本发明涉及技术领域，具体涉及一种鲣鱼内脏提取蛋白酶的方法。
背景技术：
蛋白酶作为市场上需求量最大的三种酶之一，在食品、医药、化工方面都有很广泛的应用。
蛋白酶主要来源于动物、植物和微生物，其中，动物消化蛋白酶已经成为酶工业的重要来源之一。
鲣鱼作为重要的鱼种，其内脏产量较大，所含蛋白酶较宽温度范围内均有活性，是量好的蛋白酶来源，利用好鲣鱼的内脏，能够发挥其最大的经济价值。
但是目前的常规提取方法提取的酶的活性较低，不利于提高产品的质量。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决上述问题，提供一种鲣鱼内脏提取蛋白酶的方法。
为了达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一种鲣鱼内脏提取蛋白酶的方法，包括以下步骤：
（1）将鲣鱼内脏粉碎成肉糜；
（2）配制缓冲液，缓冲液的ph为6-6.5，在缓冲液中加入硫酸铜，使硫酸铜的浓度为0.05mol/l；
（3）将肉糜混入缓冲液中，搅拌均匀；然后在加压下采用超声进行处理；加压为0.12-0.15mpa；超声的功率为150-180w；处理温度为50-55℃；
（4）然后向其中加入edta，加入量为硫酸铜的1.5-2倍；
（5）采用饱和度为35-45%的硫酸铵进行分级盐析蛋白酶；
（6）然后采用离子交换层析纯化蛋白酶；以钠离子强度为0.25-0.3mol/l、ph强度为7.5的0.01mol/ltris-hcl为初始化条件；
（7）从离子交换层析的产品采用sephadexg-100凝胶层进行分子筛纯化。
在常压下，超声功率过高会导致蛋白酶的活性降低，本发明采用加压处理，从而可以将超声的功率提高，进而提高蛋白酶的产率。
优选的，步骤（6）离子交换层的洗脱液采用聚乙二醇20000吸水浓缩，将浓缩液用于分子筛纯化。
优选的，步骤（5）中用饱和度为35%的硫酸铵沉淀杂蛋白质，离心所得上清液再调至45%的饱和度沉淀蛋白酶，离心回收。
优选的，步骤（3）中的超声处理时间为25-35min。
优选的，步骤（3）中加压处理15-20min后，采用真空处理，真空度为1-1.5kpa。
通过后半程的真空超声处理，进一步提高蛋白酶的产率。
本发明与现有技术相比，有益效果是：所提取的蛋白酶的活性较高，并且收率与普通的提取工艺有所提高。
附图说明
图1是本发明的实施例1-3和对比例提取的胃蛋白酶的活性对比图；
图2是本发明的实施例1-3和对比例提取的肠蛋白酶的活性对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步描述说明。
如果无特殊说明，本发明的实施例中所采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。
实施例1：
一种鲣鱼内脏提取蛋白酶的方法，包括以下步骤：
（1）将鲣鱼内脏粉碎成肉糜；
（2）配制缓冲液，缓冲液的ph为6，在缓冲液中加入硫酸铜，使硫酸铜的浓度为0.05mol/l；
（3）将肉糜混入缓冲液中，搅拌均匀；然后在加压下采用超声进行处理；加压为0.15mpa；超声的功率为150w；处理温度为50-55℃；超声处理时间为25-35min；
（4）然后向其中加入edta，加入量为硫酸铜的2倍；
（5）采用饱和度为35-45%的硫酸铵进行分级盐析蛋白酶；用饱和度为35%的硫酸铵沉淀杂蛋白质，离心所得上清液再调至45%的饱和度沉淀蛋白酶，离心回收；
（6）然后采用离子交换层析纯化蛋白酶；以钠离子强度为0.3mol/l、ph强度为7.5的0.01mol/ltris-hcl为初始化条件；洗脱液采用聚乙二醇20000吸水浓缩，将浓缩液用于分子筛纯化；
（7）从离子交换层析的产品采用sephadexg-100凝胶层进行分子筛纯化。
实施例2：
一种鲣鱼内脏提取蛋白酶的方法，包括以下步骤：
（1）将鲣鱼内脏粉碎成肉糜；
（2）配制缓冲液，缓冲液的ph为6.5，在缓冲液中加入硫酸铜，使硫酸铜的浓度为0.05mol/l；
（3）将肉糜混入缓冲液中，搅拌均匀；然后在加压下采用超声进行处理；加压为0.12mpa；超声的功率为180w；处理温度为50-55℃；超声处理时间为25-35min；
（4）然后向其中加入edta，加入量为硫酸铜的1.5倍；
（5）采用饱和度为35-45%的硫酸铵进行分级盐析蛋白酶；用饱和度为35%的硫酸铵沉淀杂蛋白质，离心所得上清液再调至45%的饱和度沉淀蛋白酶，离心回收；
（6）然后采用离子交换层析纯化蛋白酶；以钠离子强度为0.25mol/l、ph强度为7.5的0.01mol/ltris-hcl为初始化条件；洗脱液采用聚乙二醇20000吸水浓缩，将浓缩液用于分子筛纯化；
（7）从离子交换层析的产品采用sephadexg-100凝胶层进行分子筛纯化。
实施例3：
一种鲣鱼内脏提取蛋白酶的方法，包括以下步骤：
（1）将鲣鱼内脏粉碎成肉糜；
（2）配制缓冲液，缓冲液的ph为6-6.5，在缓冲液中加入硫酸铜，使硫酸铜的浓度为0.05mol/l；
（3）将肉糜混入缓冲液中，搅拌均匀；然后在加压下采用超声进行处理；加压为0.12-0.15mpa；超声的功率为15-180w；处理温度为50-55℃；超声处理时间为25-35min；加压处理15-20min后，采用真空处理，真空度为1-1.5kpa；
（4）然后向其中加入edta，加入量为硫酸铜的1.5-2倍；
（5）采用饱和度为35-45%的硫酸铵进行分级盐析蛋白酶；
（6）然后采用离子交换层析纯化蛋白酶；以钠离子强度为0.25mol/l、ph强度为7.5的0.01mol/ltris-hcl为初始化条件；洗脱液采用聚乙二醇20000吸水浓缩，将浓缩液用于分子筛纯化；用饱和度为35%的硫酸铵沉淀杂蛋白质，离心所得上清液再调至45%的饱和度沉淀蛋白酶，离心回收；
（7）从离子交换层析的产品采用sephadexg-100凝胶层进行分子筛纯化。
对比例
采用通常的低温浸提法提取蛋白酶。
图1是实施例1-3和对比例提取的胃蛋白酶的活性对比图；
图2是实施例1-3和对比例提取的肠蛋白酶的活性对比图；
实施例1-3所提取的蛋白酶纯度较高，杂蛋白较少，提取率与低温浸提法相比，能提高5%-8%。