处理糖苷的混合物以获得更纯的形式的一种或多种这些糖苷的方法与流程

本申请是2011年1月27日提交的发明名称为“处理糖苷的混合物以获得更纯的形式的一种或多种这些糖苷的方法”的第201180015139.8号中国专利申请的分案申请。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2010年1月28日提交的题为“从新蛇菊苷a组合物纯化新蛇菊苷b和新蛇菊苷d的方法”的美国临时申请系列号61/299,160的权益，该临时申请整体援引加入本文。

本发明的方法涉及将包含新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料的混合物拆分为更纯的形式的处理。例如，可以将新蛇菊苷a、新蛇菊苷b和新蛇菊苷d的混合物拆分以在一方面以更纯的形式提供reba，和/或在另一方面以更纯的形式提供rebb和/或rebd。更具体地，所述处理单独或组合地使用一种或多种结晶策略以纯化这样的糖苷混合物。

背景技术：

物种甜叶菊(steviarebaudiana,“stevia”)在纯化甜叶菊的某些天然存在的具有作为无热量甜味剂潜力的甜味糖苷上已经成为重要的研究和开发主题。可以从甜叶菊提取的甜味糖苷(又称为甜菊醇(steviol)糖苷)包括六种新蛇菊苷(即新蛇菊苷a-f)、蛇菊苷(来自野生型甜叶菊的提取物中主要的糖苷)、卫矛醇苷(dulcoside)和甜叶菊素(sterebin)。

新蛇菊苷a(reba)是甜味菊的甜味糖苷组分，甜度约为蔗糖的250-450倍。新蛇菊苷a因其有利的甜度特征、规章批准、消费者接受以及最小的苦味回味而成为用于无热量甜味剂中的期望糖苷。新蛇菊苷b(rebb)和新蛇菊苷d(rebd)由于其甜度特性也是备受关注的甜叶菊的甜味糖苷组分。

甜叶菊的天然提取物及其一些加工形式以及合成的对应物通常包含糖苷的混合物。期望将这些混合物纯化以获得更纯的形式的一种或多种这些糖苷。例如，在其他成分中，混合物可以包含reba、rebb和rebd的组合。在一些情况下，期望处理这些混合物以回收包含更纯的形式的reba的产物，同时降低所述产物中rebb和/或rebd的含量。在其他情况下，期望处理这些混合物以回收包含更纯的形式的rebb和/或rebd的产物，同时降低所述产物中reba的含量。仍然在其他情况中，将这些混合物加工以回收产物的组合。例如，如果将混合物处理以回收就reba而言更纯而rebb和rebd减少的混合物部分，则通常可以回收处理的混合物的另一部分，其具有更纯的rebb和/或d以及较少的reba含量。

已经报导了从包含新蛇菊苷a的粗甜叶菊提取物纯化新蛇菊苷a的许多方法。

日本公开第56121454号报导了一种通过结晶以高纯度和收率分离蛇菊苷和新蛇菊苷a的方法。在该方法中，通过常规方法从甜菊(steviarebaudianabertoni)的叶和秆提取蛇菊苷和新蛇菊苷a的混合物。将提取物溶于≥70％的乙醇水溶液并选择性地将新蛇菊苷a从该溶液结晶。

日本专利63173531描述了一种从甜叶菊植物提取甜味糖苷的方法。该方法的第一步是从甜叶菊植物提取甜味糖苷的液体溶液。第二，将甜味糖苷的液体溶液通过非极性多孔树脂并用水溶性有机溶剂优选甲醇洗脱。第三，将洗脱的溶液浓缩并干燥以得到粉状物质。这种操作方法分离了甜味糖苷的混合物，但没有分离单一的纯甜味糖苷，如新蛇菊苷a。

美国专利申请公开文本第2006/0083838号(jackson等人)报导了一种从可商购的甜叶菊起始原料分离并纯化新蛇菊苷a的方法。该方法包括：(1)乙醇(etoh)配制阶段以配制所选的etoh溶剂；(2)使用甜叶菊起始原料的第一回流阶段，以及使用从回流的混合物或搅拌的洗涤混合物分离的渗余物的任选的额外回流阶段；(3)任选地，一个或多个搅拌的洗涤阶段；以及(4)乙醇清洗和干燥阶段。在报导的方法中，进行乙醇配置阶段以配制用于回流步骤的期望回流溶剂。通常，回流溶剂为具有约5％-15体积％水的乙醇与水的混合物。回流阶段通常包括在回流溶剂中提供糖苷的混合物并将该混合物回流约1小时，将混合物冷却以改进加工收率，以及过滤。该方法还包括通常在约79℃-80℃的温度下进行约1小时的一个或多个能量密集的回流步骤。搅拌的洗涤阶段通常包括提供来自回流阶段的糖苷混合物和纯乙醇的溶剂，在室温下将该混合物搅拌约15分钟并过滤。该方法声称获得了100％纯的水溶性新蛇菊苷a。

美国专利第5,962,678号(payzant等人)报导了一种从甜叶菊植物提取选择的甜味糖苷的方法。在报导的方法中，从甜叶菊植物提取甜味糖苷并加工以在多步骤过程中获得单独组分。首先，将甜叶菊植物处理以提取含有混合的甜味糖苷的液体水溶液。通过使用一系列离子交换树脂，将不纯的非甜味糖苷从混合的甜味糖苷分离，将其干燥。这些干燥的混合甜味糖苷仍然含有杂质，然后将其溶于水溶性有机溶剂如无水甲醇以形成溶液。将该溶液回流并冷却以沉淀第一甜味糖苷组分。该第一甜味糖苷组分通常为蛇菊苷，可以通过过滤回收，并且可以通过对第二组分所述的方法进一步纯化。通过加热来浓缩滤液，可以进一步处理来自第一沉淀的甜味糖苷的结晶的滤液以获得第二甜味糖苷组分。在冷却该溶液时，第二甜味糖苷组分沉淀，其可以被回收。该第二甜味糖苷组分通常为新蛇菊苷a。可以通过将其溶于水溶性有机溶剂如甲醇来进一步纯化，该水溶性有机溶剂可以任选地含有少量水。将该溶液加热、回流并最终冷却以沉淀较高纯度的第二甜味糖苷组分。沉淀物可以通过过滤回收。可以重复该纯化过程，直至获得期望纯度的最终结晶固体。该方法报导了新蛇菊苷a的纯度水平为90％或更高，或者95％或更高。

美国专利第4,361,697号(dobberstein等人)报导了一种从甜叶菊植物回收二萜糖苷的方法。该方法包括顺序地用中间极性的第一溶剂提取植物原料以提取趋于干扰糖苷的液相色谱分离的植物物质，然后用高极性的第二溶剂提取糖苷，并通过将它们引入液相色谱柱上来色谱分离提取的糖苷，所述液相色谱柱具有通过硅原子共价键合至无机支持物的含氧有机固定相的填料。用极性比第一溶剂高但比第二溶剂低的溶剂洗脱糖苷。

美国专利第4,892,938号(giovanetto)报导了一种通过提取和纯化从甜菊的干燥植物原料回收蛇菊苷的方法。通过搅拌随后过滤并离心，于室温至约65℃的温度下在水中处理来获得提取物。用氢氧化钙处理该提取物，从而通过过滤或离心来获得沉淀物。用强酸性离子交换树脂处理该沉淀物，随后用弱碱性离子交换树脂处理该沉淀物，过滤并干燥。

美国专利第4,082,858号(dubois)报导了一种从甜叶菊植物的叶子回收新蛇菊苷a的方法。通过液相色谱、然后通过用水和具有1-3个碳原子的烷醇(优选甲醇)的初始提取来实现最终的纯化。其还公开了水可以用作初始溶剂。在该阶段中，它们的优选溶剂为具有1-4个碳原子的液体卤代烷烃。优选的第二溶剂为具有1-3个碳原子的烷醇，而优选的第三溶剂为具有1-4个碳原子的烷醇以及任选的少量的水。

美国专利申请第2006/0134292号(abelyan等人)报导了一种从甜叶菊植物原料回收甜味糖苷的方法。在果胶酶、纤维素酶和α-淀粉酶的存在下，用水处理干燥且研成粉末的叶子。据报导使用这样的酶相当大地提高提取率并促进纯化的下一个阶段。使用氢氧化钙处理并通过超滤来纯化所得的提取物。使渗透物通过填充有膨润土的柱，并在真空下浓缩成糖浆状态。用乙醇处理允许从该混合物分离几乎纯的新蛇菊苷a。通过用88-95％的乙醇洗涤晶体后获得高纯度的新蛇菊苷a。

其他技术包括例如报导在转让给ajinomotocompany,inc的日本公开文本第56121454号、第56121455号、第52062300号和第56121453号，以及转让给hailinsteviarebaudiumsugar的中国公开文本第1243835号中的那些技术。

由于它们作为无热量甜味剂的价值，期望改进用于纯化糖苷如reba、rebb和/或rebd可用方法。特别地，非常期望允许从包含新蛇菊苷b和/或新蛇菊苷d的组合物分离新蛇菊苷a的方法。这允许回收具有更纯的reba的产物、具有更纯的rebb和/或rebd的产物或者这两种产物。

技术实现要素：

本发明提供用于处理包含天然新蛇菊苷a、新蛇菊苷b和新蛇菊苷d，这些物质的合成的对应物，和/或天然或合成的实施方案的衍生物的混合物以获得更纯的形式的一种或多种这些糖苷的方法。在许多实施方案中，本发明可以用于加工至少部分地获得自天然来源如甜叶菊植物的糖苷混合物。这允许例如回收包含相对于rebb或rebd更纯的形式的reba的产物。作为回收纯化的reba的替代方式或者除回收纯化的reba之外，可以获得包含相对于reba更纯的形式的rebb和/或rebd的产物。

本发明的原则允许以高收率实现这些糖苷优异的纯化。常规地，高纯度以收率的代价获得，反之亦然。提供高水平收率和纯化的方法是显著的优势，特别在工业规模上。

本发明的处理可以与其他纯化策略组合使用。在这样的组合中，本发明的方法可以在使用其他策略之前和/或之后实施。在一些实施方式中，这样的组合可以重复一次或多次额外的次数。

在一方面，本发明涉及一种处理包含reba材料以及rebb材料或rebd材料中的至少一种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料、rebb材料或rebd材料中的至少一种的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供淤浆，所述淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料以及rebb材料和rebd材料中的至少一种，其中所述淤浆包括固相和液相；

b)在独立地高于约40℃的一个或多个升高的温度下将所述淤浆老化，所述老化进行足以使所述固相就所述新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料中的至少一种而言变得更纯的时间段；

c)将加热的混合物过滤以分离所述固相和液相，其中所述混合物在至少一部分所述过滤期间处于至少40℃的温度下；以及

d)在所述固相和液相中的至少一个中回收至少一种糖苷。

在另一方面，本发明涉及一种处理包含reba材料、rebb材料或rebd材料中的两种或更多种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料、rebb材料或rebd材料中的至少一种的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供淤浆，所述淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少reba材料、rebb材料和rebd材料，其中所述淤浆包括固相和液相；以及

b)在独立地高于约85℃的一个或多个升高的温度下将所述淤浆老化，所述老化进行足以满足以下情况中的至少一种的时间段和在足以满足以下情况中的至少一种的条件下进行：(i)所述固相就reba材料而言相对于rebb材料和rebd材料中的至少一种变得更纯；和/或(ii)所述液相就rebb材料和rebd材料中的至少一种而言相对于reba材料变得更纯。

在另一方面，本发明涉及一种处理包含reba材料、rebb材料或rebd材料中的两种或更多种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料、rebb材料或rebd材料中的至少一种的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供淤浆，所述淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料，其中所述淤浆包括固相和液相；

b)在独立地高于约40℃的一个或多个升高的温度下将所述淤浆老化，所述老化进行足以使所述固相和/或所述液相中的至少一个就所述新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料中的至少一种而言变得更纯的时间段；以及

c)在至少一部分所述老化期间，将加热的淤浆搅拌并使所述加热的淤浆的连续部分接触冷却面。

在另一方面，本发明涉及一种处理包含reba材料、rebb材料或rebd材料中的两种或更多种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供第一淤浆，所述第一淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料，其中所述第一淤浆包括固相和液相，所述液相包含第一溶剂；

b)将所述第一淤浆老化，所述老化进行足以使所述固相就reba材料而言变得更纯的时间段；

c)将步骤(b)中获得的至少一部分固相并入第二淤浆，其中所述第二淤浆包括固相和液相，所述液相包含具有不同于所述第一溶剂的组成的第二溶剂；以及

d)将所述第二淤浆老化，所述老化进行足以使所述固相就reba材料而言变得更纯的时间段。

在另一方面，本发明涉及一种处理包含reba材料、rebb材料或rebd材料中的两种或更多种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收rebb材料或rebd材料中的至少一种的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供第一淤浆，所述第一淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料，其中所述第一淤浆包括固相和液相，所述液相包含第一溶剂；

b)将所述第一淤浆老化，所述老化进行足以使所述液相就rebb材料或rebd材料中的至少一种而言变得更纯的时间段；

c)将步骤(b)中获得的至少一部分液相并入第二淤浆，其中所述第二淤浆包括固相和液相，所述液相包含具有不同于所述第一溶剂的组成的第二溶剂；以及

d)将所述第二淤浆老化，所述老化进行足以使所述第二淤浆的液相就rebb材料或rebd材料中的至少一种而言变得更纯的时间段。

在另一方面，本发明涉及一种纯化不纯的新蛇菊苷a组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供不纯的新蛇菊苷a组合物，所述组合物包含新蛇菊苷a材料以及至少一种选自新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料的杂质，其中至少一部分所述新蛇菊苷a材料处于第一结晶形式；

b)将至少一部分所述新蛇菊苷a组合物从所述第一形式转化为第二结晶形式；以及

c)将至少一部分所述新蛇菊苷a组合物的第二结晶形式转化为第三结晶形式，所述第三结晶形式任选地与所述第一结晶形式相同。

在另一方面，本发明涉及一种处理包含reba材料以及蛇菊苷材料、rebb材料或rebd材料中的至少一种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供淤浆，所述淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少蛇菊苷、新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料，其中所述淤浆包括固相和液相，并且其中所述淤浆包括基于所述淤浆中糖苷的总重量小于约60重量百分数的reba材料，并且其中所述液相包含乙醇；以及

b)在独立地高于约85℃的一个或多个升高的温度下将所述淤浆老化，所述老化进行足以满足以下情况的时间段和在足以满足以下情况的条件下进行：所述固相就reba材料而言相对于蛇菊苷、rebb材料和rebd材料中的至少一种变得更纯。

根据本发明纯化的纯化糖苷组合物可以用于甜味剂组合物和增甜的食品和饮料组合物。食品和饮料组合物的实例包括碳酸饮料、非碳酸饮料(例如运动饮品和干燥饮品混合物)、冰淇淋、口香糖、糖果、果汁、果酱、果冻、花生酱、酸奶或冷谷类(coldcereal)。

附图说明

图1是新蛇菊苷a的化学结构。

图2是新蛇菊苷b的化学结构。

图3是新蛇菊苷d的化学结构。

图4a是可用于本发明的新蛇菊苷a的乙醇晶体形式的粉末x射线衍射图。

图4b是可用于本发明的新蛇菊苷a的乙醇晶体形式的粉末x射线衍射图的峰列表。

图5a是可用于本发明的新蛇菊苷a的水晶体形式的粉末x射线衍射图。

图5b是可用于本发明的新蛇菊苷a的水晶体形式的粉末x射线衍射图的峰列表。

具体实施方式

下文所述的本发明的实施方案并非意图穷举或限制本发明为以下详细说明中公开的精确形式。相反地，选择并描述这些实施方案从而本领域其他技术人员可以理解和明白本发明的原则和实施。本文引用的所有专利、未决专利申请、公开专利申请和技术文献各自援引加入本文用于所有目的。

本发明提供处理包含新蛇菊苷a、新蛇菊苷b和新蛇菊苷d、这些物质的一种或多种的衍生物和/或这些天然和/或衍生形式的一种或多种的合成的对应物以相对于起始混合物更纯的形式回收这些糖苷中的至少一种的方法。除了这些糖苷之外，所述混合物任选地可以包含一种或多种其他糖苷。示例性的其他糖苷包括甜菊醇糖苷、这些物质的衍生物或合成的对应物。从天然来源获得的reba、rebb和rebd的混合物也倾向于包含其他甜菊醇糖苷。

本发明特别可用于从这些混合物以相对于至少rebb材料和rebd材料更纯的形式获得reba材料。因此，利用本发明的原则获得的纯化的组合物可以具有比起始混合物更大百分数的reba材料和更小百分数的rebb材料和/或rebd材料。因此，在一个方面，本发明提供用于从不纯的新蛇菊苷a组合物去除杂质如新蛇菊苷b和新蛇菊苷d的方法。

因为本发明的原则可以用于在另一方面从rebb材料和/或rebd材料分离reba材料，所以在另一方面利用本发明的原则获得的纯化的组合物可以具有比起始混合物更大百分数的rebb材料和/或rebd材料以及更小百分数的reba材料。因此，在另一方面，本发明提供用于从不纯的rebb和/或rebd组合物去除杂质如reba的方法。

本文所用的术语“新蛇菊苷a”或“reba”指具有图1所示的化学结构的化合物。本文对于糖苷所用的术语“材料”指该糖苷、该糖苷的衍生物或该糖苷或其衍生物的合成的对应物。因此，“reba材料”指reba、reba衍生物和/或reba或reba衍生物的合成的对应物。

在本文详细说明中所用的术语“新蛇菊苷b”或“rebb”指具有图2所示的化学结构的化合物。本文所用的“rebb材料”指rebb、rebb衍生物和/或rebb或rebb衍生物的合成的对应物。

在本文详细说明中所用的术语“新蛇菊苷d”或“rebd”指具有图3所示的化学结构的化合物。本文所用的“rebd材料”指rebd、rebd衍生物和/或rebd或rebd衍生物的合成的对应物。

本文所用的糖苷分子的衍生物指通过除去一个或多个部分、加入一个或多个部分、将一个或多个部分取代为一个或多个其他部分、遮蔽一个或多个部分、加入或除去不饱和、导致分子的另一位置的不饱和、这些情况的组合等的糖苷的修饰而产生的糖苷产物；然而，条件是衍生物不应当包含具有改变(例如提高或降低)碳水化合物部分(其曾经、现在或变得与糖苷的糖苷配基部分连接)中糖单元的数目，或者取代一种糖单元(例如在代表性情况中的甘露糖单元)为另一种糖单元(例如在代表性情况中的葡萄糖单元)的修饰的那些分子。如果存在糖单元的话，若这样的糖单元的类型或数目不会作为修饰的结果而变化，则衍生物确实包含对存在的糖单元的修饰。

例如，将糖部分加入通过天然酯键连接至糖苷配基的reba碳水化合物部分将reba转化为rebd。其中碳水化合物链从一个糖单元增加到两个糖单元。这样的修饰产生rebd，而不是reba的衍生物。类似地，从reba去除这样的糖部分产生rebb而不是reba衍生物，其中在这样的位置不再有碳水化合物链。

合成的对应物指基本上与天然糖苷或天然糖苷衍生物相同的分子，除了所述对应物通过化学合成获得，而不是从天然来源获得。合成的分子的立体化学可以与天然对应物相同或不同。当存在多个手性中心时，这些手性中心一些可以是相同的，而其他的手性中心在合成和天然对应物之间是不同的。混合物的糖苷可以各种形态和物理形式提供。例如，糖苷独立地可以结晶、部分结晶和/或无定形形式提供。糖苷可以干燥形式提供或作为糊、淤浆等的成分提供。在其他情况中，糖苷可至少部分地溶解，并且以溶液、凝胶等形式提供。

在一实施方式中，至少一部分糖苷是结晶，并且以醇结晶形式提供。通常，这表示糖苷在包含至少80％、甚至至少90％、甚至至少95％或甚至至少基本上100％的一种醇如甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇，这些醇的组合等的液体载体中结晶。水是这样的实施方式中的示例性共溶剂。含水醇期望地包含至少约80重量百分数、甚至至少约90重量百分数或甚至至少约95重量百分数的醇。在一些实施方案中，用于制备淤浆的乙醇包括190标准(proof)乙醇(即93-95重量百分数乙醇)。其他等级的乙醇(例如180标准或200标准乙醇)也是可用的。

乙醇结晶形式是优选的，尤其是在其中期望以相对于可能在起始混合物中的rebb材料和rebd材料更纯的形式获得reba材料的实施方案中。数据证实，当将处理应用于其中至少一部分reba处于乙醇结晶形式的糖苷混合物时，reba的纯度更高。在其他的实施方式，至少一部分糖苷以水结晶形式提供。通常，这表示糖苷在包含至少80％、甚至至少90％、甚至至少95％或甚至至少基本上100％水的液体载体中结晶。

可用的乙醇和水晶体形式的非限制实例描述在共同受让的、2009年4月9日提交的、题为“包含新蛇菊苷a的高溶解性形式的甜味剂组合物及制备方法”的美国临时申请序列号61/168,072及其公开的对应pct公开号wo2010/118218a1，这些公开每一个独立地整体援引加入本文。

糖苷的结晶形式可以取决于其中糖苷结晶的液体载体的性质而不同。例如，reba的醇结晶形式不同于reba的水结晶形式。乙醇晶体形式特征可以在于例如图4a所示的x射线衍射图。水晶体形式例如特征可以在于图5a所示的x射线衍射图。

在一些实施方式中，本发明的原则应用于糖苷的连续结晶形式。因此，本发明的原则可以应用于第一加工阶段中的糖苷，其中至少一部分糖苷处于第一结晶形式。作为实例，至少一部分糖苷处于这样的第一阶段中的乙醇结晶形式。然后，在后续的加工阶段中，当至少一部分糖苷处于第二结晶形式时，本发明的原则应用于所述糖苷。作为实例，至少一部分糖苷处于这样的后续阶段中的水结晶形式。第一和/或第二阶段可以根据需要重复。

其中本发明的原则应用于糖苷的连续结晶形式的那些实施方式在本文称作形式转换纯化。该术语表示糖苷的结晶形式在处理的过程期间进行至少一种结晶形式转换。数据表明，当将形式转换策略并入纯化处理时，糖苷产物如reba的纯度得以提高。不希望受到约束，认为所述提高是由于结晶糖苷溶于液体载体，然后在转换过程中重结晶成新的结晶形式。因此，并入晶格中的任何杂质或其他成分与其中结晶转换从一种固相直接至另一种固相的机理相比更容易释放和/或分离。

并入形式转换纯化的示例性实施方式在包括实施例在内的下文进一步描述。

根据本发明，将要处理的糖苷混合物并入包含至少一种固相和至少一种液相的淤浆中。固相可以是无定形和/或结晶的。淤浆通常从包含至少要处理的混合物的成分和适合的液体载体获得。

并入淤浆的糖苷混合物的量可以在大范围内变化。淤浆中的糖苷混合物的浓度可以变化以影响纯化的速率。例如，从不纯的新蛇菊苷a组合物去除新蛇菊苷b和新蛇菊苷d受该浓度影响。一般而言，随着淤浆浓度升高(即较高溶解的固体)，一方面reba材料从rebb材料和rebd材料分离的速率在另一方面倾向于降低。具有太多固体含量也可以使得在处理过程中搅拌和过滤淤浆变得更困难。然而，如果固体含量太低，则生产能力、成本和效率也降低。权衡这样的实际因素，示例性的淤浆实施方案包含基于淤浆总重量的约5重量百分数至约50重量百分数、优选约10重量百分数至约40重量百分数、更优选约15重量百分数至约30重量百分数的糖苷。

将淤浆加热到至少一个高于环境温度的升高的温度，并允许其在所述升高的温度下老化。老化进行足以满足以下情况中的至少一种的时间段：(i)结晶相就至少一种糖苷(如reba材料)而言变得更纯，和/或(ii)液相就至少一种其他糖苷(如rebb材料或rebd材料中的至少一种)而言变得更纯。更长的老化倾向于提供更多的纯化。因此，淤浆更长的老化提高新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料从不纯的新蛇菊苷a组合物去除的程度。老化的持续时间主要取决于实际限制。例如，在一定的持续时间之后，发生的进一步纯化的量过于缓慢而在经济上不实际。在一些实施方案中权衡这样的因素，将淤浆老化约1小时或更长的时间段，例如约1小时至约24小时。在优选的方面，将淤浆老化约3至约8小时的时间段，或者甚至约4至约6小时。

液体载体期望地包含水、醇或这些物质的组合。示例性的醇包括甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇、叔丁醇、这些醇的组合等。如本文所讨论的，醇可以是含水的。在一些实施方案中，用于制备淤浆的乙醇包括190标准乙醇(即93-95重量百分数乙醇)。其他等级的乙醇(例如180标准或200标准乙醇)也是可用的。

处理可在大范围的升高的温度下进行。期望地，避免液体载体的沸腾和回流。热提高新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料从新蛇菊苷a材料分离的速率和程度。不希望受到理论的约束，认为一种或多种糖苷进行构象或者帮助分离的其他转化。在这样的实施方案中，将淤浆在至少约40℃至，优选至少约50℃、更优选至少约70℃并且甚至更优选至少约95℃的温度下加热。加热期望地进行至高达约200℃的温度，优选150℃，更优选120℃。在一实施方式中，在100℃下加热是合适的。

当混合物充分混合时，整体温度在整个混合物中通常是均匀的。在这样的充分混合的混合物中，整体温度期望地在这样的范围内。当混合物未充分混合从而存在温度梯度时，则至少一部分、期望地至少约5体积百分数、更期望地至少约30体积百分数、更期望地至少约50体积百分数的混合物具有在这样的温度范围中的温度。处理可以在一定范围的压力下进行。例如，处理可以在环境压力或高于环境压力的升高的压力下进行。升高的压力允许在较高的温度下加热淤浆，同时在该升高的压力下保持低于液体的沸点。示例性的绝对压力在环境压力至约30atm范围内，甚至约1.1atm至约30atm，优选约1.1atm至约15atm，更优选约1.1atm至约10atm，并且甚至更优选约1.1atm至约5atm。在利用包含水中的至少90重量百分数的乙醇的液体载体的实施方式中，使用约3atm的压力是合适的。在其中期望压力高于溶剂在期望温度下的蒸汽压的实施方案中，升高的压力允许使用较高的温度。这是期望的，因为较高的温度通常导致糖苷之间更好的拆分。例如，较高的温度通常提供一方面reba材料和另一方面rebb材料和rebd材料之间更好的拆分。

在一些实施方案中，将淤浆在处理期间搅拌。搅拌通常提高纯化的程度。例如，包含reba材料、rebb材料和rebd材料的淤浆的搅拌提高从新蛇菊苷a材料分离新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料的速率和程度。通常，搅拌包括例如用叶轮在挡板混合容器(例如5升挡板混合容器)中以高速(例如200rpm)混合。

由于淤浆被老化，糖苷组分选择性地在固相和液相之间分配。在reba材料、rebb材料和rebd材料的情况下，reba材料更有利于在固相中，而rebb材料和rebd材料则更有利于在液相中。这意味着在固相获得更纯的reba材料，同时更纯的rebb材料和rebd材料则在液相中。产生的固相也包含结晶内容物。

两种相通过包括过滤在内的各种技术容易地分离以回收期望的纯化材料。如果期望纯的reba材料，则可以将晶体过滤、洗涤、干燥、进一步加工等。如果期望rebb材料和/或rebd材料，则可以将液体加工以回收作为干燥产物、分散体、溶液等的rebb材料和rebd材料。可以使用各种干燥技术，包括喷雾干燥、烘干、真空干燥、这些方法的组合等。

在优选的实施方案中，将得自处理的固相和液相通过过滤分离。期望地，产物混合物在至少一部分过滤期间处于至少约50℃、优选至少约70℃的温度下。热过滤有利地提高在包含reba材料、rebb材料和rebd材料的混合物中从reba材料分离rebb材料和rebd材料。

不希望受到约束，认为分离在较高的温度下更有利至少部分地是由于包括构象变化以及是温度函数的溶解度差异在内的因素。在室温下，rebb在用reba饱和的94重量百分数乙醇溶液中的溶解度为约0.3g/100g溶剂，并且rebd的溶解度为约0.01g/100g。在100℃下，观察到高达0.2g/l00g的rebd浓度，并且观察到高达0.5g/l00g的rebb浓度。reba在94wt％乙醇中的溶解度的变化程度则小得多。

因此，在高温下将淤浆老化提高rebb材料和rebd材料在溶液中的浓度，并且相应地降低rebb材料和rebd材料的在固相中的量。热过滤更容易地允许通过分离固体和液体而将rebb材料和rebd材料从reba材料分离，同时保持rebb材料和rebd材料较高的溶解度。相比之下，冷过滤则可能存在rebb材料和rebd材料沉淀的风险，从而rebb材料和rebd材料在液体中的浓度更接近室温下的溶解度。这可能导致更多的rebb材料和rebd材料处于固相中，导致固相中较不纯的reba材料。因此，冷过滤可能破坏在处理初期获得的纯化成果。如果期望在过滤之前冷却，则可以仅将淤浆冷却至必需的程度。在一种情况下，在过滤之前从100℃冷却至70℃维持所述方法的纯化，同时降低与过滤相关的风险。

尽管不希望受到理论约束，但是认为由于存在固相和液相，纯化至少部分地通过溶剂介导的结晶进行。在其中存在固相和液相的淤浆中，结晶和溶解同时发生。这意味着，在任一时间点，可能确实仅一部分糖苷处于晶体相，同时剩余的部分则倾向于溶解在液相中。然而，认为基本上所有可用的糖苷参与溶解和结晶，从而不同部分的糖苷连续沉淀至一种或多种不溶状态，同时其他部分则转化为一种或多种可溶状态。简而言之，虽然在任一时间点，仅一些糖苷处于一种相或另一种相，但是基本上所有的糖苷随时间反复结晶和溶解。由于连续部分溶解和结晶，在相之间的分配，因此提高了纯度。该过程是动态的，并且可以导致纯度和形状随时间变化。

在一些实施方案中，溶解和结晶通常以基本上相等的速率进行，从而即使有的话，两种相之间的宏观分配的净变化很小。即，结晶相中的分子溶解和液相中的分子结晶以基本上以相等的速率发生。

在一些实施方案中，特别是当在热处理期间搅拌混合物时，热处理在一个或多个冷却面的存在下进行是期望的，所述冷却面处于低于要处理的混合物的整体温度的温度下。因此，由于将混合物搅拌并由此在热处理的过程期间混合，连续部分的混合物会与冷却面接触。即使混合使得大部分混合物通常处于均匀的整体温度，但是发现在这样的冷却面的存在下加热该混合物增强纯化。相比之下，仅使加热的混合物进行加热和冷却的重复循环未观察到提供相同的纯化增强。

不希望受到约束，可以提出解释在冷却面的存在下加热的益处的可能理论。在混合物中存在热和冷的表面有利于冷表面附近的结晶，但有利于热表面附近或者更热的整体混合物中的溶解。通过在混合物中保持冷表面，随着晶体从冷区对流至热区，结晶和溶解更频繁地发生，导致至少对于结晶起始原料更高的纯化。当使用结晶或无定形的起始原料时，存在热和冷表面也导致较大的粒径，因为较小的颗粒由于较高的表面积比体积比而溶解更快。或者，较高的纯化可以是由于混合物中降低的分数的小晶体。还认为对于无定形和结晶起始原料，在热混合物中使用冷表面还可以提高纯化速率。

通常，冷却面处于低于约40℃、优选约35℃或更低、甚至约30℃或更低的一个或多个温度下。冷却面可以各种方式提供。在一实施方案中，通过旋管(coil)的表面提供冷却面，所述旋管浸入混合物，并且冷却液通过所述旋管流动。在这样的实施方式中，流体可以初始温度如约30℃或更低、甚至约20℃或更低或者甚至约15℃或更低进入旋管的浸入部分，并且由于热传递而以适当较高的温度如约5℃或更高、甚至10℃或更高或者甚至15℃或更高离开旋管的浸入部分。在另一实施方案中，冷却面由外部热交换器提供，一部分淤浆通过所述外部热交换器进行循环，从加热容器抽出并返回加热容器。

在这方面优选实施方案中，可以将淤浆在如上所述的高于环境压力下加热以更容易地使得处理在较高温度下进行。据发现于升高的压力下、在较高温度下进行处理增强一方面reba与另一方面rebb和rebd之间的拆分。

一般地，在本发明的方法中用作起始原料的糖苷混合物包含主要量的新蛇菊苷a材料。主要量表示至少约20重量百分数。一般地，糖苷混合物可以包含基于糖苷总重量的约20重量百分数至约96、优选约30至约96、更优选约40至约96重量百分数的reba材料。混合物中新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料的总量可以变化。在许多实施方案中，rebb材料和rebd材料的总量为基于糖苷总重量的高达约6重量百分数。例如，在一些实施方案中，混合物包含约90重量百分数至约96重量百分数的新蛇菊苷a；约1重量百分数至4重量百分数的新蛇菊苷b；以及约1重量百分数至约4重量百分数的新蛇菊苷d。利用本发明的原则获得的结晶产物可以包含至少约80重量百分数、甚至至少约90重量百分数或者甚至至少约96重量百分数的reba。

特别有利地，本发明可以用于提高包含约60重量百分数或更少、甚至45重量百分数或更少或者甚至30重量百分数或更少的reba材料的糖苷混合物中reba材料的纯度，特别是当这样的混合物中蛇菊苷材料的量为全部糖苷的至少约10重量百分数、或者甚至全部糖苷的至少约20重量百分数、或者在一些实施方案中甚至大于reba材料的量时。这样的组合物中的reba材料可以是结晶或无定形的，但通常为至少部分地无定形的。在许多常规方法中，当reba材料以这样较低的含量水平存在于糖苷混合物中时，reba材料过于溶于溶剂如水或乙醇中而不能充分地结晶和纯化。期望地，用于这样的实施方案中的淤浆的液相包含乙醇，期望地基于并入淤浆中的溶剂的总重量的至少约80重量百分数的乙醇、或者甚至至少约90重量百分数的乙醇、或者甚至至少约95重量百分数的乙醇。

不希望受到约束，认为这样的混合物，特别是获得自天然来源时，倾向于包含相对较大量的蛇菊苷材料。蛇菊苷材料倾向于使reba材料增溶。本发明的溶剂介导的结晶处理，任选地与形式转换结晶组合，能够选择性地将reba材料分配入结晶相，尽管存在蛇菊苷材料的增溶效果，这以其他方式预期是基于常规经验的技术障碍。不希望受到理论约束，认为升高的温度尤其是85℃或更高、优选90℃或更高、更优选100℃或更高诱导甜菊醇糖苷中的构象变化，其甚至在这样不利的情况下促进reba材料的结晶。

还特别有利的是，本发明可以用于提高已经是高纯的reba材料的纯度。例如，一些常规方法可能能够产生包含约90重量百分数至约95重量百分数reba材料的晶体。虽然这样晶体对于reba材料按照许多应用标准是高纯的，但是存在期望甚至更纯的reba材料的其他标准。本发明还可以用于这样的晶体以提高reba纯度至高达96重量百分数、甚至96重量百分数至99重量百分数。

在本发明方法的一优选实施方案中，将190标准乙醇中的不纯的新蛇菊苷a的30重量百分数的淤浆加热到70℃，并且搅拌保持约1小时。然后，将包含新蛇菊苷a晶体的渗余物(retentate)产物通过过滤回收，并且将渗余物用190标准乙醇(例如约2饼(cake)重量的溶剂)洗涤。该方法使得从不纯的新蛇菊苷a组合物去除约30％的新蛇菊苷b和约50％的新蛇菊苷d。新蛇菊苷a的收率一般是约95重量百分数。

在本发明方法的另一优选实施方案中，将190标准乙醇中的不纯的新蛇菊苷a的30重量百分数的淤浆加热到70℃，并且搅拌保持约24小时。然后，将包含新蛇菊苷a晶体的渗余物产物通过过滤回收，并且将渗余物用190标准乙醇(例如约2饼重量的溶剂)洗涤。该方法使得从不纯的新蛇菊苷a组合物去除约50％的新蛇菊苷b和约50％的新蛇菊苷d。新蛇菊苷a的收率一般是约95重量百分数。

代表性的纯化的新蛇菊苷a组合物一般包含约97重量百分数或更多的新蛇菊苷a材料；约2重量百分数或更少的新蛇菊苷b材料；以及约2重量百分数或更少的新蛇菊苷d材料。可以包含在纯化的新蛇菊苷a组合物中的其他组分包括例如蛇菊苷材料、新蛇菊苷c材料和新蛇菊苷f材料。

本发明尤其优选的方面涉及一方面将reba材料从另一方面的rebb材料和/或rebd材料分离(也称为拆分)。在一个这样的方面，本发明提供一种利用被认为至少部分地发生在溶剂介导的结晶的效果来纯化不纯的新蛇菊苷a组合物的方法。不纯的新蛇菊苷a组合物包含至少一种选自新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料的杂质。期望地，至少reba材料处于乙醇结晶形式。

在其他实施方案中，reba材料可以是其他晶体形式和/或可以是无定形的。所述方法包括以下步骤(a)提供不纯的新蛇菊苷a组合物，其包含新蛇菊苷a材料以及至少一种选自新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d的杂质；(b)在合适的液体载体如乙醇中制备所述不纯的新蛇菊苷a组合物的淤浆；(c)将所述淤浆老化约1小时或更长的时间段；(d)任选地，在至少一部分老化期间，将所述淤浆加热至例如约45℃至约100℃的温度；(e)任选地，在至少一部分老化期间，将所述淤浆搅拌；以及(f)在所述老化步骤之后，将所述淤浆过滤以收集包含纯化的reba材料的晶体(渗余物)，并且将所述渗余物洗涤以提供纯化的新蛇菊苷a组合物。在纯化的新蛇菊苷a组合物中，与不纯的新蛇菊苷a组合物相比，至少一部分的至少一种杂质已经减少。

在一些方面，本发明提供一种纯化糖苷混合物如不纯的新蛇菊苷a组合物的方法，所述方法包括形式转换纯化。在这样的实施方案中，提供糖苷混合物，其中至少一种糖苷处于第一结晶形式。例如，可以提供不纯的新蛇菊苷a组合物，其包含新蛇菊苷a材料以及至少一种选自新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料的杂质。至少reba材料处于第一结晶形式，如乙醇结晶形式。可以在如上所述的淤浆中将乙醇结晶形式老化以提高就reba材料而言的晶体纯度。然后将混合物处理以将糖苷转化为第二结晶形式。例如，这可以涉及将新蛇菊苷a材料从乙醇结晶形式转化为水结晶形式。可以将水结晶形式在如上所述的淤浆中老化以提高就reba材料而言的晶体纯度。然后，可以将新蛇菊苷a材料的水结晶形式从水结晶形式转化为乙醇结晶形式。可以将该形式在如上所述的淤浆中再次老化以提高纯度。这种系列的转化帮助提供具有降低量的至少一种选自新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料的杂质的纯化的新蛇菊苷a组合物。

在一些实施方案中，将乙醇晶体形式转化为水晶体形式的步骤包括：(a)将新蛇菊苷a组合物与水组合以形成基于水的淤浆；以及(b)将所述基于水的淤浆放置足以将乙醇结晶形式转化为水结晶形式的时间段。水结晶形式可以描述为新蛇菊苷a的四水合物多晶型物。在一些实施方案中，将水晶体形式转化为乙醇晶体形式的步骤包括：(a)将新蛇菊苷a组合物与乙醇组合以形成基于乙醇的淤浆；以及(b)将所述基于乙醇的淤浆放置足以将水晶体形式转化为乙醇结晶形式的时间段。可以如上所述对于溶剂介导结晶化技术选择固体含量、溶剂特性、搅拌、温度、压力。然而，用于将水形式转化为乙醇形式的乙醇一般包含大于约93重量百分数的乙醇，尽管也可以使用其他浓度。

形式转换纯化使得从不纯的新蛇菊苷a组合物(即起始原料)去除新蛇菊苷b材料、新蛇菊苷d材料或这二者。在一些实施方案中，形式转换使得去除存在于不纯的新蛇菊苷a组合物中的高达约50％的新蛇菊苷b和高达约95％的新蛇菊苷d。

本发明的原则可以与其他纯化策略组合使用。例如pct公开文本no.wo2008/091547a2描述了一种利用溶剂/抗溶剂/溶剂技术来纯化糖苷如reba的方法。本发明可以在这样的溶剂/抗溶剂/溶剂技术之前和/或之后使用以甚至更有效和/或高效地获得纯化的reba。pct公开文本no.wo2008/091547a2整体援引加入本文用于所有目的。

本发明参考以下非限制性实施例来描述。

实施例

实施例1

将乙醇结晶形式的包含分别的90％、95％、92％的reba％和分别的2.9％、0.1％、1.0％的rebd以及分别的0.07％、3.0％、1.4％的rebb的糖苷材料的三个样品的每一个与水混合以形成水中的13％固体的淤浆。将该淤浆在室温下用磁性搅拌棒和搅拌板搅拌过夜，充分搅拌以保持所有的固体材料悬浮。在老化过夜之后，将材料过滤。所述材料包含分别的93％、95％和95％的reba，分别的2.4％、0％和0.6％的rebd以及分别的0.5％、3.9％和2.5％的rebb。每个处理在固相中回收的材料分别为进料至所述方法的总材料的88％、98％和98％。滤液在真空烘箱中干燥，并且包含分别的73％、79％、72％的reba，分别的9.6％、1.8％、8.4％的rebd以及分别0.4％、3.7％、0.5％的rebb。

实施例2

将实施例1中制备的三种材料的每一个在纯乙醇中浆化为分别的3.3％、8.8％、6.0％固体的淤浆，并在室温下搅拌过夜。在次级老化之后，再将材料过滤，用200标准乙醇洗涤并干燥。每个过滤的产物包含分别的99％、98％、98％的reba，分别的1.1％、0.0％、0.1％的rebd以及分别的0.1％、1.3％、1.0％的rebb。包括实施例1的步骤在内的固相中的材料的总收率分别为64％、83％和73％。滤液在真空烘箱中干燥，并且包含分别的86％、49％、74％的reba，分别的3.0％、0.36％、2.6％的rebd以及分别的1.6％、19％、11％的rebb。

实施例3

将实施例1中制备的三种材料的每一个在190标准乙醇中浆化为分别的6.9％、4.9％、7.2％固体的淤浆，并在室温下搅拌过夜。在次级老化之后，再将材料过滤，用190标准乙醇洗涤并干燥。每个产物包含分别的99％、99％、99％的reba，分别的0.0％、0.3％、0.3％的rebd以及分别的1.0％、0.1％、0.6％的rebb。包括实施例1的加工在内的固相中回收的材料的总收率分别为68％、45％、71％。滤液在真空烘箱中干燥，并且包含分别的74％、81％、73％的reba，分别的10％、2.3％、9.7％的rebd以及分别的0.5％、3.5％、0.5％的rebb。

实施例4

将乙醇结晶形式的包含分别的90％、95％、92％的reba％和分别的2.9％、0.1％、1.0％的rebd以及分别的0.07％、3.0％、1.4％的rebb的糖苷材料三个样品的每一个如实施例1进行加工。加工之后收集的固体材料包含分别的97％、95％、95％的reba，分别的1.1％、0％、0.65％的rebd以及分别的0.9％、3.9％、2.9％的rebb。将三个收集的固体材料的每一个在纯甲醇中分别以5.1％、6.0％、5.3％固体浆化，并在室温下搅拌过夜。在次级老化之后，将材料再次过滤，用纯甲醇洗涤并干燥。产物包含分别的99％、99％、99％的reba，分别的0.2％、0.0％、0.2％的rebd以及分别的0.2％、1.3％、0.7％的rebb。包括水中加工的第一步骤在内的固相中回收的材料总收率为41％、64％、58％。收集滤液并在真空烘箱中干燥，并且包含分别的83％、79％、72％的reba，分别的6.5％、2.7％、9.6％的rebd以及分别的0.5％、4.0％、0.4％的rebb。

实施例5

将包含93.4％的reba、2.4％的rebd和1.5％的rebb的乙醇结晶形式的材料与190标准乙醇混合以产生包含10％固体的淤浆。将该淤浆在室温下搅拌。1小时之后，将材料的样品过滤，用190标准乙醇洗涤并干燥。样品包含96％的reba、1.5％的rebd和1.6％的rebb。样品中89％的糖苷材料作为固相回收。将剩余的淤浆保持过夜，然后过滤，用190标准乙醇洗涤并干燥。在淤浆中额外的～24小时之后，来自剩余的淤浆的结晶产物包含96％的reba、1.4％的rebd和1.4％的rebb，并且剩余的淤浆的89％的糖苷材料作为固相回收。收集滤液并在真空烘箱中干燥，并且包含83％的reba、10.4％的rebd和4.9％的rebb。

实施例6

将包含93.4％的reba、2.4％的rebd和1.5％的rebb的乙醇结晶形式的材料与190标准乙醇混合以产生包含30％固体的淤浆。将该淤浆加热至70℃并搅拌。1小时之后，将样品在70℃下过滤，用190标准乙醇洗涤并干燥。样品包含96％的reba、1.8％的rebd和1.7％的rebb。样品中95％的糖苷材料作为固相回收。收集滤液并在真空烘箱中干燥，并且包含87％的reba、7.0％的rebd和3.9％的rebb。将这种取样之后剩余的淤浆保持过夜，然后过滤，用190标准乙醇洗涤并干燥。在淤浆中额外的～24小时之后，剩余的结晶产物包含98％的reba、1.3％的rebd和0.4％的rebb，并且95％的糖苷材料从剩余的淤浆作为固相回收。

实施例7

将包含93.4％的reba、2.4％的rebd和1.5％的rebb的乙醇结晶形式的材料与纯乙醇混合以产生包含30％固体的淤浆。将该淤浆加热至70℃并搅拌。1小时之后，将样品在70℃下过滤，用纯乙醇洗涤并干燥。样品包含95％的reba、2.3％的rebd和1.5％的rebb，并且样品中97％的糖苷材料作为固相回收。收集滤液并在真空烘箱中干燥，并且包含73％的reba、7.7％的rebd和17％的rebb。将剩余的淤浆保持过夜，然后在70℃下过滤，用190标准乙醇洗涤并干燥。在淤浆中额外的～24小时之后，剩余淤浆的结晶产物包含96％的reba、2.1％的rebd和1.3％的rebb，并且96％的剩余淤浆的糖苷材料作为固相回收。

实施例8

将58g无定形的甜菊醇糖苷置于94wt％乙醇中以产生具有20重量％甜菊醇糖苷的淤浆。将该淤浆置于20psig的具有搅拌器和58cm²表面积的冷却回路的500ml压力容器中。冷却回路是普通的不锈钢u形回路，总长度约40cm，略微偏离容器的中心以适应搅拌器。将容器用氮气通气。然后将淤浆在1小时内加热至100℃的整体温度，并在100℃下保持2小时。将15℃的水以60ml/min进料到冷却回路。冷却水以25℃的离开冷却回路。将压力容器以180rpm搅拌。在100℃下保持2小时之后，将混合物在30

分钟内冷却至70℃，于70℃下在布氏漏斗中过滤并用57g纯乙醇在布氏漏

斗中洗涤。收集固体，干燥并通过hplc分析。产生12g材料。

实施例9

将91g无定形的甜菊醇糖苷置于100％乙醇中以产生具有30重量％甜菊醇糖苷的淤浆。将该淤浆置于20psig的实施例8的压力容器中。将容器用氮气通气，然后将混合物在1小时内加热至100℃的整体温度，并在100℃下保持2小时，15℃入口的水以60ml/min的流速通过冷却回路，并以180rpm搅拌。冷却水的出口温度为25℃。然后将混合物在30分钟内冷却到70℃，于70℃下在布氏漏斗中过滤，并在布氏漏斗中用63g纯乙醇洗涤。将固体干燥并通过hplc分析。产生8g的材料。

实施例10

将59g乙醇结晶形式的甜菊醇糖苷置于94wt％乙醇中以产生具有19重量％甜菊醇糖苷的淤浆。将该淤浆置于20psig的实施例8的压力容器中。将容器用氮气通气。然后将淤浆在1小时内加热至100℃的整体温度，并在100℃下保持6小时，15℃入口的水以60ml/min的流速通过冷却回路，并以180rpm搅拌。冷却水的出口温度为25℃。然后将混合物在30分钟内冷却至70℃，在70℃下过滤，并用107g纯乙醇洗涤。收集固体，干燥并通过hplc分析。回收作为产物的37g材料。收集滤液，在真空烘箱中干燥并通过hplc分析。

实施例11

将59g无定形的甜菊醇糖苷置于94wt％乙醇中以产生具有19重量％甜菊醇糖苷的淤浆。将该淤浆置于20psig的实施例8的压力容器中。将容器用氮气通气。然后将淤浆在1小时内加热至100℃的整体温度，并在100℃下保持2小时，15℃入口的水以60ml/min的流速通过冷却回路，并以180rpm搅拌。冷却水的出口温度为25℃。然后将混合物在30分钟内冷却至70℃，在70℃下过滤，并在布氏漏斗中用133g纯乙醇洗涤。收集固体并通过hplc分析。产生35g材料。收集滤液，在真空烘箱中干燥并通过hplc分析。

实施例12

将60g无定形的甜菊醇糖苷置于纯乙醇中以产生具有19重量％甜菊醇糖苷的淤浆。将该淤浆置于20psig的实施例8的压力容器中。将容器用氮气通气。然后将淤浆在1小时内加热至100℃的整体温度，并在100℃下保持2小时，15℃入口的水以60ml/min的流速通过冷却回路，并以180rpm搅拌。冷却水的出口温度为25℃。然后将混合物冷却至70℃，在70℃下过滤，并用148g纯乙醇洗涤。收集固体并通过hplc分析。产生46g材料。收集滤液，在真空烘箱中干燥并通过hplc分析。

实施例13(无冷却的实施例)

将86g醇结晶的甜菊醇糖苷置于190标准乙醇中以产生具有19重量％甜菊醇糖苷的淤浆。将该淤浆置于20psig的实施例8的压力容器中。将容器用氮气通气。然后将淤浆在1小时内加热至100℃，并在100℃下保持2小时，没有冷却水流过冷却回路。将容器以180rpm搅拌。然后将混合物冷却至70℃，在70℃下过滤并用216g纯乙醇洗涤。收集固体并通过hplc分析。生产75g材料。收集滤液，干燥并用hplc分析。

实施例14(有冷却的实施例)

将86g醇结晶的甜菊醇糖苷置于190标准乙醇中以产生具有19重量％甜菊醇糖苷的淤浆。将该淤浆置于20psig的实施例8的压力容器中。将容器用氮气通气。然后将淤浆在1小时内加热至100℃，并在100℃下保持2小时，15℃入口的水以60ml/min的流速通过冷却回路。冷却水的出口温度为25℃。将容器以180rpm搅拌。然后将混合物冷却至70℃，在70℃下过滤，并用216g纯乙醇洗涤。收集固体并通过hplc分析。产生75g材料。收集滤液，干燥并通过hplc分析。

本发明的实施方案可以描述如下。

1.一种处理包含reba材料以及rebb材料或rebd材料中的至少一种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料、rebb材料或rebd材料中的至少一种的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供淤浆，所述淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料以及新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料中的至少一种，其中所述淤浆包括固相和液相；

b)在独立地高于约40℃的一个或多个升高的温度下将所述淤浆老化，所述老化进行足以使所述固相就所述新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料中的至少一种而言变得更纯的时间段；

c)将加热的混合物过滤以分离所述固相和液相，其中所述混合物在至少一部分所述过滤期间处于至少40℃的温度下；以及

d)在所述固相和液相中的至少一个中回收至少一种糖苷。

2.项目1的方法，其中步骤(d)包括回收包含reba材料的固相。

3.项目1的方法，其中步骤(d)包括回收包含rebb材料和rebd材料中的至少一种的液相。

4.项目3的方法，其还包括加工所述液相以回收包含rebb材料和rebd材料中的至少一种的固相的步骤。

5.项目1的方法，其中在步骤(a)中提供的淤浆包含约20重量百分数至约96重量百分数的reba材料。

6.项目1的方法，其中在步骤(a)中提供的淤浆包含总共至少约3重量百分数的rebb材料和rebd材料。

7.项目1的方法，其中在步骤(a)中提供的淤浆包含总共至少约6重量百分数的rebb材料和rebd材料。

8.项目1的方法，其中于步骤(b)中，在一定的条件下处理所述淤浆，使得得自步骤(c)的固相包含至少80重量百分数的reba材料。

9.项目1的方法，其中于步骤(b)中，在一定条件下处理所述淤浆，使得得自步骤(c)的固相包含至少90重量百分数的reba材料。

10.项目1的方法，其中于步骤(b)中，在一定条件下处理所述淤浆，使得得自步骤(c)的固相包含至少96重量百分数的reba材料。

11.项目1的方法，其中于步骤(b)中，在一定条件下处理所述淤浆，使得得自步骤(c)的固相包含结晶相，所述结晶相包括总共高达约3重量百分数的新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料。

12.项目1的方法，其中步骤(a)至(d)的至少一个中的液相包含至少一种醇。

13.项目12的方法，其中所述醇是含水醇。

14.项目1的方法，其中步骤(a)至(d)的至少一个中的液相包含选自乙醇、异丙醇、甲醇、正丁醇及其组合的醇。

15.项目14的方法，其中所述醇是含水醇。

16.项目1的方法，其中步骤(a)至(d)的至少一个中的液相包含水。

17.项目1的方法，其中在步骤(a)中提供的淤浆包含reba材料、rebb材料和rebd材料中的至少一种的醇结晶形式。

18.项目1的方法，其中老化在至少约50℃的温度下进行。

19.项目1的方法，其中老化在至少约70℃的温度下进行。

20.项目1的方法，其中老化在至少约70℃的温度和高于环境压力的压力下进行。

21.项目1的方法，其中老化在约1.1atm至约30atm的范围内的绝对压力下进行。

22.项目1的方法，其中老化在约1.1atm至约10atm的范围内的绝对压力下进行。

23.项目1的方法，其中老化在约1.1atm至约5atm的范围内的绝对压力下进行。

24.项目1的方法，其中老化在冷却面的存在下以混合进行，所述冷却面处于低于所述混合物的整体温度的温度下。

25.项目24的方法，其中至少一部分所述冷却面处于低于约40℃的温度下。

26.一种处理包含reba材料、rebb材料或rebd材料中的两种或更多种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料、rebb材料或rebd材料中的至少一种的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供淤浆，所述淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料，其中所述淤浆包括固相和液相；以及

b)在独立地高于约85℃的一个或多个升高的温度下将所述淤浆老化，所述老化进行足以满足以下情况中的至少一种的时间段和在足以满足以下情况中的至少一种的条件下进行：(i)所述固相就reba材料而言相对于rebb材料和rebd材料中的至少一种变得更纯；和/或(ii)所述液相就rebb材料和rebd材料中的至少一种而言相对于reba材料变得更纯。

27.项目26的方法，其还包括在老化之后回收所述固相中的reba材料的步骤。

28.项目26的方法，其还包括在老化之后回收所述液相中的rebb材料和rebd材料中的至少一种的步骤。

29.项目28的方法，其还包括加工所述液相以回收包含rebb材料和rebd材料中的至少一种的固相的步骤。

30.项目26的方法，其中老化在高于环境压力的绝对压力下进行。

31.项目26的方法，其中老化在约1.1atm至约30atm的范围内的绝对压力下进行。

32.项目26的方法，其中老化在约1.1atm至约10atm的范围内的绝对压力下进行。

33.项目26的方法，其中老化在约1.1atm至约5atm的范围内的绝对压力下进行。

34.项目26的方法，其中步骤(a)中提供的淤浆包含基于所述淤浆中的糖苷的总重量的小于约60重量百分数的reba材料，并且其中所述液相包含乙醇。

35.项目26的方法，其中步骤(a)中提供的淤浆包含基于所述淤浆中的糖苷的总重量的小于约45重量百分数的reba材料，并且其中所述液相包含乙醇。

36.项目26的方法，其中步骤(a)中提供的淤浆包含基于所述淤浆中的糖苷的总重量的小于约30重量百分数的reba材料，并且其中所述液相包含乙醇。

37.项目26的方法，其中步骤(a)中提供的淤浆中至少一部分reba材料是无定形的。

38.项目26的方法，其中步骤(a)中提供的淤浆包含基于所述淤浆中的糖苷的总重量的小于约45重量百分数的reba材料和至少10重量百分数的蛇菊苷材料，并且其中所述液相包含乙醇。

39.项目26的方法，其中步骤(a)中提供的淤浆包含基于所述淤浆中的糖苷的总重量的小于约45重量百分数的reba材料和至少20重量百分数的蛇菊苷材料，并且其中所述液相包含乙醇。

40.项目26的方法，其中老化在冷却面的存在下以混合进行，所述冷却面处于低于所述混合物的整体温度的温度下。

41.项目40的方法，其中至少一部分所述冷却面处于低于约40℃的温度下。

42.一种处理包含reba材料、rebb材料或rebd材料中的两种或更多种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料、rebb材料或rebd材料中的至少一种的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供淤浆，所述淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料，其中所述淤浆包括固相和液相；

b)在独立地高于约40℃的一个或多个升高的温度下于容器中将所述淤浆老化，所述老化进行足以使所述固相和/或所述液相中的至少一个就所述新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料中的至少一种而言变得更纯的时间段；以及

c)在至少一部分所述老化期间，将加热的淤浆搅拌并使所述加热的淤浆的连续部分接触冷却面。

43.项目42的方法，其还包括在老化之后回收所述固相中的reba材料的步骤。

44.项目42的方法，其还包括在老化之后回收所述液相中的rebb材料和rebd材料中的至少一种的步骤。

45.项目44的方法，其还包括加工所述液相以回收包含rebb材料和rebd材料中的至少一种的固相的步骤。

46.项目42的方法，其中所述搅拌的淤浆具有整体温度，并且至少一部分所述冷却面处于低于所述搅拌的淤浆的整体温度的温度下。

47.项目42的方法，其中至少一部分所述冷却面处于低于约40℃的温度下。

48.项目42的方法，其中至少一部分所述冷却面处于低于约30℃的温度下。

49.项目42的方法，其中所述冷却面由热交换器提供，一部分所述搅拌的淤浆通过所述热交换器从所述容器抽出并返回所述容器。

50.一种处理包含reba材料、rebb材料或rebd材料中的两种或更多种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收reba材料的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供第一淤浆，所述第一淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料，其中所述第一淤浆包括固相和液相，所述液相包含第一溶剂；

b)将所述第一淤浆老化，所述老化进行足以使所述固相就reba材料而言变得更纯的时间段；

c)将步骤(b)中获得的至少一部分固相并入第二淤浆，其中所述第二淤浆包括固相和液相，所述液相包含具有不同于所述第一溶剂的组成的第二溶剂；以及

d)将所述第二淤浆老化，所述老化进行足以使所述固相就reba材料而言变得更纯的时间段。

51.项目50的方法，其中所述第一溶剂包含醇，并且所述第二溶剂包含至少约80重量百分数的水。

52.项目51的方法，其中所述醇是乙醇。

53.项目52的方法，其中所述醇是含水醇。

54.项目50的方法，其中所述第一溶剂包含至少约80重量百分数的水，并且所述第二溶剂包含至少约80重量百分数的醇。

55.一种处理包含reba材料以及rebb材料或rebd材料中的至少一种的糖苷混合物以帮助以更纯的形式回收rebb材料或rebd材料中的至少一种的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供第一淤浆，所述第一淤浆包含糖苷，所述糖苷包括至少新蛇菊苷a材料、新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料，其中所述第一淤浆包括固相和液相，所述液相包含第一溶剂；

b)将所述第一淤浆老化，所述老化进行足以使所述液相就rebb材料或rebd材料中的至少一种而言变得更纯的时间段；

c)将步骤(b)中获得的至少一部分液相并入第二淤浆，其中所述第二淤浆包括固相和液相，所述液相包含具有不同于所述第一溶剂的组成的第二溶剂；以及

d)将所述第二淤浆老化，所述老化进行足以使所述第二淤浆的液相就rebb材料或rebd材料中的至少一种而言变得更纯的时间段。

56.一种纯化不纯的新蛇菊苷a组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供不纯的新蛇菊苷a组合物，所述组合物包含新蛇菊苷a材料以及至少一种选自新蛇菊苷b材料和新蛇菊苷d材料的杂质，其中至少一部分所述新蛇菊苷a材料处于第一结晶形式；

(b)将至少一部分所述新蛇菊苷a材料从所述第一形式转化为第二结晶形式；以及

(c)将至少一部分所述新蛇菊苷a材料的第二结晶形式转化为第三结晶形式，所述第三结晶形式任选地与所述第一结晶形式相同。

57.项目56的方法，其中所述第一和第二结晶形式中的至少一种是醇结晶形式，并且另一种是水结晶形式。

58.项目56的方法，其中所述第一结晶形式是醇结晶形式。

59.项目56的方法，其中所述第一结晶形式是醇结晶形式，并且所述第二结晶形式是水结晶形式。

60.项目57或59的方法，其中所述水结晶形式是四水合物。

61.根据项目1、26、42、50、55或56中任一项生产的甜味剂组合物。

62.包含项目61的甜味剂组合物的食品或饮料产品。

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