药用牛血清白蛋白的分离纯化方法与流程

本发明涉及蛋白提取技术领域。更具体地说，本发明涉及一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法。

背景技术：

药用蛋白质牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，bsa)又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基，分子量为66.446kda，等电点为4.7，含氮量16％，含糖量0.08％，含脂量只有0.2％。牛血清白蛋白主要起维持渗透压作用、ph缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加蛋白质可起到生理和机械保护作用和载体作用，同时，在深化研究、遗传工程和医药研究中有广泛的应用。

目前，牛血清白蛋白的生产方法有很多，主要包括盐析法、有机溶剂沉淀法、热激法等，其中盐析法主要为：以牛血为原料分离出血清，用硫酸铵分级沉淀后，经辛酸处理精制而得；有机溶剂沉淀法最早用于人血液制品的生产，利用乙醇的低价电常数性质以及蛋白质在一定温度、ph、离子强度及浓度条件下在不同浓度乙醇中的溶解度不同分离血浆蛋白质，可以生产出多种血清蛋白；热激法是取牛血抗凝剂离心后得到血浆，加热，加入辛酸钠，调ph值后加乙醇，再经过滤、脱盐、浓缩、冻干后得牛血清中白蛋白；其中，热激法是目前研究最为广泛的过程，但是在其制备过程中如何避免整个制备过程中多容器使用造成污染概率提升，并提高收率、纯率、以及牛血清白蛋白成品质量仍然是目前急需解决的问题。

技术实现要素：

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，有效避免制备过程中多容器使用造成污染概率提升问题，同时提高血浆收率，药用牛血清白蛋白纯率。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，包括以下步骤：

步骤一、取牛血液置于离心管内，离心管可拆卸的设于密封容器内，向离心管内通入二氧化碳后密封，并将密封容器置于冷冻冰箱中，调节冷冻冰箱的温度由从20℃开始以5℃/min速度降至-30℃并保持10min，然后以5℃/min的速度升温至20℃并保持4min，反复进行3次，取出，向离心管内加入牛血液总质量10％的浓度为3.8％的柠檬酸钠，再次通入二氧化碳后密封，离心管脱离密封容器，且通过离心机，控制温度低于2℃，分离去除血球，得血浆；

其中，所述离心管为倒置圆台状，所述密封容器包括：

密封塞，其可拆卸密封塞设于所述离心管顶部开口处，所述密封塞顶面向下凹陷形成容置槽，所述容置槽底面贯穿形成第一穿孔；

开合机构，其包括同轴固设于所述容置槽底面的第一导向管、所述第一导向管中下部填充的第一弹性塞、所述第一弹性塞顶面固接的第一弹簧、所述第一弹簧顶端螺接的第一压盖、同轴固设于所述第一压盖顶面的第二导向管、所述第二导向管中下部填充的第二弹性塞、所述第二弹性塞顶面固接的第二弹簧、所述第二弹簧顶端螺接的第二压盖，其中，所述第一压盖顶面贯穿设有第二穿孔，所述第二压盖顶面贯穿设有第三穿孔，所述第一弹性塞上位于第二穿孔正下方竖直贯穿第一弹性塞设有第一弹性孔，所述第二弹性塞上位于第三穿孔正下方竖直贯穿第二弹性塞设有第二弹性孔，其中，所述第一穿孔、第二穿孔、第三穿孔距离所述容置槽中轴线的距离相等；

加热管，其可拆卸套设于所述离心管外侧，以与所述离心管外壁间形成包覆离心管外壁的储水腔，所述储水腔顶端塞设环形橡胶塞以密封储水腔，贯穿所述橡胶塞设置第四穿孔，所述第四穿孔上可拆卸连通导气管，所述导气管远离所述第四穿孔的一端为硬质管体，所述加热管外侧壁上部开设通孔；

加料机构，其包括塞设于所述通孔上的圆台状的移动塞、所述移动塞位于所述加热管外侧的小头铰接的活动杆、套设于所述活动杆外侧且开口固设于所述加热管位于所述通孔周向侧壁的加料袋，所述加料袋内放置质量比为1:3的柠檬酸和碳酸氢钠的混合物；

步骤一中向离心管内通入二氧化碳后密封具体为：依次盖设并旋转第二压盖、第一压盖，使得所述第一穿孔、第二穿孔、第三穿孔连通，所述导气管的一端依次穿过开合机构并与所述离心管连通，旋转活动杆，向所述储水腔内添加加料袋内混合物后密封通孔，向所述离心管内通入二氧化碳，抽出导气管端部，并旋转第二压盖、第一压盖，使得所述第一穿孔、第二穿孔、第三穿孔不连通，以密封离心管。

优选的是，所述的药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，还包括：通气管，所述通气管一端与所述第一穿孔下端连通固接，所述通气管周向开设多个通气孔，多个通气孔的孔径沿靠近第一穿孔的方向逐渐变小；

所述密封塞顶面向下凹陷形成容纳槽，贯穿所述容纳槽底面形成第五穿孔，所述容纳槽内密封塞设容纳塞。

优选的是，所述的药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，还包括：

步骤二、离心管置于密封容器内，所述储水腔内设有加热装置，控制储水腔内的水体温度为68-72℃，向所述离心管内加入血浆体积0.15-0.20％的辛酸钠，同时向所述离心管内通过所述通气管通入二氧化碳10-12min后，加入浓度为1mol/l的盐酸溶液，调节ph至5-5.5，继续通入二氧化碳5-6min后，加入血浆质量6％的浓度为80％的乙醇，持续通入二氧化碳10-12min后，离心，取上清液；

步骤三、将上清液置于超滤机内，使用分子量为18000的滤膜进行脱盐处理，后浓缩得浓缩液，浓缩液冻干，得药用牛血清白蛋白。

优选的是，贯穿所述橡胶塞顶面形成第六穿孔，所述第五穿孔和第六穿孔通过管体连通，所述管体上设有流体沿第六穿孔流向第五穿孔的单向阀，所述管体上位于第六穿孔和单向阀间设有抽风机；

步骤二中通入二氧化碳的过程中，抽风机工作。

优选的是，所述第一导向管和所述第二导向管的内部空腔均包括上下连通的圆柱状腔室、及倒置圆台状腔室，其中，所述第一弹性塞填充于所述第一导向管的倒置圆台状腔室内，所述第二弹性塞填充于所述第二导向管的倒置圆台状腔室内。

优选的是，步骤三中冻干具体为：将浓缩液从室温开始以20℃/min速度降至-40℃并保持8h，然后以20℃/min的速度升温至-25℃并保持15-16h，然后以5℃/min的速度升温至0℃并保持1-2h，最后以5℃/min的速度升温至20℃。

本发明至少包括以下有益效果：

第一、新鲜牛血液经过预先冷冻处理，能够有效提高凝血酶活性，配合后期柠檬酸钠的添加，有效避免血浆中的凝血酶和纤维蛋白原凝集沉淀导致白蛋白共沉淀的产生，提高血浆含量，同时在整个离心过程中，通入二氧化碳，造成一定高压环境的同时，有效避免血浆中纤维蛋白原形成纤维蛋白沉淀同样导致白蛋白共沉淀的产生，进一步提高血浆含量，而且在整个制备的过程中提供无氧环境，有效避免牛血液有氧细菌滋生污染，且分层次的冻干操作有利于提高牛血清白蛋白成品品相，并提高干燥效果，获得的牛血清白蛋白为类白色的粉体，通过检测发现纯度高于94％。

第二、密封容器的设置，将离心管于加热容器融为一体，降低多容器的使用转移过程中造成的污染概率，其中，密封盖上开合机构的设置，通过可调节连通或不连通的第一穿孔、第二穿孔、及第三穿孔的设置，在满足开孔需求的同时不减弱整个密封塞的密封性、及离心管的抗压性，且第一压盖与所述第一导向管间螺接，可上下移动其相对位置，以调节第一弹簧、第二弹簧的压紧程度，进一步调控第一弹性塞上弹性孔的密封程度、以及第二弹性塞上弹性孔的密封程度；加料机构的设置便于操控向所述储水腔内加入混合物，以使混合物在水体的作用下产生二氧化碳，同时操控隔离加料机构和储水腔，整个装置操控及其简便且效果显著；通气管的设置，再提供无氧环境的同时，使气泡较多、较大面积的经过离心管内液体，以气泡的流动代替传统的搅拌，在达到搅拌效果的同时，避免机械搅拌对目标产物的破坏，降低目标产物提取率。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1示出根据本发明所述的密封容器的结构示意图；

图2示出根据本发明所述的密封塞的结构示意图；

图3示出根据本发明所述的加料机构的结构示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

<实施例1>

一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，包括以下步骤：

步骤一、取黄牛新鲜的牛血液100ml置于离心管1内，离心管1可拆卸的设于密封容器2内，向离心管1内通入二氧化碳后密封，并将密封容器2置于冷冻冰箱中，调节冷冻冰箱的温度由从20℃开始以5℃/min速度降至-30℃并保持10min，然后以5℃/min的速度升温至20℃并保持4min，反复进行3次，取出，向离心管1内加入牛血液总质量10％的浓度为3.8％的柠檬酸钠，再次通入二氧化碳后密封，离心管1脱离密封容器2，且通过离心机，控制温度低于2℃，控制离心机转速为3500r/min，离心30min，分离去除下层血球，得上层清液即为血浆；

其中，如图1-3所示，所述离心管1为倒置圆台状，所述密封容器2包括：

密封塞3，其可拆卸密封(具体可为螺纹连接、配合密封圈)塞设于所述离心管1顶部开口处，所述密封塞3顶面向下凹陷形成容置槽30，所述容置槽30底面贯穿形成第一穿孔31；

开合机构4，其包括同轴固设于所述容置槽30底面的第一导向管40、所述第一导向管40中下部填充的第一弹性塞41、所述第一弹性塞41顶面固接的第一弹簧42、所述第一弹簧42顶端螺接的第一压盖43、同轴固设于所述第一压盖43顶面的第二导向管44、所述第二导向管44中下部填充的第二弹性塞45、所述第二弹性塞45顶面固接的第二弹簧46、所述第二弹簧46顶端螺接的第二压盖47，其中，所述第一压盖43顶面贯穿设有第二穿孔430，所述第二压盖47顶面贯穿设有第三穿孔470，所述第一弹性塞41上位于第二穿孔430正下方竖直贯穿第一弹性塞41设有第一弹性孔410，所述第二弹性塞45上位于第三穿孔470正下方竖直贯穿第二弹性塞45设有第二弹性孔420，其中，所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470距离所述容置槽30中轴线的距离相等，所述第一导向管40和所述第二导向管44的内部空腔均包括上下连通的圆柱状腔室、及倒置圆台状腔室，其中，所述第一弹性塞41填充于所述第一导向管40的倒置圆台状腔室内，所述第二弹性塞45填充于所述第二导向管44的倒置圆台状腔室内，开合机构4通过可调节连通或不连通的第一穿孔31、第二穿孔430、及第三穿孔470的设置，在满足开孔需求的同时不减弱整个密封塞3的密封性、及离心管1的抗压性，且第一压盖43与所述第一导向管40间螺接，可上下移动其相对位置，以调节第一弹簧42、第二弹簧46的压紧程度，进一步调控第一弹性塞41上第一弹性孔的密封程度、以及第二弹性塞45上第二弹性孔的密封程度；

加热管5，其可拆卸套设于所述离心管1外侧，以与所述离心管1外壁间形成包覆离心管1外壁的储水腔50，加热管5内侧壁位于储水腔50内可设置多个支撑杆，以支撑离心管1，实现离心管1和密封容器2间的可拆卸连接，所述储水腔50顶端塞设环形橡胶塞51以密封储水腔50，贯穿所述橡胶塞51设置第四穿孔52，所述第四穿孔52上可拆卸连通导气管，所述导气管远离所述第四穿孔52的一端为硬质管体，所述加热管5外侧壁上部开设通孔53；

加料机构6，其包括塞设于所述通孔53上的圆台状的移动塞60、所述移动塞60位于所述加热管5外侧的小头(即所述移动塞60位于储水腔50内的一端的直径大于所述移动塞60位于储水腔50外一端的直径)铰接的活动杆61、套设于所述活动杆61外侧且开口固设于所述加热管5位于所述通孔53周向侧壁的加料袋62，所述加料袋62内放置质量比为1:3的柠檬酸和碳酸氢钠的混合物，加料机构6的设置便于操控向所述储水腔50内加入混合物，以使混合物在水体的作用下产生二氧化碳，同时操控隔离2加料机构6和储水腔50，整个装置操控及其简便且效果显著；

步骤一中向离心管1内通入二氧化碳后密封具体为：依次盖设并旋转第二压盖47、第一压盖43，使得所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470连通，所述导气管的一端依次穿过开合机构4并与所述离心管1连通，旋转活动杆61，向所述储水腔50内添加加料袋62内混合物后密封通孔53，向所述离心管1内通入二氧化碳，抽出导气管端部，并旋转第二压盖47、第一压盖43，使得所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470不连通，以密封离心管1；

还包括：通气管7，所述通气管7一端与所述第一穿孔31下端连通固接，所述通气管7周向开设多个通气孔，多个通气孔的孔径沿靠近第一穿孔31的方向逐渐变小，且当密封塞3塞设于所述离心管1上时，所述通气管7底端与所述离心管1底端距离较小；

所述密封塞3顶面向下凹陷形成容纳槽8，贯穿所述容纳槽8底面形成第五穿孔80，所述容纳槽8内密封塞3设容纳塞81。

还包括：

步骤二、离心管1置于密封容器2内，所述储水腔50内设有加热装置，控制储水腔50内的水体温度为70℃，向所述离心管1内加入血浆体积0.17％的辛酸钠，同时向所述离心管1内通过所述通气管7通入二氧化碳12min后，加入浓度为1mol/l的盐酸溶液，调节ph至5.3，继续通入二氧化碳5min后，加入血浆质量6％的浓度为80％的乙醇，持续通入二氧化碳10-12min后，离心，取上清液，通气管7的设置，再提供无氧环境的同时，使气泡较多、较大面积的经过离心管1内液体，以气泡的流动代替传统的搅拌，在达到搅拌效果的同时，避免机械搅拌对目标产物的破坏，降低目标产物提取率；

步骤三、将上清液置于超滤机内，使用分子量为18000的滤膜进行脱盐处理，后浓缩得浓缩液，浓缩液冻干，得药用牛血清白蛋白。

其中，所述密封容器2还包括设于所述加热管5下方的底座，以支撑所述加热管5。

<实施例2>

一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，包括以下步骤：

步骤一、取黄牛新鲜的牛血液100ml置于离心管1内，离心管1可拆卸的设于密封容器2内，向离心管1内通入二氧化碳后密封，并将密封容器2置于冷冻冰箱中，调节冷冻冰箱的温度由从20℃开始以5℃/min速度降至-30℃并保持10min，然后以5℃/min的速度升温至20℃并保持4min，反复进行3次，取出，向离心管1内加入牛血液总质量10％的浓度为3.8％的柠檬酸钠，再次通入二氧化碳后密封，离心管1脱离密封容器2，且通过离心机，控制温度低于2℃，分离去除血球，得血浆；

其中，如图1-3所示，所述离心管1为倒置圆台状，所述密封容器2包括：

密封塞3，其可拆卸密封塞3设于所述离心管1顶部开口处，所述密封塞3顶面向下凹陷形成容置槽30，所述容置槽30底面贯穿形成第一穿孔31；

开合机构4，其包括同轴固设于所述容置槽30底面的第一导向管40、所述第一导向管40中下部填充的第一弹性塞41、所述第一弹性塞41顶面固接的第一弹簧42、所述第一弹簧42顶端螺接的第一压盖43、同轴固设于所述第一压盖43顶面的第二导向管44、所述第二导向管44中下部填充的第二弹性塞45、所述第二弹性塞45顶面固接的第二弹簧46、所述第二弹簧46顶端螺接的第二压盖47，其中，所述第一压盖43顶面贯穿设有第二穿孔430，所述第二压盖47顶面贯穿设有第三穿孔470，所述第一弹性塞41上位于第二穿孔430正下方竖直贯穿第一弹性塞41设有第一弹性孔410，所述第二弹性塞45上位于第三穿孔470正下方竖直贯穿第二弹性塞45设有第二弹性孔420，其中，所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470距离所述容置槽30中轴线的距离相等；

加热管5，其可拆卸套设于所述离心管1外侧，以与所述离心管1外壁间形成包覆离心管1外壁的储水腔50，所述储水腔50顶端塞设环形橡胶塞51以密封储水腔50，贯穿所述橡胶塞51设置第四穿孔52，所述第四穿孔52上可拆卸连通导气管，所述导气管远离所述第四穿孔52的一端为硬质管体，所述加热管5外侧壁上部开设通孔53；

加料机构6，其包括塞设于所述通孔53上的圆台状的移动塞60、所述移动塞60位于所述加热管5外侧的小头铰接的活动杆61、套设于所述活动杆61外侧且开口固设于所述加热管5位于所述通孔53周向侧壁的加料袋62，所述加料袋62内放置质量比为1:3的柠檬酸和碳酸氢钠的混合物；

步骤一中向离心管1内通入二氧化碳后密封具体为：依次盖设并旋转第二压盖47、第一压盖43，使得所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470连通，所述导气管的一端依次穿过开合机构4并与所述离心管1连通，旋转活动杆61，向所述储水腔50内添加加料袋62内混合物后密封通孔53，向所述离心管1内通入二氧化碳，抽出导气管端部，并旋转第二压盖47、第一压盖43，使得所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470不连通，以密封离心管1。

还包括：通气管7，所述通气管7一端与所述第一穿孔31下端连通固接，所述通气管7周向开设多个通气孔，多个通气孔的孔径沿靠近第一穿孔31的方向逐渐变小；

所述密封塞3顶面向下凹陷形成容纳槽8，贯穿所述容纳槽8底面形成第五穿孔80，所述容纳槽8内密封塞3设容纳塞81。

还包括：

步骤二、离心管1置于密封容器2内，所述储水腔50内设有加热装置，控制储水腔50内的水体温度为70℃，向所述离心管1内加入血浆体积0.17％的辛酸钠，同时向所述离心管1内通过所述通气管7通入二氧化碳10-12min后，加入浓度为1mol/l的盐酸溶液，调节ph至5.35，继续通入二氧化碳5.5min后，加入血浆质量6％的浓度为80％的乙醇，持续通入二氧化碳11min后，离心，取上清液，其中，加热装置具体包括加热部(可为设置在储水腔50内的加热管5)、与所述加热部连接的温度调节部(温度传感器，设于储水腔50内部以检测储水腔50内水体温度信息，并传递给控制部)、与加热部及温度调节部连接的控制部(控制部根据接收的新型调控加热部的工作)；

步骤三、将上清液置于超滤机内，使用分子量为18000的滤膜进行脱盐处理，后浓缩得浓缩液，浓缩液冻干，得药用牛血清白蛋白。

贯穿所述橡胶塞51顶面形成第六穿孔，所述第五穿孔80和第六穿孔通过管体连通，所述管体上设有流体沿第六穿孔流向第五穿孔80的单向阀，所述管体上位于第六穿孔和单向阀间设有抽风机，抽风机和单向阀的设置大大降低了混合物原料的使用；

步骤二中通入二氧化碳的过程中，抽风机工作。

<实施例3>

一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，包括以下步骤：

步骤一、取黄牛新鲜的牛血液100ml置于离心管1内，离心管1可拆卸的设于密封容器2内，向离心管1内通入二氧化碳后密封，并将密封容器2置于冷冻冰箱中，调节冷冻冰箱的温度由从20℃开始以5℃/min速度降至-30℃并保持10min，然后以5℃/min的速度升温至20℃并保持4min，反复进行3次，取出，向离心管1内加入牛血液总质量10％的浓度为3.8％的柠檬酸钠，再次通入二氧化碳后密封，离心管1脱离密封容器2，且通过离心机，控制温度低于2℃，分离去除血球，得血浆；

其中，如图1-3所示，所述离心管1为倒置圆台状，所述密封容器2包括：

密封塞3，其可拆卸密封塞3设于所述离心管1顶部开口处，所述密封塞3顶面向下凹陷形成容置槽30，所述容置槽30底面贯穿形成第一穿孔31；

开合机构4，其包括同轴固设于所述容置槽30底面的第一导向管40、所述第一导向管40中下部填充的第一弹性塞41、所述第一弹性塞41顶面固接的第一弹簧42、所述第一弹簧42顶端螺接的第一压盖43、同轴固设于所述第一压盖43顶面的第二导向管44、所述第二导向管44中下部填充的第二弹性塞45、所述第二弹性塞45顶面固接的第二弹簧46、所述第二弹簧46顶端螺接的第二压盖47，其中，所述第一压盖43顶面贯穿设有第二穿孔430，所述第二压盖47顶面贯穿设有第三穿孔470，所述第一弹性塞41上位于第二穿孔430正下方竖直贯穿第一弹性塞41设有第一弹性孔410，所述第二弹性塞45上位于第三穿孔470正下方竖直贯穿第二弹性塞45设有第二弹性孔420，其中，所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470距离所述容置槽30中轴线的距离相等；

加热管5，其可拆卸套设于所述离心管1外侧，以与所述离心管1外壁间形成包覆离心管1外壁的储水腔50，所述储水腔50顶端塞设环形橡胶塞51以密封储水腔50，贯穿所述橡胶塞51设置第四穿孔52，所述第四穿孔52上可拆卸连通导气管，所述导气管远离所述第四穿孔52的一端为硬质管体，所述加热管5外侧壁上部开设通孔53；

加料机构6，其包括塞设于所述通孔53上的圆台状的移动塞60、所述移动塞60位于所述加热管5外侧的小头铰接的活动杆61、套设于所述活动杆61外侧且开口固设于所述加热管5位于所述通孔53周向侧壁的加料袋62，所述加料袋62内放置质量比为1:3的柠檬酸和碳酸氢钠的混合物；

步骤一中向离心管1内通入二氧化碳后密封具体为：依次盖设并旋转第二压盖47、第一压盖43，使得所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470连通，所述导气管的一端依次穿过开合机构4并与所述离心管1连通，旋转活动杆61，向所述储水腔50内添加加料袋62内混合物后密封通孔53，向所述离心管1内通入二氧化碳，抽出导气管端部，并旋转第二压盖47、第一压盖43，使得所述第一穿孔31、第二穿孔430、第三穿孔470不连通，以密封离心管1。

还包括：通气管7，所述通气管7一端与所述第一穿孔31下端连通固接，所述通气管7周向开设多个通气孔，多个通气孔的孔径沿靠近第一穿孔31的方向逐渐变小；

所述密封塞3顶面向下凹陷形成容纳槽8，贯穿所述容纳槽8底面形成第五穿孔80，所述容纳槽8内密封塞3设容纳塞81。

还包括：

步骤二、离心管1置于密封容器2内，所述储水腔50内设有加热装置，控制储水腔50内的水体温度为70℃，向所述离心管1内加入血浆体积0.17％的辛酸钠，同时向所述离心管1内通过所述通气管7通入二氧化碳11min后，加入浓度为1mol/l的盐酸溶液，调节ph至5.25，继续通入二氧化碳5.5min后，加入血浆质量6％的浓度为80％的乙醇，持续通入二氧化碳11min后，离心，取上清液；

步骤三、将上清液置于超滤机内，使用分子量为18000的滤膜进行脱盐处理，后浓缩得浓缩液，浓缩液冻干，得药用牛血清白蛋白。

贯穿所述橡胶塞51顶面形成第六穿孔，所述第五穿孔80和第六穿孔通过管体连通，所述管体上设有流体沿第六穿孔流向第五穿孔80的单向阀，所述管体上位于第六穿孔和单向阀间设有抽风机；

步骤二中通入二氧化碳的过程中，抽风机工作。

步骤三中冻干具体为：将浓缩液从室温开始以20℃/min速度降至-40℃并保持8h，然后以20℃/min的速度升温至-25℃并保持15.5h，然后以5℃/min的速度升温至0℃并保持1.5h，最后以5℃/min的速度升温至20℃。

<对比例1>

一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，包括以下步骤：

步骤一、取牛血液置于常规低温离心机的离心管内，向离心管内加入牛血液总质量10％的浓度为3.8％的柠檬酸钠，通过离心机，控制温度低于2℃，分离去除血球，得血浆。

<对比例2>

一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，其中，步骤一、及步骤三同实施例1，步骤二具体为：

步骤二、离心管1置于密封容器2内，所述储水腔50内设有加热装置，控制储水腔50内的水体温度为70℃，向所述离心管1内加入血浆体积0.17％的辛酸钠，机械搅拌加入浓度为1mol/l的盐酸溶液，调节ph至5.4，继续搅拌加入血浆质量6％的浓度为80％的乙醇，离心，取上清液。

<对比例3>

一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，其中，步骤一、及步骤二同实施例3，步骤三具体为：将上清液置于超滤机内，使用分子量为18000的滤膜进行脱盐处理，后浓缩得浓缩液，将浓缩液从室温开始以20℃/min速度降至-40℃并保持20h，后取出升温至20℃。，得药用牛血清白蛋白。

结果分析

1：比较实施例1和对比例1中，通过步骤一获得的血浆含量，其中实施例1中100ml牛血液获得血浆52ml，而对比例1中血浆含量只有47ml，其主要由于实施例1中的预先冷冻处理，能够有效提高凝血酶活性，配合后期柠檬酸钠的添加，有效避免血浆中的凝血酶和纤维蛋白原凝集沉淀导致白蛋白共沉淀的产生，提高血浆含量；进一步在整个离心过程中，通入二氧化碳，造成一定高压环境的同时，有效避免血浆中纤维蛋白原形成纤维蛋白沉淀同样导致白蛋白共沉淀的产生，进一步提高血浆含量；更进一步，两次通入二氧化碳提供无氧环境，有效避免牛血液有氧细菌滋生污染。

2：比较实施例1和对比例2中，通过步骤二获得的上清液含量、以及上清液中白蛋白的含量，其中实施例1中获得上清液的体积大于对比例1中上清液的体积，进一步采用溴甲酚氯法分别测定实施例1和对比例2中通过步骤二获得的上清液中白蛋白的含量，得出实施例1中获得上清液中白蛋白的含量大于对比例1中上清液中白蛋白的含量。

3：比较实施例3和对比例3中获得的牛血清白蛋白，其中，实施例3获得的牛血清白蛋白成品为类白色粉体，含水量为3.2％，而对比例3中获得的牛血清白蛋白成品为不均匀块状类白色物质，含水量为6％，所以分层次的冻干操作有利于提高牛血清白蛋白成品品相，并提高干燥效果。

4:通过醋酸纤维素膜法测定实施例3获得的牛血清白蛋白成品的纯度为94.5％。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。