一种TaqMan‑MGB探针法检测人类ADH1B基因多态性的引物及其应用的制作方法

文档序号:12697907阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种TaqMan-MGB探针法检测人类ADH1B基因多态性的引物,其特征在于,包括如下核酸序列:

(1)扩增ADH1B基因rs1229984多态性位点的引物对,其核苷酸序列SEQ ID NO.:1和SEQ ID NO.:2所示;

(2)用于检测ADH1B基因rs1229984多态性位点的TaqMan-MGB探针,其核苷酸序列SEQ ID NO.:3和SEQ ID NO.:4所示,其中SEQ ID NO.:3在5’末端标记Fam信号,SEQ ID NO.:4在5’末端标记VIC信号;

上述引物对和荧光探针对在一次检测中共同使用。

2.权利要求1所述的TaqMan-MGB探针法检测人类ADH1B基因多态性的引物在检测ADH1B基因多态性中的应用。

3.一种TaqMan-MGB探针法用于检测人类ADH1B基因多态性的试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括权利要求1所述的引物和探针。

4.根据权利要求3所述的TaqMan-MGB探针法用于检测人类ADH1B基因多态性的试剂盒,其特征在于,包括2x PCR反应混合液,阳性标准品。

5.根据权利要求4所述的TaqMan-MGB探针法用于检测人类ADH1B基因多态性的试剂盒,其特征在于,所述2x PCR反应混合液的配方如下:10mM Tris-HCL、2mMMgCl2、50mM KCL、0.2mM dNTPs、2U/μL Taq DNA聚合酶。

6.一种TaqMan-MGB探针法用于检测人类ADH1B基因多态性的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)提取人外周血基因组DNA;

(2)分别以提取的人外周血基因组DNA和阳性标准品为模板、权利要求1和2中的引物、探针、PCR反应混合液,进行实时荧光定量PCR反应;

(3)根据检测到的荧光信号值对rs1229984位点进行基因型判定。

7.根据权利要求5所述的TaqMan-MGB探针法用于检测人类ADH1B基因多态性的方法,其特征在于,步骤(2)中,实时荧光定量PCR反应的扩增体系为:总体积20μL,2x PCR反应混合液10uL,SEQ ID NO.:1 0.2uM,SEQ ID NO.:2,0.2uM,SEQ ID NO.:1 0.2uM,SEQ ID NO.:1 0.2uM,模板DNA 50ng。

8.根据权利要求5所述的TaqMan-MGB探针法用于检测人类ADH1B基因多态性的方法,其特征在于,步骤(2)中,实时荧光定量PCR反应中的扩增程序为:95℃,2min;95℃,5s,60℃,45s,收集荧光,40个循环。

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