本发明涉及一种果胶酶制剂的制备方法，尤其是涉及一种食品级酸性果胶酶液体酶制剂的制备和罐装方法。属于酶制剂生产技术领域。
背景技术：
果胶酶是一种可分解植物果实中果胶的酶，其制剂广泛应用于果蔬汁生产、植物活性物质提取和果酒等的工业生产中，具有提高过滤速度、提高出汁率和收率，提高产品澄清度、延长产品货架期的作用。
现有技术中，为了保证酸性果胶酶制剂的微生物指标在货架期达到食品级标准，液体果胶酶制剂主要通过添加防腐剂(山梨酸钾、苯甲酸钠等)和冷链运输保藏来满足要求。很多果汁生产企业对食品添加剂的限量要求越来越严格，尤其是出口果汁加工企业，一些常用的防腐剂品种，如苯甲酸钠，甚至被规定不得检出。现有产品中若不添加防腐剂，即使在冷链运输条件下，也会发生细菌污染等问题。
技术实现要素：
针对现有技术存在的不足，本发明所要解决的技术问题是，提供一种果胶酶制剂的制备方法，以解决酸性果胶酶制剂的微生物指标在货架期和冷链运输保藏过程中需要添加防腐剂及存在细菌污染的问题，使液体酸性果胶酶制剂中的细菌生长缓慢或不生长。
为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案是，一种果胶酶制剂的制备方法，其内容包括：将发酵后获得的酸性果胶酶液，降温至10-20℃，然后进行板框压滤、微滤、超滤，调节ph值后，经终端过滤进行无菌灌装。
上述的果胶酶制剂的制备方法，其具体内容为：
a.将发酵后获得的酸性果胶酶液降温至10-20℃，加入重量百分比为0.5-1％的磷酸二氢钠和/或重量百分比为0.5-1％的氯化钙，静置絮凝30min；
b.然后用粉末状活性炭作为助滤剂，首先用果胶酶液加活性炭制备预涂悬浊液，以果胶酶液计按w/v＝0.5％添加活性炭；悬浊液经加热杀菌后预涂到板框内，用纯净水降温至流出液温度为20℃以下；然后在果胶酶液中加入以果胶酶液计w/v＝0.5％的活性炭，其中，w的单位为kg，v的单位为1；混匀后用预涂过的板框压滤果胶酶液；
c.用微滤膜微滤果胶酶液，微滤后用血球计数板计数，使透过液中菌数小于50个/ml；
d.然后将果胶酶液进行超滤、加水、再超滤，循环进行至残糖含量在0.05mg/ml以下，以降低截留液中残糖含量，提高蛋白质的纯度；用柠檬酸调节果胶酶液ph为4.0-5.5；
e.将果胶酶液经0.3um的终端过滤膜过滤后，无菌灌装。
所述粉末状活性炭的细度为100-200目。
所述微滤膜的绝对精度为0.45um。
所述无菌灌装，其内容包括：将食品级塑料或铝塑材质软袋进行无菌处理，达到袋内无菌；灌装过程在带有可蒸汽灭菌的无菌灌装小室内进行，将无菌袋灌装口放入灌装小室后，先经瞬时蒸汽灭菌，再自动拔开灌装口塞子进行无菌灌装，然后自动压紧盖子，完成包装。其采用可灭菌的食品级塑料软袋并且在带蒸汽瞬时灭菌的无菌灌装小室内进行灌装，实现灌装过程操作无菌化。
与现有技术对比，应用本发明的方法制备的酸性果胶酶制剂，在不加防腐剂的情况下，仍然能够保证酸性果胶酶制剂中细菌的生长缓慢。本发明通过控制整个制备过程的温度和降低制剂中的营养源残量，应用可控的无菌包装技术，包括膜除菌技术及无菌灌装设备联合应用，可以在不加防腐剂的情况下很好的保证酶制剂产品质量及卫生指标。
本发明未涉及专用设备，所用试剂均为本行业常用原料。除特别指出的外，所涉及的检测方法均为本行业技术人员常用方法。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步详细说明。
实施例1
一种果胶酶制剂的制备方法，其包括：
一、接发酵罐放出的发酵液500l，初始温度28℃，给储罐夹套通冷却水降温至16℃。然后加入重量百分比为0.5的磷酸二氢钠和重量百分比为0.5％的氯化钙，静置絮凝30min。
二、用200目的粉末状活性炭作为助滤剂，用果胶酶液加活性炭制备预涂悬浊液，以果胶酶液计按w/v＝0.5％添加活性炭，其中，w的单位为kg，v的单位为l；蒸汽升温至80℃，维持10min，然后预涂到板框内，纯净水降温，流出液温度为20℃。在果胶酶液中加入以果胶酶液计w/v＝0.5％的活性炭，其中，w的单位为kg，v的单位为l；混匀后用预涂过的板框压滤果胶酶液。
三、将压滤液用0.45um绝对精度的微滤膜微滤，经检测，透过液中酶活4200u/ml，血球计数板计数，菌落总数30个/ml。
四、微滤透过液经超滤10倍，测定截留液残糖为0.13mg/ml。加入纯净水100l，再次浓缩3倍，测定残糖为0.04mg/ml。
五、用稀释的柠檬酸溶液调ph为4.5。
六、果胶酶液经0.3um的终端过滤膜过滤后，进行无菌包装，包装软袋预先灭菌，在带蒸汽瞬时灭菌的无菌灌装小室内进行灌装。将包装好后的液体酸性果胶酶制剂存放于4℃冷库保藏。
将本实施例的产品进行检测，三个月时，4℃冷库保存样品酶活力保存率为91.4％，菌落总数为60cfu/ml。六个月时，冷库保存样品酶活力保存率为79％，菌落总数为170cfu/ml。即，4℃冷库保存半年，仍可满足食品级卫生指标要求。
本实施例的产品室温保存3天，酶活力保存率为98.9％，菌落总数为110cfu/ml。即采用本实施例的方法生产的酸性果胶酶，短期运输对质量无明显影响。
实施例2
一种果胶酶制剂的制备方法，其包括：
一、接发酵罐放出的发酵液500l，初始温度28℃，给储罐夹套通冷却水降温至20℃。然后加入重量百分比为1％的磷酸二氢钠和重量百分比为0.5％的氯化钙，静置絮凝30min。
二、用100目的粉末状活性炭作为助滤剂，用果胶酶液加活性炭制备预涂悬浊液，以果胶酶液计按w/v＝0.5％添加活性炭，其中，w的单位为kg，v的单位为l；蒸汽升温至80℃，维持10min，然后预涂到板框内，纯净水降温，流出液温度为18℃。在果胶酶液中加入以果胶酶液计w/v＝0.5％的活性炭，其中，w的单位为kg，v的单位为l；混匀后用预涂过的板框压滤果胶酶液。
三、将压滤液用0.45um绝对精度的微滤膜微滤，经检测，透过液中酶活4100u/ml，血球计数板计数，菌落总数36个/ml。
四、微滤透过液经超滤10倍，测定截留液残糖为0.14mg/ml。加入纯净水100l，再次浓缩3倍，测定残糖为0.05mg/ml。
五、用稀释的柠檬酸溶液调ph为4.0。
六、果胶酶液经0.3um的终端过滤膜过滤后，进行无菌包装，包装软袋预先灭菌，在带蒸汽瞬时灭菌的无菌灌装小室内进行灌装。将包装好后的液体酸性果胶酶制剂存放于4℃冷库保藏。
将本实施例的产品进行检测，三个月时，4℃冷库保存样品酶活力保存率为91.2％，菌落总数为66cfu/ml。六个月时，冷库保存样品酶活力保存率为79％，菌落总数为180cfu/ml。即，4℃冷库保存半年，仍可满足食品级卫生指标要求。
本实施例的产品室温保存3天，酶活力保存率为98.8％，菌落总数为115cfu/ml。即采用本实施例的方法生产的酸性果胶酶，短期运输对质量无明显影响。
实施例3
一种果胶酶制剂的制备方法，其包括：
一、接发酵罐放出的发酵液500l，初始温度28℃，给储罐夹套通冷却水降温至10℃。然后加入重量百分比为1％的氯化钙，静置絮凝30min。
二、用150目的粉末状活性炭作为助滤剂，用果胶酶液加活性炭制备预涂悬浊液，以果胶酶液计按w/v＝0.5％添加活性炭，其中，w的单位为kg，v的单位为1；蒸汽升温至80℃，维持10min，然后预涂到板框内，纯净水降温，流出液温度为18℃。在果胶酶液中加入以果胶酶液计w/v＝0.5％的活性炭，其中，w的单位为kg，v的单位为l；混匀后用预涂过的板框压滤果胶酶液。
三、将压滤液用0.45um绝对精度的微滤膜微滤，经检测，透过液中酶活4150u/ml，血球计数板计数，菌落总数33个/ml。
四、微滤透过液经超滤10倍，测定截留液残糖为0.15mg/ml。加入纯净水100l，再次浓缩3倍，测定残糖为0.05mg/ml。
五、用稀释的柠檬酸溶液调ph为5.5。
六、果胶酶液经0.3um的终端过滤膜过滤后，进行无菌包装，包装软袋预先灭菌，在带蒸汽瞬时灭菌的无菌灌装小室内进行灌装。将包装好后的液体酸性果胶酶制剂存放于4℃冷库保藏。
将本实施例的产品进行检测，三个月时，4℃冷库保存样品酶活力保存率为91.0％，菌落总数为63cfu/ml。六个月时，冷库保存样品酶活力保存率为77％，菌落总数为175cfu/ml。即，4℃冷库保存半年，仍可满足食品级卫生指标要求。
本实施例的产品室温保存3天，酶活力保存率为98.6％，菌落总数为118cfu/ml。即采用本实施例的方法生产的酸性果胶酶，短期运输对质量无明显影响。