥贝胆酸形式c转化为奥贝胆酸形式1包括将结晶奥贝胆酸形式c溶解在naoh水溶液中并添加hcl的步骤。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中将结晶奥贝胆酸形式d转化为奥贝胆酸形式1包括将结晶奥贝胆酸形式d溶解在naoh水溶液中并添加hcl的步骤。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中将结晶奥贝胆酸形式f转化为奥贝胆酸形式1包括将结晶奥贝胆酸形式f溶解在naoh水溶液中并添加hcl的步骤。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中将结晶奥贝胆酸形式g转化为奥贝胆酸形式1包括将结晶奥贝胆酸形式g溶解在naoh水溶液中并添加hcl的步骤。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中将结晶奥贝胆酸形式i转化为奥贝胆酸形式1包括将结晶奥贝胆酸形式i溶解在naoh水溶液中并添加hcl的步骤。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸是在碱性水溶液中在约85℃至约110℃的温度下进行。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸是在约20℃至约105℃的温度下和在约0.5至约5巴的压力下进行。在一个单独的实施例中，氢化是在约20℃至约105℃的温度范围下，例如30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃和100℃以及之间的任何增量进行。在另一个实施例中，该氢化是在如下压力下进行：约0.5巴至约5.5巴，例如0.6巴、0.7巴、0.8巴、0.9巴、1.0巴、1.2巴、1.4巴、1.6巴、1.8巴、2.0巴、2.2巴、2.4巴、2.6巴、2.8巴、3.0巴、3.2巴、3.4巴、3.6巴、3.8巴、4.0巴、4.2巴、4.4巴、5.0巴、5.2巴、5.3巴和5.4巴以及之间的任何增量。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中使e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯与naoh反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸是在约20℃至约60℃的温度下进行。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯与ch3cho反应以形成e-或e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯是在bf3的存在下，在极性非质子溶剂中，在约-50℃至约-70℃的温度下进行。在一个实施例中，该反应是在bf3的存在下，在低于-60℃至约-70℃的温度范围进行。在一个实施例中，该反应是在bf3的存在下，在约-60℃的上限温度下进行。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl反应以形成3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯是在极性非质子溶剂中，在约-10℃至约-30℃的温度下进行。本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中关于使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸与ch3oh和h2so4反应以形成3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯，将此反应加热约3小时，并将反应混合物的ph用碱性水溶液调节至约9.5至约10的ph范围。本发明涉及奥贝胆酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物，其具有大于约98％、大于约98.5％、大于约99.0％或大于约99.5％的效力。本发明涉及药物组合物，其包含通过本发明的方法产生的奥贝胆酸形式1和药学上可接受的载体。本发明涉及治疗或预防受试者中fxr介导的疾病或病症的方法，该方法包括给予有效量的奥贝胆酸形式1。该疾病或病症选自胆道闭锁、胆汁淤积性肝病、慢性肝病、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、丙型肝炎感染、酒精性肝病、原发性胆汁性肝硬化(pbc)、由进行性纤维化引起的肝损伤、肝纤维化以及心血管疾病(包括动脉粥样硬化、动脉硬化、高胆固醇血症和高脂血症)。本发明涉及用于降低受试者中甘油三酯的方法，该方法包括给予有效量的奥贝胆酸形式1。附图说明图1是实例1的步骤4的粗化合物5(以1mg/ml注射，注射体积3μ1)的hplc-uv/ms色谱图。根据实例2中描述的方法获得色谱图。图2是实例1的步骤4的化合物5(以1mg/ml注射，注射体积20μl的经纯化的参照物)的hplc-uv/ms色谱图。根据实例2中描述的方法获得色谱图。图3是使用hplc方法，实例1的步骤4的粗化合物5的uv色谱图。根据实例2中描述的方法获得色谱图。图4a是来自实例1的步骤4的化合物5(用hplc方法纯化分离)的主峰级分(rt29.0min)的m/z850.61914±3ppm的精确离子迹线(参见实例2)。图4b是来自实例1的步骤4的化合物5(用hplc方法纯化分离)的次要峰级分(rt29.9min)的m/z850.61914±3ppm的精确离子迹线(参见实例2)。图4c是来自实例1的步骤4的粗化合物5的m/z850.61914±3ppm的精确离子迹线(参见实例2)。图4d是来自实例1的步骤4的化合物5(经纯化的参照物)的m/z850.61914±3ppm的精确离子迹线(参见实例2)。图5是结晶奥贝胆酸形式c的xrpd衍射图(参见实例3)。图6显示结晶奥贝胆酸形式c的tga和dsc热谱图(参见实例3)。图7显示了在25℃、110℃和120℃下结晶奥贝胆酸的vt-xrpd衍射图(参见实例3)。图8a是结晶奥贝胆酸形式c的gvs等温线图(参见实例3)。图8b是结晶奥贝胆酸形式c的gvs动力学图(参见实例3)。图8c显示在gvs分析之前和之后结晶奥贝胆酸形式c的xrpd衍射图(参见实例3)。图9显示在40℃/75％rh下储存之前和之后结晶奥贝胆酸形式c的xrpd衍射图(参见实例3)。图10是批次1的奥贝胆酸形式1的xrpd衍射图(参见实例5)。图11显示了批次1、2、3、4、5和6的奥贝胆酸形式1的xrpd衍射图(参见实例5)。图12是在d6-dmso中批次1的奥贝胆酸形式1的nmr光谱(参见实例5)。图13显示了批次1、2、3、4、5和6的奥贝胆酸形式1的1hnmr光谱(参见实例5)。图14是来自10-75ppm区域的奥贝胆酸形式1的13cdeptqnmr光谱的扩展(参见实例5)。图15是来自0-75ppm区域的抑制季碳的奥贝胆酸形式1的13cdept135nmr光谱的扩展(参见实例5)。图16是奥贝胆酸形式1的定量13cnmr(参见实例5)。图17是图16的32.3ppm处的峰的扩展图(参见实例5)。图18是批次1的奥贝胆酸形式1的ft-ir光谱(参见实例5)。图19显示了批次1的奥贝胆酸形式1的tga和dsc热谱图(参见实例5)。图20显示了批次1的奥贝胆酸形式1的调制dsc热谱图(参见实例5)。图21显示了批次1、2、3、4、5和6的奥贝胆酸形式1的tga迹线(参见实例5)。图22显示了批次1、2、3、4、5和6的奥贝胆酸形式1的dsc迹线(参见实例5)。图23a是在偏振光显微镜检查下批次1的奥贝胆酸形式1的照片。图23b是在偏振光显微镜检查下批次2的奥贝胆酸形式1的照片。图23c是在偏振光显微镜检查下批次3的奥贝胆酸形式1的照片。图23d是在偏振光显微镜检查下批次4的奥贝胆酸形式1的照片。图23e是在偏振光显微镜检查下批次5的奥贝胆酸形式1的照片。图23f是在偏振光显微镜检查下批次6的奥贝胆酸形式1的照片。图24显示了批次1的奥贝胆酸形式1的gvs等温线图(参见实例5)。图25显示了批次1的奥贝胆酸形式1的gvs动力学图(参见实例5)。图26显示了在gvs之前和之后批次1的奥贝胆酸形式1的xrpd衍射图(参见实例5)。图27是奥贝胆酸形式1的三种不同甲醇/水比率下pka的测量图表(参见实例5)。图28是奥贝胆酸形式1的yasuda-shedlovsky图(参见实例5)。图29是显示对于奥贝胆酸形式1，取决于ph的物质分布的图(参见实例5)。图30是显示对于奥贝胆酸形式1，通过电位测定法获得的差异曲线的图(参见实例5)。图31显示了奥贝胆酸形式1的亲脂性曲线(参见实例5)。图32显示了在40℃/75％rh下储存之后，批次1的奥贝胆酸形式1的xrpd衍射图(参见实例5)。图33显示了在25℃/97％rh下储存之后，批次1的奥贝胆酸形式1的xrpd衍射图(参见实例5)。图34显示了奥贝胆酸形式g的来自晶体结构的分子的视图，显示了50％概率水平的非氢原子的各向异性原子位移椭圆体(参见实例6)。图35显示了奥贝胆酸形式g的晶体结构的分子间氢键的视图，其中氢键合是以短划线显示(参见实例6)。图36显示了模拟粉末图案、收集的晶体和奥贝胆酸形式g的实验图案的xrpd叠加(参见实例6)。图37显示了口服给予20mg/kg的奥贝胆酸形式1和结晶形式f之后血浆奥贝胆酸曲线与时间的图表(参见实例7)。图38显示了给药后不同时间间隔的奥贝胆酸形式1和结晶形式f的牛磺酸缀合物的血浆浓度的图表(参见实例7)。图39显示了形式1的dsc曲线(参见实例7)。图40显示了形式f的dsc曲线(参见实例7)。图41是结晶奥贝胆酸形式a的xrpd衍射图(参见实例3)。图42是结晶奥贝胆酸形式a的tga和dsc热谱图的叠加(参见实例3)。图43是形式a的gvs实验的等温线图(参见实例3)。图44是形式a的gvs实验的动力学图(参见实例3)。图45是结晶奥贝胆酸形式d的xrpd衍射图(参见实例9)。图46是结晶奥贝胆酸形式d的tga和dsc热谱图的叠加(参见实例9)。图47是形式d的gvs实验的等温线图(参见实例9)。图48是形式d的gvs实验的动力学图(参见实例9)。图49是结晶奥贝胆酸形式f的xrpd衍射图(参见实例9)。图50是结晶奥贝胆酸形式f的tga和dsc热谱图的叠加(参见实例9)。图51是形式f的gvs实验的等温线图(参见实例9)。图52是形式f的gvs实验的动力学图(参见实例9)。图53是结晶奥贝胆酸形式g的xrpd衍射图(参见实例9)。图54是结晶奥贝胆酸形式g的tga和dsc热谱图的叠加(参见实例9)。图55是形式g的gvs实验的等温线图(参见实例9)。图56是形式g的gvs实验的动力学图(参见实例9)。图57是结晶奥贝胆酸形式i的xrpd衍射图(参见实例9)。图58是结晶奥贝胆酸形式i的tga和dsc热谱图的叠加(参见实例9)。图59是结晶奥贝胆酸形式i的gvs实验的等温线图(参见实例9)。图60是结晶奥贝胆酸形式i的gvs实验的动力学图(参见实例9)。具体实施方式本申请涉及奥贝胆酸，即一种具有如下化学结构的药物活性成分(又称int-747)：其包括基本上纯的奥贝胆酸，用于制备包含结晶奥贝胆酸(作为合成中间体)的奥贝胆酸的方法，以及用于确认在制备奥贝胆酸的方法中奥贝胆酸和合成中间体的存在和纯度的分析方法。本申请还描述了奥贝胆酸的药物组合物和配制品以及此类组合物的用途。制备奥贝胆酸的方法本申请涉及用于制备高纯度的奥贝胆酸的方法。方案1中显示了本申请的方法。该方法是6步合成，随后是一个纯化步骤，以产生高纯度的奥贝胆酸。方案1本发明的方法还包括根据方案1的方法，其中化合物4和5各自包含e和z异构体的混合物，如下面化合物4a和5a的结构所示：在一个实施例中，e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)的e/z异构体比率为约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约83％、大于约85％、大于约90％、大于约93％、大于约95％或大于约99％。在一个实施例中，该e/z比率通过hplc测定。在一个实施例中，该比率大于约80％。在一个实施例中，该比率大于约83％。在一个实施例中，该比率大于约85％。在一个实施例中，该比率大于约90％。在一个实施例中，该比率大于约93％。在一个实施例中，该比率大于约95％。在一个实施例中，该比率大于约99％。在一个实施例中，e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)的e/z异构体比率为约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约83％、大于约85％、大于约90％、大于约93％、大于约95％或大于约99％。在一个实施例中，该e/z比率通过hplc测定。在一个实施例中，该比率大于约80％。在一个实施例中，该比率大于约83％。在一个实施例中，该比率大于约85％。在一个实施例中，该比率大于约90％。在一个实施例中，该比率大于约93％。在一个实施例中，该比率大于约95％。在一个实施例中，该比率大于约99％。本领域从未报道过本申请的方法。该方法是6-步合成随后是一个纯化步骤。步骤1是在酸催化剂的存在下使用甲醇将7-酮基石胆酸(klca)的c-24羧酸酯化并加热以产生甲酯化合物1。步骤2是在强碱的存在下使用氯硅烷从化合物1形成硅烯醇醚，以产生化合物3。步骤3是在酸的存在下硅烯醇醚化合物3和乙醛的酸介导的醇醛缩合反应，以产生化合物4(或化合物4a)。步骤4是酯水解，即化合物4(或化合物4a)的c-24甲酯的皂化，以产生羧酸化合物5(或化合物5a)。步骤5是化合物5(或化合物5a)的6-亚乙基部分的氢化，随后使最初形成的6-β乙基异构化，以产生化合物6。步骤6是化合物6的7-酮基基团选择性还原成7α-羟基基团，以产生结晶奥贝胆酸。步骤7是将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。本发明的方法涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，其中该方法利用奥贝胆酸的结晶形式作为合成中间体。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1的步骤。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)与naoh反应以形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)，使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)与naoh反应以形成e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)，使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)与ch3cho反应以形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)，使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)与naoh反应以形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)，使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)与ch3cho反应以形成e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)，使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)与naoh反应以形成e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)，使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl反应以形成3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)，使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)与ch3cho反应以形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)，使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)与naoh反应以形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)，使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl反应以形成3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)，使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)与ch3cho反应以形成e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)，使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)与naoh反应以形成e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)，使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(klca)与ch3oh和h2so4反应以形成3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)，使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl反应以形成3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)，使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)与ch3cho反应以形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)，使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)与naoh反应以形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)，使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及用于制备奥贝胆酸形式1的方法，该方法包括以下步骤：使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(klca)与ch3oh和h2so4反应以形成3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)，使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl反应以形成3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)，使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)与ch3cho反应以形成e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)，使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)与naoh反应以形成e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)，使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)与pd/c和氢气反应以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)，使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸，并且将结晶奥贝胆酸转化为奥贝胆酸形式1。本发明涉及使用结晶奥贝胆酸作为合成中间体来制备奥贝胆酸形式1的方法。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式是形式a。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式a的特征在于x射线衍射图类似于图41中所示的x射线衍射图。在一个实施例中，使结晶奥贝胆酸形式a结晶并从乙酸正丁酯中重结晶。在另一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式是形式c。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式c的特征在于x射线衍射图类似于图5中所示的x射线衍射图。在另一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式是形式d。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式d的特征在于x射线衍射图类似于图45中所示的x射线衍射图。在另一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式是形式f。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式f的特征在于x射线衍射图类似于图49中所示的x射线衍射图。在另一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式是形式g。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式g的特征在于x射线衍射图类似于图53中所示的x射线衍射图。在另一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式是形式i。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式i的特征在于x射线衍射图类似于图57中所示的x射线衍射图。步骤1步骤1是使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(klca)与ch3oh和h2so4反应以形成3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)。在步骤1的一个实施例中，将反应混合物加热约3小时，并将反应混合物的ph用碱性水溶液调节至约9.5至约10的ph值。在一个实施例中，3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)的分离进一步包括用活性炭处理。在一个实施例中，3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)的分离不会进一步包括用活性炭处理。在一个实施例中，在没有用活性炭处理的情况下分离3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)提供了更高的产率。在一个实施例中，使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(1)与ch3oh和h2so4反应是在甲醇中进行。在一个实施例中，所述碱性溶液是naoh水溶液。在一个实施例中，ph值为约9.5至约10。在一个实施例中，甲醇充当甲基化试剂以及反应溶剂。在一个实施例中，将含有产物的溶液用活性炭处理约30分钟并过滤以除去碳固体。在一个实施例中，含有产物的溶液未用活性炭处理。为了使产物沉淀，加入约5℃至约20℃的水和种子材料。在另一个实施例中，水在约10℃至约15℃。在一个实施例中，用离心机分离产物并用甲醇和水的混合物洗涤。在一个实施例中，由卡尔费舍尔(karlfischer)(kf)定量湿材料的含水量。在一个实施例中，在用于下一步骤之前，将该材料在转筒式干燥机中干燥。在一个实施例中，在用于下一步骤之前不干燥该材料。在一个实施例中，将湿材料用庚烷洗涤以改进干燥。步骤2步骤2是使3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl反应以形成3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)。在一个实施例中，在极性非质子溶剂中，在约-10℃至约-30℃的温度下进行步骤2。在一个实施例中，该极性非质子溶剂是四氢呋喃。在一个实施例中，温度为约-20℃至约-25℃。在一个实施例中，将3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)与li[n(ch(ch3)2)2]和si(ch3)3cl的反应搅拌约2小时。在一个实施例中，在惰性条件下将化合物1填充到反应器中。在另一个实施例中，通过在约65℃和环境压力下重复共沸蒸馏以除去残余的水和甲醇，以避免在此步骤中稍后加入的氯三甲基硅烷的水解。在另一个实施例中，根据需要将thf加入到残余物中，并重复蒸馏约4次。在另一个实施例中，重复蒸馏约3次、约2次或约1次。在一个实施例中，含有产物的剩余溶液的最终含水量≤0.05％(卡尔费舍尔滴定法)。在一个实施例中，将产物的溶液预冷至约-10℃至约-30℃，并且然后添加氯三甲基硅烷。在另一个实施例中，将溶液预冷至约-20℃至约-25℃。在一个实施例中，将强碱和thf填充到单独的反应器中并冷却至约-10℃至约-30℃。在一个实施例中，强碱是二异丙基氨基锂。在另一个实施例中，例如，在氮气或氩气氛下，该反应器是惰性的。在另一个实施例中，将碱和thf的溶液冷却至约-20℃至约-25℃。在一个实施例中，将3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯、thf和氯三甲基硅烷的无水冷却溶液在约-10℃至约-30℃下填充到碱性溶液中。在另一个实施例中，温度为约-20℃至约-25℃。在一个实施例中，将反应混合物搅拌约2小时。在一个实施例中，为了工作进程，将反应混合物加入预冷的酸性溶液中。在另一个实施例中，该酸性溶液是柠檬酸水溶液。在一个实施例中，在添加之后，分离并丢弃水相。在一个实施例中，通过在约50℃下真空蒸馏从有机相中除去溶剂。在一个实施例中，分离的残余物是3α,7α-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)，在下一步骤中“原样”使用。可替代地，可以在步骤3之前纯化化合物3。步骤3步骤3是使3α,7-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)与ch3cho反应以形成3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)。在一个实施例中，在极性非质子溶剂中，在bf3的存在下，在约-50℃至约-70℃的温度下进行步骤3。在一个实施例中，该极性非质子溶剂是二氯甲烷。在一个实施例中，bf3为乙腈中的16重量％溶液。在另一个实施例中，在bf3二乙基醚合物的存在下进行该反应。在一个实施例中，温度为约-60℃至约-65℃。在一个实施例中，将极性非质子溶剂中的化合物3填充到惰性反应器中。在另一个实施例中，该极性非质子溶剂是来自前一步骤的残余溶剂(例如，thf)。在一个实施例中，加入thf以帮助蒸馏出残余的水和二异丙胺。在约50℃的最高温度下，在真空下蒸馏出残余量的极性非质子溶剂。含有化合物3的残余物中的含水量限于≤0.5％(卡尔费舍尔滴定法)。然后将含有化合物3的残余物溶于极性非质子溶剂中并预冷至约-50℃至约-70℃。该极性非质子溶剂是二氯甲烷。在另一个实施例中，将极性非质子溶剂中的含有化合物3的残余物预冷至约-60℃至约-65℃。加入乙醛(ch3cho)。将极性非质子溶剂和三氟化硼(bf3)溶剂化络合物填充到单独的反应器中，并且然后冷却至约-50℃至约-70℃。在另一个实施例中，极性非质子溶剂是二氯甲烷。在另一个实施例中，三氟化硼溶剂化络合物是三氟化硼乙腈络合物。bf3溶液的温度为约-60℃至约-65℃。将含有化合物3和乙醛的溶液加入约-60℃至约-65℃的bf3溶液中。在另一个实施例中，含有化合物3和乙醛的溶液是无水的。在一个实施例中，将反应混合物在约-60℃至约-65℃下搅拌约2小时，加热至约23℃至约28℃，再搅拌约2小时，并冷却至约2℃至约10℃进行水解/工作进程。在一个实施例中，加入和搅拌的总时间为约4小时。在一个实施例中，为了工作进程，将来自反应器的冷却溶液加入预冷的碱性水溶液中。在另一个实施例中，该碱性水溶液为约50重量％氢氧化钠(naoh；苛性钠)。在一个实施例中，分离各相并将(下部)有机层转移至单独的反应器中。在一个实施例中，尽可能在不高于(nmt)50℃的温度下通过蒸馏自有机层除去溶剂。在一个实施例中，残余物包含3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)和一些剩余的乙腈和二氯甲烷。应理解，步骤4可形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)。将步骤3的产物直接用于步骤4。步骤4步骤4是使3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)与naoh反应以形成e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)。在一个实施例中，在步骤4之前，将来自步骤3的残余物加热至约45℃至约60℃以除去残余量的溶剂。在一个实施例中，温度为约49℃至约55℃。在一个实施例中，使3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)与naoh反应的酯水解反应是在甲醇、水和naoh溶液中在约20℃至约25℃下进行。在一个实施例中，将3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)的反应填充到反应器中。在另一个实施例中，例如，在氮气或氩气氛下，该反应器是惰性的。在nmt50℃的温度下，在真空下蒸馏出残余量的溶剂。在一个实施例中，将残余物加热至约45℃至约60℃。在另一个实施例中，将残余物加热至约49℃至约55℃。在另一个实施例中，将来自步骤3的残余物(化合物4)溶于甲醇和水以及碱性水溶液中。在另一个实施例中，该碱性水溶液为约50重量％氢氧化钠(naoh；苛性钠)。在约20℃至约60℃下进行步骤4的酯水解反应并搅拌直至水解反应完成。在一个实施例中，在约20℃至约25℃下进行酯水解。检查反应混合物的ph以验证它>12。如果ph<12，则加入另外的naoh。将反应混合物用水稀释，并将温度调节至约20℃至约35℃。在另一方面，将反应混合物用水稀释，并将温度调节至约25℃至约35℃。在一个实施例中，为了工作进程，分离各相，并将下部富含产物的水层转移到单独的反应器中，并丢弃有机层。在一个实施例中，在乙酸乙酯的存在下，用水性酸调节富含产物的水相的ph。在另一个实施例中，该酸是柠檬酸水溶液。在一个实施例中，分离各相，保留上层富含产物的有机层，并丢弃下部水层。在一个实施例中，从有机层中蒸馏出乙酸乙酯并用乙酸乙酯代替。在一个实施例中，重复蒸馏直至馏出物的含水量为1％nmt或直至达到恒定沸点。在一个实施例中，将所得产物悬浮液冷却至约10℃至约30℃并分离，并且用乙酸乙酯洗涤。在一个实施例中，通过过滤(例如过滤器nutche、离心机等)分离所得产物。在另一个实施例中，将所得含有化合物5的产物悬浮液冷却至约20℃至约25℃。在一个实施例中，在真空下在约60℃下进行所得产物的干燥(例如，锥形干燥器、桨式干燥器、盘式干燥器等)。在一个实施例中，使用乙醇使粗e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)结晶。在一个实施例中，将乙醇和粗化合物5填充到反应器中。在另一个实施例中，该反应器是惰性的。在一个实施例中，为了溶解粗化合物5，将混合物加热至回流。在一个实施例中，将混合物在受控的冷却坡度中冷却至约15℃至约20℃。在一个实施例中，使用离心机分离结晶化合物5，并且然后用乙酸乙酯洗涤。在一个实施例中，在真空下并在约60℃下进行结晶化合物5的干燥(例如，锥形干燥器、桨式干燥器、盘式干燥器等)。可以采集样品来测量经纯化的化合物5的测定、纯度和水分。在一个实施例中，纯化的化合物5含有3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸的e和z异构体。在一个实施例中，e与z的比率为约99:1、约98:2、约95:5、约90:10、约85:15、约80:20、约75:25、约70:30、约65:35、约60:40、约55:45、或约50:50。关于经纯化的化合物5的鉴定和表征的完整细节，参见实例2。也可以从作为e/z异构体的混合物的化合物开始进行步骤4。例如，步骤4是使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)与naoh反应以形成e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)。在一个实施例中，在步骤4之前，将来自步骤3的残余物加热约45℃至约60℃以除去残余量的溶剂。在一个实施例中，温度为约49℃至约55℃。在一个实施例中，涉及使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)与naoh反应的酯水解反应是在甲醇、水和naoh溶液中在约20℃至约25℃下进行。在一个实施例中，naoh溶液为50重量％水溶液。在一个实施例中，将e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4a)的反应填充到反应器中。在另一个实施例中，例如，在氮气或氩气氛下，该反应器是惰性的。在nmt50℃的温度下，在真空下蒸馏出残余量的溶剂。在一个实施例中，将残余物加热至约45℃至约60℃。在一个实施例中，温度为约49℃至约55℃。在一个实施例中，将来自步骤3的残余物(化合物4a)溶于甲醇和水以及碱性水溶液中。在另一个实施例中，该碱性水溶液为约50重量％氢氧化钠(naoh；苛性钠)。在约20℃至约60℃下进行步骤4的酯水解反应并搅拌直至水解反应完成。在一个实施例中，在约20℃至约25℃下进行酯水解。检查反应混合物的ph以验证它>12。如果ph<12，则加入另外的naoh。将反应混合物用水稀释，并将温度调节至约25℃至约35℃。在一个实施例中，为了工作进程，分离各相，并将下部富含产物的水层转移到单独的反应器中，并丢弃有机层。在一个实施例中，在乙酸乙酯的存在下，用水性酸调节富含产物的水相的ph。在另一个实施例中，该酸是柠檬酸水溶液。在一个实施例中，分离各相，保留上层富含产物的有机层，并丢弃下部水层。在一个实施例中，从有机层中蒸馏出乙酸乙酯并用乙酸乙酯代替。在一个实施例中，重复蒸馏直至馏出物的含水量为1％nmt或直至达到恒定沸点。在一个实施例中，将所得产物悬浮液冷却至约10℃至约30℃并分离，并且用乙酸乙酯洗涤。在一个实施例中，通过过滤(例如过滤器nutche、离心机等)分离所得产物。在另一个实施例中，将所得含有化合物5a的产物悬浮液冷却至约20℃至约25℃。在一个实施例中，在真空下在约60℃下进行所得产物的干燥(例如，锥形干燥器、桨式干燥器、盘式干燥器等)。可以不经纯化将化合物5a用于步骤5。在一个实施例中，使用乙醇使粗e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)结晶。在一个实施例中，将乙醇和粗化合物5a填充到反应器中。在另一个实施例中，该反应器是惰性的。在一个实施例中，为了溶解粗化合物5a，将混合物加热至回流。在一个实施例中，将混合物在受控的冷却坡度中冷却至约15℃至约20℃。在一个实施例中，使用离心机分离结晶化合物5a，并且然后用乙酸乙酯洗涤。在一个实施例中，在真空下并在约60℃下进行结晶化合物5a的干燥(例如，锥形干燥器、桨式干燥器、盘式干燥器等)。在一个实施例中，步骤4的经分离的结晶产物是化合物5。替代步骤4可根据替代方法制备化合物5。在一个实施例中，将化合物4填充到惰性反应器中。在约50℃(最大)下，可以在真空下蒸馏出残余量的溶剂(例如，乙腈、二氯甲烷)。将残余物溶于甲醇并冷却。加入水和苛性钠(50％重量naoh)。在一个实施例中，将反应混合物在约20℃至约25℃下搅拌约4小时。将溶液用水稀释并加入甲苯。搅拌后，分离各相，将下部富含产物的水层转移到惰性反应器中。丢弃有机层。在乙酸乙酯的存在下，用水性柠檬酸调节富含产物的水层的ph。分离各相，并丢弃下部水层。将有机层转移到惰性反应器中。从有机层中蒸馏出乙酸乙酯并用乙酸乙酯代替。在一个实施例中，重复此操作直至馏出物的含水量不多于约1％或直至达到恒定沸点。将所得产物悬浮液冷却至约20℃至约25℃并分离化合物5，并在惰性离心机中用乙酸乙酯洗涤。在转筒式干燥器中，在真空和大约60℃下进行干燥。也可以从作为e/z异构体的混合物的化合物开始进行此替代步骤4。在一个实施例中，将化合物4a填充到惰性反应器中。在约50℃(最大)下，可以在真空下蒸馏出残余量的溶剂(例如，乙腈、二氯甲烷)。将残余物溶于甲醇并冷却。加入水和苛性钠(50重量％，naoh)。在一个实施例中，将反应混合物在约20℃至约25℃下搅拌大约4小时。将溶液用水稀释并加入甲苯。搅拌后，分离各相，将下部富含产物的水层转移到惰性反应器中。丢弃有机层。在乙酸乙酯的存在下，用水性柠檬酸调节富含产物的水层的ph。分离各相，并丢弃下部水层。将富含产物的有机层转移到惰性反应器中。从有机层中蒸馏出乙酸乙酯并用乙酸乙酯代替。在一个实施例中，重复此操作直至馏出物的含水量不多于约1％或直至达到恒定沸点。将所得产物悬浮液冷却至20℃至25℃并分离化合物5a，并在惰性离心机中用乙酸乙酯洗涤。在转筒式干燥器中，在真空和大约60℃下进行干燥。步骤5步骤5是使e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)与pd/c和氢气反应以最初形成3α-羟基-6β-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸，使其经受碱介导的异构，以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)。可以按一个阶段(氢化和异构化一起)或两个不连续阶段(氢化随后异构化)进行步骤5。在一个实施例中，在约90℃至约110℃的温度和约0.5至约5巴的压力下进行步骤5。在一个实施例中，在工作进程中，用活性炭处理反应混合物的有机相。在一个实施例中，压力为约0.5至约5.5巴。在另一个实施例中，压力为约5巴。在另一个实施例中，该氢化是在约0.5巴至约5.5巴的压力下进行，例如0.6巴、0.7巴、0.8巴、0.9巴、1.0巴、1.2巴、1.4巴、1.6巴、1.8巴、2.0巴、2.2巴、2.4巴、2.6巴、2.8巴、3.0巴、3.2巴、3.4巴、3.6巴、3.8巴、4.0巴、4.2巴、4.4巴、5.0巴、5.2巴以及之间的任何增量。在一个实施例中，使氢化反应混合物搅拌约1小时。在一个实施例中，在pd/c和氢气的存在下，将e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)加热至约100℃，并搅拌约2小时至约5小时。在一个实施例中，在pd/c和氢气的存在下，将e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)加热至约100℃，并搅拌约3小时。在一个实施例中，在pd/c和氢气的存在下，e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)在碱性溶液存在下进行。在一个实施例中，该碱性溶液是含水的50重量％的氢氧化钠(naoh；苛性钠)溶液。在氢化反应之后，将反应混合物加热至约100℃(以进行c-6位从β构型到α构型的异构化)，并且然后冷却至约40℃至约50℃。为了工作进程，将pd/c过滤掉。在一个实施例中，向滤液中加入乙酸正丁酯和酸。在另一个实施例中，该酸是盐酸(hcl)。在检查ph-值后分离并丢弃水相以确保其为酸性。将富含产物的有机相用活性炭处理。在一个实施例中，将活性炭过滤掉，并通过蒸馏浓缩所得的富含产物的滤液，并将所得产物悬浮液冷却至约10℃至约30℃。在另一个实施例中，将产物悬浮液冷却至约15℃至约20℃。分离含有化合物6的悬浮液并用乙酸正丁酯洗涤。使用压滤器过滤化合物6。在一个实施例中，在压滤器中，在约80℃，在真空下进行干燥。在步骤5的一个实施例中，将e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)、水、naoh溶液(例如50重量％)和pd/c在约5巴的h2气和约100℃至约105℃的温度下混合，直至h2吸收停止。将反应混合物冷却至约40℃至约50℃并过滤出pd/c。然后将乙酸正丁酯和hcl加入到含有化合物6的溶液中。在一个实施例中，分离并丢弃水相。将含有化合物6的有机相用活性炭处理。过滤出碳，兵将滤液移至另一个反应器中，其中通过蒸馏将其浓缩，并且然后将悬浮液冷却至约5℃至约20℃。在一个实施例中，通过过滤来分离化合物6，并在约80℃，在真空下，将滤液在压滤器上干燥。也可以从作为e/z异构体的混合物的化合物开始进行步骤5。例如，步骤5是使e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气反应并加热以形成3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)。可以按一个阶段(氢化和异构化一起)或两个不连续阶段(氢化随后异构化)进行步骤5。在一个方面，在约90℃至约110℃的温度和约4至约5巴的压力下进行步骤5。在一个实施例中，在工作进程中，用活性炭处理反应混合物的有机相。在一个实施例中，压力为约4.5至约5.5巴。在另一个实施例中，压力为约5巴。在一个实施例中，使氢化反应混合物搅拌约1小时。在一个实施例中，将e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气的反应加热至约100℃，并搅拌约2小时至约5小时。在一个实施例中，将e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气的反应加热至约100℃，并搅拌约3小时。在一个实施例中，e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)与pd/c和氢气的反应是在碱溶液的存在下进行。在一个实施例中，该碱性溶液是水和50重量％的氢氧化钠(naoh；苛性钠)溶液。在氢化反应之后，将反应混合物加热至约100℃(以进行c-6位从β构型到α构型的异构化)，并且然后冷却至约40℃至约50℃。为了工作进程，将pd/c过滤掉。在一个实施例中，向滤液中加入乙酸正丁酯和酸。在另一个实施例中，该酸是盐酸(hcl)。在检查ph-值后分离并丢弃水相以确保其为酸性。将富含产物的有机相用活性炭处理。在一个实施例中，将活性炭过滤掉，并通过蒸馏浓缩所得的富含产物的滤液，并将所得产物悬浮液冷却至约10℃至约30℃。在另一个实施例中，将产物悬浮液冷却至约15℃至约20℃。分离含有化合物6的悬浮液并用乙酸正丁酯洗涤。使用压滤器过滤化合物6。在一个实施例中，在压滤器中，在约80℃，在真空下进行干燥。在步骤5的一个实施例中，将e/z-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5a)、水、naoh溶液(例如50重量％)和pd/c在约5巴的h2气和约100℃至约105℃的温度下混合，直至h2吸收停止。将反应混合物冷却至约40℃至约50℃并过滤出pd/c。然后将乙酸正丁酯和hcl加入到含有化合物6的溶液中。在一个实施例中，分离并丢弃水相。将富含产物的有机相用活性炭处理。过滤出碳，兵将滤液移至另一个反应器中，其中通过蒸馏将其浓缩，并且然后将产物悬浮液冷却至约5℃至约20℃。在一个实施例中，通过过滤来分离化合物6，并在约80℃，在真空下，将滤液在压滤器上干燥。在另一个实施例中，上述制备化合物6的氢化/异构化反应按两个阶段进行(从化合物5或化合物5a开始)。首先，氢化在约4至5巴和约20℃至约40℃下进行，并且然后第二次，将反应混合物加热至约95℃至约105℃。加热反应混合物使得在6位的乙基基团从最初形成的6-β构型异构化为所希望的6-α构型。将反应混合物加热直至异构化完成。步骤6步骤6是使3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)与nabh4反应以形成结晶奥贝胆酸。在一个实施例中，在碱性水溶液中，在约85℃至约110℃的温度下进行步骤6。在一个实施例中，温度为约90℃至约95℃。在一个实施例中，该碱性水溶液是naoh水溶液。在一个实施例中，该碱性水溶液是50重量％naoh溶液和水的混合物。在一个实施例中，将化合物6和nabh4的反应混合物搅拌约3小时至约5小时。在另一个实施例中，将反应混合物搅拌约4小时。为了工作进程，在反应完成后，将混合物冷却至约80℃并转移至冷却的反应器中。在一个实施例中，在约20℃至约60℃下，加入乙酸正丁酯和酸。在一个实施例中，温度为约40℃至约45℃。在另一个实施例中，该酸是柠檬酸。在检查ph-值后分离并丢弃水相以确保其为酸性。通过蒸馏来浓缩富含产物的有机相。在一个实施例中，将乙酸正丁酯加入到残余物中并再次蒸馏出。在一个实施例中，再次将乙酸正丁酯加入到残余物中，并且然后缓慢冷却。在另一个实施例中，在约50℃下接种残余物。在另一个实施例中，在发生结晶后，将混合物加热至52℃，并且然后缓慢冷却至约15℃至约20℃。在另一个实施例中，将残余物冷却至约15℃至约20℃。在一个实施例中，将所得奥贝胆酸用乙酸正丁酯洗涤。在一个实施例中，分离奥贝胆酸并用乙酸正丁酯(例如，在压滤器中)洗涤。在另一个实施例中，该压滤器是惰性的。将结晶产物在约60℃在真空下干燥，并且鉴定为形式a，其特征在于x-射线衍射图基本上类似于图41中所示的x-射线衍射图，包括在约5.0和5.3度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，将所得结晶奥贝胆酸从有机溶剂(例如，庚烷)中分离，并且特征在于包括在约5.0和5.3度2-θ处的特征峰的x射线衍射图。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式a的特征在于x-射线衍射图基本上类似于图41中所示的x-射线衍射图。关于结晶奥贝胆酸形式a的鉴定和表征的全部细节，参见实例3。步骤7步骤7是将结晶奥贝胆酸形式a转化为奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，步骤7包括将结晶奥贝胆酸形式a溶解在naoh水溶液中并添加hcl的步骤。在一个实施例中，将结晶奥贝胆酸在约20℃至约50℃下溶于水和苛性钠溶液(50重量％)中。在一个实施例中，温度为约30℃至约40℃。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸形式是形式a。在一个实施例中，将所得结晶奥贝胆酸形式a溶液在约20℃至约50℃下添加到稀酸中。在另一个实施例中，温度为约30℃至约40℃。在另一个实施例中，所述酸是盐酸(例如，37％)。在一个实施例中，将37％盐酸溶液用水稀释至小于按体积计约1％。在一个实施例中，将37％盐酸溶液用水稀释至按体积计约0.7％。在一个实施例中，将稀酸中的产物悬浮液在约20℃至约50℃搅拌约30分钟。在另一个实施例中，温度为约30℃至约40℃。在一个实施例中，分离奥贝胆酸形式1，并用水(例如，在压滤器中)在nmt约20℃下洗涤。在一个实施例中，分离奥贝胆酸形式1并用水(例如，在压滤器中)在nmt约20℃下洗涤。在另一个实施例中，该压滤器是惰性的。在nmt约50℃的温度，在真空下，将产物在压滤器上干燥。本申请的方法在制备奥贝胆酸形式1中利用结晶中间体，其出乎意料地导致最终产物的整个制备和纯度的显著改进。确切地说，该合成的步骤6产生奥贝胆酸的新的结晶形式。此结晶形式的产生导致基本上纯的奥贝胆酸形式1。本申请的方法是对现有技术中公开的方法的改进。美国公开号2009/0062526a1(本文称为“‘526公开”)、美国专利号7,138,390(本文称为“‘390专利”)和wo2006/122977(本文称为“‘977申请”)中公开了奥贝胆酸的制备。在‘390专利(本文称为“‘390方法”)中，用以制备奥贝胆酸的方法描绘于方案3中(r为乙基)：方案3尽管此方法包括几个步骤，但它存在一系列缺点。在所有步骤中，将反应产物在色谱柱上纯化，即非常昂贵的分离方法，其不能以工业规模使用。此外，步骤2中的反应产率极低(12％-13％)，总产率显著降低，其低于3.5％。此方法还使用六亚甲基膦酰胺作为反应物，其是已知的致癌剂。方案4中描绘了‘977申请中制备奥贝胆酸的方法。方案4制备奥贝胆酸的‘977方法是8步合成方法，其包括一个纯化步骤(步骤7)，随后是另外2个纯化步骤。‘977方法与本申请的方法之间存在大量差异。下面的表a描述了两种方法之间的至少一些差异：表a：‘977方法与本申请方法之间的差异本申请方法与‘977方法相比的差异导致所述方法的显著改进，包括与放大优化、安全性和纯度相关的改进以及整个方法的改进。通过本申请的方法产生的奥贝胆酸的纯度基本上是纯的。确切地说，通过本申请的方法产生的奥贝胆酸比通过现有技术的方法(包括‘390方法和‘977方法)产生的奥贝胆酸基本上更纯。例如，下表b中显示了在通过本申请的方法产生的奥贝胆酸和通过‘977方法产生的奥贝胆酸的分析证书中呈现的结果的比较。使用hplc方法测定杂质的百分比。表b：由本申请方法和‘977方法生成的奥贝胆酸的杂质的比较参数规格限制本申请方法‘977方法水(kf)nmt4.5％1.0％2.1％杂质1和杂质4nmt0.15％<0.05％<0.05％杂质2nmt0.15％<0.05％<0.1％杂质3nmt0.15％<0.05％<0.1％杂质5nmt3.0％0.2％1.0％杂质6nmt0.15％<0.05％<0.05％杂质1是6-乙基熊去氧胆酸。杂质2是3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮(cheto)-5β-胆烷-24-酸。杂质3是6β-乙基鹅去氧胆酸。杂质4是3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸。杂质5是鹅去氧胆酸。杂质6是3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(6ecdca二聚体)。nmt是指“不多于”。结晶奥贝胆酸作为合成中间体目前正在开发奥贝胆酸作为呈非结晶固体状的活性药物成分。为了促进奥贝胆酸的开发，进行了初始结晶和多晶型研究，以便确定结晶形式是否可获得，并且如果是，则确定它们是否适合于开发。在设计为了更好地理解材料在各种溶剂中的行为的初步溶解度筛选之后，显现该材料具有形成凝胶的倾向并且可能结晶。然后进行广泛的多晶型筛选，将材料暴露于大范围的溶剂和结晶条件，以便鉴定和表征尽可能多的相关多晶型物。在此筛选中发现了五种不同的固体形式。奥贝胆酸的三种形式(a、c和d)是含有0.25mol当量水和不同量的一系列有机溶剂的混合水合物/溶剂化物。在加热时，这些固体同时失去结晶度和溶剂，并且不幸的是，这些溶剂化形式由于其低熔融温度和高溶剂含量而不适合作为药物成分进行进一步开发。还应注意，存在此类型的相似“不适合”形式。例如，在后来的实验中发现了低熔融溶剂化形式，以及另一种形式的单晶，其通过scxrd(单晶x射线衍射)显示为一水合物/苯甲醚溶剂化物。剩余的两种形式是更高的熔融和可能更具发展前景，但其中一种(形式g)不能放大再现，尽管经过多次尝试也不能重复。单独生产这种形式的困难使其不适合开发。剩余的非溶剂化形式f是可重复制备的，但它需要扩展的重结晶程序，并且使用硝基甲烷，它是一种有毒溶剂，并且如果被胺、碱、强酸或者高温或绝热压缩敏化的话可能会爆炸。对残余水平的硝基甲烷(被视为形式f)的顾虑也不适合于开发。还鉴定了结晶奥贝胆酸形式i。初始结晶和多晶型研究的总体结果揭示，该材料可以形成各种形式的结晶材料，但没有一种结晶材料或形式被认为适合于开发。直到很久以后才发现在本申请方法的倒数第二步中产生作为中间体的结晶奥贝胆酸的重要性。使用本申请方法可以容易地大规模分离结晶奥贝胆酸。从初始结晶和多晶型研究中确定此结晶奥贝胆酸与形式a一致。在本申请方法的步骤7中作为合成中间体产生的结晶奥贝胆酸的形成、易于分离和高纯对于制备基本上纯的奥贝胆酸确实是关键的。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式a，其特征在于x射线衍射图包括在约5.0和5.3度2θ处的特征峰。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约5.0、5.3和7.7度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约5.0、5.3、7.7和10.0度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约5.0、5.3、7.7、10.0和11.0度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约5.0、5.3、7.7、10.0、11.0和12.4度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约5.0、5.3、7.7、10.0、11.0、12.4和14.9度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式a，其特征在于x-射线衍射图基本上类似于图41中所示的x-射线衍射图。在一个实施例中，使用cukα辐射(40kv，40ma)在衍射仪上收集x射线衍射图。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸，其中所述结晶奥贝胆酸是形式a并且具有大于约90％的纯度。在一个实施例中，通过hplc测定所述结晶奥贝胆酸形式a的纯度。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式a，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物。在一个实施例中，该溶剂化物是正丁基溶剂化物。在一个实施例中，该纯度大于约92％。在一个实施例中，该纯度大于约94％。在一个实施例中，该纯度大于约96％。在一个实施例中，该纯度大于约98％。在一个实施例中，该纯度大于约99％。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸，其中所述结晶奥贝胆酸是形式a并且具有大于约90％的效力。在一个实施例中，通过hplc和/或本领域已知的其他分析程序测定所述结晶奥贝胆酸形式a的纯度。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式a，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物。在一个实施例中，该溶剂化物是水合物。在一个实施例中，该效力大于约92％。在一个实施例中，该效力大于约94％。在一个实施例中，该效力大于约96％。在一个实施例中，该效力大于约98％。在一个实施例中，该效力大于约99％。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式a，其含有总共小于约4％的一种或多种选自以下的杂质：6-乙基熊去氧胆酸、3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸、6β-乙基鹅去氧胆酸、3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸、鹅去氧胆酸、以及3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，总杂质少于约3.8％。在一个实施例中，总杂质少于约3.6％。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式c，其特征在于x射线衍射图包括在约4.2、6.4、9.5、12.5和16.7度2θ处的特征峰。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约4.2、6.4、9.5、12.5、12.6、15.5、15.8、16.0、16.7和19.0度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约4.2、6.4、8.3、9.5、11.1、12.2、12.5、12.6、15.5、15.8、16.0、16.3、16.7、18.6和19.0度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约4.2、6.4、8.3、9.5、11.1、12.2、12.5、12.6、15.5、15.8、16.0、16.3、16.7、17.0、17.8、18.6、18.8、19.0、20.5和20.9度2-θ处的特征峰。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式c，其特征在于x-射线衍射图基本上类似于图5中所示的x-射线衍射图。在一个实施例中，使用cukα辐射(40kv，40ma)在衍射仪上收集x射线衍射图。在一个实施例中，该x射线衍射图包括在约12.0至约12.8和约15.4至约21.0的特征峰。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式c，其特征在于吸热值在约98℃±2℃的差示扫描量热法(dsc)热谱图，如用mettlerdsc823e仪器测量的。在一个实施例中，差示扫描量热法(dsc)热谱图具有约98℃±2℃的吸热值，如通过mettlerdsc823e仪器测量的。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸，其中所述结晶奥贝胆酸是形式c并且具有大于约90％的纯度。在一个实施例中，通过hplc测定所述结晶奥贝胆酸形式c的纯度。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式c，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物。在一个实施例中，该溶剂化物是水合物。在一个实施例中，该纯度大于约92％。在一个实施例中，该纯度大于约94％。在一个实施例中，该纯度大于约96％。在一个实施例中，该纯度大于约98％。在一个实施例中，该纯度大于约99％。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸，其中所述结晶奥贝胆酸是形式c并且具有大于约90％的效力。在一个实施例中，通过hplc和/或本领域已知的其他分析程序测定所述结晶奥贝胆酸形式c的纯度。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式c，或其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物。在一个实施例中，该溶剂化物是水合物。在一个实施例中，该效力大于约92％。在一个实施例中，该效力大于约94％。在一个实施例中，该效力大于约96％。在一个实施例中，该效力大于约98％。在一个实施例中，该效力大于约99％。在一个实施例中，本发明涉及结晶奥贝胆酸形式c，其含有总共小于约4％的一种或多种选自以下的杂质：6-乙基熊去氧胆酸、3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸、6β-乙基鹅去氧胆酸、3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸、鹅去氧胆酸、以及3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，总杂质少于约3.8％。在一个实施例中，总杂质少于约3.6％。本申请的实例3提供了奥贝胆酸的这些结晶形式的完全表征。获得了奥贝胆酸的单晶x射线结构，并分配了绝对立体化学。例如，结晶奥贝胆酸形式g的单晶x-射线结构是由在以0.1℃/min冷却至5℃随后在rt/50℃8小时循环1周熟化之后从乙腈溶液中重结晶奥贝胆酸而获得的晶体测定的。该结构是斜方晶系，空间群p212121，并且在不对称晶胞中含有一个奥贝胆酸分子。最终r1[i>2σ(i)]＝3.22％。如下所示测定该分子的绝对立体化学，flack参数＝-0.01(13)。该结构没有无序。对奥贝胆酸形式1(非结晶)与结晶奥贝胆酸形式f进行生物利用度研究(实例7)。该研究的结果显示，当向受试者口服给药时，固体奥贝胆酸的这种物质状态可以在分子的生物利用度上起作用。根据本领域已知的方法评价口服给药后的血浆动力学和肠吸收效率以及固体奥贝胆酸形式1(非结晶)和结晶形式f的药代动力学。本发明的实例8显示了在给予奥贝胆酸形式1或形式f后，奥贝胆酸血浆浓度与时间、tmax、cmax和auc的曲线(参见图37-38)。结晶形式f具有比奥贝胆酸形式1(非结晶)更高的生物利用度。血浆曲线显示形式f被更有效地吸收(更高的auc)，并且甚至动力学更规则，反映了该药物在肠内容物中的最佳分布。奥贝胆酸形式1(非结晶)的水溶解度略高于形式f。由于在所研究的温度范围内，热重分析(tga)没有显示出任何重量损失，因此形式f是稳定的。基本上纯的奥贝胆酸本申请提供基本上纯的奥贝胆酸及其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物：药物活性成分奥贝胆酸的其他名称是int-747、3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸、6α-乙基-鹅去氧胆酸、6-乙基-cdca、6ecdca、和胆烷-24-酸,6-乙基-3,7-二羟基-,(3α,5β,6α,7α)-。本申请提供了包含奥贝胆酸形式1的组合物和合成高纯度的奥贝胆酸形式1的方法，这些方法是安全的并且大规模地产生奥贝胆酸。在一个方面，以商业规模过程生产奥贝胆酸形式1。术语“商业规模方法”是指以至少约100克的单批次进行的方法。在一个方面，本申请的方法以高产率(>80％)和有限的杂质生产奥贝胆酸形式1。如本文所用，术语“纯度”是指基于hplc的奥贝胆酸的量。纯度基于化合物的“有机”纯度。纯度不包括任何量的水、溶剂、金属、无机盐等的量度。在一个方面，通过比较峰下面积，将奥贝胆酸的纯度与参考标准品的纯度进行比较。在另一个方面，纯度的已知标准品是奥贝胆酸参考标准品。在一个方面，奥贝胆酸具有大于约96％的纯度。在一个方面，奥贝胆酸具有大于约98％的纯度。例如，奥贝胆酸形式1的纯度是96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％。例如，奥贝胆酸形式1的纯度是98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％。例如，奥贝胆酸的纯度是98.0％、98.5％、99.0％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％。例如，奥贝胆酸的纯度是98.5％、99.0％、或99.5％。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及纯度大于约98％的奥贝胆酸。在一个实施例中，通过hplc确定纯度。在另一个实施例中，本发明涉及奥贝胆酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物。在一个实施例中，该纯度大于约98.5％。在一个实施例中，该纯度大于约99.0％。在一个实施例中，该纯度大于约99.5％。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。如本文所用，术语“效力”是基于已知标准品的情况的奥贝胆酸的量的量度(例如，约95％至约102％的接受标准)。效力考虑了所有可能的杂质，包括水、溶剂、有机和无机杂质。在一个方面，已知标准品是奥贝胆酸。在一个方面，奥贝胆酸具有大于约96％的效力。在一个方面，奥贝胆酸具有大于约98％的效力。在一个方面，已知标准品是奥贝胆酸。在另一个方面，效力是100％减去水、硫酸化灰分、残余溶剂和如下其他杂质内容物的量，如6-乙基熊去氧胆酸、3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸、6β-乙基鹅去氧胆酸、3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸、鹅去氧胆酸、以及3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在另一个实施例中，效力对归因于水、溶剂、金属、无机盐和其他无机或有机杂质的杂质做出了说明。例如，奥贝胆酸形式1的效力是96.0％、96.1％、96.2％、96.3％、96.4％、96.5％、96.6％、96.7％、96.8％、96.9％、97.0％、97.1％、97.2％、97.3％、97.4％、97.5％、97.6％、97.7％、97.8％、97.9％、98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％。在一个方面，奥贝胆酸形式1的效力是98.0％、98.1％、98.2％、98.3％、98.4％、98.5％、98.6％、98.7％、98.8％、98.9％、99.0％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％。例如，奥贝胆酸的效力是98.0％、98.5％、99.0％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、或99.9％。例如，奥贝胆酸的效力是98.5％、99.0％、或99.5％。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，本发明涉及奥贝胆酸，其含有总共小于约2％的一种或多种选自以下的杂质：6-乙基熊去氧胆酸、3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸、6β-乙基鹅去氧胆酸、3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸、鹅去氧胆酸、以及3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，杂质总量少于约1.5％。在一个实施例中，杂质总量少于约1.4％。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约10％的水、少于约9％的水、少于8％的水、少于7％的水、少于6％的水、少于5％的水、少于4％的水、少于3％的水、少于2％的水、或少于1％的水。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约1.2％的水。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约1.0％的水。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。在另一个实施例中，奥贝胆酸含有不多于(nmt)0.15％的6-乙基熊去氧胆酸和3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸。在另一个实施例中，奥贝胆酸含有总共少于约0.07％的6-乙基熊去氧胆酸和3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有总共少于约0.06％的6-乙基熊去氧胆酸和3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有总共少于约0.05％的6-乙基熊去氧胆酸和3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，奥贝胆酸含有不多于(nmt)0.15％的3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.07％的3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.06％的3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.05％的3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，奥贝胆酸含有不多于(nmt)0.15％的6β-乙基鹅去氧胆酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.07％的6β-乙基鹅去氧胆酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.06％的6β-乙基鹅去氧胆酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.05％的6β-乙基鹅去氧胆酸。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，奥贝胆酸含有不多于(nmt)3％的鹅去氧胆酸(cdca)。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约1％的cdca。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.5％的cdca。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.3％的cdca。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.2％的cdca。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，奥贝胆酸含有不多于(nmt)4％的cdca和6-乙基鹅去氧胆酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有不多于(nmt)1.5％的3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约1％的3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.07％的3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.06％的3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，奥贝胆酸含有少于约0.05％的3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。在一个实施例中，该奥贝胆酸是奥贝胆酸形式1。口服配制品和给药奥贝胆酸用于口服给予。在一个实施例中，该配制品经口服给予以预防和治疗fxr介导的疾病和病症。在一个实施例中，该配制品包含奥贝胆酸形式1。在另一个实施例中，该配制品包含基本上纯的奥贝胆酸。适合于口服给予的配制品可以按以下提供：离散单元，如片剂、胶囊、扁囊剂(由药剂师用于提供药物的扁胶囊)、锭剂，各自含有预定量的奥贝胆酸；散剂或颗粒剂；处于水性或非水性液体的溶液或悬浮液；或者水包油或油包水乳液。本发明的配制品可以通过任何适合的方法来制备，典型地通过按所需的比例将奥贝胆酸与液体或细分的固体载体或与这二者均一地且紧密地混合，然后，如果需要的话，将所得混合物成型为所希望的形状。例如，片剂可以通过压制包含奥贝胆酸的粉末或颗粒及一种或多种任选的成分如粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂或表面活性分散剂的紧密混合物，或通过模制粉状活性成分和惰性液体稀释剂的紧密混合物来制备。例如，可以给予一种或多种片剂以达到基于受试者体重(例如在约30kg至约70kg之间的人类)的目标剂量水平。在一个实施例中，该受试者是儿童，并且该配制品用于治疗胆道闭锁。胆道闭锁，也称为“肝外胆管缺失”和“进行性闭塞性胆管病”，是先天性或后天性肝脏疾病，并且是移植肝同种异体移植物慢性排斥的主要形式之一。在先天性形式中，肝脏和小肠之间的胆总管被阻塞或不存在。获得性类型最常发生在自身免疫疾病的环境中，并且是移植肝同种异体移植物的慢性排斥的主要形式之一。患有胆道闭锁的婴儿和儿童具有进行性胆汁淤积，伴有所有常见的伴随特征：黄疸、瘙痒、伴有生长迟缓的吸收不良、脂溶性维生素缺乏、高脂血症、以及最终伴有门静脉高压的肝硬化。如果未被识别，则该病症导致肝衰竭-但不会导致核黄疸，因为肝脏仍然能够缀合胆红素，并且缀合的胆红素不能跨越血脑屏障。该病症的原因尚不清楚。唯一有效的治疗是某些手术，如kasai手术或肝移植在一个实施例中，所述人类儿童已进行了肝门肠吻合术，其中当他们出生时没有胆管或出生时胆管被完全阻断，所述肝门肠吻合术有效地给予了他们功能性胆管。除了以上具体提到的成分之外，考虑到所讨论的配制品类型，本发明的口服配制品还可以包括药学领域技术人员已知的其他药剂。适合的口服配制品可以包括调味剂。在一个实施例中，本发明涉及奥贝胆酸或其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物的药物配制品，其中通过本发明的方法产生奥贝胆酸(奥贝胆酸形式1)。在另一个实施例中，将该配制品口服给予。在一个实施例中，该配制品是片剂形式。在另一个实施例中，该配制品包含奥贝胆酸和一种或多种选自以下的组分：微晶纤维素、淀粉乙醇酸钠、硬脂酸镁、包衣材料或胶体二氧化硅。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。在另一个实施例中，该配制品每片包含约0.1mg至约1500mg的奥贝胆酸。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约100mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约50mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约30mg。在另一个实施例中，该配制品包含约4mg至约26mg。在另一个实施例中，该配制品包含约5mg至约25mg。在一个实施例中，该配制品包含约1mg至约2mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.2mg至约1.8mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.3mg至约1.7mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.5mg。在一个实施例中，该配制品每片包含约1mg至约25mg的奥贝胆酸。在一个实施例中，该配制品包含约1mg的奥贝胆酸、约180至约190mg的微晶纤维素、约10至约15mg的淀粉乙醇酸钠、约1至约3mg的硬脂酸镁、以及约5mg至约10mg的包衣材料。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。在一个实施例中，该配制品每片包含约1mg至约25mg的奥贝胆酸。在一个实施例中，该配制品包含约1mg的奥贝胆酸、约185.0mg的微晶纤维素、约12.0mg的淀粉乙醇酸钠、约2.0mg的硬脂酸镁和约8.0mg的包衣材料。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。在一个实施例中，该配制品每片包含约1mg至约25mg的奥贝胆酸。在一个实施例中，该配制品包含约5mg的奥贝胆酸、约175至约190mg的微晶纤维素、约10至约15mg的淀粉乙醇酸钠、约1至约3mg的硬脂酸镁和约5mg至约10mg的包衣材料。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。在一个实施例中，该配制品每片包含约1mg至约25mg的奥贝胆酸。在一个实施例中，该配制品包含约5mg的奥贝胆酸、约181.0mg的微晶纤维素、约12.0mg的淀粉乙醇酸钠、约2.0mg的硬脂酸镁和约8.0mg的包衣材料。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。在一个实施例中，该配制品每片包含约1mg至约25mg的奥贝胆酸。在一个实施例中，该配制品包含约10mg的奥贝胆酸、约170mg至约180mg的微晶纤维素、约10mg至约15mg的淀粉乙醇酸钠、约1mg至约3mg的硬脂酸镁和约5mg至约10mg的包衣材料。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。在一个实施例中，该配制品每片包含约1mg至约25mg的奥贝胆酸。在一个实施例中，该配制品包含约10mg的奥贝胆酸、约176.0mg的微晶纤维素、约12.0mg的淀粉乙醇酸钠、约2.0mg的硬脂酸镁和约8.0mg的包衣材料。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。在一个实施例中，该配制品每片包含约1mg至约25mg的奥贝胆酸。在一个实施例中，该配制品包含约25mg的奥贝胆酸、约150mg至约160mg的微晶纤维素、约10mg至约15mg的淀粉乙醇酸钠、约1mg至约3mg的硬脂酸镁、约5至约10mg的包衣材料和约1至约10mg的胶体二氧化硅。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。在一个实施例中，该配制品每片包含约1mg至约25mg的奥贝胆酸。在一个实施例中，该配制品包含约25mg的奥贝胆酸、约157.0mg的微晶纤维素、约12.0mg的淀粉乙醇酸钠、约2.0mg的硬脂酸镁、约8.0mg的包衣材料和约4.0mg的胶体二氧化碳。在一个实施例中，该包衣材料是包衣材料。除非另外指示，否则本文所用的所有百分比和比率都以重量计。二聚杂质百分比是基于面积百分比的，典型地是如通过分析性hplc所量化的。在整个说明书中，当组合物被描述为具有、包括或包含特定组分时，预期组合物也基本上由所述组分组成或由所述组分组成。类似地，在将方法描述为具有、包括或包含特定方法步骤的情况下，这些方法也基本上由所述处理步骤组成或由所述处理步骤组成。此外，应当理解只要本发明保持可操作性，那么步骤的顺序或用于执行某些动作的顺序是无关紧要的。此外，可以同时进行两个或更多个步骤或动作。片剂的配制api：活性药物成分hse＝内部规格usp-nf＝美国药典国家处方集pheur＝欧洲药典jp＝日本药典*所示的奥贝胆酸量假定api为无水且100％纯；基于所用药物物质批次的效力调整实际量，并且相应地减少微晶纤维素的量。在一个实施例中，该片剂包含黄色在另一个实施例中，该片剂包含白色在另一个实施例中，该片剂包含绿色药物组合物奥贝胆酸(包括奥贝胆酸形式1、基本上纯的形式的奥贝胆酸和结晶形式的奥贝胆酸)或其药学上可接受的盐、溶剂化物或氨基酸缀合物可用于多种药用目的。奥贝胆酸可以用于预防或治疗fxr介导的疾病和病症的方法中。在一个实施例中，该疾病或病症选自胆道闭锁、胆汁淤积性肝病、慢性肝病、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、丙型肝炎感染、酒精性肝病、原发性胆汁性肝硬化(pbc)、由进行性纤维化引起的肝损伤、肝纤维化以及心血管疾病(包括动脉粥样硬化、动脉硬化、高胆固醇血症和高脂血症)。在一个实施例中，奥贝胆酸形式1可以用于降低甘油三酯的方法中。在一个实施例中，结晶奥贝胆酸可以用于降低甘油三酯的方法中。奥贝胆酸形式1或结晶奥贝胆酸可增加hdl。奥贝胆酸形式1或结晶奥贝胆酸的其他作用包括降低碱性磷酸酶(alp)、胆红素、alt、ast和ggt。在一个实施例中，本发明涉及包含奥贝胆酸和药学上可接受的载体的药物组合物，其中通过本发明的方法产生奥贝胆酸，例如，奥贝胆酸形式1。在一个实施例中，该药物组合物包含基本上纯的奥贝胆酸和药学上可接受的载体。在另一个实施例中，该药物组合物包含结晶奥贝胆酸和药学上可接受的载体。在另一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式a。在另一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式c。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式d。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式f。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式g。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式i。在一个实施例中，本发明涉及治疗或预防受试者中fxr介导的疾病或病症的方法，该方法包括给予有效量的通过本发明的方法产生的奥贝胆酸形式1或其药物组合物。在一个实施例中，本发明涉及治疗或预防受试者中fxr介导的疾病或病症的方法，该方法包括给予有效量的通过本发明的方法产生的基本上纯的奥贝胆酸或其药物组合物。在一个实施例中，本发明涉及治疗或预防受试者中fxr介导的疾病或病症的方法，该方法包括给予有效量的结晶奥贝胆酸或其药物组合物。在另一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式c。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式a。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式c。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式d。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式f。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式g。在一个实施例中，该结晶奥贝胆酸是形式i。在另一个实施例中，该疾病或病症是心血管疾病或胆汁淤积性肝病，并且用于降低甘油三酯。在另一个实施例中，该心血管疾病是动脉粥样硬化或高胆固醇血症。在另一个实施例中，该受试者是哺乳动物。在另一个实施例中，该哺乳动物是人。在另一个实施例中，将该化合物或药物组合物口服、肠胃外、或局部地给予。在另一个实施例中，将该化合物或药物组合物口服给予。在一个实施例中，本发明涉及用于抑制患有胆汁郁积性病症的受试者的纤维化的方法，该方法包括向该受试者给予有效量的奥贝胆酸或其药物组合物的步骤，其中奥贝胆酸是通过本发明的方法产生。在一个实施例中，本发明涉及用于抑制未患有胆汁郁积性病症的受试者的纤维化的方法，该方法包括向该受试者给予有效量的奥贝胆酸或其药物组合物的步骤，其中奥贝胆酸是通过本发明的方法产生。在实施例中，待抑制的纤维化发生在表达fxr的器官中。在一个实施例中，该胆汁淤积性病症被定义为具有异常升高的血清水平的碱性磷酸酶、7-谷氨酰转肽酶(ggt)、和5’核苷酸酶。在另一个实施例中，胆汁淤积性病症被进一步定义为呈现至少一种临床症状。在另一个实施例中，该症状是发痒(瘙痒)。在另一个实施例中，该纤维化选自下组，该组由以下组成：肝纤维化、肾纤维化、和肠纤维化。在另一个实施例中，胆汁淤积性病症选自下组，该组由以下组成：原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、药物诱导性胆汁淤积、遗传性胆汁淤积以及妊娠肝内胆汁淤积症。在另一个实施例中，该受试者不患有与选自下组的疾病或病症相关的胆汁淤积性病症，该组由以下组成：原发性肝癌和胆管癌、转移性癌症、败血症、慢性全胃肠外营养、囊胞性纤维症、和肉芽肿性肝病。在另一个实施例中，受试者患有与选自下组的疾病相关的肝纤维化，该组由以下组成：乙型肝炎；丙型肝炎；寄生性肝病；移植后细菌性、病毒性和真菌性感染；酒精性肝病(ald)；非酒精性脂肪肝病(nafld)；非酒精性脂肪性肝炎(nash)；由甲氨蝶呤(methotrexate)、异烟肼(isoniazid)、酚丁(oxyphenistatin)、甲基多巴(methyldopa)、氯丙嗪(chlorpromazine)、甲苯磺丁脲(tolbutamide)或胺碘达隆(amiodarone)诱发的肝病；自体免疫肝炎；类肉瘤病；威尔逊氏病(wilson'sdisease)；血色素沉着病；高雪氏病(gaucher'sdisease)；iii、iv、vi、ix和x型糖原贮积病；α1-抗胰蛋白酶缺乏症；齐薇格综合征(zellwegersyndrome)；酪氨酸血症；果糖血症；半乳糖血症；与巴德-吉亚利综合征(budd-chiarisyndrome)、静脉闭塞疾病或门静脉血栓形成相关的血管紊乱；和先天性肝纤维化。在另一个实施例中，该受试者患有与选自下组的疾病相关的肠纤维化，该组由以下各项组成：克罗恩病、溃疡性结肠炎、放疗后结肠炎、和微观结肠炎。在另一个实施例中，该患者患有与选自下组的疾病相关的肾纤维化，该组由以下各项组成：糖尿病肾病、高血压性肾硬化、慢性肾小球肾炎、慢性移植肾小球病、慢性间质性肾炎、和多囊肾病。定义为了方便起见，在此集中了本说明书、实例和所附权利要求书中所用的某些术语。如本文所用，术语“奥贝胆酸”或“oca”是指具有以下化学结构的化合物：奥贝胆酸的其他化学名包括：3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸、6α-乙基-鹅去氧胆酸、6-乙基-cdca、6ecdca、胆烷-24-酸,6-乙基-3,7-二羟基-,(3α,5β，6α,7α)-和int-747。奥贝胆酸的cas登记号是459789-99-2。此术语是指所有形式的奥贝胆酸，例如非晶态、晶态和基本上纯的。如本文所用，术语“结晶奥贝胆酸”是指具有以下化学结构的一种化合物的任何结晶形式：结晶奥贝胆酸意指化合物结晶成在三个空间维度上的特定晶体堆积排列或具有外表面平面的化合物。奥贝胆酸(或其药学上可接受的盐、氨基酸缀合物、溶剂化物)的结晶形式可以结晶成不同的晶体包装排列，其全部都具有奥贝胆酸的相同元素组成。不同晶体形式通常具有不同的x-射线衍射图、红外光谱、熔点、密度硬度、晶体形状、光学和电学性质、稳定性、以及溶解度。重结晶溶剂、结晶速率、储存温度以及其他因素可以使得一种晶体形式占优势。奥贝胆酸的晶体可以通过在不同条件(例如，不同的溶剂、温度等)下结晶来制备。如本文所用，术语“结晶奥贝胆酸形式a”是指具有基本上类似于图41中所示的x-射线衍射图的奥贝胆酸结晶形式，例如，实例3中表征的结晶形式之一。如本文所用，术语“结晶奥贝胆酸形式c”是指具有基本上类似于图5中所示的x-射线衍射图的奥贝胆酸结晶形式，例如，实例3中表征的结晶形式之一。如本文所用，术语“基本上纯的奥贝胆酸”是指具有大于约95％的效力的奥贝胆酸。奥贝胆酸的效力考虑了杂质，包括例如水、溶剂和在奥贝胆酸样品中的其他有机和无机杂质。在另一个实施例中，已知的效力标准品是100％的奥贝胆酸，并且通过从100％的已知标准品中减去杂质如溶剂、水和其他有机和无机杂质的百分比来确定效力。在一个方面，这些无机杂质包括例如无机盐和硫酸化灰分。在一个方面，这些有机杂质包括6-乙基熊去氧胆酸、3α-羟基-6α-乙基-7-醛酮-5β-胆烷-24-酸、6β-乙基鹅去氧胆酸、3α,7α-二羟基-6-亚乙基-5β-胆烷-24-酸、鹅去氧胆酸、以及3α(3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-基氧基)-7α-羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸。可通过本领域已知的程序，例如hplc、nmr或来自美国药典或欧洲药典的方法或这些方法中两种或更多种的组合，来测定杂质的量。如本文所用，术语“纯度”是指从例如hplc获得的化合物的化学分析。在一个实施例中，将化合物的纯度与参考标准(例如，奥贝胆酸)的纯度通过比较它们各自峰下的面积进行比较。在一个实施例中，纯度对样品中的有机杂质做出了说明。如本文所用，术语“反应混合物”是指一种或多种物质组合在一起的混合物。在一个实施例中，这些物质的混合或组合引起一种或多种原始物质的化学转化或变化。如本文所用，术语“奥贝胆酸形式1”是指非结晶奥贝胆酸。在一个实施例中，通过作为合成中间体的结晶奥贝胆酸产生这种形式的奥贝胆酸。例如，这种形式的奥贝胆酸是经由作为合成中间体的结晶奥贝胆酸形式a通过本申请的方法产生的。在一个实施例中，奥贝胆酸形式1是用作药物活性成分的形式。更多细节，参见实例5。“治疗”包括引起病状、疾病、病症等改进的任何作用，例如减轻、减少、调节或消除。疾病状态的“治疗(treating/treatment)”包括：抑制疾病状态，即阻止疾病状态或其临床症状的发展、或减轻疾病状态，即引起疾病状态或其临床症状的暂时性或永久性消退。“预防”疾病状态包括在可能暴露于或易患有疾病状态但还未经历或展示疾病状态的症状的受试者中使得疾病状态的临床症状不发展。“疾病状态”意指任何疾病、障碍、病症、症状或适应症。如本文所用，术语“有效量”是指当适当的剂量给予时产生急性或慢性治疗效果的奥贝胆酸(例如，fxr活化配体)的量。所述效果包括疾病/病症(例如，肝、肾或肠的纤维化)以及相关并发症的症状、病征和潜在病理的达到任何可检测程度的预防、矫正、抑制、或逆转。“治疗有效量”意指奥贝胆酸的当向哺乳动物给予以治疗疾病时足以实现所述疾病的这种治疗的量。“治疗有效量”将根据奥贝胆酸、疾病及其严重性以及待治疗的哺乳动物的年龄、体重等来变化。可以将治疗有效量的奥贝胆酸与药学上可接受的载体一起配制，用于向人类或动物给予。因此，可以给予奥贝胆酸或其配制品，例如通过口服、肠胃外、或局部的途径，以提供有效量的化合物。在替代性实施例中，根据本发明制备的奥贝胆酸可以用来涂覆或浸渍医疗装置，例如支架。如本文所用，“药理作用”涵盖了在达到疗法的预期目的的受试者中产生的作用。在一个实施例中，药理作用意指预防、缓解、或减少被治疗的受试者的主要适应症。例如，药理作用将是导致所治疗受试者的主要适应症的预防、减轻或减少的药理作用。在另一个实施例中，药理作用意指预防、减轻、或减少被治疗受试者的主要适应症的障碍或症状。例如，药理作用是导致所治疗受试者的主要适应症的预防或减少的药理作用。本发明还包括同位素标记的奥贝胆酸、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或氨基酸缀合物，其与本发明和以下的化学式中列举的那些相同，除了以下事实：一个或多个原子被具有与自然中最常见的原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的原子代替。可以掺入奥贝胆酸、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或氨基酸缀合物中的同位素实例包括氢、碳、氮、氟的同位素，如3h、11c、14c和18f。包含上述同位素和/或其他原子的其他同位素的奥贝胆酸、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或氨基酸缀合物是在本发明的范围内。同位素标记的奥贝胆酸、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或氨基酸缀合物，例如掺入放射性同位素如3h、14c的那些，在药物和/或底物组织分配测定中是有用的。氚化的(即3h)和碳-14(即14c)同位素因其易于制备和可检测性而特别优选。此外，用较重的同位素(如氘，即2h)取代可以提供由更高的代谢稳定性引起的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或减少的剂量要求，并且因此在某些情况下可能是优选的，同位素标记的奥贝胆酸、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或氨基酸缀合物通常可以通过执行本发明的方案和/或实例中披露的程序，通过将易得的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。在一个实施例中，奥贝胆酸、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或氨基酸缀合物是同位素标记的。在一个实施例中，氘化的奥贝胆酸用于生物分析测定。在另一个实施例中，奥贝胆酸、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或氨基酸缀合物是放射性标记的。“几何异构体”意指其存在归因于围绕双键的旋转受阻的非对映异构体。这些构型的名称通过前缀顺式和反式、或z和e加以区分，根据cahn-ingold-prelog规则，所述前缀指示基团在分子中的双键的同侧或对侧。“溶剂化物”意指包含化学计量或非化学计量量的溶剂的溶剂添加剂形式。奥贝胆酸可能倾向于在晶状固态中捕获固定摩尔比的溶剂分子，从而形成溶剂化物。如果所述溶剂是水，那么所形成的溶剂化物是水合物，当所述溶剂是醇时，所形成的溶剂化物是醇化物。通过将一个或多个水分子与其中水保持其作为h2o的分子状态的物质之一组合形成水合物，这样的组合能够形成一种或多种水合物。另外，本发明的化合物(例如，化合物的盐)能以水合或非水合(无水的)形式存在或作为与其他溶剂分子的溶剂化物存在。水合物的非限制性实例包括一水合物、二水合物等。溶剂化物的非限制性实例包括乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等。“互变异构体”是指在分子排列上结构明显不同的，但是其以简单并快速平衡存在的化合物。应该理解的是，奥贝胆酸可以被描绘为不同互变异构体。应当理解的是，当本发明的奥贝胆酸和合成的中间体具有互变异构形式时，所有的互变异构形式旨在在本发明的范围之内，并且奥贝胆酸的命名并不排除任何互变异构形式。本发明的奥贝胆酸和合成的中间体能以若干互变异构形式(包括酮-烯醇)存在。例如，在酮-烯醇互变异构中，电子和氢原子发生同时移动。互变异构体在溶液中作为一组互变异构体的混合物存在。在固体形式下，通常以一种互变异构体为主。即使可能描述的是一种互变异构体，但是本发明包括了所有本发明化合物的互变异构体。因此，应当理解的是，除非另外说明，否则本发明范围内包括由不对称碳原子产生的异构体(例如，所有的对映异构体和非对映异构体)。这类异构体可以通过经典分离技术和通过立体化学控制的合成以基本上纯的形式获得。此外，本申请中所讨论的结构和其他化合物及部分也包括其所有的互变异构体。适当时，烯烃可以包括e-或z-几何结构。奥贝胆酸和合成的中间体能以立体异构形式存在，并且因此可以作为单独的立体异构体或作为混合物生产。“药物组合物”是包含奥贝胆酸的适用于向受试者给予形式的配制品。在一个实施例中，该药物组合物处于散装形式或单位剂型。可能有利的是为了易给予以及剂量均一，以单位剂型来配制组合物。如本文所用，剂量单位形式是指适合作为用于待治疗的受试者的单一剂量的物理上离散单位；每个单位含有预定量的经计算结合所需药用载体可产生所希望治疗作用的活性试剂。本发明的单位剂型的规格由如下决定并且直接依赖于：活性试剂的独特特征和待实现的具体治疗效果，和本领域中配制用于治疗个体的这种活性剂的固有局限性。所述单位剂型是任何各种形式，包括例如胶囊、iv包、片剂、气溶胶吸入器上的单泵、或小瓶。在单位剂量的组合物中奥贝胆酸(例如，奥贝胆酸、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、或氨基酸缀合物的配制品)的量是有效量，并且根据涉及的具体治疗而变化。本领域的技术人员将理解，有时取决于患者的年龄和病症，有必要对剂量做出常规变化。该剂量也将取决于给予途径。考虑了各种途径，包括口服、肺部、直肠、肠胃外、透皮、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、吸入、颊部、舌下、胸膜内、鞘内、鼻内等。用于局部或经皮给予本发明的化合物的剂型包括散剂、喷雾剂、软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。在一个实施例中，将奥贝胆酸在无菌条件下与药学上可接受的载体和所需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。术语“闪释剂量”是指快速分散剂型的奥贝胆酸配制品。术语“立即释放”定义为奥贝胆酸从剂型中以相对短暂的时间段(通常长达约60分钟)的释放。术语“改良释放”被定义为包括延迟释放、延长释放和脉冲释放。术语“脉冲释放”定义为药物从剂型中的一系列释放。术语“持续释放”或“延长释放”定义为在延长的时间内奥贝胆酸从剂型中连续释放。“受试者”包括哺乳动物，例如，人、伴侣动物(例如，狗、猫、鸟等)、农场动物(例如，牛、绵羊、猪、马、家禽等)、以及实验室动物(例如，大鼠、小鼠、豚鼠、鸟等)。在一个实施例中，该受试者是人。在一个实施例中，该受试者是人类儿童(例如，在约30kg至约70kg之间)。在一个实施例中，所述人类儿童已进行了肝门肠吻合术，其中当他们出生时没有胆管或出生时胆管被完全阻断，所述肝门肠吻合术有效地给予了他们功能性胆管。如本文所用，短语“药学上可接受”是指在正确医学判断的范围内适合于与人类和动物的组织接触而无过多毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物、载体和/或剂型。“药学上可接受的赋形剂”意指在制备药物组合物中有用的赋形剂，所述赋形剂通常是安全的、无毒的并且不是生物学的或其他方面不受欢迎的，并且包括对于兽医使用以及人类药用可接受的赋形剂。在说明书和权利要求书中使用的“药学上可接受的赋形剂”这一术语包含一种和多于一种这类的赋形剂。虽然可以直接给予奥贝胆酸而不需要任何配制品，但是奥贝胆酸通常以包括药学上可接受的赋形剂和奥贝胆酸的药物配制品的形式给予。这些配制品可以通过多种途径给予，包括口服、经颊、直肠、鼻内、经皮、皮下、静脉内、肌内、和鼻内途径。在此奥贝胆酸的口服配制品在标题为“口服配制品和给予”的部分下进行了进一步的描述。在一个实施例中，可以经皮给予奥贝胆酸。为了经皮给予，需要经皮递送装置(“贴剂”)。此类透皮贴剂可用于以可控量进行本发明的化合物的连续或间断输注。用于药学试剂递送的经皮贴剂的构造和使用是本领域中熟知的。参见，例如美国专利号5,023,252。此类贴剂可以被构造成连续的、脉冲的或按需递送的药学试剂。在本发明的一个实施例中，提供了适用于经颊和/或舌下、或鼻腔给予的配制品形式的药物配制品，所述药物配制品包括至少如以上所描述的奥贝胆酸。此实施例提供了以避免胃并发症(如通过胃系统和/或通过肝脏的首过代谢)的方式给予奥贝胆酸。此给予途径还可以减少吸收时间，使治疗益处更快速起效。本发明的化合物可以提供特别有利的溶解度曲线，以协助舌下/经颊配制品。此类配制品典型地需要相对高浓度的活性成分，以相对短的持续时间递送足够量的活性成分到舌下/口腔粘膜的有限表面面积上，所述配制品接触表面面积，以允许活性成分的吸收。因此，奥贝胆酸的非常高的活性，结合其高溶解度，有利于其舌下/经颊配制品的适合性。优选地，将奥贝胆酸配制成单位剂型，每剂含有约0.1mg至约1500mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约100mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约50mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约30mg。在另一个实施例中，该配制品包含约4mg至约26mg。在另一个实施例中，该配制品包含约5mg至约25mg。在一个实施例中，该配制品包含约1mg至约2mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.2mg至约1.8mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.3mg至约1.7mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.5mg。术语“单位剂型”是指适合作为人受试者和其他哺乳动物的单位剂量的物理离散的单位，每个单位含有经计算产生所希望的治疗效果的预定量的活性物质，与上述合适的药物赋形剂结合。奥贝胆酸通常在很宽剂量范围内是有效的。例如，剂量/天通常在约0.0001至约30mg/kg体重的范围内。在成人的治疗中，约0.1至约15mg/kg/天的范围(以单次或分次剂量)是尤其优选的。在实施例中，该配制品包含约0.1mg至约1500mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约100mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约50mg。在另一个实施例中，该配制品包含约1mg至约30mg。在另一个实施例中，该配制品包含约4mg至约26mg。在另一个实施例中，该配制品包含约5mg至约25mg。在一个实施例中，该配制品包含约1mg至约2mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.2mg至约1.8mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.3mg至约1.7mg。在一个实施例中，该配制品包含约1.5mg。然而，将理解的是，根据相关情况(包括待治疗的病症，所选择的给药途径，所给予的奥贝胆酸的形式，个体患者的年龄、体重、和响应，以及患者症状的严重性)，将由内科医师确定实际上给予的奥贝胆酸的量，并且因此，以上剂量范围并不旨在以任何方式限制本发明的范围。在一些情况下，低于上述范围的下限的剂量水平可能是足够的，而在其他情况下还可以采用不会引起任何有害的副作用的更大的剂量，前提条件是此更大剂量首先分成若干个更小的剂量以用于全天内给药。“本发明的方法”是指如本文所述的用于制备奥贝胆酸的方法，其中该方法包括结晶奥贝胆酸。“纤维化”是指在组织或器官中涉及过度纤维结缔组织(例如，瘢痕组织)的发展的病症。瘢痕组织的此类生成可以响应于由疾病、创伤、化学剂毒性等引起的感染、炎症或器官损伤而发生。纤维化可以在各种不同的组织和器官(包括肝、肾、肠、肺、心脏等)中发展。如本文所用，术语“抑制(inhibiting或inhibition)”是指对疾病或病症的发展或进展的任何可检测的积极效果。这样一种积极效果可以包括所述疾病或病症的至少一种症状或病征的发作的延迟或预防，所述一种或多种症状或一种或多种病征的减轻或逆转，以及所述一种或多种症状或一种或多种病征的进一步恶化的减缓或预防。如本文所用，“胆汁淤积病症”是指来自肝的胆汁排泄受损或被阻断的任何疾病或病症，所述疾病或病症可以在肝或在胆管中发生。肝内胆汁淤积和肝外胆汁淤积是两种类型的胆汁淤积病状。肝内胆汁淤积(发生在肝脏内)最常见于原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、脓毒症(全身性感染)、急性酒精性肝炎、药物毒性、全胃肠外营养(静脉内供应)、恶性肿瘤、囊性纤维化以及妊娠。肝外胆汁淤积(发生在肝脏外)可以经由胆管肿瘤、狭窄、囊肿、憩室、胆总管中的结石形成、胰腺炎、胰腺肿瘤或假囊肿以及由于临近器官中的肿块或肿瘤而引起的压缩引起。胆汁淤积病状的临床症状和病征包括：发痒(瘙痒)、乏力、黄疸皮肤或眼睛、无法消化某些食物、恶心、呕吐、白便、尿色深、以及右上腹腹痛。患有胆汁淤积性病症的患者可以基于一组标准临床实验室测试进行诊断和临床跟踪，这些测试包括患者血清中的碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶(ggt)、5’核苷酸酶、胆红素、胆汁酸、以及胆固醇水平的测量。通常，如果所有三种诊断标志物(碱性磷酸酶、ggt、和5’核苷酸酶)的血清水平都被认为异常升高，则患者被诊断为患有胆汁郁积病症。这些标志物的正常血清水平可能取决于测试方案、因不同的实验室和不同的程序在一定程度上变化。因此，医师将能够基于具体的实验室和测试程序确定对于所述标志物中的每一种异常升高的血液水平怎么样。例如，患有胆汁郁积性病症的患者通常在血液中具有大于约125iu/l的碱性磷酸酶、大于约65iu/l的ggt、和大于约17nil的5’核苷酸酶。由于血清标志物的水平的变化性，除了上述症状中的至少一种(如发痒(瘙痒))之外，胆汁郁积性病症可以基于这三种标志物的异常水平进行诊断。术语“器官”是指由细胞和组织组成且执行生物体的一些特定功能的分化的结构(如在心脏、肺、肾、肝等中)。此术语还涵盖执行功能或在活动中协作的身体部分(例如，构成视觉器官的眼睛和相关结构)。术语“器官”进一步涵盖分化的细胞和组织的能够潜在发育成完整结构的任何部分结构(例如，肝的叶或区段)。在此引用的所有出版物和专利文件均通过引用结合在此，如同每份此出版物或文件均被明确地和单独地指出通过引用结合在此的。公开和专利文献的引用并无意承认任何公开和专利文献是相关的现有技术，也未构成对其内容或日期的任何承认。现已通过书面说明描述了本发明，本领域的技术人员应认识到，可在各种实施方案中实践本发明，且前述描述和下文的实例是出于说明的目的，并不限制随后的权利要求书。在说明书中，除非上下文另外明确地指出，否则单数形式也包括复数。除非另外定义，本文所用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常所理解的意义相同的意义。在冲突的情况下，以本说明书为准。除非另外指示，否则本文所用的所有百分比和比率都以重量计。实例实例1：奥贝胆酸的合成此合成程序中提及的化合物编号是指方案1和反应中发现的对应于每个步骤的那些。步骤1–3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)的制备：反应1：7-酮基石胆酸(klca)的c-24羧酸的酯化在酸性催化(硫酸，1.0ml)的存在下，使用甲醇(2500ml)将3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(klca；500.0g，1.28mol)酯化，并且加热至62℃至64℃持续大约3小时，得到3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(1)。在此反应中，甲醇充当甲基化试剂以及反应溶剂。为了工作进程，用氢氧化钠溶液(2n)将ph值调节至ph9.5至10。将该溶液用活性炭(25g)处理大约30分钟并过滤以除去碳固体。可替代地，该溶液未用活性炭处理。为了使产物沉淀，在15分钟内加入10℃至15℃的水(625ml)并加入种子材料。将反应混合物在10℃至15℃下搅拌1小时。在约20至25分钟内加入另一部分水(1875ml)。将产物悬浮液在10℃至15℃下搅拌30分钟。用离心机分离产物，并用甲醇和水(1:1，350ml)的混合物洗涤。由卡尔费舍尔(kf)定量湿材料的含水量。在转筒式干燥器中，将该材料在真空下在nmt70℃下干燥。也可以将该材料在不经干燥的情况下用于下一步骤中。产率(基于干燥产物计算)为501.4g(1.24mol，96.8％)。步骤2-3α,7α-二三甲基甲硅烷基氧基-5β-胆-6-烯-24-酸甲酯(3)的制备：反应2：由7-酮基石胆酸甲酯形成硅烯醇醚在惰性条件下，将含有残余水和甲醇的化合物1(60.69g，150mmol，按干物质计算)填充到反应器中，并溶解在四氢呋喃(thf，363ml)中。通过在大约65℃和环境压力下重复共沸蒸馏来除去水和甲醇。根据需要将thf加入到残余物中，并重复蒸馏大约4次。剩余的溶液必须具有≤0.05％的最终含水量(卡尔费舍尔滴定法)。将此溶液预冷至-20℃至-25℃，并且然后在约30至45分钟内加入氯三甲基硅烷(73.33g，675mmol，4.5当量)。在氮气氛下，将二异丙基氨基锂(28％lda溶液，900mmol)和thf(504ml)填充到单独的惰性反应器中，并冷却至-20℃至-25℃。将化合物1、thf(84ml)和氯三甲基硅烷的无水冷却溶液填充到-20℃至-25℃的lda溶液中。然后，将反应混合物搅拌大约2小时。为了工作进程，在2℃至8℃下，将反应混合物加入预冷的柠檬酸水溶液(34.6g，在300ml中)中。添加后，分离水相并弃去。通过在最高50℃下真空蒸馏从有机相中除去液体。分离的残余物含有化合物3和一些残余溶剂，并在下一步骤中“原样”使用。步骤3–3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸甲酯(4)的制备：反应3：硅烯醇醚和乙醛的醇醛缩合将thf中的化合物3(164.68g，300mmol，以干物质计算)溶液填充到惰性反应器中。在最高温度50℃下，在真空下蒸馏出残余量的thf。为了继续进行，将残余物中的含水量限制在≤0.5％(卡尔费舍尔滴定法)。然后将残余物溶于二氯甲烷(200ml)中并预冷至-60℃至-65℃。然后加入乙醛(33.8ml，600mmol)。在氮气氛下，将二氯甲烷(700ml)和三氟化硼(乙腈中的16重量％溶液，318g，750mmol)乙腈络合物填充到单独的反应器中，并且然后冷却至-60℃至-65℃。在-60℃至-65℃，加入无水的化合物3溶液。对于该水解/工作进程，将反应混合物在-60℃至-65℃下搅拌大约2小时，加热至23℃至28℃，再搅拌大约3小时并冷却至大约2℃至10℃。为了工作进程，将来自反应器的冷却溶液添加至50重量％苛性钠(40ml)和660ml水预冷的水溶液。在剧烈搅拌约10分钟后，分离各相，并将(下部)有机层转移到单独的反应器中。尽可能在nmt50℃的温度下通过蒸馏自有机层除去溶剂。将由化合物4和一些剩余的乙腈和二氯甲烷组成的残余物填充到鼓中。也可以通过上述步骤3的程序制备化合物4a，即e/z-异构体的混合物。步骤4–3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)的制备：反应4：c-24酯的皂化将化合物4(258.37g，600mmol，以干物质计算)填充到惰性反应器中。在nmt50℃的温度下，在真空下蒸馏出残余量的溶剂。将残余物溶于甲醇(360ml)和水(54ml)中并添加苛性钠50重量％(54ml)。将反应混合物加热至49℃至53℃并在此温度下搅拌至少2小时。检查反应混合物的ph并验证>12。如果ph<12，则加入额外的naoh并重复2小时的反应时间。将该溶液用水(1000ml)稀释，并将温度调节至25℃至35℃。为了工作进程，使反应混合物静置至少30分钟。分离各相，并将下部水层转移到单独的反应器中，并丢弃有机层。在密集搅拌下向水层中添加乙酸乙酯(1400ml)和水性柠檬酸(244g，480ml)。将反应混合物在25℃至35℃搅拌10分钟。分离各相，并丢弃下部水层。从有机层中蒸馏出乙酸乙酯，并用乙酸乙酯(800ml)代替。重复此操作直至馏出物的含水量为1％nmt或直至达到恒定沸点。将悬浮液冷却至20℃至25℃，搅拌30分钟，并且然后将产物分离并用乙酸乙酯(100ml，3至4次)洗涤。在转筒式干燥器中在大约60℃的真空下进行干燥。产量为118.71g(来自klca的47.5％)粗化合物5。化合物4a(e/z异构体的混合物)也可用作起始材料，以产生化合物5a(e/z异构体的混合物)。然后使用乙醇使粗化合物5结晶。用于结晶的粗化合物也可以是e/z异构体的混合物，即化合物5a。将乙醇(390至520ml)和粗化合物5(130g)填充到惰性反应器中。为了溶解粗化合物5，将反应混合物加热至回流。然后，在3至5小时内，将反应混合物通过线性曲线以受控的冷却坡度中冷却至15℃至20℃。使用离心机分离结晶化合物5a，并且然后用乙酸乙酯(50-100ml，2次)洗涤。在转筒式干燥器中，在真空和大约60℃下进行干燥。这导致85.8g(66％)的产量。取样品以测量纯化的化合物5的测定、纯度和水分。经纯化的化合物5是3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸的e异构体。关于经纯化的化合物5的鉴定和表征的完整细节，参见实例2。经纯化的化合物5(e异构体)的分离可以是任选的。e异构体和z异构体具有不同的溶解度。e异构体溶解性较差并且结晶，使得可以将z异构体洗涤掉。制备化合物5的另一种方法如下。将化合物4(111.96g)填充到惰性反应器中。在最高50℃下，在真空下蒸馏出残余量的溶剂(例如，乙腈、二氯甲烷)。将残余物溶于甲醇(156ml)中并冷却至约10℃。加入自来水(23.4ml)和苛性钠50％(23.4ml)。将反应混合物在约20℃至约25℃下搅拌约4小时。将溶液用自来水(433ml)稀释，并添加甲苯(144ml)。搅拌后，分离各相，将下部水层转移到惰性反应器中。丢弃有机层。在密集搅拌下向水层中添加乙酸乙酯(607ml)和柠檬酸溶液(105.7g，在208ml水中)。分离各相，并丢弃下部水层。将有机层转移到惰性反应器中。从有机层中蒸馏出乙酸乙酯并用乙酸乙酯(347ml)代替。在一个实施例中，用乙酸乙酯(173ml)重复此操作，直至馏出物的含水量不多于约1％或直至达到恒定沸点。将本悬浮液冷却至20℃至25℃。分离化合物5，并且用惰性离心机用乙酸乙酯(3至4次，每次43ml)洗涤。在转筒式干燥器中，在真空和大约60℃下进行干燥(基于化合物1，产率为64.8％)。化合物4a(e/z异构体的混合物)也可用作步骤4的起始材料，以产生化合物5a(e/z异构体的混合物)。步骤5-3α-羟基-6α-乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(6)的制备：反应5：6-亚乙基部分的氢化将纯化的化合物5(110g，264mmol)、水(1100ml)、50％的苛性钠溶液(35.8ml，682mmol)和钯催化剂(pd/c，11g)的混合物填充到氢化反应器中。将温度调节至25℃至35℃并将反应器用氮气(2巴)冲洗三次并用氢气(1巴)冲洗三次。相对于环境压力(＝0巴)给出这些压力值。施加5巴的氢气压力，并在1.5小时的时间段内将反应混合物加热至100℃(以便异构化至α位)，并且然后搅拌3小时，同时将氢气压力保持在4.5至5巴。然后将反应混合物冷却至40℃至50℃。为了工作进程，过滤掉pd/c。向滤液中加入乙酸正丁酯(1320ml)和盐酸(67.8ml，815mmol，37％)。分离并弃掉水相。将有机相用活性炭(5.5g)在40℃至50℃下处理约10分钟。滤出活性炭并通过蒸馏浓缩滤液，并将所得悬浮液在2至3小时内冷却至15℃至20℃。分离沉淀的化合物6并用乙酸正丁酯(160ml)洗涤。使用压滤器过滤产物。在压滤器中，在约60℃，在真空下进行干燥。这产生89.8g(81.2％)的化合物6。化合物5a(e/z异构体的混合物)可用于步骤5中来制备化合物6。步骤6-3α,7α-二羟基-6α-乙基-5β-胆烷-24-酸(奥贝胆酸)的制备：反应6：将7-酮基团选择性还原为7α-羟基基团在90℃至105℃下，使化合物6(86g，205.4mmol)、水(688ml)和50％氢氧化钠溶液(56.4ml)的混合物与50重量％氢氧化钠溶液(1.5ml)和水(20ml)的混合物中的硼氢化钠(7.77g，205.4mmol)反应。将反应混合物加热至回流并搅拌至少3小时。为了工作进程，反应完成后，将反应混合物冷却至大约80℃并转移至冷却的反应器中。在30℃至50℃，添加在水(491ml)中的乙酸正丁酯(860ml)和柠檬酸(320.2g，无水)。在检查ph值后分离并丢弃水相以确保其为酸性。转移有机相并蒸馏。将残余物用乙酸正丁酯稀释并缓慢冷却至15℃至20℃，并且使用离心机过滤粗奥贝胆酸。将湿产物从乙酸正丁酯中结晶。分离产物奥贝胆酸并在惰性压滤器中用乙酸正丁酯(43ml，4次)洗涤。在压滤器中，在约80℃，在真空下进行干燥。这得到67.34g(77.9％)结晶奥贝胆酸，其特征在于x射线衍射图包括在约5.0和5.3度2-θ处的特征峰。结晶奥贝胆酸形式a的特征在于x-射线衍射图基本上类似于图41中所示的x-射线衍射图。关于结晶奥贝胆酸的鉴定和表征的全部细节，参见实例3。步骤7-奥贝胆酸形式1的制备：反应7：由结晶奥贝胆酸形式a制备奥贝胆酸形式1在30℃至40℃下，将特征在于包括在约5.0和5.3度2-θ处的特征峰的x射线衍射图的结晶奥贝胆酸形式a(58g)溶于水(870ml)和苛性钠溶液(50％，8.7ml，166mmol)中。搅拌混合物直至所有固体溶解。使用以下工作进程使产物沉淀。在30℃至40℃下，通过过滤器将奥贝胆酸溶液缓慢添加至水(870ml)中的稀盐酸(37％，16.05ml，193mmol)中。在30℃至40℃下，将悬浮液搅拌约30分钟，并且然后冷却至不高于(nmt)20℃。分离产物并在惰性压滤器中用水(465ml，6次)洗涤。在压滤器中，在nmt50℃的温度，在真空下进行干燥。这得到53.2g(91.7％)的奥贝胆酸形式1。实例2：e-3α-羟基-6-亚乙基-7-酮-5β-胆烷-24-酸(5)的表征化合物5是本申请方法的关键中间体。从乙酸乙酯中分离化合物，并且然后从乙醇中结晶。高纯度化合物5允许高效且高产率地产生化合物6，以及随后的奥贝胆酸形式a(其特征在于x射线衍射图包括在约5.0和5.3度2θ处的特征峰)及奥贝胆酸形式1(包括基本上纯的奥贝胆酸)。使用1hnmr、13cnmr和质谱法来确认来自实例1中步骤4的化合物5的结构。在通过lc/ms偶联由质量控制方法1生成的uv色谱图中，来自步骤4的粗产物在保留时间(rt)27.457min时产生主要产物，并且在rt28.078min时产生次要产物。这两种产物是化合物5的e/z异构体：这两种异构体在ms/ms谱中显示出相同的准确质量和相同的碎片化。它们不能通过质谱数据区分。使用半制备方法来分离e/z异构体峰，使用两阶段方法来确认e/z异构体的结构。hplc质量控制方法1使用非挥发性磷酸缓冲液，并且因此不可能直接将lc/ms与非挥发性缓冲液进行偶联。用来调整该方法的初步测试显示，只有uplc方法允许非常高的板数以充分分离e/z异构体。两阶段方法如下：步骤a用新开发的uplc/ms方法鉴定两个样品中的e/z异构体，并且步骤b用hplc方法2分离e/z异构体峰的级分并且随后用uplc/ms方法1进行鉴定。方法的实验细节如下：表c这些结果显示在图1和图2中。图1和图2是在高效uplc柱上获得的“粗化合物5”(图1)和化合物5“经纯化的参考物”(图2)的uplcuv/ms色谱图。对于图1，将样品以1mg/ml溶解于acn/h2o1:1；200x2mmhypersilgoldr122；lma:h2o+10mmaf+0.1％hfo；lmb:acn；45％-20-60％(10)；0.4ml/min；40℃；uva＝200nm；3μl注射体积。对于图2，将样品以1mg/ml溶解于acn/h2o；200x2mmhypersilgoldr122；a：10mmaf+0.1％hfo；b：acn；45％-20-60％b(10)；0.4ml/min；20μl注射体积。在两个样品中，主要组分(rt9.92min)和次要组分(rt10.77min)的分子量与预期相同，并且两种化合物的准确质量与如下面所示的正离子和负离子测量数据的表d和e中所示提供的结构一致：表d：正离子测量的数据表e：负离子测量的数据为了确保质量控制hplc方法2的便携性，在规定条件下精确地重复原始分离。将主峰和次峰分离为半制备。图3中显示了所得的带有捕获级分标记位置的uv色谱图。图3是使用hplc方法2的粗化合物5的uv色谱图；125x4mmpurospherstarc185μmag；lma:h2oph2.6(含h3po4)；lmb:acn；30％b-10-35％-30-60％-1-90％(9)；1ml/min；35℃；uva＝200nm；ohnems；25ml。随后，用新开发的uplc/ms方法分别分析经分离的级分。为了评价准分子离子的准确离子迹线，使用在850.61914±3ppm的[2m+nh4]。图4(a-d)中显示了所得主峰级分、次要峰级分和两个样品的色谱图。ms研究显示，通过质量控制方法2在rt27.457min和rt28.078min生成的两个峰是具有化学式c26h40o4的两种异构体。此化学式与针对e/z异构体提出的结构一致。因此，uplc-ms方法的开发显示，3α-羟基-亚乙基-7-酮-5β-胆-24酸的e/z异构体可以高分辨率地进行色谱分离。来自fr-icr质谱仪的准确ms数据与针对e/z异构体提出的结构一致。对于两种异构体，得到相同的化学式c26h40o4。归因于用hplc方法2半制备地分离e/z-异构体峰和用uplc-ms方法进行随后鉴定，我们可以显示由质量控制方法2(rt27.457分钟和rt28.078分钟，参见图1)生成的两个峰是具有化学式c26h40o4的两种异构体。此化学式与e/z-异构体的提出结构是一致的。结合下面描述的nmr结果，获得以下分配：rt27.457分钟属于e-异构体，并且rt28.078分钟属于z-异构体。对于3α-羟基-亚乙基-7-酮-5β-胆-24酸的e异构体，1h和13c位移的分配如下所示。根据“l.bettarello等人,iifarmaco55(2000),51-55(物质3α-羟基-7-酮-5β-胆烷-24-酸)估计位移。表f：1h位移分配(1h-nmr，500mhz，303k，cd3od)化学位移[ppm]强度[h]多重性分配6.101q253.611m32.691dd52.282dt231.723d261.053s190.993d210.703s18表g：13c位移分配(13c-nmr，125mhz，303k，cd3od)化学位移[ppm]多重性分配207.5s7178.1s24145.3s6130.4d2571.0d356.0s1752.0和50.1d各自8和1446.9d544.7s1340.7d940.3t12＊38.3t4＊36.5d2035.8s1035.4t132.3和32.0t各自22和2330.5t2＊29.4t16＊27.0t15＊23.2q1922.4t1118.9q2112.7q2612.5q18s＝单峰d＝二重峰t＝三重峰q＝四重峰m＝多重峰dd＝双二重峰dt＝双三重峰实例3：结晶奥贝胆酸的表征i.来自方案1和实例1的步骤6的产物的固态表征显示该奥贝胆酸是结晶的。此结晶形式是标记的形式a，并且基本上类似于图41中的x射线衍射图，并且特征在于在约5.0和5.3度2-θ处的峰。下表4中呈现了形式a的x射线衍射图的相应数据。表4：结晶奥贝胆酸形式a的x射线衍射图数据角度强度％2θ°％5.053.85.334.66.354.07.315.67.723.38.210.58.311.88.411.88.935.99.420.410.063.010.511.711.050.812.483.214.519.714.939.915.336.916.075.716.569.116.8100.017.939.218.735.619.034.419.612.120.616.221.322.8结晶奥贝胆酸形式a的小规模合成将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。添加乙酸正丁酯(60μl)并进行观察。将样品在50℃下搅拌1小时，并且使用0.1℃/min的线性冷却速率冷却至5℃。将该样品在5℃下搅拌2天。将固体过滤，风干并通过xrpd分析。将溶液在冰箱中储存约48小时，并且然后在环境条件下蒸发，得到形式a。在实例9中提供了制备形式a的其他方法。结晶奥贝胆酸形式a的放大合成将无定形的奥贝胆酸(大约1g)称入大玻璃小瓶中并加温至50℃。在50℃下添加乙酸乙酯(1.5ml，1.5体积)，形成澄清溶液。添加抗溶剂(庚烷，2.0ml，2体积)，最初形成浑浊的沉淀，在搅拌下转化成油。在50℃下搅拌1小时后，将油保留，这样添加0.5ml(0.5体积)乙酸乙酯，其溶解油，形成混浊液体。用来自直接上面的小规模实验中的约1mg样品接种该样品。将样品在50℃下再搅拌1小时，然后使用0.1℃/min的线性冷却速率冷却至-20℃。将样品在-20℃下搅拌过夜，在此之后，将少量固体过滤，风干并通过xrpd进行分析。将样品的剩余部分通过0.45μmptfe过滤器过滤，并用2x2ml份的庚烷洗涤。将样品风干大约30分钟，并且然后在真空烘箱中在室温下干燥过夜。将得到的白色固体(898.9mg)表征为形式a，其具有基本上类似于图41的x射线衍射图的x射线衍射图。图42是结晶奥贝胆酸形式a的tga和dsc热谱图的叠加。图43是形式a的gvs实验的等温线图。图44是形式a的gvs实验的动力学图。ii.下面是总结了结晶奥贝胆酸形式c的表征的表格：表g：结晶奥贝胆酸形式c特征的总结热分析在配备有34位自动取样器的mettlerdsc823e上收集dsc(差示扫描量热法)数据。使用认证的铟将该仪器对于能量和温度进行校准。典型地，将在针孔铝盘中的0.5-1mg的每个样品以10℃/min从25℃加热至350℃。在样品上保持以50ml/min进行氮气吹扫。仪器控制和数据分析软件是starev9.20。在配备有34位自动取样器的mettlertga/sdta851e上收集tga(热重分析)数据。使用认证的铟将该仪器进行温度校准。典型地，将5-10mg的每个样品加载到预先称重的铝坩埚上，并以10℃/min从环境温度加热至300℃。在样品上保持以50ml/min进行氮气吹扫。仪器控制和数据分析软件是starev9.20。通过tga观察到结晶奥贝胆酸形式c的两个重量损失步骤。首先在室温(r.t.)和85℃(0.41％)之间发生，而再次在85℃-115℃(4.10％)之间发生。第一个重量损失步骤可归因于水损失，第二个步骤归因于剩余水的损失(水负责约1.2％重量损失)和结合的庚烷的损失(约3.4％重量损失)。结晶奥贝胆酸形式c含有0.15-0.2摩尔溶剂(庚烷)和约1.5％w/w(0.3摩尔)。结晶奥贝胆酸形式c的dsc热谱图含有一个吸热。这相当尖锐并且起始为约98℃。参见图6。不同的溶剂将具有不同的沸点，并且因此在dsc和tga实验中在不同温度下蒸发。x射线粉末衍射(xrpd)分析brukeraxsc2gadds使用cukα辐射(40kv，40ma)、自动xyz平台、用于自动样品定位的激光视频显微镜、以及histar2维区域检测器，在brukeraxsc2gadds衍射仪上收集x射线粉末衍射图。x射线光学元件由与0.3mm的针孔准直器相结合的单个多层镜组成。使用认证的标准nist1976刚玉(平板)进行每周性能检查。光束发散(即x射线光束在样品上的有效大小)是大约4mm。采用θ-θ连续扫描模式，样品-检测器距离为20cm，给出有效2θ范围3.2°-29.7°。典型地，将样品暴露于x射线束120秒。用于数据收集的软件是针对wnt4.1.16的gadds，并且使用diffracplusevav9.0.0.2或v13.0.0.2对数据进行分析和呈现。环境条件：使用如所接收的没有研磨的粉末将在环境条件下运行的样品制备为平板样本。将大约1-2mg样品轻轻压在一个玻璃载玻片上以获得一个平的表面。非环境条件：将在非环境条件下运行的样品安装在具有导热化合物的硅晶片上。然后将所述样品以约10℃/min加热到合适的温度，并且随后在数据收集开始之前等温保持约1分钟。brukeraxs/siemensd5000使用cukα辐射(40kv，40ma)、θ-θ测角仪、v20和接收狭缝的发散度、石墨次级单色仪、以及闪烁计数器，在siemensd5000衍射仪上收集x射线粉末衍射图。使用认证的刚玉标准品(nist1976)进行仪器的性能检查。用于数据采集的软件是diffracplusxrdcommanderv2.3.1，并使用diffracplusevav11,0.0.2或v13.0.0.2对数据进行分析和呈现。使用如所接收的粉末，在环境条件下作为平板样本运行样品。将大约20mg的样品轻轻地装到切割成抛光的零背景(510)硅晶片的空腔中。在分析过程中，将样品在其自身的平面中旋转。数据收集的细节是：·角度范围：2至42°2θ·步长：0.05°2θ·收集时间：4s/步brukeraxsd8advance使用cukα辐射(40kv，40ma)、θ-2θ测角仪、以及v4和接收狭缝的发散度、ge单色仪、以及lynxeye检测器，在brukerd8衍射仪上收集x射线粉末衍射图。使用认证的刚玉标准品(nist1976)进行仪器的性能检查。用于数据采集的软件是diffracplusxrdcommanderv2.5.0，并使用diffracplusevav11.0.0.2或v13.0.0.2对数据进行分析和呈现。使用如所接收的粉末，在环境条件下作为平板样本运行样品。将大约5mg的样品轻轻地装到切割成抛光的零背景(510)硅晶片的空腔中。在分析过程中，将样品在其自身的平面中旋转。数据收集的细节是：·角度范围：2至42°2θ·步长：0.05°2θ·收集时间：0.5秒/步x射线衍射图的相应数据呈现在下表中。用于数据采集的软件是diffracplusxrdcommanderv2.6.1，并使用diffracplusevav13.0.0.2或v15.0.0.0对数据进行分析和呈现。使用如所接收的粉末，在环境条件下作为平板样本运行样品。将样品轻轻地装到切割成抛光的零背景(510)硅晶片的空腔中。在分析过程中，将样品在其自身的平面中旋转。数据收集的细节是：·角度范围：2至42°2θ·步长：0.05°2θ·收集时间：0.5秒/步表h：结晶奥贝胆酸形式c的x射线衍射图数据峰角度2-θ(度)d值(埃)14.221.020326.3513.9083938.29810.6471849.59.30229511.058.00042612.2467.22192712.4987.07692812.6476.99367915.4975.713371015.8435.58951115.9985.535611216.3465.418361316.6955.306011416.9965.212511517.8494.965471618.5934.768441718.7984.716891819.0474.655791920.4934.330412020.8944.24808vt-xrpd(可变温度-x射线衍射)显示，在dsc热谱图中看到的吸热对应于样品的去溶剂化，因为在加热时没有观察到形式变化。dsc和vt-xrpd数据之间存在温差，因为vt-xrpd实验在暴露样品的大空间中进行，而dsc实验是在有限的封闭空间中进行。这个差异是20℃左右，并解释了为什么在dsc实验中样品在低得多的温度下熔化，并且在vt-xrpd实验中样品在110℃下仍然显现结晶。vt-xrpd显示，从材料中干燥溶剂导致结晶度的损失，这与溶剂化形式的材料一致。参见图7。重量法蒸气吸附(gvs)使用由dvs固有控制软件v1.0.0.30控制的smsdvs内在水分吸附分析仪来获得吸附等温线。通过仪器控制将样品温度保持在25℃。通过混合干燥和湿润的氮气流(总流速为200ml/min)来控制湿度。通过位于样品附近的经校准的rotronic探针(动态范围1.0％-100％rh)测量相对湿度。通过微量天平(精度±0.005mg)不断监测作为％rh(相对湿度)的函数的样品的重量变化(质量松弛)。在环境条件下将5至20mg的样品放入去皮重的网格不锈钢篮中。在40％rh和25℃(典型室内条件)下，加载和卸载样品。如下所概述进行水分吸附等温线(2次扫描给出1次完整的循环)。标准等温线在25℃下，在0.5％-90％rh范围内，以10％rh间隔进行。使用dvs分析套件v6.0.0.7在microsoftexcel中进行数据分析。用于smsdvs内部实验的方法参数如下：参数值吸附-扫描140-90％解吸/吸附-扫描290-0，0-40％间隔(％rh)10扫描次数2流速(ml·min-1)200温度(℃)25稳定性(℃·min-1)0.2吸附时间(小时)6小时超时在等温线完成后回收样品并通过xrpd重新分析。结晶奥贝胆酸形式c的分析显示样品略微具有吸湿性，因为示出了在0-90％rh之间质量增加1.18％。整个分析中这种水吸收是稳定的并且在所有步骤中达到平衡。曲线的滞后很小，指示样品很容易失去它吸收的水。gvs分析后的xrpd分析显示该样品未变化。参见图8a、8b和8c。通过卡尔费舍尔滴定法(kf)进行的水测定使用hydranalcoulomatag试剂和氩气吹扫在mettlertoledodl39库仑计上测量每个样品的含水量。在铂tga盘上将称重的固体样品引入容器中，该容器与半密封件(subaseal)连接以避免水进入。每次滴定使用大约10mg的样品，并进行重复确定。卡尔费舍尔分析显示结晶奥贝胆酸形式c含有1.5％水，对应于约0.3摩尔水。40℃和75％rh下的一周稳定性如下测定在40℃和75％rh(相对湿度)下奥贝胆酸的稳定性。在湿度室中，将奥贝胆酸的样品在40℃/75％rh下储存一周。通过xrpd重新分析样品，并且发现样品没有变化。固态研究显示，需要存在相对大量的有机溶剂来使奥贝胆酸形式c结晶。存储时，奥贝胆酸形式1的样品极不可能自发结晶形成结晶奥贝胆酸形式c。实例4：奥贝胆酸片剂配制品下表显示了奥贝胆酸片的定量组成。5mg、10mg和25mg配制品用作3期临床试验材料。表i：膜包衣片剂api：活性药物成分hse＝内部规格usp-nf＝美国药典国家处方集pheur＝欧洲药典jp＝日本药典*所示的奥贝胆酸量假定api为无水且100％纯；基于所用药物物质批次的效力调整实际量，并且相应地减少微晶纤维素的量。实例5：奥贝胆酸形式1的表征奥贝胆酸形式1是指奥贝胆酸的非结晶形式。可以通过作为合成中间体的结晶奥贝胆酸产生这种形式的奥贝胆酸。奥贝胆酸形式1可用作药物活性成分。如下对奥贝胆酸形式1进行表征和分析。使用以下技术表征奥贝胆酸形式1的批次1：通过x射线粉末衍射(xprd)对结晶度进行评估，1h和13c核磁共振(nmr)，傅里叶变换红外光谱(ft-ir)，光学评估(例如，颗粒形状/尺寸)，热性质(例如，差示扫描量热法(dsc)和热重分析(tga))，通过卡尔费舍尔(kf)进行水分测定，在40℃和75％rh下储存并在2周后通过xrpd进行再分析，通过电位滴定法得到pka，通过电位测定法得到logp/d(辛醇/水)，并使用重量法蒸汽吸附(gvs；例如，完全吸附-解吸循环，通过xrpd对收集的固体进行分析)得到对水分的稳定性。还使用以下技术表征和比较其他五个批次(例如，批次2、3、4、5和6)的奥贝胆酸形式1：通过xrpd评估和与主要批次1图案比较，1h和13cnmr，ft-ir，光学评估(例如，颗粒形状/尺寸)，热性质(例如，dsc、tga和热台显微镜检查)和通过kf进行的水分测定。x射线粉末衍射(xrpd)分析使用cukα辐射(40kv，40ma)、自动xyz平台、用于自动样品定位的激光视频显微镜、以及histar2维区域检测器，在brukeraxsc2gadds衍射仪上收集x射线粉末衍射图。x射线光学由与0.3mm的针孔准直器耦合的单多层镜组成。光束发散度，即在样品上的x射线束的有效尺寸为大约4mm。使用θ-θ连续扫描模式，其中样品-检测器距离为20cm，所述检测器距离给出3.2°-29.7°的有效2θ范围。典型地，将样品暴露于x射线束120秒。用于数据收集的软件是针对wnt4.1.16的gadds，并且使用diffracplusevav9.0.0.2或v13.0.0.2对数据进行分析和呈现。使用如所接收的没有研磨的粉末将在环境条件下运行的样品制备为平板样本。将大约1-2mg样品轻轻压在硅晶片上以获得平的表面。衍射图显示，奥贝胆酸形式1是非结晶的(参见图10和图11)。nmr表征在配备了自动进样器并且由drx400控制台控制的bruker400mhz仪器上收集nmr光谱。使用iconnmrv4.0.4(构建1)操作用topspinv1.3(补丁级别8)使用标准的bruker装载实验获得自动的实验。对于非常规光谱学，通过单独使用topspin获得数据。样品在d6-dmso中制备，除非另有说明。使用acdspecmanagerv9.09(build7703)进行了离线分析。图12显示批次1的1hnmr光谱。还记录了批次2-6的1hnmr光谱，并与批次1的光谱进行比较。参见图13。光谱都相似，但具有不同量的水。在0.75ppm和2ppm之间的大组质子的整合中注意到一些差异，其中峰重叠并且不能单独地整合。表j显示了在批次1-6的光谱中整合的质子总数，考虑到0.75-2ppm区域中的变化。表j已排除羧酸质子，因此质子数应为43，但实际上在6个光谱之间从40至43变化。然而，产生变化的区域(0.75-2ppm)非常宽，并且归因于基线的质量，不能依赖于这种整合。由于该光谱不能被完全分配并且整合变化，因此记录了批次2的13cnmr光谱。图14显示了deptq光谱，其中ch2和季碳峰指向上，而ch3和ch基团指向下。有十三个峰指向下，其对应于九个ch和四个ch3基团。这与该结构一致。在175ppm看到羧酸的碳的峰。为了清楚感兴趣的区域，它已从这个扩展的视图中排除。然而，只有十一个峰指向上，而应该有十二个，因为在该分子中有十个ch2基团和两个季碳(不包括羰基)。一个碳显现与另一个信号重叠。因此，收集dept135光谱，抑制季碳信号，这可以显示重叠信号是否是四元的。参见图15。dept135光谱与deptq光谱的比较显示，一个峰(在42.5ppm处)消失。该分子中有两个季碳，其应该对应于正在消失的两个峰。因此，重叠碳信号是四元信号。此外，进行确定碳的弛豫时间的实验以确定缺失的季碳信号与另一碳信号重叠的位置。参见图16。此13c光谱含有整合的峰。这显示在32.3ppm处的峰对两个碳做出了说明。有关在32.3ppm处峰的扩展视图，参见图17。因此，现在通过整合(包括羧酸)对二十六个碳做出了说明，这与该结构一致。通过atr的ft-ir在装配有universalatr采样附件的perkin-elmerspectrumone上收集数据。使用spectrumv5.0.1软件收集和分析数据。参见图18。差示扫描量热法(dsc)和热重分析(tga)的热分析在配备了50位自动进样器的ta仪器q2000上收集dsc数据。使用认证的铟将该仪器对于能量和温度校准进行校准。典型地，将在针孔铝盘中的0.5-3mg的每个样品以10℃/min从25℃加热至300℃。在样品上保持以50ml/min进行氮气吹扫。仪器控制软件对q系列v2.8.0.392和thermaladvantagev4.8.3是有力的，并且使用universalanalysisv4.3a进行数据分析。对于调制的dsc，如前所述制备样品，并将该盘以2℃/min从为25℃加热至200℃。调制器条件是0.20℃振幅和40s周期。采样间隔为1sec/pt。在配备了一个16位自动进样器的一个ta仪器q500tga上收集了tga数据。使用认证的阿卢梅尔合金将该仪器进行温度校准。典型地，将5--10mg的每个样品加载到预先配衡的铂坩埚和铝dsc盘上，并以10℃/min从环境温度加热至350℃。在样品上保持以60ml/min进行氮气吹扫。仪器控制软件是advantageforqseriesv2.8.0.392和thermaladvantagev4.8.3。通过dsc和tga进行批次1的热分析。tga迹线(参见图19)显示环境温度与121℃之间的重量损失为1.7％，这很可能是水的损失。dsc迹线(参见图19)显示宽的低温吸热，可能对应于水的损失，随后是在94℃起始的小吸热。此第二吸热可能指示玻璃化转变并且通过调制dsc进一步研究(参见图20)。此技术使可逆事件(如玻璃化转变)能够与不可逆事件分离，如溶剂损失或结晶形式的熔体。调制dsc中的可逆热流迹线显示作为具有95℃处拐点(tg)的步骤的玻璃化转变。这对于玻璃化转变是高的并且表明形式1是稳定的。在不可逆的热流迹线上在89℃起始的小吸热对应于在玻璃化转变温度下散装材料的分子弛豫。dsc迹线(参见图19)显示分解开始于220℃左右，也对应于tga曲线向下弯曲。批次1、2、3、4、5和6的tga迹线具有相似的形状(图21)。表k中显示了在环境温度和120℃之间测量的重量损失。它们与通过nmr观察到的不同量的水一致。通过卡尔费舍尔(kf)水滴定法进一步量化这些量。参见通过kf进行的水分测定。表k：所接收样品的tga重量损失的总结批号按tga计的重量损失11.7％20.6％31.2％40.9％51.5％61.6％图22显示了六个批次的dsc迹线以进行比较。这些迹线类似，具有不同尺寸的宽低温吸热，与不同量的水一致，随后在dsc和tga部分中看到围绕玻璃化转变温度的小吸热。结果汇总于表l中。表l：所接收样品的dsc结果的总结批号第1吸热，宽第2吸热，小分解开始128.3j/g,tmax＝64℃1.2j/g,t起始＝94℃220℃27.4j/g,tmax＝48℃1.4j/g,t起始＝94℃220℃3无2.0j/g,t起始＝89℃175℃414.5j/g,tmax＝58℃1.3j/g,t起始＝94℃200℃512.2j/g,tmax＝59℃1.2j/g,t起始＝94℃175℃628.7j/g,tmax＝59℃1.5j/g,t起始＝94℃200℃偏振光显微镜检查(plm)将样品在具有用于图像捕获的数字摄像机的leicalm/dm偏振光显微镜上进行研究。将少量每个样品放置在载玻片上，安装在硅油中并用玻璃滑块覆盖，将单个颗粒尽可能地分离。用适当的放大率和部分偏振光观察样品，与λ假色彩滤光片相耦合。图23a-23f显示了批次1、2、3、4、5和6是由小的不规则颗粒的大的坚硬团聚体构成的材料。批次1、2、3、4、5和6看起来都相似。在平面偏振光下没有观察到双折射，这与非结晶材料一致。粒径范围从小于1μm到3μm。这些小尺寸颗粒表明它们已经很快沉淀出来。重量法蒸气吸附(gvs)使用由sms分析套件软件控制的smsdvs内在水分吸附分析仪来获得吸附等温线。通过仪器控制将样品温度保持在25℃。通过混合干燥和湿润的氮气流(总流速为200ml/min)来控制湿度。通过位于样品附近的经校准的rotronic探针(动态范围1.0％-100％rh)测量相对湿度。通过微量天平(精度±0.005mg)不断监测作为％rh的函数的样品的重量变化(质量松弛)。典型地，在环境条件下，将5-20mg样品放在一个配衡网不锈钢篮中。在40％rh和25℃(典型室内条件)下，加载和卸载样品。如下所概述进行水分吸附等温线(2次扫描给出1次完整的循环)。标准等温线在25℃下，在0.5％-90％rh范围内，以10％rh间隔进行。表m参数值吸附-扫描140-90解吸/吸附-扫描285-干燥，干燥-40间隔(％rh)10扫描次数2流速(ml.min-1)200温度(℃)25稳定性(℃.min-1)0.2吸附时间(小时)6小时超时在25℃下获得批次1的重量法蒸汽吸附(gvs)等温线，并显示在图24中。样品显现具有中等吸湿性，从0到90％相对湿度(rh)总重量变化3.8％。滞后(吸附和解吸曲线之间的区域)很小，指示固体很容易释放吸附的水。没有观察到水合物的形成。整个实验后不存在显著的重量变化(0.3％)。gvs的动力学图(图25)显示水的吸附主要发生在非常高的湿度下，并且解吸发生在非常低的湿度下。在吸附阶段，样品在高达80％rh下相当快地达到平衡并且在90％rh下需要更长时间达到平衡。在解吸时，在所有步骤质量都是稳定的。完成gvs后，回收样品并通过xrpd重新分析，这显示该材料仍然是非结晶的(图26)。通过卡尔费舍尔(kf)进行的水确定使用hydranalcoulomatag试剂和氩气吹扫在mettlertoledodl39库仑计上测量每个样品的含水量。在铂tga盘上将称重的固体样品引入容器中，该容器与半密封件(subaseal)连接以避免水进入。每次滴定使用大约10mg的样品，并进行重复确定。通过库仑卡尔费舍尔水滴定法给出2.4重量％水的结果。这略高于通过tga观察到的重量损失。这可能意味着一些水在加热时不会从材料中释放出来，但很可能是由于这两种技术的不同实验程序。通过库仑卡尔费舍尔确定每批次的含水量。表n显示了这些结果，并将它们与获得的较早的卡尔费舍尔结果和通过tga观察到的重量损失进行比较。数据是一致的，因为在所有三个分析中趋势是相同的。获得的较早的卡尔费舍尔数据显示水量低于此处获得的结果。这与吸湿的材料一致，尽管一些样品比其他的吸收更多水。tga重量损失始终低于卡尔费舍尔滴定法获得的结果，这可能意味着一些水被捕获在材料中并且在加热时不释放，但也可能是由于实验程序。表n：卡尔费舍尔(kf)结果和含水量数据总结批号kf含水量较早的kf结果tga重量损失12.4％2.1％1.7％21.9％0.4％0.6％32.5％1.4％1.2％42.2％0.92％0.9％52.3％0.53％1.5％62.8％2.1％1.6％pka测定和预测在具有d-pas附件的siriusglpka仪器上收集pka测定数据。在25℃下，通过uv在水溶液中进行测量，并且在甲醇水混合物中通过电位测定法进行测量。用0.15mkcl(水性)将滴定介质进行离子强度调节(isa)。通过yasuda-shedlovsky外推法将甲醇水混合物中的值校正为0％共溶剂。使用细化pro软件v1.0将数据进行精修。使用acdpka预测软件v9对pka值做出预测。使用甲醇作为共溶剂通过电位测定法测量奥贝胆酸的pka(图27)，并使用yasuda-shedlovsky外推法外推至0％共溶剂(图28)。pka使得能够确定在给定ph下化合物的中性和离子化形式的比例。图29显示了依赖于ph的物质分布。logp测定通过siriusglpka仪器上的电位测定滴定法收集数据，使用三种比率的辛醇：离子强度调节(isa)水，以生成logp、logpion和logd值。使用细化pro软件v1.0将数据进行精修。使用acdv9和syracusekowwinv1.67软件对logp值做出预测。表o：预测和测量的logpacd(v9)预测logp5.81测量logp5.54测量logpion1.58测量logd7.42.98使用acd软件预测logp，然后通过电位测定法测量。在三种不同的辛醇/isa水率比下进行三次滴定，得到图30中绘制的差异曲线。黑色曲线是纯水性pka滴定，并且3个彩色曲线对应于三个辛醇/isa水比率。pka的位移使得能够测定logp。在图31中显示了亲脂性曲线(logd作为ph的函数)。logd是分布系数，表示在特定ph下存在的所有物质的组合亲脂性。logp是化合物常数，其对应于纯中性物质的分配系数，而logpion是纯电离物质的分配系数。logp和logpion可以从亲脂性曲线测定，作为y轴与ph标度开始(当该分子纯粹处于中性形式时)时的切线和ph标度结束时(当该分子完全电离时)的切线的交点。40℃和75％rh以及25℃和97％rh下的两周稳定性在固体形式的加速稳定性测试中，将批次1的样品在40℃和75％相对湿度(rh)下储存。将另一个样品储存在25℃和97％相对湿度下以检查非常高湿度的影响。在5天后和2周后通过xrpd重新分析两个样品。在两种储存条件下，两个样品保持非结晶长达两周，显示形式1对这些条件是稳定的。参见图32和图33。分析的六个批次均为非结晶的。用调制dsc实验在95℃下测量玻璃化转变温度。在使用的所有分析技术的情况下，六个批次显现非常相似，它们之间的唯一区别是它们的含水量，通过卡尔费舍尔滴定法，其从1.9％至2.8％变化。热分析显示不同量的水并且指示分解开始于175℃-220℃左右。测得pka为4.82，并且logp为5.54。显微镜评价显示非常小的不规则颗粒的大的坚硬团聚体。稳定性测试显示，在加速条件(40℃/75％rh)或高湿度(25℃/97％rh)下两周后材料仍然是非结晶的。重量法蒸汽吸附(gvs)分析显示该材料仅具有中等吸湿性，从0到90％相对湿度(rh)总重量增加3.8％。在gvs下未观察到水合物形成。在gvs之后通过xrpd重新分析的样品仍然是非结晶的。高玻璃化转变温度和稳定性测试结果表明该非结晶形式是稳定的。实例6：单晶x射线结构和绝对立体化学奥贝胆酸的单晶x-射线结构是由在以0.1℃/min冷却至5℃随后在rt/50℃8小时循环持续1周的熟化之后从乙腈溶液中重结晶奥贝胆酸而获得的晶体测定的(参见图34)。该结构与形式g一致，并且已生成模拟xrpd图案作为此材料的参考图案。可以通过冷却在例如乙腈中的奥贝胆酸的溶液来制备形式g。该结构是斜方晶系，空间群p212121，并且在不对称晶胞中含有一个奥贝胆酸分子。最终r1[i>2σ(i)]＝3.22％。该晶体展现出近似尺寸0.4x0.4x0.3mm的棱晶形态。该分子的绝对立体化学在手性中心c5、c9、c10和c14处确定为s，并且在手性中心c3、c6、c7、c8、c13、c17和c22处确定为r，flack参数＝-0.01(13)。对于具有r构型的手性中心c5、c9、c10和c14以及s构型的手性中心c3、c6、c7、c8、c13、c17和c22的倒置结构，flack参数＝1.01(13)，确认上述分配。总体而言，该结构具有强大的数据集并且没有无序。用于分配立体化学(platon)的软件将手性中心(c8)确定为r立体中心，而对于(c8)的acd软件(和cahn-ingold-prelog)分配为s。然而，b/c环系统的反式环结的分配是从晶体结构中绝对定义的。使用bijvoet差异的贝叶斯统计(bayesianstatistics)来确定绝对结构(hooft等人,j.appl.cryst.[应用结晶学杂志],(2008),41,96-103)，揭示了所呈现的绝对结构为正确的概率是1.000，而该绝对结构是外消旋双体或假的概率分别是0.000和0.000。通过此程序计算flack等效值及其不确定度为-0.019(17)。奥贝胆酸的结构含有稠合在一起的一个5元环和3个六元环。对5元环(c13、c14、c15、c16和c17)的构象分析揭示，此环的最接近的皱折描述符(puckeringdescriptor)是半椅式。三个6元环(c1、c2、c3、c4、c5和c10)；(c5、c6、c7、c8、c9和c10)和(c8、c9、c11、c12c13和c14)的构象分析揭示，这些环的最接近的皱折描述符是椅式。在该晶体结构中观察到两个独特的分子间氢键。每个奥贝胆酸分子与两个不同的对称相关的奥贝胆酸分子形成氢键，氧o1和o4充当氧的供体，o3和o1分别充当受体，和(参见图35)。这些相互作用导致复杂的三维氢键网络。最终的傅里叶差分图显示最大和最小电子密度分别为0.402和实验批次的结构的计算xrpd图案的叠加显示该晶体与散装一致并且是奥贝胆酸形式g(参见图36)。表1.奥贝胆酸形式g的晶体数据表2.对奥贝胆酸形式g的数据收集和结构细化实例7：奥贝胆酸形式1(非结晶)与结晶(形式f)形式之间的生物利用度差异当向受试者(例如，大鼠)口服给药时，固体奥贝胆酸的这种物理状态可以在分子的生物利用度上起作用。进行下述研究以评价单次口服给药后的血浆动力学和肠吸收的效率以及固体非结晶形式和结晶形式的奥贝胆酸的药代动力学。比较了给予奥贝胆酸形式1(非结晶)或形式f后的奥贝胆酸血浆浓度与时间曲线、tmax、cmax和auc(参见图37-图38)将奥贝胆酸形式1(非结晶)和形式f给予大鼠，并且在每只动物中，在持续至少3小时的不同时间段收集血液。针对每种形式的奥贝胆酸研究了六只动物。实验方案：所用的测试物质是奥贝胆酸形式1(非结晶)和结晶形式f。形式f可以通过从乙腈或硝基甲烷中熟化来制备。该配制品被制备为ph4的水悬浮液。研究模型是成年雄性斯普拉-道来(spraguedawley)大鼠，约225至约250g(哈兰实验室(harlanlaboratories))。每剂量途径使用六只动物。剂量为po20mg/kg/5ml。在用奥贝胆酸配制品处理之前使动物禁食过夜。通过胃管饲法进行口服给药。在第1天，将动物装配被植入左颈静脉中的插管(sopvivo/saf6)，通过异氟醚获得麻醉。在从手术中恢复一天后开始实验。在肝素化注射器(na肝素)中通过套管取出约500μl血液(250μl血浆)并立即收集在冰/水浴中的微管中。在1小时内，将样品在4℃下在10000xg下离心5分钟。立即将血浆转移在微管中并储存在-20℃。在给药后30分钟、1小时、1.3小时、2小时和3小时收集血液样品。使用hplc-es/ms/ms定量方法分析血浆样品。使用非隔室方法进行药代动力学研究。结果：图37中报告了在20mg/kgb.w口服单剂量给予两种固体形式后，奥贝胆酸的平均血浆浓度。值是每种配制品的六组实验的均值。图表中报告了标准差。在给予结晶形式后，在1.5小时后达到cmax，并且血浆奥贝胆酸浓度遵循具有一个最大值的常规动力学，并且在3小时后，该剂量几乎是cmax的一半。给予奥贝胆酸形式1(非结晶)形式1后的动力学曲线不同于结晶形式f的动力学曲线。30分钟后获得早期血浆浓度峰，并且2小时后获得第二血浆浓度峰。6只大鼠的数据的可变性非常低，并且这种行为在统计学上不同于结晶形式。对于结晶形式，所研究的三小时的auc更高。动力学表明，3小时后，该奥贝胆酸仍然存在于血浆中。先前已经证明，奥贝胆酸通过肝脏产生肝代谢物牛磺酸缀合物，其分泌到胆汁中并在肝肠循环中积累。因此，可使用牛磺酸缀合物的测量来确定奥贝胆酸通过肝脏的量。图38中报道了牛磺酸缀合物形成的速率，其显示在给予结晶形式后牛磺酸缀合物形成更快并且实现更高的浓度。熔点和玻璃化转变使用常规方法测量奥贝胆酸形式1(非结晶)形式1和结晶形式f的熔点。作为参考化合物，测量鹅去氧胆酸和熊去氧胆酸的熔点。测量以一式三份进行。对于结晶形式，从固态到液态的转变被定义为熔融温度(tm)，而对于非结晶形式，被定义为玻璃化转变温度(tg)，在表中报告了测量的以摄氏℃和开尔文°k表示的值。表3：奥贝胆酸(形式1和形式f)以及cdca和udca的熔点结果：对于cdca和udca获得的值与先前报道的那些一致，其中udca的熔点高于cdca的熔点。形式1的玻璃化转变温度tg(102℃-112℃)低于形式f的熔点温度tm(120℃-124℃)。当比较两种固态形式时，观察到的这种图案与先前报道的数据一致。形式f在较高温度(235℃-237℃)下具有额外的转变。以开尔文度表示的最高熔点温度和玻璃化转变温度之间的比率与其他药物和其他胆汁酸非常相似。(j.kerc等人thermochim.acta,1995(248)81-95)。差示扫描量热分析进行差示扫描量热法(dsc)分析以更好地定义奥贝胆酸结晶和非结晶形式的熔点和物理状态。使用的仪器是mettlertoledodsc型号821e。形式1和形式f各自提交大约4-5mg进行分析。将化合物以10℃/min加热速率暴露于30℃-300℃的温度范围。图39显示了对于奥贝胆酸结晶形式f获得的dsc曲线。检测到对应于该化合物熔点的120.04℃的一个吸热转变。通过热台显微镜检查(hsm)也证实了这一结果；在30℃-240℃的范围内，观察到的固-液转变是在122℃-124℃。在dsc迹线中，对于形式f获得的峰形和强度与结晶形式显示的典型行为一致。然而，峰宽相当宽；这可能是由于不均匀的晶体。热重分析(tga)未显示在30℃-300℃温度范围内的任何重量损失。图40显示了对于奥贝胆酸非结晶形式1获得的dsc曲线。观察到在79.95℃的一个吸热转变。峰形和强度与非结晶化合物的预期行为一致。对于这些物质，固-液转变(玻璃化转变)所需的能量小于结晶化合物。热谱图未显示在30℃-300℃温度范围内的任何重量损失。水溶性按照本领域已知的程序测量奥贝胆酸形式1(非结晶)和结晶形式f的水溶性。简而言之，将固体悬浮在低ph(hcl0.1mol/l)的水中，并在轻微混合下在25℃下平衡一周。过滤饱和溶液，并且通过hplc-es-ms/ms测量化合物在溶液中的浓度。结果：形式1呈现出更高的溶解度17.9μmol/l，相比形式f的9.1μmol/l。根据该奥贝胆酸的生物利用度数据，结晶形式f高于奥贝胆酸形式1(非结晶)。尽管在给予形式1后有较早的血浆浓度峰，血浆曲线显示f型被更有效地吸收(更高的auc)，并且甚至动力学更规则，反映了该药物在肠内容物中的最佳分布。形式1显示此早期峰，然后是后面第二个峰，其cmax低于形式f的cmax。形式1的水溶解度高于形式f的水溶解度。由于在所研究的温度范围内，热重分析(tga)没有显示出任何重量损失，因此形式f显现是稳定的。根据这些结果，当口服给药时，形式f显现更有效地被肠吸收并被肝脏吸收。与形式1相比，对于形式f，主要肝脏代谢物牛磺酸缀合物的形成速率几乎是两倍，表明在3小时后在肝肠循环和血浆浓度上更有效的转运和积累。实例8：放射性标记的奥贝胆酸的制备根据以下方案制备放射性标记的奥贝胆酸。方案5在30℃下，记录5-mmo.d.管(诺瑞尔公司(norell,inc)，507-hp)中的cdc13和meod-d4溶液中的nmr光谱并且在varianvnmrs-400上，在400mhz针对1h收集该光谱。化学位移(δ)是相对于四甲基硅烷(tms＝0.00ppm)并以ppm表示。在accela-thermofinniganlcqfleet(运行est(-)电离模式)上离子阱质谱仪(ion-trapmassspectrometer)上进行lc-ms/ms。在agilent1200系列(柱：xterramsc8，250x4.6mm，5μm，40℃)上以线β-ram进行hplc。在lsa(液体闪烁分析仪(liquidscintillationanalyzer)，铂金埃尔默公司(perkinelmer)，tri-carb2900tr)上获取比活。化合物2x的制备在-20℃下，向二异丙胺(1.59g，15.8mmol)于无水thf(6.0ml)中的溶液中添加n-buli(6.30ml，2.5m，15.8mmol)。在-20℃下搅拌反应混合物1小时后，冷却至-78℃并添加tmsc1(1.72g，15.8mmol)，随后添加无水thf(6.0ml)中的化合物1x(3.00g，6.29mmol)。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时，通过添加nahco3淬灭并在室温下搅拌30min。分离有机层并在真空下浓缩，以给出化合物2x(3.29g，95％)，并且不经进一步纯化用于下一步。化合物3x的制备将甲苯(1.0ml)中的[1-14c]乙醛(330mci，5.63minol)(由[14c]baco3制备，sa＝58.6mci/mmol)和dcm(2.0ml)中的乙醛(130mg，2.95mmol)在-78℃下混合，并且然后转移到化合物2x(3.29g，6.00mmol)于dcm(13.0ml)中的溶液中，随后在-78℃下添加bf3·oet2(1.05g，7.40mmol)。在-78℃下搅拌1小时后，将反应混合物加温至35℃并在上述温度下搅拌1小时。通过添加水(10ml)淬灭反应，将水层用dcm萃取，将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空下浓缩将残余物通过sio2柱色谱法(己烷:etoac＝5:1至3:1)纯化，给出呈白色固体状的化合物3x(102mci，31％，saw37.0mci/mmol)。1h-nmr(cdc13,瓦里安公司(varian),400mhz):80.65(3h,s)；0.93(3h,d,j＝6.0hz),1.01(3h,s),1.06-1.49(12h,m),1.62-2.04(7h,m),1.69(3h,d,j＝6.8hz),2.18-2.28(2h,m),2.32-2.43(2h,m),2.58(1h,dd,j＝12.8,4.0hz),3.62-3.70(1h,m),3.67(3h,s),6.18(1h,q,j＝6.8hz)。化合物4x的制备在室温下，向化合物3x(102mci，2.75mmol)于meoh(6.0ml)中的溶液中添加h2o(3.0ml)中的naoh(220mg，5.50mmol)。将反应混合物在45℃下搅拌1小时后，冷却至室温，在减压下除去meoh，并用h2o(12ml)稀释。将水层用h3po4酸化，用dcm萃取，并将有机层在真空下浓缩。将残余物悬浮在et2o中，并且通过过滤来收集沉淀物，给出呈白色固体状的化合物4x(86.3mci，85％)。1h-nmr(cdci3,瓦里安公司(varian),400mhz)；80.63(3h,s),0.92(3h,d,j＝6.0hz),0.99(3h,s),1.04-1.50(13h,m),1.61-2.01(7h,m),1.67(3h,d,j＝7.2hz),2.21-2.28(2h,m),2.35-2.41(2h,m),2.56(1h,dd,j＝12.8,4.0hz),3.58-3.69(1h,m),6.16(1h,q,j＝7.2hz)。化合物5x的制备将化合物4x(86.3mci，2.35mmol)和5％-pd/c(100mg)于水性0.5mnaoh(10ml，5.0mmol)中的混合物在室温下在h2气氛(气球)下搅拌10小时，并且然后在100℃下搅拌14小时。通过过滤除去催化剂，用水洗涤，并将滤液用h3po4酸化。通过过滤收集沉淀物，将固体溶解在etoac中，用盐水洗涤，通过短的sio2垫过滤并在真空下浓缩。将残余的固体用etoac重结晶，给出呈白色固体状的化合物5x(67.7mci，78％)。1h-nmr(meod-d4,瓦里安公司(varian),400mhz):80.71(311,s),0.75-0.84(1h,m),0.81(3h,t,j＝7.4hz),0.921.01(1h,m),0.96(3h,d,j＝6.4hz),1.06-1.38(7h,m),1.25(3h,s),1.41-1.96(1211,m),2.01-2.05(1h,m),2.11-2.24(2h,m),2.30-2.37(1h,m),2.50(1h,t,j＝11.4hz),2.80-2.85(1h,m),3.42-3.49(1h,m)。[乙基-1-14c]奥贝胆酸的制备在80℃下，向化合物5x(67.7mci，1.83mmol)于2mnaoh(4.50ml，9.00mmol)中的溶液中添加nabh4(416mg，11.0mmol)于1120(2.0ml)中的溶液。将反应混合物在100℃下搅拌2小时后，在室温下添加水(6.0ml)并用h3po4酸化。将水层用dcm萃取，经无水na2so4干燥，通过sio2短垫过滤并在真空下浓缩。将残余物通过sio2柱色谱法(己烷:etoac＝1:1至1:3)纯化，给出呈白色固体状的产物(44.0mci，65％)。将产物(44.0mci，1.19mmol)和奥贝胆酸(120mg，0.285mmol)溶解在etoac(4ml)中，将溶液在50℃下搅拌2小时，并且然后在真空下浓缩。将残余的油悬浮于et2o中，通过过滤收集沉淀物，给出呈白色固体状的[乙基-1-14c]奥贝胆酸(560mg，38.5mci，sa＝29mci/mmol)。1h-nmr(cdcl3,瓦里安公司(varian),400mhz):80.66(3h,s),0.88(311,s),0.93(3h,t,j＝7.2hz),0.93(3h,d,i＝6.4hz),0.96-1.04(1h,m),1.08-1.52(14h,m),1.51-1.60(1011,m),2.22-2.30(111,m),2.36-2.44(1h,m),3.38-3.45(111,m),3.71(ih,s)。lc-ms/ms(ms：lcqfleet)：ms计算值：421.56；ms实测值：421.07[m-h]-。放射tlc：二氧化硅60f254的tlc板，并且流动相为etoac。放射化学纯度为98.90％，rf＝0.675hplc(agilent1200系列)：流动相；乙腈:5mm磷酸盐缓冲液(ph＝3):meoh＝450:450:100。放射化学纯度为98.19％(β-ram)，rt＝20.00min。[乙基-1-14c]奥贝胆酸具有分子式14c1c25h44o4，并且通过lsc，分子量为421.46，比活性为29mci/mmol。实例9.结晶奥贝胆酸的合成下面鉴定和列出了形式a、c、d、f、g和i的选择性合成的程序。这些实验的结果提供在表5中。程序1：冷却然后熟化将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。在50℃下加入2体积(60μl)部分的乙腈。最初，样品形成胶，该胶在加入14体积溶剂后溶解。在搅拌时，观察到固体沉淀碎片。使用0.25℃/min的线性冷却速率将样品冷却至5℃。通过xrpd分析所得悬浮液，并且然后熟化(在50℃/室温下以8小时循环摇动)。熟化5天后，将样品平衡至室温并通过xrpd重新分析。程序2：冷却将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。添加溶剂(按照表5并进行观察。将样品在50℃下搅拌1小时，然后使用0.1℃/min的线性冷却速率冷却至5℃。将样品在5℃下搅拌2天。过滤任何固体，风干并通过xrpd分析。将溶液储存在冰箱中约48小时，并且然后在环境条件下蒸发。通过xrpd分析固体。程序3：添加抗溶剂然后冷却将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。添加溶剂(按照表5)来溶解无定形材料，并且然后添加抗溶剂(庚烷，按照表5的体积)并进行观察。将样品在50℃下搅拌1小时，然后使用0.1℃/min的线性冷却速率冷却至5℃。将样品在5℃下搅拌2天。将固体过滤，风干并通过xrpd分析。程序4：熟化将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。添加溶剂(按照表5)以溶解无定形材料。将样品在50℃下搅拌1小时，然后熟化(在50℃/室温下以8小时循环摇动)。3天后，过滤含有固体的样品，风干并通过xrpd分析。将作为溶液的样品用较冷的上限温度熟化(在40℃/rt下，以4小时循环搅拌，程序4b)，并且在1天和2天后通过xrpd分析形成的任何固体。程序5：抗溶剂然后冷却将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。添加mtbe(90μl，3体积)以溶解无定形材料，并且然后添加抗溶剂(庚烷，90μl，3体积)并进行观察。将样品在50℃下搅拌1小时，然后使用0.2℃/min的线性冷却速率冷却至25℃。在25℃下约30分钟后，将所得固体过滤，风干并通过xrpd分析。程序6：熟化将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。添加苯甲醚(90μl，3体积)以溶解无定形材料。将样品熟化(在40℃/rt下，以4小时循环摇动)总共17天。程序7：冷浆将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并冷却至5℃。添加乙腈/水混合物(按照，预冷却至5℃)并将样品在5℃下搅拌过夜。进行观察并且过滤固体，风干并通过xrpd分析。一些固体是大块，在xrpd分析之前将其压碎。一个样品是粘性固体，因此在5℃下搅拌总共17天，形成坚硬的固体块，将其压碎并通过xrpd进行分析。程序8：冷却将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。加入溶剂(参见表5)以溶解无定形材料，将样品在50℃下搅拌1小时。使用0.1℃/min的线性冷却速率将样品冷却至-20℃。在-20℃下搅拌过夜后，将样品平衡至室温，并且过滤所得固体，风干并通过xrpd进行分析。表5：合成结晶奥贝胆酸的方法的概述和结果*部分结晶a.结晶奥贝胆酸形式d的小规模合成在一种方法中，将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。添加甲基异丁基酮(90μl)并进行观察。将样品在50℃下搅拌1小时，然后使用0.1℃/min的线性冷却速率冷却至5℃。将该样品在5℃下搅拌2天。过滤任何固体，风干并通过xrpd分析。将溶液储存在冰箱中约48小时，并且然后在环境条件下蒸发。通过xrpd分析固体，并且峰提供于表6中。表6：形式d的峰列表b.结晶奥贝胆酸形式d的放大合成在一种方法中，将无定形的奥贝胆酸(大约1g)称入大的玻璃小瓶中并加温至50℃。在50℃下添加mibk(2.0ml，2体积)，在搅拌下形成澄清溶液。将样品在50℃下搅拌2小时，然后使用0.1℃/min的线性冷却速率冷却至-20℃。将样品在-20℃下搅拌过夜，在此之后，将少量固体过滤，经空气干燥并通过xrpd进行分析。将样品的剩余部分通过0.45μmptfe过滤器过滤。将样品风干大约30分钟，并且然后在真空烘箱中在室温下干燥过夜。所得白色固体被表征为形式d。图45是结晶奥贝胆酸形式d的xrpd衍射图。图46是结晶奥贝胆酸形式d的tga和dsc热谱图的叠加。图47是结晶奥贝胆酸形式d的gvs实验的等温线图。图48是结晶奥贝胆酸形式d的gvs实验的动力学图。c.结晶奥贝胆酸形式f的小规模合成在一种方法中，将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。添加硝基甲烷以溶解无定形材料。将样品在50℃下搅拌1小时，然后熟化(在50℃/室温下以8小时循环摇动)。3天后，过滤含有固体的样品，风干并通过xrpd分析。通过xrpd分析固体，并且峰提供于表7中。表7：形式f的峰列表d.结晶奥贝胆酸形式f的放大合成在一种方法中，将奥贝胆酸(大约1g)称入大的玻璃小瓶中并加温至50℃。在50℃下添加硝基甲烷(15.0ml，15体积)，得到样品，形成胶状固体球。将样品熟化(在50℃/rt下以8小时循环摇动)过夜，在此之后样品是大块坚硬固体和针状颗粒的悬浮液。将一些固体粉碎成白色粉末并通过xrpd分析。手动破碎固体块并将样品再熟化24小时。将少量所得悬浮液过滤，风干并通过xrpd分析。将样品的剩余部分通过0.45μmptfe过滤器过滤。将样品风干大约40分钟，并且然后在真空烘箱中在40℃下干燥过夜。所得白色固体被表征为形式f。图49是结晶奥贝胆酸形式f的xrpd衍射图。图50是结晶奥贝胆酸形式f的tga和dsc热谱图的叠加。图51是形式f的gvs实验的等温线图。图52是形式f的gvs实验的动力学图。e.结晶奥贝胆酸形式g的小规模合成在一种方法中，将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。在50℃下，添加2体积(60μl)部分的乙腈。最初，样品形成胶，在添加14体积溶剂后该胶溶解。在搅拌时，观察到固体沉淀碎片。使用0.25℃/min的线性冷却速率将样品冷却至5℃。通过xrpd分析所得悬浮液，并且然后熟化(在50℃/室温下以8小时循环摇动)。熟化5天后，将样品平衡至室温并通过xrpd重新分析，并且峰提供于表8中。表8：形式g的峰列表f.结晶奥贝胆酸形式g的放大合成将无定形的奥贝胆酸(大约100mg)称入玻璃小瓶中并加温至50℃。平行进行十次100mg规模试验。向每个样品中添加乙腈(0.5ml，5体积，预加温至50℃)，形成无色胶，该胶在50℃下静置时大部分溶解。在小规模实验中用约1mg产物接种每个样品，并使样品熟化(在50℃/rt下以8小时循环摇动)3天。熟化后，样品在小瓶壁上含有晶体并且在小瓶底部含有硬固体，其在刮擦时形成白色粉末。通过xrpd分析每个样品，并通过将它们全部通过0.45μmptfe过滤器进行过滤来合并样品。将样品风干大约30分钟，并且然后在真空烘箱中在室温下干燥过夜。所得白色固体(795.8mg)被表征且鉴定为形式g。图53是结晶奥贝胆酸形式g的xrpd衍射图。图54是结晶奥贝胆酸形式g的tga和dsc热谱图的叠加。图55是形式g的gvs实验的等温线图。图56是形式g的gvs实验的动力学图。g.结晶奥贝胆酸形式i的小规模合成在一种方法中，将无定形的奥贝胆酸(大约30mg)称入玻璃小瓶中并冷却至5℃。添加乙腈/水混合物(50/50，60μl)并将样品在5℃下搅拌过夜。进行观察并且过滤固体，风干并通过xrpd分析。一些固体是大块，在xrpd分析之前将其压碎。一个样品是粘性固体，因此在5℃下搅拌总共17天，形成坚硬固体块，将其压碎并通过xrpd进行分析，并且峰提供于表9中。表9：形式i的峰列表h.结晶奥贝胆酸形式i的放大合成将无定形的奥贝胆酸(大约1g)称入大的玻璃小瓶中并冷却至5℃。添加乙腈/水混合物(2ml，2体积的50/50v/v预混合混合物，预冷至5℃)，并且样品形成大块胶状灰白色固体。将样品在5℃下搅拌过夜，在此之后它由大块坚硬白色固体组成。将固体块破碎成白色粉末，并且过滤少量，风干并通过xrpd进行分析。将样品在5℃下再搅拌4天，然后过滤少量所得悬浮液，风干并通过xrpd进行分析。将样品的剩余部分通过0.45μmptfe过滤器过滤。将样品风干大约40分钟，并且然后在真空烘箱中在室温下干燥过夜。对所得白色固体(955.4mg)进行表征。图57是结晶奥贝胆酸形式i的xrpd衍射图。图58是结晶奥贝胆酸形式i的tga和dsc热谱图的叠加。图59是形式i的gvs实验的等温线图。图60是形式i的gvs实验的动力学图。当前第1页12