本发明涉及活性胶原蛋白肽的提取工艺，具体涉及从猪皮中提取胶原蛋白的酸酶结合法。
背景技术：
胶原蛋白又叫胶原，是一种含糖蛋白质，在自然界分布广泛，主要分布在哺乳动物的结缔组织中，作为皮肤、骨骼、肌腱、韧带、血管的构成材料。胶原特有的空间结构赋予其优异的理化性质和生物活性-生物相容性、生物可降解性和低抗原性等，从而成为目前研究和应用最为广泛的一类结构蛋白，在食品、化妆品、组织工程和生物医学材料等领域得到了广泛应用。
目前，从动物组织中提取胶原的方法主要有单独使用或联用酸法、碱法、酶解法及热水抽提法。其中，酸法、碱法和热水抽提法胶原溶出率很低，且酸法、碱法对环境污染严重，水抽提法得到的往往是胶原的变性产物，而酶法转移性强、破坏性小，能更好地获得活性胶原，但水解不够彻底。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明的目的是从猪皮中提取胶原蛋白的酸酶结合法，本提取方法采用醋酸和胃蛋白酶相结合，对环境无污染、保留活性成分，且提取率高，同时提高猪皮的利用率。
为了达到上述目的，本发明采取的技术方案是：
从猪皮中提取胶原蛋白的酸酶结合法，包括以下步骤：
(1)将猪皮皮下脂肪和表面的毛发剔除干净，利用蒸馏水彻底洗净后，切成猪皮小颗粒状，再用蒸馏水润洗一遍，沥干水；
(2)在40℃条件下，用体积比为5:3的异丙醇个乙酸乙酯混合有机溶剂，按照料液比为1:4m/v对猪皮颗粒脱脂4.5h，然后用蒸馏水反复润洗猪皮颗粒直至无有机溶剂气味，沥干水后，置于-20℃条件下保存备用；
(3)将脱脂后的猪皮颗粒置于醋酸中，按与猪皮质量比为0.012～0.013mg/g加入胃蛋白酶，置于温度为3～5℃的条件下提取55～65h；
(4)待提取结束后，加入氯化钠粉末进行盐析出胶原絮状沉淀，然后将胶原絮状沉淀溶于0.4mol/L醋酸溶液中，再注入透析袋内并先后于0.02mol/L的磷酸钠溶液和蒸馏水中透析3～4天后，用硝酸银溶液检测透析液至无浑浊现象为止，真空冷冻干燥后即可得到产品。
作为优选技术方案，为了使猪皮中的胶原蛋白尽可能溶解于胃蛋白酶，有利于提高胶原蛋白的提取率，同时避免胃蛋白酶的浪费，所述步骤(3)中加入胃蛋白酶与猪皮的质量比0.0125mg/g。
作为优选技术方案，为了使猪皮中的胶原蛋白尽可能溶解于胃蛋白酶，有利于提高胶原蛋白的提取率，同时防止提取过长浪费能源，所述步骤(3)中提取60h。
作为优选技术方案，为了保证温度合适，使猪皮中的胶原蛋白尽可能溶解于胃蛋白酶，有利于提高胶原蛋白的提取率，所述步骤(3)中置于温度为4℃的条件下提取。
作为优选技术方案，为了尽可能使猪皮中的胶原蛋白都溶解出来，提高提取率，同时防止猪皮颗粒太小损坏胶原蛋白，所述步骤(1)中的猪皮小颗粒状的规格为4.5mm×4.5mm。
与现有技术相比，本发明具有的效益：本发明采用醋酸和胃蛋白酶相结合提取，一方面对环境无污染，另一方面完好保留胶原蛋白的活性成分，同时在酶用量为0.0125mg/g、提取时间60h、提取温度为4℃最优提取条件下提取，胶原蛋白的提取率高达19.87％，提取率高，且使猪皮得到最大利用价值，且该方法简单、易于操作、提取成本低，适合工业化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地说明。
实施例1
从猪皮中提取胶原蛋白的酸酶结合法，包括以下步骤：
(1)将猪皮皮下脂肪和表面的毛发剔除干净，利用蒸馏水彻底洗净后，切成4.5mm×4.5mm的猪皮小颗粒状，再用蒸馏水润洗一遍，沥干水；
(2)在40℃条件下，用体积比为5:3的异丙醇个乙酸乙酯混合有机溶剂，按照料液比为1:4m/v对猪皮颗粒脱脂4.5h，然后用蒸馏水反复润洗猪皮颗粒直至无有机溶剂气味，沥干水后，置于-20℃条件下保存备用；
(3)将脱脂后的猪皮颗粒置于醋酸中，按与猪皮质量比为0.012mg/g加入胃蛋白酶，置于温度为3℃的条件下提取55h；
(4)待提取结束后，加入氯化钠粉末进行盐析出胶原絮状沉淀，然后将胶原絮状沉淀溶于0.4mol/L醋酸溶液中，再注入透析袋内并先后于0.02mol/L的磷酸钠溶液和蒸馏水中透析3～4天后，用硝酸银溶液检测透析液至无浑浊现象为止，真空冷冻干燥后即可得到产品。
实施例2
从猪皮中提取胶原蛋白的酸酶结合法，包括以下步骤：
(1)将猪皮皮下脂肪和表面的毛发剔除干净，利用蒸馏水彻底洗净后，切成猪皮小颗粒状，再用蒸馏水润洗一遍，沥干水；
(2)在40℃条件下，用体积比为5:3的异丙醇个乙酸乙酯混合有机溶剂，按照料液比为1:4m/v对猪皮颗粒脱脂4.5h，然后用蒸馏水反复润洗猪皮颗粒直至无有机溶剂气味，沥干水后，置于-20℃条件下保存备用；
(3)将脱脂后的猪皮颗粒置于醋酸中，按与猪皮质量比为0.0122mg/g加入胃蛋白酶，置于温度为3.5℃的条件下提取57h；
(4)待提取结束后，加入氯化钠粉末进行盐析出胶原絮状沉淀，然后将胶原絮状沉淀溶于0.4mol/L醋酸溶液中，再注入透析袋内并先后于0.02mol/L的磷酸钠溶液和蒸馏水中透析3～4天后，用硝酸银溶液检测透析液至无浑浊现象为止，真空冷冻干燥后即可得到产品。
实施例3
从猪皮中提取胶原蛋白的酸酶结合法，包括以下步骤：
(1)将猪皮皮下脂肪和表面的毛发剔除干净，利用蒸馏水彻底洗净后，切成4.5mm×4.5mm的猪皮小颗粒状，再用蒸馏水润洗一遍，沥干水；
(2)在40℃条件下，用体积比为5:3的异丙醇个乙酸乙酯混合有机溶剂，按照料液比为1:4m/v对猪皮颗粒脱脂4.5h，然后用蒸馏水反复润洗猪皮颗粒直至无有机溶剂气味，沥干水后，置于-20℃条件下保存备用；
(3)将脱脂后的猪皮颗粒置于醋酸中，按与猪皮质量比为0.0124mg/g加入胃蛋白酶，置于温度为4℃的条件下提取60h；
(4)待提取结束后，加入氯化钠粉末进行盐析出胶原絮状沉淀，然后将胶原絮状沉淀溶于0.4mol/L醋酸溶液中，再注入透析袋内并先后于0.02mol/L的磷酸钠溶液和蒸馏水中透析3～4天后，用硝酸银溶液检测透析液至无浑浊现象为止，真空冷冻干燥后即可得到产品。
实施例4
从猪皮中提取胶原蛋白的酸酶结合法，包括以下步骤：
(1)将猪皮皮下脂肪和表面的毛发剔除干净，利用蒸馏水彻底洗净后，切成猪皮小颗粒状，再用蒸馏水润洗一遍，沥干水；
(2)在40℃条件下，用体积比为5:3的异丙醇个乙酸乙酯混合有机溶剂，按照料液比为1:4m/v对猪皮颗粒脱脂4.5h，然后用蒸馏水反复润洗猪皮颗粒直至无有机溶剂气味，沥干水后，置于-20℃条件下保存备用；
(3)将脱脂后的猪皮颗粒置于醋酸中，按与猪皮质量比为0.0127mg/g加入胃蛋白酶，置于温度为4.5℃的条件下提取63h；
(4)待提取结束后，加入氯化钠粉末进行盐析出胶原絮状沉淀，然后将胶原絮状沉淀溶于0.4mol/L醋酸溶液中，再注入透析袋内并先后于0.02mol/L的磷酸钠溶液和蒸馏水中透析3～4天后，用硝酸银溶液检测透析液至无浑浊现象为止，真空冷冻干燥后即可得到产品。
实施例5
从猪皮中提取胶原蛋白的酸酶结合法，包括以下步骤：
(1)将猪皮皮下脂肪和表面的毛发剔除干净，利用蒸馏水彻底洗净后，切成4.5mm×4.5mm的猪皮小颗粒状，再用蒸馏水润洗一遍，沥干水；
(2)在40℃条件下，用体积比为5:3的异丙醇个乙酸乙酯混合有机溶剂，按照料液比为1:4m/v对猪皮颗粒脱脂4.5h，然后用蒸馏水反复润洗猪皮颗粒直至无有机溶剂气味，沥干水后，置于-20℃条件下保存备用；
(3)将脱脂后的猪皮颗粒置于醋酸中，按与猪皮质量比为0.013mg/g加入胃蛋白酶，置于温度为5℃的条件下提取65h；
(4)待提取结束后，加入氯化钠粉末进行盐析出胶原絮状沉淀，然后将胶原絮状沉淀溶于0.4mol/L醋酸溶液中，再注入透析袋内并先后于0.02mol/L的磷酸钠溶液和蒸馏水中透析3～4天后，用硝酸银溶液检测透析液至无浑浊现象为止，真空冷冻干燥后即可得到产品。
应当指出，以上案例仅是本发明有代表性的例子。显然，本发明的技术方案并不限于上述实施例，还可以有许多变性。