1.一种构建植物中pre-miRNA 3’RACE-seq文库的方法,包括如下:
(1)、植物总RNA的提取;
(2)、RNA的准备:
利用SDS-PAGE对所提取的植物总RNA进行分离,对50bp-400bp之间的RNA进行切胶回收;
其特征在于,
(3)、连接:
回收好的RNA的长度集中在50bp-400bp,通过连接酶在RNA的3’末端连接一种特殊的DNA接头,其序列如序列表SEQ ID No.1所示;
(4)、反转录:
利用反转录试剂盒,对已经加好接头的RNA进行反转录,反转录成cDNA;
(5)、巢式PCR反应:
利用5’端的特殊引物,以步骤(4)的反转录cDNA为模板,进行第一轮PCR;PCR产物跑PAGE胶回收后,再利用第二轮引物进行第二轮PCR,PCR产物回收后送去测序。
2.根据权利要求1所述的一种构建植物中pre-miRNA 3’RACE-seq文库的方法,其特征在于,步骤(5)第一轮PCR,上引物如序列表SEQ ID No.2-SEQ ID No.79所示,下引物如序列表SEQ ID No.80所示;
第二轮PCR,上引物如序列表SEQ ID No.81所示,下引物如序列表SEQ ID No.82所示。