本发明属于细胞资源储存服务技术领域，具体地说，涉及一种细胞资源储存服务方法。
背景技术：
近年来随着现代医学的发展，细胞治疗技术的出现，使得医疗技术不断取得振奋人心的进步。细胞治疗技术主要分为干细胞治疗和免疫细胞两大类。
干细胞移植治疗是指把健康的干细胞移植到患者体内，以达到修复或替换受损细胞或组织，从而达到治愈的目的。因干细胞可以分化成多种功能细胞或组织器官，干细胞移植治疗范围很广，一般能治疗神经系统疾病、免疫系统疾病、还有其他的一些内外科疾病。免疫细胞治疗技术通过调节免疫系统能有效清除和杀灭癌细胞。被称为继传统手术、放疗、化疗后的第四种肿瘤治疗方法。
细胞储存是指通过一定的方法将健康的细胞通过某种技术进行深度低温保存，维持细胞的功能和活性不受明显的影响。将自身或异体的健康的细胞储存起来，可以在自身或亲属患病时启用细胞治疗方法，使一些病症能得到有效治疗，为生命储存一份保险。
随着细胞治疗技术日益成熟、细胞储存费用大幅下降及需求扩大，公众的细胞资源储存服务需求日益明显，则需要建立一套系统化的细胞资源储存服务方法，以点带面服务区域范围内的公众，满足细胞资源储存服务的需求。
技术实现要素：
本发明克服了现有技术中的缺点，提供了一种细胞资源储存服务方法，将自身或异体的健康细胞资源储存起来，可以在自身或亲属患病时很方便的取出用于治疗，为生命储存一份保险。
为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：
一种细胞资源储存服务方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)建立细胞资源储存服务点；
2)客户在上述服务点提供细胞来源组织样本及待检血样，并采集客户个人身份信息；
3)细胞来源组织样本运送细胞制备中心，细胞制备中心生成样本细胞唯一识别码并与个人身份信息相关联；对细胞来源组织样本及待检血样的检测；细胞来源组织样本的处理并从中分离目标细胞；目标细胞的扩大培养；目标细胞的特性检测；目标细胞的冻存；目标细胞进入细胞库深低温储存；
4)目标细胞质量的年度检测；
5)各项信息及数据上传云端服务器；
6)客户根据唯一识别码在云端服务器获取数据结果。
进一步，所述细胞资源包括成体干细胞、ips细胞或免疫细胞，所述成体干细胞包括间充质干细胞、造血干细胞或神经干细胞。
进一步，步骤1)中，所述细胞资源储存服务点设置在医院、学校、美容院、社区，以就近的原则使公众获取服务。
进一步，所述步骤2)中所述细胞来源组织样本包括脐带、胎盘、脂肪、羊水、牙髓、皮肤、子宫蜕膜、脐血、外周血或经血。
进一步，步骤3)所述细胞来源组织样本运送细胞制备中心的过程中，组织样本放置于专用的样本运输装置内，运输全程配有温湿度记录装置对组织样本进行监测，确保组织样本的生物学活性。
进一步，步骤3)中，待检血样的检测项目包括血常规检测、疱疹病毒(eb)；巨细胞病毒(cmv)；艾滋病毒(hiv)；梅毒螺旋体(tp)；乙肝病毒(hbv)；丙肝病毒(hcv)；嗜t细胞病毒(htlv)的检测。
进一步，步骤3)中，分离目标细胞的方法有酶消化法、组织块贴壁法或密度梯度离心法，所述的酶消化法为利用消化酶组织样本，将组织样本解离成单个细胞，所述的消化酶为胰蛋白酶、胶原酶或透明质酸酶，所述的组织块贴壁法为将组织样本剪碎为1-2mm3大小的组织块，然后直接接种于细胞培养瓶或培养板中培养，细胞会沿组织块边沿游出，所述的密度梯度离心法用于血液样本的处理及从中获取目标细胞，是指将血液样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，在一定的离心力下把不同细胞分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法。
进一步，步骤3)中，目标细胞的扩大培养的步骤为：原代目标细胞融合率达到80％，可利用消化酶将贴壁细胞脱离培养瓶或培养皿底部，离心后移除上清液，并加入新的细胞培养基重悬细胞，接种于新的细胞培养瓶或进行传代，并进行扩增培养；此后每2-5天换液一次直至融合率达到80％后，即得，必要时再进行传代；
目标细胞的特性检测项目：细胞数量测定、细胞活动测定、细胞特异性表面标记的检测、细菌检测、真菌检测、支原体检测或内毒素检测；
目标细胞的冻存步骤为配制组织冻存液，4℃条件下低温冷藏，然后按每管1ml分装到冻存管中，使用程序降温系统进行梯度降温至-80℃；
所述的细胞库为保存多种组织来源成体干细胞、ips细胞或免疫细胞，所述成体干细胞包括：脐带、胎盘、脂肪、羊水、牙髓、皮肤、子宫蜕膜、脐血、外周血或经血，细胞库设有液氮罐，液氮罐中温度稳定维持在-196℃，可长时间保证细胞的功能和活性不发生明显变化。
进一步，步骤4)中细胞质量的年度检测项目包括细胞存活率、细胞回收率、生长曲线、培养形态、或特异性细胞表面标记，另外干细胞还需检测其分化能力或集落形成能力。
进一步，步骤5)中所述的各项信息包括个人身份信息、目标细胞特性检测结果、目标细胞质量年度检测和细胞来源组织样本及待检血样的检测结果及细胞储存的具体位置及细胞储存状态。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明为公众提供一种细胞资源储存服务，将自身或异体的健康细胞资源储存起来，可以在自身或亲属患病时取出用于治疗，为生命储存一份保险，将个人身份信息和储存细胞的各类信息相关联，用户通过远程云端服务器直接查询并获取信息，向用户提供方便快捷的系统化细胞资源储存服务，用户只需在服务点提供细胞来源组织样本及相关信息，就可将细胞资源深度长期储存在细胞库中。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制，在附图中：
图1是本发明所述一种细胞资源储存服务的流程图。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
如图1所示，本发明所述一种细胞资源储存服务包括以下步骤：
1)建立细胞资源储存服务点
细胞资源储存服务点一般设置在医院、学校、美容院、社区等，以就近的原则使公众获取服务。
其中，所述细胞资源储存服务点具有多个，多个所述细胞资源储存服务点以点成面的方式分布于有效运输半径的区域内，并带动区域内的公众在该细胞资源储存服务点上获取服务。
2)客户在细胞资源储存服务点提供细胞来源组织样本及待检血样
客户在细胞资源储存服务点提供所要储存的目标细胞来源组织样本及待检血样。
细胞来源组织样本可以是脐带、胎盘、脂肪、羊水、牙髓、皮肤、子宫蜕膜、脐血、外周血、经血等样本。
待检血样为抽取客户外周静脉血5ml各2管，一管含有抗凝剂，另一含抗凝剂，分别分离血细胞和血清，用于后续各项指标的检测。
采集客户个人身份信息
细胞资源储存服务点的工作人员采集和录入客户个人身份信息，该身份信息包括：姓名，联系方式，遗传病史等数据。
3)细胞来源组织样本运送细胞制备中心
细胞来源组织样本运送细胞制备中心的过程中，组织样本放置于专用的样本运输装置内，运输全程配有温湿度记录装置对组织样本进行监测，确保组织样本的生物学活性。
生成样本细胞唯一识别码并与个人身份信息相关联
样本细胞唯一识别可以是二维码、条形码，也可以使其他字符标识，但是这些标识均应该与所述客户的个人身份信息相关联。
细胞来源组织样本及待检血样的检测
组织样本的检测项目包括无菌检测和真菌检测。待检血样的检测项目包括血常规检测、疱疹病毒(eb)；巨细胞病毒(cmv)；艾滋病毒(hiv)；梅毒螺旋体(tp)；乙肝病毒(hbv)；丙肝病毒(hcv)；嗜t细胞病毒(htlv)的检测。以上各项检测均可通过第三方有资质的机构检测。
脐带样本的处理并从中分离间充质干细胞
脐带组织样本作为一种细胞来源组织样本，间充质干细胞一种储存的目标细胞。
取全长约5cm的脐带组织样本，表面经75％乙醇消毒清洗后剪切成合适长度的小段，分离脐带表面的羊膜和脐带内的血管撕取脐带内的沃顿胶组织并清洗，均匀剪碎成1-2mm3小块。天平称量3g的沃顿胶组织碎块，分别加入10ml完全培养基。吸取之前加入完全培养基的人脐带沃顿胶组织种入细胞培养瓶。
胎盘样本的处理并从中分离间充质干细胞
胎盘组织样本作为一种细胞来源组织样本，间充质干细胞一种储存的目标细胞。
手术器械完整分离胎盘组织边缘连接的绒毛膜组织及附着于上面的组织，用组织保护液清洗血液和血凝块。用手术器械刮取壁蜕膜组织、绒毛膜组织和羊膜组织，将其清洗。清洗后，分别收集3g组织量于离心管中。将组织剪碎，加入ⅰ型胶原酶，37℃1500rpm/分钟震荡消化2h。用5ml完全培养基终止消化，将消化后组织液用组织保护液稀释至100ml。将离心管放入离心机离心，离心参数：2000rpm,10min。移弃上清，用组织保护液再次稀释至100ml。将细胞悬液再次离心，离心参数：1200rpm,10min。移弃上清，用10ml完全培养基重悬细胞沉淀得细胞悬液。将绒毛膜、壁蜕膜和羊膜的细胞悬液分别种一个细胞瓶。
羊水样本的处理并从中分离羊水干细胞
羊水样本作为一种细胞来源组织样本，羊水干细胞一种储存的目标细胞。
在无菌条件下，先将10ml羊水样本通过用200目标准筛过滤，以除去较大的组织碎片。1000r/min，离心10min，弃去上清液，收集下层细胞；加入羊水样本保护液溶液，混匀,置37℃处理5min；1000r/min，离心10min，弃去上清液，收集下层细胞；加入羊水样本保护液溶液，混匀，置37℃处理5min；1000r/min，离心10min，弃去上清液，收集下层细胞，加入羊水干细胞专用培养液后接种于细胞瓶中。
牙齿样本的处理并从中分离牙髓干细胞
牙齿样本作为一种细胞来源组织样本，牙髓干细胞一种储存的目标细胞。
取儿童乳牙或成年阻生智齿,用齿轮钻在培养皿中纵向或横向将牙冠切掉，用取髓针去除牙髓组织。将取出的牙髓组织放入离心管中。用生理盐水润洗培养皿2-3次，收集润洗液，转移进ep管中。用眼科剪适当剪碎牙髓组织，与消化液1:1混合，37℃消化1h。轻轻吹打组织块，使细胞离散成单个细胞悬液。生理盐水洗涤1-2遍，2000rpm,10min,去上清。用含完全培养基重悬细胞，接种于培养瓶或中。
脂肪样本的处理并从中分离脂肪干细胞
脂肪样本作为一种细胞来源组织样本，脂肪干细胞一种储存的目标细胞。
30g脂肪组织置于采集瓶50ml生理盐水中，剧烈晃动3min以充分洗涤脂肪组织，接着静止3-5min，使不同相分离，吸去下层水相；重复以上操作3-5次，直到下层液较为清澈。移液管，去吸头，于脂肪采集瓶先吸取下层红色液体弃掉，剩余上层脂肪混匀后进行分装。将脂肪组织混合物分装到二个50ml离心管中。加入等体积胶原酶溶液，37℃，150rpm，消化直到看起来较为平滑。分离基质血管组分(svf)：2000rpm离心10min。用移液管自上而下小心除去上层油脂和下层的胶原酶溶液。生理盐水重悬细胞，吹散，将消化后的组织用100um细胞滤网过滤后，300g离心10min。离心后加脂肪干细胞培养基充分混匀，接种于细胞培养瓶中。
外周血样本的处理并从中分离免疫细胞
外周血样本作为一种细胞来源组织样本，免疫细胞干细胞一种储存的目标细胞。
离心管中加入20ml人淋巴细胞分离液，制成分离液管，常温备用。pbs悬浮的血细胞缓慢加入淋巴细胞分离液，2000rpm离心20min(升7降0)；离心后的离心管中由上到下分为四层：第一层为血浆层；第二层为环状乳白色淋巴细胞层；第三层为分离液层；第四层为红细胞层；收集第二层白膜层细胞，分别缓慢加入到2支含5-10ml细胞洗涤液的50ml离心管中，轻柔吹打混匀，并用细胞洗涤液重悬细胞并补至50ml，1800rpm离心10min；弃上清，向其中加10ml的空白细胞培养液x-vivo15，制成细胞悬液，混匀。
间充质干细胞的扩大培养
间充质细胞干细胞作为一种储存的目标细胞。
原代间充质干细胞细胞融合率达到80％左右，可利用消化酶将贴壁细胞脱离培养瓶或培养皿底部，离心后移除上清液，并加入新的细胞培养基重悬细胞，接种于新的细胞培养瓶或进行传代，并进行扩增培养；此后每2-5天换液一次直至融合率达到80％后，即得，必要时再进行传代。
扩大培养方法同样适用于羊水干细胞、牙髓干细胞、脂肪干细胞、皮肤干细胞或其他贴壁细胞的扩大培养。
间充质干细胞的特性检测
目标细胞的特性检测项目：细胞数量测定、细胞活动测定、细胞特异性表面标记的检测、细菌检测、真菌检测、支原体检测、内毒素检测等。
采用细胞计数仪进行细胞数量测定和细胞活动测定的，采用流式细胞仪检测细胞特异性表面标记，细菌检测、真菌检测、支原体检测、内毒素检测可送往第三方有资质的机构检测。
目标细胞的冻存
目标细胞的冻存步骤为配制组织冻存液，4℃条件下低温冷藏，然后按每管1ml分装到冻存管中，使用程序降温系统进行梯度降温至-80℃。
利用细胞冻存液重悬，调整细胞密度为2×106个/ml，分装入冻存管中，封盖，并做好编号，立即使用程序降温仪进行程序式降温，；
程序如下：先于4℃平衡20min，然后以1℃/min的速度降至-5℃，接着以21℃/min的速度降至-50℃，再以10℃/min的速度升温至-21℃，然后以2℃/min的速度降至-40℃，接着以10℃/min的速度降至-80℃。
目标细胞进入细胞库深低温储存
将实施例15中-80℃的细胞，置于-196℃细胞库中液氮罐中，深度储存，记录细胞储存的位置。
4)目标细胞质量的年度检测
细胞质量的年度检测项目包括细胞存活率、细胞回收率、生长曲线、培养形态、特异性细胞表面标记等，另外干细胞还需检测其分化能力或集落形成能力。
采用细胞计数仪进行细胞存活率和细胞回收率，采用流式细胞仪检测特异性细胞表面标记，生长曲线测定采用cck-8法，培养形态通过显微镜观察，干细胞分化能力通过成脂、成骨和成软骨三系分化判定。
5)各项信息及数据上传云端服务器
各项信息包括个人身份信息、目标细胞特性检测结果、目标细胞质量年度检测和细胞来源组织样本及待检血样的检测结果及细胞储存的具体位置及细胞储存状态等。
客户根据唯一识别码在云端服务器获取数据结果
6)客户通过样本细胞唯一识别码在远程云端服务器上获取登记的各项信息及数据结果。
最后应说明的是：以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，但是凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。