B7-h4融合蛋白和其使用方法

专利名称：B7-h4融合蛋白和其使用方法
技术领域：
本发明涉及B7-H4融合蛋白和使用B7-H4融合蛋白调节受试者的免疫应答的方法。
_2] 相关串请案的交叉参考本申请案主张 2009年8月31日申请的美国临时专利申请案第61/238，605号、2009年12月4日申请的美国临时专利申请案第61/266，854号、2009年10月26日申请的美国临时专利申请案第61/254，930号、2009年12月15日申请的美国临时专利申请案第61/286，537号以及2010年8月30日申请的美国临时专利申请案第61/378，361号的优先权。
背景技术：
抗原特异性T细胞应答是由两种信号介导第一，TCR与在MHC情形下提呈的抗原肽接合(信号I);和第二，由不同受体/配体对之间接触所传递的第二抗原独立信号(信号2)。此“第二信号”对于确定T细胞应答的类型(活化与容忍)以及所述应答的强度和持续时间至关重要，并且受来自共刺激分子(例如B7蛋白质家族)的正信号和负信号调控。最详尽表征的T细胞共刺激路径是B7-⑶28，其中B7-l(⑶80)和B7-2 (⑶86)各自可接合刺激性⑶28受体和抑制性CTLA-4(⑶152)受体。结合经由T细胞受体进行的信号传导，CD28连接将增加T细胞的抗原特异性增殖；增进细胞因子产生；刺激分化和效应功能；并促进T细胞存活(兰萧(Lenshow)等人,免疫学年鉴(Annu. Rev. Immunol.), 14 233-258(1996);查姆博(Chambers)和埃里森(Allison)，免疫学当代视点(Curr. Opin.Immunol.),9 :396-404(1997);以及雷斯梅尔(Rathmell)和汤普森(Thompson),免疫学年鉴，17 :781-828(1999))。相比之下，经由CTLA-4进行的信号传导被认为传递抑制T细胞增殖、IL-2产生和细胞周期进程的负信号(克鲁梅尔(Krummel)和埃里森(Allison)，实验医学杂志(J. Exp. Med)，183 :2533-2540(1996);和沃伦斯(Walunas)等人，实验医学杂志，183 :2541-2550 (1996))。B7家族的其它成员包括B7-H1 (董(Dong)等人，自然-医学(Nature Med)，5 :1365-1369 (1999);和弗雷曼(Freeman)等人，实验医学杂志，192 :1-9(2000))、B7-DC(曾(Tseng)等人，实验医学杂志，193 =839-846 (2001);和拉奇曼(Latchman)等人，自然-免疫学(Nature Immunol), 2 :261-268 (2001) )、B7-H2 (王(Wang)等人，血液(Blood), 96 :2808-2813 (2000);斯瓦洛(Swallow)等人，免疫学(Immunity),11 :423-432(1999);和吉永(Yoshinaga)等人，自然(Nature), 402 :827-832 (1999))、B7-H3(查普沃(Chapoval)等人，自然-免疫学，2 :269-274 (2001))和 B7_H4(崔(Choi)等人，免疫学杂志(J. Immunol), 171 =4650-4654(2003);西卡(Sica)等人，免疫学，18:849-861(2003);普拉萨德(Prasad)等人，免疫学，18 :863-873 (2003);和臧(Zang)等人，美国国家科学院院刊(Proc. Natl Acad Scl U. S. A. )，100 :10388-10392 (2003))。B7-H1 和B7-DC是PD-I的配体，B7-H2是ICOS的配体，且B7-H3此时仍为孤儿配体(orphan ligand)(董(Dong)等人，免疫学研究(Immunol Res.), 28 :39-48 (2003))。
B7-H4是B7家族的成员，其为T细胞应答的负调控子。人类与小鼠B7-H4共有87%氨基酸一致性，表明重要的在进化上保守的功能。人类和小鼠B7-H4mRNA在淋巴(脾和胸腺)和非淋巴器官(包括肺、肝、睾丸、卵巢、胎盘、骨骼肌、胰腺和小肠)中广泛表达。关于B7-H4蛋白表达的有限研究表明，B7-H4不在新分离的人类T细胞、B细胞、DC和单核细胞上表达，但其可在体外刺激后在这些细胞类型上诱导。免疫组织化学染色显示，B7-H4在乳房、肾、肺和卵巢肿瘤中高度表达，并且逆转录酶聚合酶链反应(reverse-transcriptasepolymerase chain reacti on,RT-PCR)分析表明，小鼠B 7-H4也在包括前列腺、肺和结肠癌在内的大量肿瘤细胞系中高度表达。B7-H4是由肿瘤相关巨噬细胞(tumor associatedmacrophage, ΤΑΜ)高度表达，并且存在于肿瘤血管系统中。调控性T细胞(Treg)经由IL-6和IL-10诱导TAM上的Β7-Η4上调；此举被认为是Treg引起免疫抑制的一种机制。(克雷泽克 J.I. (Kryczek，J. I·)，免疫学杂志(J. Immunol), 177 (I) :40-44 (2006))。也曾在患病的肾的肾小管上皮细胞中观察到B7-H4表达(陈Y. (Chen, Y.)，国际肾脏(Kidney Int.)，70(12) :2092-9 (2006)Epub 2006 年 10 月 18 日)。B7-H4的受体还未得到克隆。经显示，B7-H4不结合于已知的⑶28家族成员，例如CD28、CTLA-4、ICOS和PD-1 (西卡等人，免疫学，18 =849-861 (2003))，且因此这些CD28家族成员并非B7-H4的潜在受体。使用B7-H4转染子和B7-H4_Ig融合蛋白进行的功能研究证实，B7-H4传递抑制TCR介导的⑶4+和⑶8+T细胞增殖、细胞周期进程和IL-2产生的信号。B7-1共刺激不能克服B7-H4-Ig诱导的抑制作用。与体外活性一致，B7-H4基因敲除小鼠产生自体免疫性。B7-H4的广泛可诱导表达结合功能研究表明，B7-H4用于下调周围组织的免疫应答。近期的结果证实，B7-H4也充当嗜中性粒细胞应答的负调控子。嗜中性粒细胞是固有免疫系统的关键组分，并且是宿主针对病原体的第一线防御。然而，嗜中性粒细胞也会引起慢性炎症和自体免疫疾病。B7-H4基因敲除小鼠呈现增加的Thl应答，并且因嗜中性粒细胞依赖性免疫应答增加而对单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)引起的感染更具抗性(苏W.K. (Suh. W. K.)等人，分子细胞生物学(Mol Cell Biol)，26 (17)6403-11(2006);和朱 G. (Zhu，G.)等人，血液学，113 (8) :1759-67 (2009) Epub 2008 年 12 月24日)。用单体B7-H4IgV结构域或细胞外结构域(ECD)水动力转染小鼠使嗜中性粒细胞对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)和李斯特菌感染的应答增加,而二聚体B7-H4_Ig减少骨髓源性嗜中性粒细胞前体增殖(朱G.等人，血液学，113(8) =1759-67 (2009) Epub 2008年12月24日)。某些免疫细胞和免疫细胞信号转导路径是用于治疗免疫病症的新型试剂的理想目标。举例来说，ThU Thl7、Th22和调控性T细胞(Treg)在介导自体免疫性和炎症方面起到重要作用。来自多项研究的越来越多的证据显示了这些免疫细胞在例如类风湿性关节炎、发炎性肠病、多发性硬化、牛皮癣、红斑狼疮和葡萄膜炎等病症中的重要性。大部分现有疗法一次只靶向一种路径。因此，需要靶向自体免疫和炎症中所涉及的多种细胞和路径的疗法，所述细胞例如Thl、Thl7、Th22、Treg，或者分泌或使其它细胞分泌例如细胞因子、金属蛋白酶、趋化因子以及包括(但不限于)IL-1@、TNF-a、TGF-β、IFNi、IL-17, IL-6,IL-23、IL-22、IL-21、IL-10和MMP的其它分子等发炎性分子的其它细胞。因此，本发明一个目的是提供用于调节Th I、Th 17、Th22，或分泌或使其它细胞分泌、包括(但不限于)IL-I β、TNF- a、TGF- β、IFN- y、IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21 和MMP的发炎性分子的其它细胞的组合物和方法。本发明另一目的是提供用于调节至少两个使得优选由Thl、Thl7或Th22细胞分泌包括(但不限于)IL-I β、TNF- a、TGF- β、IFN- y、IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21 和MMP的一种或一种以上发炎性分子的免疫路径的组合物和方法。本发 明另一目的是提供用于调节Treg细胞和路径(例如IL-10和TGF- β分泌)的组合物和方法。本发明另一目的是提供用于调节Thl、Thl7或Th22T细胞的促炎性活性，同时增加或促进Treg活性的组合物和方法。本发明一个目的是提供含有B7-H4多肽的组合物，其用于减少或抑制T细胞的抗原特异性增殖；减少或抑制T细胞产生促炎性分子；减少或抑制Thl、Thl7或Th22细胞的分化和效应功能；以及减少或抑制Thl、Thl7或Th22细胞的存活率。本发明另一目的是提供含有B7-H4多肽的组合物，其用于增加或促进Treg活性；增加由Treg产生例如IL-10等发炎性分子；增加原生T细胞分化成Treg ;增加Treg的数量；或增加Treg的存活率。本发明另一目的是提供含有B7-H4多肽的组合物，其用于抑制或降低Thl、Thl7或Th22T细胞的促炎性活性，同时增加或促进Treg活性。本发明另一目的是提供编码B7-H4组合物的分离的核酸分子。本发明另一目的是提供含有表达编码B7-H4组合物的核酸分子的载体的细胞。本发明另一目的是提供通过使促炎性T细胞与B7-H4组合物接触来减少或抑制促炎性T细胞活化的方法。本发明另一目的是提供用于治疗发炎性和自体免疫疾病和病症的方法。本发明另一目的是提供用于对有需要的哺乳动物投予B7-H4组合物、编码B7-H4组合物的核酸或用编码B7-H4组合物的核酸转染或转导的细胞的方法。另一目的是提供用于增加Treg生物活性的组合物和方法。另一目的是提供用于抑制或减少表位扩展的组合物和方法。另一目的是提供用于抑制原生T细胞分化成Thl、Thl7、Th22，或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I β、TNF-a ,TGF-β、IFNi、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP的促炎性分子的其它细胞的组合物和方法。另一目的是提供用于抑制不成熟抗原提呈细胞的分化和成熟的组合物和方法。本发明另一目的是通过测量将从用所揭示的组合物和方法进行的治疗获益的患者体内例如发炎性趋化因子、细胞因子或其它分子等生物标记物的水平或生物标记物的基因表达来监测所述患者。本发明另一目的是通过测量将从用所揭示的组合物和方法进行的治疗获益的患者体内例如发炎性趋化因子、细胞因子或其它分子等生物标记物的水平来鉴别所述患者。本发明另一目的是通过鉴别将从用所揭示的组合物和方法进行的治疗获益的患者的编码例如发炎性趋化因子、细胞因子或其它分子等生物标记物的基因的多形性来鉴别所述患者。本发明另一目的是提供用于治疗患有发炎性和自体免疫疾病和病症的患者的组合疗法。本发明另一目的是提供用于治疗对TNF阻断剂无应答的患者的组合物。本发明另一目的是提供用于治疗慢性和持久性炎症的组合物。

发明内容
本发明揭示含有B7-H4多肽的融合蛋白。B7-H4融合多肽具有第一融合搭配物，其包含与第二多肽直接融合或经由与第二多肽融合的连接肽序列间接融合的B7-H4蛋白的全部或一部分。B7-H4多肽可属于任何起源物种。在优选实施例中，B7-H4多肽具有鼠类、非人类灵长类动物或人类起源。在一个实施例中，B7-H4融合蛋白抑制Thl、Thl7、Th22，或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I β、TNF- a、TGF- β、IFN- y、IL-17, IL-6,IL-23、IL-22、IL-21和MMP的发炎性分子的其它细胞的发炎性活性。B7-H4融合蛋白也可通过增加例如细胞因子IL-10等分子的产生来增加Treg的抑制能力。B7-H4融合蛋白可包括全长B7-H4多肽或其片段。在一个实施例中，B7-H4多肽是全长B7-H4的可溶性片段。片段包括保留结合于其天然受体的能力且并入B7-H4多肽的一部分或全部细胞外结构域，并且缺乏一部分或全部细胞内和/或跨膜结构域的片段。在一个实施例中，B7-H4多肽片段包括B7-H4多肽的整个细胞外结构域。在其它实施例中，可溶性B7-H4多肽片段包括保持B7-H4生物活性的细胞外结构域的片段。B7-H4多肽细胞外结构域可包括跨膜结构域的1、2、3、4、5个或更多个连续氨基酸，和/或信号序列的1、2、3、4、5个或更多个连续氨基酸。或者，细胞外结构域的C末端、N末端或二者可去除1、2、3、4、5个或更多个连续氨基酸。也可使用B7-H4多肽的变异体和其片段。在一个实施例中，B7-H4多肽可与Ig重链恒定区的一个或一个以上结构域融合，所述结构域优选具有对应于人类免疫球蛋白C Y I链的铰链区、Ch2区和Ch3区或对应于鼠类免疫球蛋白C Y 2a链的铰链区、Ch2区和Ch3区的氨基酸。融合蛋白可发生二聚或多聚反应以形成均二聚体、杂二聚体、均多聚体或杂多聚体。二聚/多聚反应搭配物可呈平行或反平行定向布置。也提供编码所述融合蛋白的分离的核酸分子、并有所述核酸的载体和宿主细胞以及含有所述融合蛋白的药物组合物和免疫原性组合物。免疫原性组合物含有抗原、融合蛋白来源和任选存在的佐剂。本发明揭示使用所述融合蛋白减少或抑制促炎性T细胞活化的方法。所揭示组合物的治疗用途包括治疗或减轻发炎性和自体免疫疾病和病症的一种或一种以上症状。B7-H4融合蛋白适用于通过以下任一或所有方式来治疗炎症抑制或减少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的分化；抑制或降低Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的活性；抑制或减少Thl和/或Thl7路径；抑制或减少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞对发炎性分子的产生和/或分泌 ；抑制或减少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的增殖；与Treg相互作用；增强Treg活性；增强Treg对IL-10的分泌；增加Treg的数量；增加Treg的抑制能力；或其组合。在一个实施例中，B7-H4多肽或融合蛋白增强Treg对免疫系统的抑制活性。Treg可抑制Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌。在一个优选实施例中，B7-H4多肽或融合蛋白增强Treg对原生T细胞的抑制活性，以抑制或减少原生T细胞分化成Thl、Thl7或Th22细胞，并由此减少受试者中Thl或Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的数量，所述发炎性分子包括(但不限于)IL-I β、TNF- a、TGF- β、IFN- y、IL-17, IL-6,IL-23、IL-22、IL-21 和 MMP一个实施例提供一种通过对受试者投予有效量的B7-H4多肽或其融合蛋白来抑制或减少受试者的表位扩展的方法。一个优选实施例提供一种投予有效量的B7-H4多肽或其融合蛋白以抑制或减少多发性硬化(MS)或系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus, SLE)患者的表位扩展的方法。B7-H4多肽、其片段或融合物可与一种或一种以上其它治疗剂组合投予，所述其它治疗剂包括(但不限于)针对其它淋巴细胞表面标记物(例如CD40、α-4整合素 (integrin))或针对细胞因子的抗体；其它融合蛋白，例如CTLA4_Ig ( Orencia 、贝拉西普(belatacept) )、TNFR-Ig (Enbrel ); TNF-α 阻断剂(例如 Remicade、Cimzia 和 Humira)；CD73-Ig ;环磷酰胺(cyclophosphamide, CTX)(即 Endoxan 、Cytoxan 、Neosar 、Procytox >Revimmune )、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)(即Rheumatrex 、Trexall )、贝利单抗(belimumab)(即86111731& )、Tysabri或其它免疫抑制药物；抗增殖剂；细胞毒性剂；或可能有助于免疫抑制的其它化合物。在一个实施例中，所述其它治疗剂靶向免疫活化所涉及的不同路径。在一个优选实施例中，所述其它治疗剂是CTLA-4融合蛋白，例如CTLA-4Ig (阿巴西普(abatac印t))。在一个优选实施例中，所述其它治疗剂是称为贝拉西普的CTLA4-Ig融合蛋白，其含有在体内明显增加其与⑶86的亲合力的两个氨基酸取代(L104E和A29Y)。在另一实施例中，第二治疗剂是环磷酰胺(CTX)。在一个优选实施例中，B7-H4_Ig与CTX以有效量共投予以治疗慢性自体免疫疾病或病症，例如系统性红斑狼疮(SLE)。在另一实施例中，第二治疗剂增加血清中腺苷的量。在一个优选实施例中，第二治疗剂是⑶73-Ig、重组⑶73或另一增加⑶73表达的试剂(例如细胞因子或单克隆抗体或小分子)。在另一实施例中，第二治疗剂是干扰素_β。在另一实施例中，第二治疗剂是Tysabri或另一 MS治疗剂。在一个优选实施例中，B7-H4-Ig与Tysabri —起循环或在停药期期间使用以便降低给与第二治疗剂的频率并降低例如PML等副作用的风险，且防止对第二治疗剂产生抗性。在另一实施例中，第二治疗剂是抑制或减少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌的小分子。在另一实施例中，第二治疗剂是与Treg相互作用、增强Treg活性、促进或增进Treg对IL-10的分泌、增加Treg数量、增加Treg的抑制能力或其组合的小分子。在一个实施例中，小分子是视黄酸或其衍生物。在另一实施例中，B7-H4多肽、其融合蛋白或片段可用于治疗对TNF阻断剂无应答的患者。


图IA和IB是说明使用B7-H4_Ig抑制炎症的作用模式的图。在图IA中，B7-H4_Ig靶向T细胞。在图IB中，B7-H4-Ig阻止树突状细胞(dendritic cell, DC)成熟。图2是说明胶原蛋白诱发的关节炎(collagen induced arthritis, CIA)的预防模型的关节炎诱发和治疗的图。图3是在预防模型中用B7-H4_Ig治疗的小鼠(实心圆)和用媒剂治疗的小鼠(空心圆)的关节炎评分随胶原蛋白II(CII)激发后变化的线图。图4是说明CIA治疗模型的关节炎诱发和治疗的图。图5是在治疗模型中用B7-H4_Ig治疗的小鼠(实心圆)和用媒剂治疗的小鼠(空心圆)的关节炎评分随CII激发后变化的线图。图6是说明CIA治疗模型的代表性疾病诱发和给药方案的图。图7是显示雌性小鼠(AA#79)的关节炎评分随CII免疫后时间(天数)而变化的线图。图中显示了媒剂、鼠类IgG、鼠类B7-H4-Ig、Synagis 、B7-H4-Ig和RPA110010治疗。图8是显示雄性小鼠(AA#80)的关节炎评分随CII免疫后时间(天数)而变化的线图。图中显示了媒剂、鼠类IgG、鼠类B7-H4-Ig、Synagis 、B7-H4-Ig和RPA110010治疗。图9是显示在对来自用B7-H4-Ig或Synagis 治疗的小鼠的血清样品进行定量免疫分析多分析物并行检测(multi-analyte profiling)以鉴别可用于监测疾病发展和对B7-H4-Ig治疗的应答的生物标记物后得到的完整数据集的第一部分的图表。图10是显示在对来自用B7-H4-Ig或Synagis 治疗的小鼠的血清样品进行定量免疫分析多分析物并行检测分析以鉴别可用于监测疾病发展和对B7-H4-Ig治疗的应答的生物标记物后得到的完整数据集的第二部分的图表。图11是显示有关图7和图8的完整数据集的定量免疫分析多分析物并行检测数据分析概要的图表。如果在第27天、第34天、第41天或总的说来，Synagis 与B7-H4_Ig治疗组之间存在差异(P小于O. 05)，那么分析物画有阴影。如果分析物与临床评分之间的相关系数小于O. 3，那么分析物也画有阴影。图12是显示C反应性蛋白(C-Reactive Protein, CRP)的血清水平(yg/ml)与临床评分的关系的线图。图13是在CII免疫后第27天、第34天和第41天用B7-H4-Ig(-·-)或Synagis (_ · _)治疗的小鼠的血清内皮素I (ET-I)水平(pg/ml)的图。图14是显示IL-6的血清水平(μ g/ml)与临床评分的关系的线图。图15是显示在CII免疫后第27天、第34天和第41天用B7-H4_Ig(- ■-)或Synagis (- ·-)治疗的小鼠的血清单核细胞趋化蛋白-I (Monocyte ChemotacticProtein-1, MPC-1)水平(pg/ml)白勺图。图16是显示血清单核细胞趋化蛋白-3(MPC_3)水平(pg/ml)与临床评分的关系的线图。图17是显示在CII免疫后第27天、第34天和第41天用B7-H4_Ig(-·-)或Synagis (- ·-)治疗的小鼠的血清单核细胞趋化蛋白-3(MPC-3)水平(pg/ml)的图。图18是显示在CII免疫后第27天、第34天和第41天用B7-H4_Ig(-·-)或Synagis (- ·-)治疗的小鼠的血清噬菌体发炎性蛋白-2(MIP-2)水平(pg/ml)的图。图20A、20B和20C是显示对于指定的促炎性细胞因子/趋化因子，用B7_H4_Ig (实心柱形)或媒剂对照物(空心柱形)治疗的小鼠的血浆促炎性细胞因子和趋化因子水平的、柱形图。TNFa (图 6a)、IL-6(图 6b)和 MCP-1 (图 6c)。图21是在⑶4+Thl促进条件下利用结合于培养板或在溶液中的对照IgG(空心柱形)或B7-H4-Ig(实心柱形)培养并用结合于珠粒的抗CD3/CD28或用以卵清蛋白肽冲击的抗原提呈细胞活化的小鼠原生T细胞的T细胞增殖情况([3H]胸苷并入)的柱形图。图22是在Thl促进条件下利用结合于培养板或在溶液中的对照IgG(空心柱形)或B7-H4-Ig (实心柱形)培养并用结合于珠粒的抗CD3/CD28或用以卵清蛋白肽冲击的抗原提呈细胞活化的小鼠原生⑶4+T细胞产生的IFN-Y (ng/ml)的柱形图。图23是在Thl7促进条件下利用结合于培养板或在溶液中的对照IgG (空心柱形)或B7-H4-Ig(实心柱形)培养并用结合于珠粒的抗CD3/CD28或用以卵清蛋白肽冲击的抗原提呈细胞活化的小鼠原生CD4+T细胞的T细胞增殖情况([3H]胸苷并入)的柱形图。图24是在Thl7促进条件下利用结合于培养板或在溶液中的对照IgG (空心柱形) 或B7-H4-Ig(实心柱形)培养并用结合于珠粒的抗CD3/CD28或用以卵清蛋白肽冲击的抗原提呈细胞活化的小鼠原生T细胞产生的IL17(ng/ml)的柱形图。图25是在Thl7促进条件下利用结合于培养板或在溶液中的对照IgG (空心柱形)或B7-H4-Ig(实心柱形)培养并用结合于珠粒的抗CD3/CD28或用以卵清蛋白肽冲击的抗原提呈细胞活化的小鼠原生T细胞产生的TNF-a (ng/ml)的柱形图。图26是在Th2促进条件下利用结合于培养板或在溶液中的对照IgG(空心柱形)或B7-H4-Ig (实心柱形)培养并用结合于珠粒的抗CD3/CD28或用以卵清蛋白肽冲击的抗原提呈细胞活化的小鼠原生CD4+T细胞的T细胞增殖情况([3H]胸苷并入)的柱形图。图27是显示由在Thl促进条件下培养并用卵清蛋白肽刺激的小鼠原生T细胞产生的 IFN- Y (ng/ml)随对照 IgG (-〇-)或 B7_H4_Ig 第 22 批(-·-)或 B7_H4_Ig 第 23批(-▲-)的浓度而变化的线图。图28是显示由在Thl7促进条件下培养并用卵清蛋白肽刺激的小鼠原生T细胞产生的 IL-17 (ng/ml)随对照 IgG (-〇-)或 B7_H4_Ig 第 22 批(-·-)或 B7_H4_Ig 第 23 批(-▲-)的浓度而变化的线图。图29是在Thl (- · _)或Thl7(_ ▲-)促进条件下培养，用结合于珠粒的抗CD3/CD28刺激并用直接添加到培养物(溶液)中的递增浓度的人类BT-M-Ig(UgAil)处理的小鼠原生CD4+T细胞的T细胞增殖情况([3H]胸苷并入)的线图。图30是在Thl (- · _)或Thl7(_ ▲-)促进条件下培养，用结合于珠粒的抗CD3/CD28刺激并用直接添加到培养物(溶液)中的递增浓度的人类BT-M-Ig(UgAil)处理的小鼠原生⑶4+T细胞产生的IFN-Y (ng/ml)的线图。图31是在Thl(-·_)或Thl7(_A_)促进条件下培养，用结合于珠粒的抗CD3/CD28刺激并用直接添加到培养物(溶液)中的递增浓度的人类BT-M-Ig(UgAil)处理的小鼠原生⑶4+T细胞产生的IL17 (ng/ml)的线图。图32A和32B是在⑶25+T细胞存在或不存在下在Thl促进条件下培养，用以卵清蛋白肽冲击的抗原提呈细胞刺激并用不同浓度(μ g/ml)的对照IgG或B7-H4-Ig处理的CD4+CD62+原生小鼠T细胞产生的IFN-y (ng/ml) (A)和IL-10 (ng/ml) (B)的线图。用对照IgG处理的含有⑶25+T细胞的T细胞以(·)显示，而B7-H4-Ig以(▲)显示。⑶25+T细胞耗尽且用IgG处理的T细胞以(〇)显示，而B7-H4-Ig以(Λ )显示。
图33A和33B是在⑶25+T细胞存在或不存在下在Thl7促进条件下培养，用以卵清蛋白肽冲击的抗原提呈细胞刺激并用不同浓度(μ g/ml)的对照IgG或B7-H4-Ig处理的CD4+CD62+原生小鼠T细胞产生的IL-17A(ng/ml) (A)和IL-10 (ng/ml) (B)的线图。用对照IgG处理的含有⑶25+T细胞的T细胞以(·)显示，而B7-H4-Ig以(▲)显示。⑶25+T细胞耗尽且用IgG处理的T细胞以(〇)显示，而B7-H4-Ig以(Λ )显示。图34是说明nTreg抑制分析法的流程图。图35 是针对比例为 I : O、I O. 12、I O. 25、I O. 5,1 I 和 I : 2 的原
生CD4+/GFP_应答T细胞与CD4+/GFP+nTreg细胞加经过照射的作为抗原提呈细胞(APC)的未纯化脾细胞、抗CD3抗体以及不同量的鼠类B7-h4-Ig(0(- · -),1(- ■ -)>5(-A-)或ΙΟ(-Τ-) μ g/mL)的T细胞增殖情况([3H]胸苷并入)的线图。图36是在利用自体免疫R-EAE鼠类多发性硬化(MS)模型的体内研究中实验性自 体免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)诱发和治疗方案的示意图。图37 是在 60 μ g(3mg/kg)对照 IgG ( O )或 60 μ g (3mg/kg) B7_H4_Ig ( ·)的治疗天数=O时EAE诱发的S几小鼠的平均临床评分与疾病诱发后天数的关系的线图。图38 是在 60 μ g(3mg/kg)对照 IgG ( O )或 60 μ g (3mg/kg) B7_H4_Ig ( ·)的治疗天数=21时EAE诱发的S几小鼠的平均临床评分与疾病诱发后天数的关系的线图。图39是利用平均耳肿胀(Mean Ear Swelling) (X10_4英寸)测量的在第50天用PLP139_151或PLP178,进行耳激发后第O天或第21天用对照IgG或鼠类B7-H4_Ig治疗的EAE小鼠在第55天的迟发型超敏反应(Delayed-Type Hypersensitivity, DTH)应答的柱形图。空心矩形是在t = O时投予的对照IgG，实心矩形是在t = O时投予的B7-H4-Ig，带向右斜线的矩形是在t = 21时投予的对照IgG，且带向左斜线的矩形是在t = 21时投予的B7-H4-Ig。*DTH应答显著小于注射对照IgG的小鼠，p小于O. 01。图40是从在体外用PLP139_151 (诱发疾病的优势表位)和PLP178_191 (扩展表位特异性肽)处理后第O天或第21天用B7-H4-Ig和对照IgG治疗的EAE小鼠的淋巴结分离的T细胞的T细胞增殖情况(ACPU(每分钟计数))的柱形图。空心矩形是在t = O时投予的对照IgG，实心矩形是在t = O时投予的B7-H4-Ig，带向右斜线的矩形是在t = 21时投予的对照IgG，且带向左斜线的矩形是在t = 21时投予的B7-H4-Ig。I3H]-胸苷并入显著小于注射对照IgG的小鼠，P小于O. 01。图41是从在体外用PLP139_151 (诱发疾病的优势表位)和PLP178_191 (扩展表位特异性肽)处理后第O天或第21天用B7-H4-Ig和对照IgG治疗的EAE小鼠的淋巴结分离的T细胞所产生的IFN- Y (pg/ml)的柱形图。空心矩形是在t = O时投予的对照IgG，实心矩形是在t = O时投予的B7-H4-Ig，带向右斜线的矩形是在t = 21时投予的对照IgG，且带向左斜线的矩形是在t = 21时投予的B7-H4-Ig。*IFN- Y产量显著小于注射对照IgG的小鼠，P小于O. 01。图42是在第10天用PLP139_151或0VA323_339肽(负对照)进行耳激发后，通过在疾病诱发后第O天与第10天之间5次注射60 μ gB7-H4-Ig、300 μ gB7-H4_Ig或对照IgG治疗的EAE小鼠的Λ平均耳肿胀(Χ10_4英寸)-0VA应答的柱形图。*DTH应答显著小于注射对照IgG的小鼠。
图43 是从在体外在抗 CD3 (O. 1-10 μ g/mL)、PLP139_151 (1-20 μ g/mL)或OVA323-S39 (1-20 μ g/mL)存在下再活化的图42中所述的EAE小鼠的淋巴结分离的T细胞的增殖情况(ACPU (每分钟计数))的线图。图44是在利用自体免疫R-EAE鼠类多发性硬化(MS)模型的体内研究中实验性自体免疫性脑脊髓炎(EAE)诱发和治疗方案的示意图。图45A、45B和45C是显示在第50天从用50 μ g在CFA中乳化的PLP肽免疫的SJL小鼠分离的脾(A)、引流淋巴结⑶和CNS中总淋巴细胞数量(X106)的柱形图。缓解期间，用对照IgG或B7-H4-Ig治疗小鼠每剂60或300 μ g，每周3剂，持续2周(6剂)。
图46A、46B和46C是显示从如图45中所述的脾(A)、引流淋巴结⑶或CNS分离的T细胞子集数量(X106)的柱形图，所述T细胞子集为CD4+(T细胞)、CD4+/FoXP3+(Treg)和CD4+/CD44+(效应/记忆T细胞)。提供的数据为来自个别小鼠的每一表型的细胞的平均数量。图47是显示对于对照IgG、60 μ g或300 μ g B7_H4_Ig治疗，来自图46的CD4+T细胞中Treg百分含量的柱形图。图48A和48B是显示在第35天从用50 μ g在CFA中乳化的PLP肽免疫并在体外在抗CD3 (I μ g/ml)、PLP139^151或PLP178_191 (20 μ g/ml)存在下活化的SJL小鼠分离的总脾细胞(A)和淋巴结细胞(B)的增殖情况(CPU(每分钟计数))的柱形图。缓解期间，用对照IgG或B7-H4-Ig治疗小鼠每剂60或300 μ g，每周3剂，持续2周出剂)。图49是显示在疾病诱发后的50天时间过程(天)中SJL小鼠的平均临床评分的线图。从疾病诱发后第23天开始，一周三次用60 μ gB7-H4-Ig(- ·-)、300 μ gB7-H4-Ig(- ▲-)或对照 IgG (- Δ -)治疗小鼠。图50是在利用自体免疫R-EAE鼠类多发性硬化(MS)模型的体内研究中实验性自体免疫性脑脊髓炎(EAE)诱发和人类B7-H4-Ig治疗方案的示意图。图51A和51B是显示在疾病诱发后55天时间过程(天)中SJL小鼠的平均临床评分(A)和长期复发率(B)的线图。从疾病诱发后第23天开始，一周三次用IOOyg人类B7_H4_Ig (5mg/kg)、500 μ g 人类 B7-H4_Ig(25mg/kg)或 100 μ g 对照 IgGSynagis (5mg/kg)治疗小鼠，持续4周。图52是CTLA4KD/N0D糖尿病小鼠％与连续4周每周3次用B7-H4_Ig治疗(15mg/kg，每次均为腹膜内注射)后的周数的关系的线图。小鼠为两周龄。图53是CTLA4KD/BDC2.5/N0D糖尿病小鼠％与连续4周每周3次用B7-H4_Ig治疗(15mg/kg，每次均为腹膜内注射)后的周数的关系的线图。小鼠为11周龄。图54是来自对照小鼠和用不同剂量B7-H4_Ig治疗的小鼠的Treg细胞增殖百分比的柱形图。Treg细胞滴定到5天肠抗原特异性⑶4+⑶25-增殖分析法中。每一柱形表示以未暴露于Treg的培养物的百分比表示的四个重复培养物的平均cpm值，且条形表示SD。在本图中，从左到右每组三个柱形表示来自用对照物、B7-H4-Ig(60y g)或B7-H4-Ig(300y g)治疗的小鼠的 Trego图55是从对照小鼠或用B7-H4_Ig治疗且暴露于肠抗原冲击的脾细胞APC达5天的小鼠回收的CD4+CD25-细胞的增殖情况(cpm)的柱形图。每一柱形表示四个重复培养物的平均cpm值，且条形表示SD。在本图中，从左到右每组三个柱形表示来自用对照物、B7-H4-Ig(60y g)或 B7-H4_Ig(300 μ g)治疗的小鼠的 Treg。图56是显示在第9天、4天培养期的第I天或第2天添加到培养物中的Thl7分化混合液(differentiation cocktail)以及鼠类B7-H4_Ig、鼠类同种型IgG2a对照物或视黄酸(RA)存在下由用抗⑶3/⑶28活化的Balb/C小鼠原生T细胞分泌的IL-17A的量(ng/ml)的柱形图。图57是显示由抗⑶3/⑶28和鼠类B7-H4_Ig活化的小鼠原生T细胞的mRNA相对于鼠类同种型对照物的上调或下调倍数的柱形图。所有细胞都在Thl7分化混合液存在下培养。Thl7细胞、Treg、自体免疫病症和/或炎症中所涉及的mRNA的表达是借助定量RT-PCR 测试。 图58是显示在由抗⑶3/⑶28和在融合蛋白46位具有Q或L的人类B7-H4-Ig(l μ g/mL)或者作为同种型对照物的针对呼吸道合胞病毒F蛋白A抗原位点中的表位的人化单克隆IgG抗体(Synagis)活化的人类T细胞中mRNA上调或下调倍数的柱形图。所有细胞都在Thl7分化混合液存在下培养。Thl7细胞、Treg、自体免疫病症和/或炎症中所涉及的mRNA的表达是借助定量RT-PCR测试。图59是由用指定浓度的鼠类B7-H4_Ig、鼠类IgG对照物或视黄酸处理的TH17细胞产生的IL-17A(ng/ml)浓度的柱形图。图60是IL-17A (ng/ml)随蛋白质浓度(μ g/ml)变化的线图，其显示了B7-H4-IgQ( ■ )、B7-H4-IgL( ▲)与 Synagis ( )(不相关的人类 IgG1 抗体)对小鼠 Thl7细胞的活性的比较。图61是IL-17A(ng/ml)随蛋白质浓度(yg/ml)变化的线图，其显示了鼠类B7-H4-Ig(第22批(■)和第23批(▲))与小鼠IgG( )和视黄酸对照物( )对Thl7细胞的活性的比较。图62是利用MRL/lpr狼疮小鼠模型的体内研究的治疗方案的示意图。图63是显示在从预先治疗(4周)并定期治疗直到21周龄的对照组、B7-H4_Ig和环磷酰胺(CTX)组合治疗组、仅B7-H4-Ig治疗组和仅CTX治疗组的MRL/lpr小鼠收集的血浆中检测的抗ds DNA自身抗体(单位)的柱形图。对于每一治疗组，从左到右，各柱形显示在4、7、8、9、10、11、15、19和21周时的抗ds DNA自身抗体。图64是显示在21周时对照组、B7-H4_Ig和环磷酰胺(CTX)组合治疗组、仅B7-H4-Ig治疗组和仅CTX治疗组的蛋白质指数(单位)的柱形图。
具体实施例方式I.定义本文中使用的术语“分离的”是指相关化合物(例如聚核苷酸或多肽)所处环境不同于所述化合物天然存在的环境，举例来说，例如通过将肽浓缩到不能在自然界中发现的浓度而与其自然环境分离。“分离的”包括化合物在实质上富集相关化合物的样品内和/或其中相关化合物部分或实质上纯化。“免疫细胞”是指造血系统起源的任何细胞，包括(但不限于)T细胞、B细胞、单核细胞、树突状细胞和巨噬细胞。本文中使用的术语“多肽”是指任何长度的氨基酸链，不管是否存在修饰(例如磷酸化或糖基化)。本文中使用的“共刺激多肽”或“共刺激分子”是在与T细胞上的细胞表面分子相互作用时调节T细胞应答的多肽。本文中使用的“共刺激信号传导”是在抗原特异性T细胞应答期间由抗原提呈细胞上的共刺激多肽与其在T细胞上的受体之间相互作用所产生的信号传导活性。抗原特异性T细胞应答是由两种信号介导1)T细胞受体(TCR)与在MHC情形下提呈的抗原肽接合(信号I);和2)，由不同共刺激受体/配体对之间接触所传递的第二抗原独立信号(信号2)。此“第二信号”对于确定T细胞应答的类型(活化与抑制)以及所述应答的强度和持续时间至关重要，并且受来自共刺激分子(例如Β7蛋白质家族)的正信号和负信号调控。本文中使用的术语“Β7多肽”意指Β7蛋白质家族的成员，其共刺激T细胞，包括(但不限于)Β7-1、Β7-2、B7-DC、Β7-Η5、Β7-Η1、Β7-Η2、Β7-Η3、Β7-Η4 和其生物活性片段和/或变异体。代表性生物活性片段包括共刺激T细胞的细胞外结构域或细胞外结构域的片段。本文中使用的“可溶性Β7-Η4”或“ sH4”是指可由表达B7-H4的细胞脱出、分泌或以其它方式提取的B7-H4片段。可溶性B7-H4片段包括B7-H4多肽的一部分或全部细胞外结构域，并且缺乏一部分或全部细胞内和/或跨膜结构域。在一个实施例中，可溶性B7-H4多肽片段包括B7-H4多肽的整个细胞外结构域。在其它实施例中，可溶性B7-H4多肽片段包括细胞外结构域的片段。B7-H4多肽的细胞外结构域可易于由所属领域技术人员使用例如水疗法图谱(hydropathy plotting)等标准方法确定。本文中使用的“发炎性分子”是指产生发炎性应答的分子，包括(但不限于)细胞因子和金属蛋白酶，例如包括(但不限于)IL-I β、TNF-a、TGF-β、IFN-y , IL-17, IL-6,IL-23、IL-22、IL-21 和 MMP。本文中使用的“载体”是一种复制子，例如质粒、噬菌体或柯斯质粒(cosmid)，其中可插入另一 DNA区段以引起插入的区段的复制。本文所述的载体可以是表达载体。本文中使用的“表达载体”是包括一个或一个以上表达控制序列的载体。本文中使用的“表达控制序列”是控制和调控另一 DNA序列的转录和/或翻译的DNA序列。“按可操作方式连接”是指各元件的布置使得所述各组件经过配置以执行其常见或预定功能。因此，按可操作方式连接在一起的两个不同多肽保持其相应的生物功能，同时以物理方式连接在一起。本文中使用的“价态”是指每一分子可用的结合位点的数量。本文中使用的“变异”多肽相比相应野生型多肽的氨基酸序列含有至少一个氨基酸序列变化。本文中使用的“保守”氨基酸取代是经过取代的氨基酸具有类似结构或化学性质的取代。本文中使用的术语“宿主细胞”是指可引入重组载体的原核和真核细胞。本文中使用的“转化”和“转染”涵盖借助此项技术中已知的多种技术将核酸(例如载体)引入细胞中。本文中使用的短语分子“特异性结合”于目标或与目标“呈现特异性结合”是指在、其它异源生物群体存在下决定所述分子的存在的结合反应。在指定免疫分析条件下，特定分子优先结合于特定目标，并且不会大量结合于样品中存在的其它生物。抗体与目标在所述条件下的特异性结合需要选择对所述目标具有特异性的抗体。可使用多种免疫分析型式来选择与特定蛋白质具有特异性免疫反应性的抗体。举例来说，常常使用固相ELISA免疫分析法来选择与某一蛋白质具有特异性免疫反应性的单克隆抗体。有关可用于确定特异性免疫反应性的免疫分析型式和条件的描述，参见例如哈罗瓦(Harlow)和莱恩(Lane)(1988),抗体实验室手册(Antibodies, A Laboratory Manual),冷泉港出版社(ColdSpring Harbor Publications),纽约(New York)。本文中使用的术语“免疫的”、“免疫学的”或“免疫”应答是产生针对受体患者中某一肽的有益体液(抗体介导的)和/或细胞(由抗原特异性T细胞或其分泌产物介导的)应答。此类应答可为通过投予免疫原诱导的主动应答或通过投予抗体或预致敏T细胞诱导的被动应答。细胞免疫应答是由提呈多肽表位与I类或II类MHC分子的组合以活化抗原特异性CD4+T辅助细胞和/或CD8+细胞毒性T细胞所引起。所述应答也可能涉及单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、嗜碱细胞、树突状细胞、星形细胞、小胶质细胞、嗜酸性粒细胞的活化，嗜中 性粒细胞或固有免疫性的其它组分的活化或募集。细胞介导的免疫学应答的存在可由增殖分析法(CD4+T细胞)或CTL (细胞毒性T淋巴细胞)分析法确定。体液和细胞应答对免疫原的预防或治疗作用的相对贡献可通过从经过免疫的同种同基因动物单独分离出抗体和T细胞，并测量在另一受试者中的预防或治疗作用来辨识。“免疫原性试剂”或“免疫原”能够在任选与佐剂组合投予哺乳动物后诱导针对其自身的免疫应答。术语“个体”、“宿主”、“受试者”和“患者”在本文中可互换使用，并且指哺乳动物，包括(但不限于)人类、啮齿动物(例如小鼠和大鼠)和其它实验动物。II.融合蛋白B7-H4融合多肽具有第一融合搭配物，其包含与第二多肽直接融合或经由与第二多肽融合的连接肽序列融合的B7-H4蛋白的全部或一部分。融合蛋白任选含有用以使两种或两种以上融合蛋白二聚或多聚的结构域。肽/多肽连接子结构域可为独立结构域，或者可包含在融合蛋白其它结构域(B7-H4多肽或第二多肽)中的一者内。类似地，用以使融合蛋白二聚或多聚的结构域可为独立结构域，或者可包含在融合蛋白其它结构域(B7-H4多肽、第二多肽或肽/多肽连接子结构域)中的一者内。在一个实施例中，二聚/多聚结构域与肽/多肽连接子结构域是相同的。本文揭示的融合蛋白具有式I :N_R「R2_R3_C其中“N”表不融合蛋白的N末端,“C”表不融合蛋白的C末端。在一个优选实施例中，“R/’是B7-H4多肽，“R2”是任选存在的肽/多肽连接子结构域，且“R3”是第二多肽。或者，R3可为B7-H4多肽，且R1可为第二多肽。二聚或多聚反应可通过二聚或多聚结构域在两种或两种以上融合蛋白之间发生。或者，融合蛋白的二聚或多聚反应可通过化学交联发生。形成的二聚体或多聚体可为均二聚体/均多聚体或杂二聚体/杂多聚体。A.B7-H4 多肽
在一个优选实施例中，B7-H4多肽来自哺乳动物物种。在最优选的实施例中，B7-H4多肽为鼠类、非人类灵长类动物(黑猩猩(Pan troglodytes)、恒河猴(Macaca mulatto)或食蟹猴(Macaca fascicularis))或人类来源。适用的鼠类B7-H4多肽与由基因库寄存编号(GenBank Accession Number) NM—178594 或 AY280973 的核酸所编码的 B7-H4 多肽具有至少约80%、85%、9 0%、95%或100%序列一致性。适用的鼠类B7-H4多肽与根据基因库寄存编号AAH32925. I或NP—848709. 2的B7-H4多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列一致性。适用的人类B7-H4多肽与由基因库寄存编号AK026071的核酸所编码的87-财多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列一致性。适用的人类B7-H4多肽与根据基因库寄存编号NP—078902. 2或BAB15349. I的B7-H4多肽具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列一致性。鼠类B7-H4多肽可由与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性的核苷酸序列编码atggcttcct tggggcagat catcttttgg agtattatta acatcatcat catcctggct 60ggggccatcg cactcatcat tggctttggc atttcaggca agcacttcat cacggtcacg 120accttcacct cagctggaaa cattggagag gacgggaccc tgagctgcac ttttgaacct 180gacatcaaac tcaacggcat cgtcatccag tggctgaaag aaggcatcaa aggtttggtc 240cacgagttca aagaaggcaa agacgacctc tcacagcagc atgagatgtt cagaggccgc 300acagcagtgt ttgctgatca ggtggtagtt ggcaatgctt ccctgagact gaaaaacgtg 360cagctcacgg atgctggcac ctacacatgt tacatccgca cctcaaaagg caaagggaat 420gcaaaccttg agtataagac cggagccttc agtatgccag agataaatgt ggactataat 480gccagttcag agagtttacg ctgcgaggct cctcggtggt tcccccagcc cacagtggcc 540tgggcatctc aagtcgacca aggagccaat ttctcagaag tctccaacac cagctttgag 600ttgaactctg agaatgtgac catgaaggtc gtatctgtgc tctacaatgt cacaatcaac 660aacacatact cctgtatgat tgaaaacgac attgccaaag ccaccgggga catcaaagtg 720acagattcag aggtcaaaag gcgaagtcag ctgcagttgc tgaactctgg gccttccccg 780tgtgtttttt cttctgcctt tgtggctggc tgggcactcc tatctctctc ctgttgcctg 840atgctaagat ga852(SEQ ID NO :1) 鼠类B7-H4多肽可与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性MASLGQIIFff SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP 60DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQWV GNASLRLKNV 120QLTDAGTYTC YIRSSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA 180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV 240TDSEVKRRSQ LQLLNSGPSP CVSSSAFVAG WALLSLSCCL MLR283(SEQ ID NO:2)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV 60IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY 120TCYIRSSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAffASQVDQG 180
ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR240SQLQLLNSGP SPCVSSSAFV AGffALLSLSC CLMLR275(SEQ ID NO:3)、GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK60DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ WVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRSSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAffASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG PSPCVSSSAF240VAGffALLSLS CCLlR256
(SEQ ID NO:4)、MASLGQIIFff SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP60DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQWV GNASLRLKNV120QLTDAGTYTC YIRTSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TDSEVKRRSQ LQLLNSGPSP CVFSSAFVAG WALLSLSCCL MLR283(SEQ ID NO:5)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV60IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY120TCYIRTSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR240SQLQLLNSGP SPCVFSSAFV AGffALLSLSC CLlR275(SEQ ID NO :6)或GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK60DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ WVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAffASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG PSPCVFSSAF240VAGffALLSLS CCL醫256(SEQ ID NO :7)人类B7-H4多肽可由与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性的核苷酸序列编码atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct60ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact120actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct180gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc240catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg300acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg360caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat420gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgt ggactataat480gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc540tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaatac cagctttgag600
ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacagggga tatcaaagtg720acagaatcgg agatcaaaag gcggagtcac ctacagctgc taaactcaaa ggcttctctg780tgtgtctctt ctttctttgc catcagctgg gcacttctgc ctctcagccc ttacctgatg840ο ββββ ββ849(SEQ ID NO :8)。人类B7-H4多肽可与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列
一致性 MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFFAISff ALLPLSPYLM LK282(SEQ ID NO :9)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240SHLQLLNSKA SLCVSSFFAI SffALLPLSPY LMLK274(SEQ ID NO :10)、GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFFA240ISffALLPLSP YLMLK255(SEQ ID NO :11)、MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFFAISff ALLPLSPYLM LK282(SEQ ID NO :12)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVTINNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240SHLQLLNSKA SLCVSSFFAI SffALLPLSPY LMLK274(SEQ ID NO :13)或GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFFA240ISffALLPLSP YLMLK255(SEQ ID NO :14)。非人类灵长类动物的B7-H4多肽可与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性 MKPLTSRIIS IIIILAGAIA LIIGFGISGR HSITVTTVAS AGNIGEDGIL SCTFEPDIKL60SDIVIQWLKE GVLGLVHEFK EGKDELSEQD EMFRGRTAVF ADQVIVGNAS LRLKNVQLTD120AGTYKCYIIT SKGKGNANLE YKTGAFSMPE VNVDYNASSE TLRCEAPRWF PQPTWffASQ180IDQGANFSEV SNTSFELNSE NVTMKVVSVL YNATINNTYS CMIENDIAKA TGDIKVTESE240IKRRSHLQLL NSKASLCVSS FFAISffALLP LSPYLMLK278(SEQ ID NO :15)或GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQIDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNA TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFFA240ISffALLPLSP YLMLK255(SEQ ID NO :16)或MASLGQILFff SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFLAISff ALLPLAPYLM LK282(SEQ ID NO :17)或GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFLA240ISffALLPLAP YLMLK255(SEQ ID NO :18)或MASLGQILFff SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKASL CVSSFLAISff ALPPLAPYLM LK282(SEQ ID NO :19)或GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWA8QVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK ASLCVSSFLA 240ISffALPPLAP YLMLK255(SEQ ID NO :20)，其中SEQ ID NO :15 和 16 是黑猩猩(chimapanzee/Pan troglodytes)多妝序列，SEQ ID NO :17 和 18 是恒河猴(rhesus monkey/Macaca mulatto)多妝序列，且 SEQ ID NO 19 和 20 是食蟹猴(cynomolgus monkey/Macaca fascicularis)多妝序列。编码B7-H4多肽的核酸可经过优化以在所选表达宿主中表达。密码子可用编码同一氨基酸的替代性密码子取代，以说明获得B7-H4核酸序列的哺乳动物与表达宿主之间密码子用法的差异。按这种方式，可使用表达宿主优选的密码子合成核酸。I. B7-H4多肽的片段B7-H4蛋白在细胞外含有两个免疫球蛋白结构域，即IgV结构域(或V结构域)和IgC结构域(或C结构域)，其与抗体的可变结构域和恒定结构域相关。这些结构域可由所属领域技术人员通过搜索家族和结构域数据库来鉴别。根据来自分离的IgV结构域的功能数据，以及通过类比其它B7家族成员，相信IgV结构域负责受体结合。细胞外结构域中的每一 Ig结构域都包括在结构域内半胱氨酸残基之间形成的一个二硫键，这是此折叠特有的并且对于结构-功能极为重要。在SEQ ID N0:2、5、9和12中，对于IgV结构域，这些半胱氨酸位于残基56和130处,且对于IgC结构域则位于残基168和225处。此外,在IgV结构域中存在一个预测的N连接糖基化位点，并且在IgC结构域中存在6个糖基化位点，这些糖基化位点在小鼠与人类B7-H4序列之间保持不变。在一个实施例中，第一融合搭配物是B7-H4的片段。如本文中所用，B7-H4的片段是指比全长蛋白质少至少一个氨基酸的多肽的任何子集。适用的片段是保持结合于其一个或一个以上天然受体的能力的片段。作为全长B7-H4的片段的B7-H4多肽结合其天然受体的能力通常是全长 B7-H4 的至少 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%、99%、100% 或甚至超过 100%。B7-H4多肽的片段包括可溶性片段。可溶性B7-H4多肽片段是可由产生细胞脱出、分泌或以其它方式提取的B7-H4多肽的片段。可溶性B7-H4多肽片段包括一部分或全部受体多肽细胞外结构域，并且缺乏一部分或全部细胞内和/或跨膜结构域。在一个实施例中，B7-H4多肽片段包括B7-H4多肽的整个细胞外结构域。在其它实施例中，可溶性B7-H4多肽片段包括保持B7-H4生物活性的细胞外结构域的片段。细胞外结构域可包括跨膜结构域的1、2、3、4或5个连续氨基酸，和/或信号序列的1、2、3、4或5个连续氨基酸。或者，细胞外结构域的C末端、N末端或二者可去除1、2、3、4、5个或更多个氨基酸。在一些实施例中，细胞外结构域仅为IgV结构域，或在位于全长蛋白质的残基56和130处的IgV结构域保守半胱氨酸之间的区域。一般说来，B7-H4多肽或其片段是由包括编码信号序列的序列的核酸表达。信号序列一般从不成熟多肽裂解，产生不含信号序列的成熟多肽。SEQ ID NO :4、7、11、14、16、18和20各自不含信号肽。可使用标准分子生物学技术，用另一多肽的信号序列代替B7-H4的信号序列，以影响多肽的表达水平、分泌、溶解性或其它性质。用来代替B7-H4信号序列的信号序列可以是此项技术中已知的任何序列。SEQ ID NO :2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和、19各自含有信号肽。
在一个优选实施例中，融合蛋白包括B7-H4的细胞外结构域，或其与Ig Fe区融合的片段。如先前所述，可通过将B7-H4或其片段的细胞外结构域的编码区与人类IgGl或小鼠IgG2a的Fe区融合，来制备重组B7-H4_Ig融合蛋白(查普沃(Chapoval)等人，分子医学方法(Methods Mol Med.) ,45 :247-255 (2000))。a.鼠类B7-DC细胞外结构域融合搭配物在一个实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括鼠类B7-H4细胞外结构域或其片段。第一融合搭配物可由与以下序列具有至少80 %、85 %、90 %、95 %、99 %或100 %序列一致性的核苷酸序列编码atggcttcct tggggcagat catcttttgg agtattatta acatcatcatcatcctggct60ggggccatcg cactcatcat tggctttggc atttcaggca agcacttcatcacggtcacg120 accttcacct cagctggaaa cattggagag gacgggaccc tgagctgcacttttgaacct180gacatcaaac tcaacggcat cgtcatccag tggctgaaag aaggcatcaaaggtttggtc240cacgagttca aagaaggcaa agacgacctc tcacagcagc atgagatgttcagaggccgc300acagcagtgt ttgctgatca ggtggtagtt ggcaatgctt ccctgagactgaaaaacgtg360cagctcacgg atgctggcac ctacacatgt tacatccgca cctcaaaaggcaaagggaat420gcaaaccttg agtataagac cggagccttc agtatgccag agataaatgtggactataat480gccagttcag agagtttacg ctgcgaggct cctcggtggt tcccccagcccacagtggcc540tgggcatctc aagtcgacca aggagccaat ttctcagaag tctccaacaccagctttgag600ttgaactctg agaatgtgac catgaaggtc gtatctgtgc tctacaatgtcacaatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaacgac attgccaaag ccaccggggacatcaaagtg720acagattcag aggtcaaaag gcgaagtcag ctgcagttgc tgaactctggg771(SEQ ID NO :21)、atggagtggt catgggtttt tctgttcttt cttagcgtga ctacaggcgtccattcagga60ttcggcataa gcggcaagca cttcatcaca gttacaacgt ttacaagtgcggggaacatt120ggggaagatg gaacattgtc atgtacattt gagccagata tcaaactcaatggaatagta180attcagtggc ttaaggaggg catcaagggc ctggtccacg aatttaaggaggggaaagac240gatctgtctc agcagcacga gatgttcagg ggcagaaccg ccgtcttcgcagaccaggtt300gtggtaggca acgccagttt gcggctgaaa aacgtgcagc tgactgacgccggcacctac360acatgctata tccggtcctc taagggcaag gggaacgcta atctcgagtacaaaacaggc420gccttttcta tgccagagat caacgtggac tataacgcaa gctctgaaagtctgagatgc480gaggcgccaa ggtggttccc tcagcccacc gtcgcgtggg cttcccaggtggatcaaggc540gccaactttt ctgaggtttc taacaccagc ttcgaactga acagcgaaaatgtgacaatg600aaggtagtca gcgttctgta taacgtgacc atcaacaata cttactcctgtatgatagaa660aatgatatag ccaaggctac aggagatatt aaagtgacgg attcagaagtgaaaaggagg720agtcaactgc aactcttgaa tagcggc747(SEQ ID NO :22)或atggagtggt catgggtttt tctgttcttt cttagcgtga ctacaggcgtccattcagga60ttcggcataa gcggcaagca cttcatcaca gttacaacgt ttacaagtgcggggaacatt120
ggggaagatg gaacattgtc atgtacatttgagccagata tcaaactcaa tggaatagta180attcagtggc ttaaggaggg catcaagggcctggtccacg aatttaagga ggggaaagac240gatctgtctc agcagcacga gatgttcaggggcagaaccg ccgtcttcgc agaccaggtt300gtggtaggca acgccagttt gcggctgaaaaacgtgcagc tgactgacgc cggcacctac360
acatgctata tccggacctc taagggcaaggggaacgcta atctcgagta caaaacaggc420gccttttcta tgccagagat caacgtggactataacgcaa gctctgaaag tctgagatgc480gaggcgccaa ggtggttccc tcagcccaccgtcgcgtggg cttcccaggt ggatcaaggc540gccaactttt ctgaggtttc taacaccagcttcgaactga acagcgaaaa tgtgacaatg600aaggtagtca gcgttctgta taacgtgaccatcaacaata cttactcctg tatgatagaa660aatgatatag ccaaggctac aggagatattaaagtgacgg attcagaagt gaaaaggagg720agtcaactgc aactcttgaa tagcggc747(SEQ ID NO :23)。在另一实施例中，第一融合搭配物可与以下鼠类氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或 100%序列一致性MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFITVTTFTSAGNI GEDGTLSCT FEPDIKLNGIV60IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFRGRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY120TCYIRSSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVDYNASSESLRC EAPRWFPQPT VAffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVTINNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR240SQLQLLNSG249(SEQ ID NO :24)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFITVTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV60IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFRGRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY120TCYIRTSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVDYNASSESLRC EAPRWFPQPT VAffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVTINNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR240SQLQLLNSG249(SEQ ID NO :25)、MASLGQIIFff SIINIIIILA GAIALIIGFGISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP60DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDLSQQHEMFRGR TAVFADQWV GNASLRLKNV120QLTDAGTYTC YIRSSKGKGN ANLEYKTGAFSMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKVVSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TDSEVKRRSQ LQLLNSG257(SEQ ID NO :26)或MASLGQIIFff SIINIIIILA GAIALIIGFGISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP60DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDLSQQHEMFRGR TAVFADQWV GNASLRLKNV120QLTDAGTYTC YIRTSKGKGN ANLEYKTGAFSMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKVVSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TDSEVKRRSQ LQLLNSG257(SEQ ID NO :27)。成熟蛋白质中的信号序列被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。SEQ ID NO :28提供了不含信号序列的鼠类氨基酸序列 SEQ ID NO 24 和 SEQ ID NO 26 GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK 60DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ WVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRSSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAffASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG230(SEQ ID NO :28)。SEQ ID NO :29提供了不含信号序列的鼠类氨基酸序列SEQ ID NO 25和SEQ ID NO 27 GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK 60DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ WVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAffASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG230(SEQ ID NO :29)。在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括鼠类B7-H4的IgV结构域。在一个实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO 2或SEQ ID NO 5的56位半胱氨酸到SEQID NO 2或SEQ ID NO 5的130位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。第一融合搭配物可由与以下编码示范性IgV结构域的核苷酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性的核苷酸序列编码ggattcggca taagcggcaa gcacttcatc acagttacaa cgtttacaag tgcggggaac 60attggggaag atggaacatt gtcatgtaca tttgagccag atatcaaact caatggaata 120gtaattcagt ggcttaagga gggcatcaag ggcctggtcc acgaatttaa ggaggggaaa 180gacgatctgt ctcagcagca cgagatgttc aggggcagaa ccgccgtctt cgcagaccag 240gttgtggtag gcaacgccag tttgcggctg aaaaacgtgc agctgactga cgccggcacc 300tacacatgct atatccggtc ctctaagggc aaggggaacg ctaatctcga gtacaaaaca 360ggcgcctttt ctatgccaga gatcaac387(SEQ ID NO 30)或ggattcggca taagcggcaa gcacttcatc acagttacaa cgtttacaag tgcggggaac 60attggggaag atggaacatt gtcatgtaca tttgagccag atatcaaact caatggaata 120gtaattcagt ggcttaagga gggcatcaag ggcctggtcc acgaatttaa ggaggggaaa 180gacgatctgt ctcagcagca cgagatgttc aggggcagaa ccgccgtctt cgcagaccag 240gttgtggtag gcaacgccag tttgcggctg aaaaacgtgc agctgactga cgccggcacc 300tacacatgct atatccggac ctctaagggc aaggggaacg ctaatctcga gtacaaaaca 360ggcgcctttt ctatgccaga gatcaac387(SEQ ID NO :31)。第一融合搭配物可与以下鼠类氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK 60
DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ WVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRSSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEIN129(SEQ ID NO :32)或GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCTFEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK60DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ WVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEIN129(SEQ ID NO :33)。b.人类细胞外结构域融合搭配物 在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括人类B7-H4细胞外结构域或其片段。第一融合搭配物可由与以下序列具有至少80 %、85 %、90 %、95 %、99 %或100 %序列一致性的核苷酸序列编码atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct60ggagcaattg cactcatcat tggctttggtatttcaggga gacactccat cacagtcact120actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct180gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc240catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg300acagcagtgt ttgctgatca agtgatagttggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg360caactcacag atgctggcac ctacaaatgttatatcatca cttctaaagg caaggggaat420gctaaccttg agtataaaac tggagccttcagcatgccgg aagtgaatgt ggactataat480 gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggctccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc540tgggcatccc aagttgacca gggagccaacttctcggaag tctccaatac cagctttgag600ctgaactctg agaatgtgac catgaaggttgtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaatgacattgccaaag caacagggga tatcaaagtg720acagaatcgg agatcaaaag gcggagt747(SEQ ID NO :34)、atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct60ggagcaattg cactcatcat tggctttggtatttcaggga gacactccat cacagtcact120actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct180gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc240catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg300acagcagtgt ttgctgatca agtgatagttggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg360caactcacag atgctggcac ctacaaatgttatatcatca cttctaaagg caaggggaat420gctaaccttg agtataaaac tggagccttcagcatgccgg aagtgaatgt ggactataat480gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggctccccgatggt tcccccagcc cacagtggtc540tgggcatccc aagttgacca gggagccaacttctcggaag tctccaatac cagctttgag600ctgaactctg agaatgtgac catgaaggttgtgtctgtgc tctacaatgt tacgatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaatgacattgccaaag caacagggga tatcaaagtg720acagaatcgg agate735(SEQ ID NO :35)、
atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcattattctggct60ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccatcacagtcact120actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcacttttgaacct180gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgttttaggcttggtc240catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgttcagaggccgg300acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggctgaaaaacgtg360caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat420gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgtggactataat480 gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcccacagtggtc540tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaataccagctttgag600ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgttacgatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacagggga tatcaaagtg720acagaatcgg agatcaaaag gcggagtcac ctacagctgc taaactcaaa ggcttct777(SEQ ID NO :36)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgtccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgctggcaatata120ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgctggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaacattgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggttgatcagggg540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagatcaaacggcgg720tct723(SEQ ID NO :37)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgtccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgctggcaatata120ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgctggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaacattgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggttgatcagggg540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa660
aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat c711(SEQ ID NO :38)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata120ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta300
atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg720tctcacctac agctgctaaa ctcaaaggct tct753(SEQ ID NO :39)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata120ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg720tct723(SEQ ID NO :40)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata120ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaagga agggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagta taaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggt tgatcagggg540
gctaactttt ccgaggtgag caacaccagcttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaacaatcaacaaca cttattcatg catgattgaa660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatattaaggtaactg aatccgagat c711(SEQ ID NO :41)或atggaatgga gctgggtatt tctgtttttcctgtcagtaa cgactggcgt ccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcacagtgaccaccg tcgcctccgc tggcaatata120ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtacctttgagccggaca tcaaactgtc tgacatagtg180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggtctggtacatg agtttaagga agggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgggggaggaccg ctgtgttcgc cgatcaggta300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaaaatgtgcaac tgactgatgc tggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaaggaaatgcta accttgagta taaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgactataatgcca gcagtgaaac attgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaaccgtggtctggg cctctcaggt tgatcaggggS40gctaactttt ccgaggtgag caacaccagcttcgaactca actctgagaa tgtgaccatg600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaacaatcaacaaca cttattcatg catgattgaa660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatattaaggtaactg aatccgagat caaacggcgg720tctcacctac agctgctaaa ctcaaaggcttct753(SEQ ID NO :42)。在另一实施例中，第一融合搭配物可与以下人类氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或 100%序列一致性MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSITVTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFRGRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVDYNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVTINNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240S241(SEQ ID NO :43)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSITVTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFRGRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVDYNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVTINNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEI237(SEQ ID NO :44)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSITVTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFRGRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVDYNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVTINNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240SHLQLLNSKA S251(SEQ ID NO :45)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSITVTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFRGRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120αε
,(S= ON aI53s)〔寸890〕
6 荔 SHMS3S3X 〔CO890UO 荔 Λ αοχνΜνΙ iMmoSAXN NlXMTLVSiV AMXMMsm gggg>ggh NVSaASSVM 〔3890|__|
08T Mxdg_d V8H1X3SSV NAaAMais JVaLMASNV NiMMSXIIA OMSVano·〔1890〕02 SJSWi ΛΙΛΒνΗΛνχ HBMW JMIMSS SJS3σ·ΙΛΙα3 Ια0009S09 dsxoslloa SINOVSVAX IAXISHMOSI MoInVIVo3IIISIIS JMlIglSW 〔6Z.9S
,(Tg=ON aI53s) 〔8Z.90〕Sc SVMSNTI3 HSHMI3S3X 〔Z.Z.90〕Λ αοχνΜνΙ iMmoSAXN NlXMTLVSiV AMXMMsm gggg>ggh NVsaAafSVM 〔9Z.9S 08T AAXdg_d vmohixmssv naoammcms JVaLMASNV NiMMSXIIA ^J^ovano·〔9Z.9S02 SJSWi ΛΙΛΒνΗΛνχ HBMW JMIMSS SJS3σ·ΙΛΙα3 Ια 〔寸 Z.9S09 dsxosafIoa SINOVSVAX IAXISHMOSI MoInVIVo3IIISIIS JMlIglSW 〔COZ.9S
,(OTON QIafMS) 〔3Z.90〕
Lo荔 HMgMh 云 QouΛ αοχνΜνΙ iMmoSAXN NlXMTLVSiV AMXMMsm gggg>ggh NVsaAafSVI 〔0Z.9S08Τ AAXdg_d vmohixmssv naoammcms JVaLMASNV NiMMSXIIA ^J^ovano·〔69901——1
02 SJSWi ΛΙΛΒνΗΛνχ HBMW JMIMSS SJS3afIAIaslMa 〔0099S
6 荔 SHMS3S3X 〔9990U O 荔 Λ αοχνΜνΙ iamoSAXN ΝΙΧΜΑ ΛΜΛ AMXMMsm sggg>ggh NVSOASSVM 〔寸 99a 08T AAXdg_d vaoHlxassv naoammcms JvoLMaSNV NiMMSXIIA ^J^ovano·I--1CO99S 02 SJSWi ΛΙΛΒνΗΛνχ HBMW JMIMSS SJS3σ·ΙΛΙα3 Ια 〔3990|__| 09 dsbssls Sinovsvax iaxishmosi Msnvlvo 3IIISIIS JMlIglsw 〔1990〕
,(8寸"ON Ω—屋OCDSU
TLOZOoSsa O 荔 ISWME IgXVWIi 3ISSAXNNI XMTLVSMMSXM3SN1S SXNSiVaSi 〔899a 02SOASSVMA Xd5d_dv3oHlxassvNA OEMJZi XHSXI IAOM 〔Z.99S 02 ASVOnSM }nalsvNc)i\I Λδαν ΛνχΗοSmbmwjm Isfcuο Λο3}ΓΜσ·Ι 〔999a 09 ΛΙα3 Ια& Hxoslsag INoVSVAXXiv XISHMoSIiMoSHivoXIASl Sfcss 〔9990〕
,s.. § ai 53s)〔寸990〕
zcoz imsmxm IaoXVWIi 3ISSAXNNI XMTLVSMMSXM3SN1S SXNSivMs 麵〔CO990〕 02SaASSVMA Xd5d_dv30H1X3SSVNA OEMJZi XHSXI IAOM 〔399s OZT ASVaXlSM ^nMlSVNiMI Λσ·αν ΛνχΗ3 Smbmwjm Isfcu 3 Λ33}ΓΜσ·Ι 〔1990U 09 ΛΙα3 Ια& Hxoslsag INoVSVAXXiv XISHMoSIiMoSHivoXIASl Sfcss 〔0990〕
,(9寸=§ ai 53s) 〔6寸90〕
T 荔Oo〔is O 荔 ISWME IaoXVWIi 3ISSAXNNI XMTLVSMMSXM3SN1S SXNSiVaSi 〔z.寸 90U 02SaASSVMA xdafduvM0H1X3SSVNA OEMJZi XHSXI IAOM 〔9 寸9S
X 60T/S < 6ZCT寸ZST Zo
MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEI245(SEQ ID NO :53)或MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120 QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKAS259(SEQ ID NO :54)。成熟蛋白质中的信号序列将被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。SEQ ID NO :55提供了不含信号序列的人类氨基酸序列 SEQ ID NO 43 和 SEQ ID NO 49 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGDIKVTESEIKR RS222(SEQ ID NO :55)。SEQ ID NO :56提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ ID NO :46和SEQ IDNO 52 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS222(SEQ ID NO :56)。SEQ ID NO :57提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ ID NO :44和SEQ IDNO 50 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI218(SEQ ID NO :57)。SEQ ID NO :58提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ ID NO :47和SEQ IDNO 53 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180
MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI218(SEQ ID NO :58)。SEQ ID NO :59提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ ID NO :45和SEQ IDNO 51GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS232
(SEQ ID NO :59)。SEQ ID NO :60提供了不含信号序列的人类氨基酸序列SEQ ID NO :48和SEQ IDNO 54GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS232(SEQ ID NO :60)。在其它实施例中，最后的丙氨酸和丝氨酸残基从SEQ ID NO :45、48、51、54、59和60去除。在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括人类B7-H4的IgV结构域。在一个实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO 9或SEQ ID NO 12的56位半胱氨酸到SEQID NO9或SEQ ID NO 12的130位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。第一融合搭配物可由与以下编码示范性IgV结构域的核苷酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性的核苷酸序列编码ggcttcggca tcagtggacg gcacagtatc acagtgacca ccgtcgcctc cgctggcaat 60ataggtgagg atggcatcca gtcctgtacc tttgagccgg acatcaaact gtctgacata 120gtgatacaat ggctgaagga gggggtgctc ggtctggtac atgagtttaa ggaagggaag 180gatgaactgt ccgagcagga tgagatgttc cgggggagga ccgctgtgtt cgccgatcag 240gtaatcgtcg gaaatgcaag tctcagattg aaaaatgtgc aactgactga tgctggcacg 300tataaatgct acattatcac aagtaagggc aaaggaaatg ctaaccttga gtataaaaca 360ggcgcattct caatgcccga ggt caat387(SEQ ID NO 61)或ggcttcggca tcagtggacg gcacagtatc acagtgacca ccgtcgcctc cgctggcaat 60ataggtgagg atggcatcct gtcctgtacc tttgagccgg acatcaaact gtctgacata 120gtgatacaat ggctgaagga gggggtgctc ggtctggtac atgagtttaa ggaagggaag 180gatgaactgt ccgagcagga tgagatgttc cgggggagga ccgctgtgtt cgccgatcag 240gtaatcgtcg gaaatgcaag tctcagattg aaaaatgtgc aactgactga tgctggcacg 300tataaatgct acattatcac aagtaagggc aaaggaaatg ctaaccttga gtataaaaca 360ggcgcattct caatgcccga ggtcaat387
(SEQ ID NO :62)。第一融合搭配物可与以下人类氨基酸序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVN129(SEQ ID NO :63)或GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60 DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVN129(SEQ ID NO :64)。c.非人类灵长类动物细胞外结构域融合搭配物在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括非人类灵长类动物B7-H4细胞外结构域或其片段。示范性非人类灵长类动物包括(但不限于)黑猩猩、恒河猴和食蟹猴。第一融合搭配物可与以下黑猩猩氨基酸序列具有至少80^^85^^90^^95 %、99%或100%序列一致性MKPLTSRIIS IIIILAGAIA LIIGFGISGR HSITVTTVAS AGNIGEDGIL SCTFEPDIKL60SDIVIQWLKE GVLGLVHEFK EGKDELSEQD EMFRGRTAVF ADQVIVGNAS LRLKNVQLTD120AGTYKCYIIT SKGKGNANLE YKTGAFSMPE VNVDYNASSE TLRCEAPRWF PQPTWffASQ180IDQGANFSEV SNTSFELNSE NVTMKVVSVL YNATINNTYS CMIENDIAKA TGDIKVTESE240IKRRS245(SEQ ID NO :65)、MKPLTSRIIS IIIILAGAIA LIIGFGISGR HSITVTTVAS AGNIGEDGIL SCTFEPDIKL60SDIVIQWLKE GVLGLVHEFK EGKDELSEQD EMFRGRTAVF ADQVIVGNAS LRLKNVQLTD120AGTYKCYIIT SKGKGNANLE YKTGAFSMPE VNVDYNASSE TLRCEAPRWF PQPTWffASQ180IDQGANFSEV SNTSFELNSE NVTMKVVSVL YNATINNTYS CMIENDIAKA TGDIKVTESE240I241(SEQ ID NO :66)或MKPLTSRIIS IIIILAGAIA LIIGFGISGR HSITVTTVAS AGNIGEDGIL SCTFEPDIKL60SDIVIQWLKE GVLGLVHEFK EGKDELSEQD EMFRGRTAVF ADQVIVGNAS LRLKNVQLTD120AGTYKCYIIT SKGKGNANLE YKTGAFSMPE VNVDYNASSE TLRCEAPRWF PQPTWffASQ180IDQGANFSEV SNTSFELNSE NVTMKVVSVL YNATINNTYS CMIENDIAKA TGDIKVTESE240IKRRSHLQLL NSKAS255(SEQ ID NO :67)。成熟蛋白质中的信号序列将被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。SEQ ID NO 68提供了不含信号序列的黑猩猩氨基酸序列SEQ ID NO 65 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120
GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQIDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNA TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS222(SEQ ID NO :68)。SEQ ID NO :69提供了不含信号序列的黑猩猩氨基酸序列SEQ ID NO 66 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQIDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180
MKWSVLYNA TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI218(SEQ ID NO :69)。SEQ ID NO :70提供了不含信号序列的黑猩猩氨基酸序列SEQ ID NO 67 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQIDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNA TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS232(SEQ ID NO :70)。第一融合搭配物可与以下恒河猴氨基酸序列具有至少80^^85%99%或100%序列一致性MASLGQILFff SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRS249(SEQ ID NO :71)、MASLGQILFff SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEI245(SEQ ID NO :72)或MASLGQILFff SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKAS259(SEQ ID NO :73)。成熟蛋白质中的信号序列将被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。SEQ ID NO 74提供了不含信号序列的恒河猴氨基酸序列SEQ ID NO 71 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS222(SEQ ID NO :74)。SEQ ID NO :75提供了不含信号序列的恒河猴氨基酸序列SEQ ID NO 72 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK60
DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI218(SEQ ID NO :75)。SEQ ID NO :76提供了不含信号序列的恒河猴氨基酸序列SEQ ID NO 73 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS232(SEQ ID NO :76)。第一融合搭配物可与以下食蟹猴氨基酸序列具有至少80^^85%99%或100%序列一致性MASLGQILFff SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRS249(SEQ ID NO :77)、MASLGQILFff SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEI245(SEQ ID NO :78)或MASLGQILFff SIISIIFILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVIGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESE IKRRSH LQLLNSKAS259(SEQ ID NO :79)。成熟蛋白质中的信号序列将被去除。此外，在制造期间还可使用来自其它多肽或生物体的信号肽增进宿主对融合蛋白的分泌。SEQ ID NO 80提供了不含信号序列的食蟹猴氨基酸序列SEQ ID NO 77
GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RS222(SEQ ID NO :80)。SEQ ID NO :81提供了不含信号序列的食蟹猴氨基酸序列SEQ ID NO 78 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120 GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEI218(SEQ ID NO :81)。SEQ ID NO :82提供了不含信号序列的食蟹猴氨基酸序列SEQ ID NO 79 GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK AS232(SEQ ID NO :82)。在其它实施例中，最后的丙氨酸和丝氨酸残基从SEQ ID NO :67、70、73、76、79和82去除。在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括黑猩猩B7-H4的IgV结构域。在另一实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO 15的52位半胱氨酸到SEQ ID NO 15的126位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。第一融合搭配物可与以下示范性IgV结构域的以下黑猩猩氨基酸序列具有至少80%,85%,90%,95%,99%^； 100%序列一致性GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVN129(SEQ ID NO :83)。在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括恒河猴B7-H4的IgV结构域。在一个实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO 17的56位半胱氨酸到SEQ ID NO 17的130位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。第一融合蛋白可与以下示范性IgV结构域的恒河猴氨基酸序列具有至少80%、85%,90%,95%,99%^； 100%序列一致性GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVN129(SEQ ID NO :84)。
在另一实施例中，融合蛋白的第一融合搭配物包括食蟹猴B7-H4的IgV结构域。在一个实施例中，IgV结构域至少包括SEQ ID NO 19的56位半胱氨酸到SEQ ID NO 19的130位半胱氨酸。在另一实施例中，IgV结构域含有所述多肽由此氨基酸范围界定的至少25个或50个氨基酸的片段。第一融合蛋白可与以下示范性IgV结构域的食蟹猴氨基酸序列具有至少80%、85%,90%,95%,99%^； 100%序列一致性GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVI GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVN129(SEQ ID NO :85)。
d. B7-H4细胞外结构域片段B7-H4细胞外结构域可含有信号肽的一个或一个以上氨基酸或B7-H4的假定跨膜结构域。在分泌期间，裂解的信号肽的氨基酸的数量可视表达系统和宿主而变化。此外，C末端或N末端失去一个或一个以上氨基酸并且保持结合B7-H4受体的能力的B7-H4细胞外结构域的片段可用作所揭示的融合蛋白的融合搭配物。举例来说，可用作第一融合搭配物的适合的鼠类B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段SEQ ID NO 26 或 SEQ ID NO 27 的 32-257、32-256、32-255、32-254、32_253、
32-252、32-251、32-250、32-249、31-257、31-256、31-255、31-254、31-253、31-252、31-251、
31-250、31-249、30-257、30-256、30-255、30-254、30-253、30-252、30-251、30-250、30-249、
29-257、29-256、29-255、29-254、29-253、29-252、29-251、29-250、29-249、28-257、28-256、
28-255、28-254、28-253、28-252、28-251、28-250、28-249、27-257、27-256、27-255、27-254、
27-253、27-252、27-251、27-250、27-249、26-257、26-256、26-255、26-254、26-253、26-252、
26-251、26-250、26-249、25-257、25-256、25-255、25-254、25-253、25-252、25-251、25-250、
25-249、24-257、24-256、24-255、24-254、24-253、24-252、24-251、24-250、24-249，或SEQ ID NO 24 或 SEQ ID NO 25 的 24-249、24-248、24-247、24-246、24-245、
24-244、24-243、24-242、24-241、23-249、23-248、23-247、23-246、23-245、23-244、23-243、
23-242、23-241、22-249、22-248、22-247、22-246、22-245、22-244、22-243、22-242、22-241、
21-249、21-248、21-247、21-246、21-245、21-244、21-243、21-242、21-241、20-249、20-248、
20-247、20-246、20-245、20-244、20-243、20-242、20-241、19-249、19-248、19-247、19-246、
19-245、19-244、19-243、19-242、19-241、18-249、18-248、18-247、18-246、18-245、18-244、
18-243、18-242、18-241、17-249、17-248、17-247、17-246、17-245、17-244、17-243、17-242、
17-241、16-249、16-248、16-247、16-246、16-245、16-244、16-243、16-242、16-241。其它适合的鼠类B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段SEQ ID NO :2 或 SEQ ID NO :5 的 28-257、28-258、28-259、28-260、28-261、28-262、
28-263、29-257、29-258、29-259、29-260、29-261、29-262、29-263、30-257、30-258、30-259、
30-260、30-261、30-262、30-263、31-257、31-258、31-259、31-260、31-261、31-262、31-263、
32-257、32-258、32-259、32-260、32-261、32-262、32-263，任选在N末端附接信号肽的I到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO :2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的
任何信号肽。其它适合的鼠类B7-H4片段包括(但不限于)含有SEQ ID NO 32或SEQ ID NO 33中所述IgV结构域的至少25、20、75、100或125个氨基酸的片段。示范性片段包括(但不限于)SEQ ID NO 24 或 SEQ ID NO 25 的 16-144、16-145、16-146、16-147、16-148、
16-149、16-150、16-151、16-152、17-144、17-145、17-146、17-147、17-148、17-149、17-150、
17-151、17-152、18-144、18-145、18-146、18-147、18-148、18-149、18-150、18-151、18-152、
19-144、19-145、19-146、19-147、19-148、19-149、19-150、19-151、19-152、20-144、20-145、
20-146、20-147、20-148、20-149、20-150、20-151、20-152、21-144、21-145、21-146、21-147、
21-148、21-149、21-150、21-151、21-152、22-144、22-145、22-146、22-147、22-148、22-149、
22-150、22-151、22-152、23-144、23-145、23-146、23-147、23-148、23-149、23-150、23-151、
23-152、24-144、24-145、24-146、24-147、24-148、24-149、24-150、24-151、24-152，或SEQ ID NO 26 或 SEQ ID NO 27 的 24-152、24-153、24-154、24-155、24_156、
24-157、24-158、24-159、24-160、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、25-157、25-158、
25-159、25-160、26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、26-157、26-158、26-159、26-160、
27-152、27-153、27-154、27-155、27-156、27-157、27-158、27-159、27-160、28-152、28-153、
28-154、28-155、28-156、28-157、28-158、28-159、28-160、29-152、29-153、29-154、29-155、
29-156、29-157、29-158、29-159、29-160、30-152、30-153、30-154、30-155、30-156、30-157、
30-158、30-159、30-160、31-152、31-153、31-154、31-155、31-156、31-157、31-158、31-159、
31-160、32-152、32-153、32-154、32-155、32-156、32-157、32-158、32-159、32-160，任选在N末端附接信号肽的I到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO :2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。可用作第一融合搭配物的示范性适合的人类B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段SEQ ID NO 49 或 SEQ ID NO 52 的 32-249、32-248、32-247、32-246、32_245、
32-244、32-243、32-242、32-241、31-249、31-248、31-247、31-246、31-245、31-244、31-243、
31-242、31-241、30-249、30-248、30-247、30-246、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、
29-249、29-248、29-247、29-246、29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、28-249、28-248、
28-247、28-246、28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、27-249、27-248、27-247、27-246、
27-245、27-244、27-243、27-242、27-241、26-249、26-248、26-247、26-246、26-245、26-244、
26-243、26-242、26-241、25-249、25-248、25-247、25-246、25-245、25-244、25-243、25-242、
25-241、24-249、24-248、24-247、24-246、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241，或SEQ ID NO 50 或 SEQ ID NO 53 的 32-245、32-244、32-243、32-242、32_241、
32-240、32-239、32-238、32-237、31-245、31-244、31-243、31-242、31-241、31-240、31-239、
31-238、31-237、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、30-240、30-239、30-238、30-237、
29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、29-240、29-239、29-238、29-237、28-245、28-244、
28-243、28-242、28-241、28-240、28-239、28-238、28-237、27-245、27-244、27-243、27-242、、27-241、27-240、27-239、27-238、27-237、26-245、26-244、26-243、26-242、26-241、26-240、
26-239、26-238、26-237、25-245、25-244、25-243、25-242、25-241、25-240、25-239、25-238、
25-237、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241、24-240、24-239、24-238、24-237，或SEQ ID NO 51 或 SEQ ID NO :54 的 32-259、32-258、32-257、32-256、32_255、32-254、32-253、32-252、32-251、31-259、31-258、31-257、31-256、31-255、31-254、31-253、
31-252、31-251、30-259、30-258、30-257、30-256、30-255、30-254、30-253、30-252、30-251、29-259、29-258、29-257、29-256、29-255、29-254、29-253、29-252、29-251、28-259、28-258、
28-257、28-256、28-255、28-254、28-253、28-252、28-251、27-259、27-258、27-257、27-256、
27-255、27-254、27-253、27-252、27-251、26-259、26-258、26-257、26-256、26-255、26-254、 26-253、26-252、26-251、25-259、25-258、25-257、25-256、25-255、25-254、25-253、25-252、
25-251、24-259、24-258、24-257、24-256、24-255、24-254、24-253、24-252、24-251，或SEQ ID NO :43 或 SEQ ID NO :46 的 24-241、24-240、24-239、24-238、24_237、24-236、24-235、24-234、24-233、23-241、23-240、23-239、23-238、23-237、23-236、23-235、
23-234、23-233、22-241、22-240、22-239、22-238、22-237、22-236、22-235、22-234、22-233、21-241、21-240、21-239、21-238、21-237、21-236、21-235、21-234、21-233、20-241、20-240、
20-239、20-238、20-237、20-236、20-235、20-234、20-233、19-241、19-240、19-239、19-238、
19-237、19-236、19-235、19-234、19-233、18-241、18-240、18-239、18-238、18-237、18-236、
18-235、18-234、18-233、17-241、17-240、17-239、17-238、17-237、17-236、17-235、17-234、
17-233、16-241、16-240、16-239、16-238、16-237、16-236、16-235、16-234、16-233，或SEQ ID NO 44 或 SEQ ID NO -Al 的 24-237、24-236、24-235、24-234、24_233、
24-232、24-231、24-230、24-229、23-237、23-236、23-235、23-234、23-233、23-232、23-231、
23-230、23-229、22-237、22-236、22-235、22-234、22-233、22-232、22-231、22-230、22-229、
21-237、21-236、21-235、21-234、21-233、21-232、21-231、21-230、21-229、20-237、20-236、
20-235、20-234、20-233、20-232、20-231、20-230、20-229、19-237、19-236、19-235、19-234、
19-233、19-232、19-231、19-230、19-229、18-237、18-236、18-235、18-234、18-233、18-232、
18-231、18-230、18-229、17-237、17-236、17-235、17-234、17-233、17-232、17-231、17-230、
17-229、16-237、16-236、16-235、16-234、16-233、16-232、16-231、16-230、16-229，或SEQ ID NO 45 或 SEQ ID NO 48 的 24-251、24-250、24-249、24-248、24_247、
24-246、24-245、24-244、24-243、23-251、23-250、23-249、23-248、23-247、23-246、23-245、
23-244、23-243、22-251、22-250、22-249、22-248、22-247、22-246、22-245、22-244、22-243、
21-251、21-250、21-249、21-248、21-247、21-246、21-245、21-244、21-243、20-251、20-250、
20-249、20-248、20-247、20-246、20-245、20-244、20-243、19-251、19-250、19-249、19-248、
19-247、19-246、19-245、19-244、19-243、18-251、18-250、18-249、18-248、18-247、18-246、
18-245、18-244、18-243、17-251、17-250、17-249、17-248、17-247、17-246、17-245、17-244、
17-243、16-251、16-250、16-249、16-248、16-247、16-246、16-245、16-244、16-243。其它适合的人类B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段SEQ ID NO 9 或 SEQ ID NO 12 的 27-249、27-250、27-251、27-252、27_253、
27-254、27-255、27-256、27-257、27-259、27-260、28-249、28-250、28-251、28-252、28-253、28-254、28-255、28-256、28-257、28-259,28-260,29-249、29-250、29-251、29-252、29-253、29-254、29-255、29-256、29-257、29-259、29-260、30-249、30-250、30-251、30-252、30-253、30-254、30-255、30-256、30-257、30-259、30-260、31-249、31-250、31-251、31-252、31-253、31-254、31-255、31-256、31-257、31-259、31-260、32-249、32-250、32-251、32-252、32-253、32-254、32-255、32-256、32-257、32-259、32-260，任选在N末端附接信号肽的I到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO :2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。其它适合的人类B7-H4片段包括(但不限于)含有SEQ ID NO 63或SEQ ID NO 64中所述IgV结构域的至少25、20、75、100或125个氨基酸的片段。示范性片段包括(但 不限于)SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ ID N0:47 或SEQID NO 48 中任一者的 16-144、16-145、16-146、16-147、16-148、16-149、16-150、16-151、16-152、17-144、17-145、17-146、17-147、17-148、17-149、17-150、17-151、17-152、18-144、
18-145、18-146、18-147、18-148、18-149、18-150、18-151、18-152、19-144、19-145、19-146、
19-147、19-148、19-149、19-150、19-151、19-152、20-144、20-145、20-146、20-147、20-148、
20-149、20-150、20-151、20-152、21-144、21-145、21-146、21-147、21-148、21-149、21-150、
21-151、21-152、22-144、22-145、22-146、22-147、22-148、22-149、22-150、22-151、22-152、
23-144、23-145、23-146、23-147、23-148、23-149、23-150、23-151、23-152、24-144、24-145、
24-146、24-147、24-148、24-149、24-150、24-151、24-152，或SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO :53或SEQID NO 54 中任一者的 24-152、24-153、24-154、24-155、24-156、24-157、24-158、24-159、
24-160、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、25-157、25-158、25-159、25-160、26-152、
26-153、26-154、26-155、26-156、26-157、26-158、26-159、26-160、27-152、27-153、27-154、
27-155、27-156、27-157、27-158、27-159、27-160、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156、
28-157、28-158、28-159、28-160、29-152、29-153、29-154、29-155、29-156、29-157、29-158、
29-159、29-160、30-152、30-153、30-154、30-155、30-156、30-157、30-158、30-159、30-160、
31-152、31-153、31-154、31-155、31-156、31-157、31-158、31-159、31-160、32-152、32-153、
32-154、32-155、32-156、32-157、32-158、32-159、32-160，任选在N末端附接信号肽的I到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO :2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的
任何信号肽。可用作第一融合搭配物的示范性适合的非人类灵长类动物B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段SEQ ID NO 71 或 SEQ ID NO 77 的 32-249、32-248、32-247、32-246、32_245、
32-244、32-243、32-242、32-241、31-249、31-248、31-247、31-246、31-245、31-244、31-243、31-242、31-241、30-249、30-248、30-247、30-246、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、
29-249、29-248、29-247、29-246、29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、28-249、28-248、
28-247、28-246、28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、27-249、27-248、27-247、27-246、32-254.32-253.32-252.32-251.31-259.31-258.31-257.31-256.31-255.31-254.31-25.0031-252.31-251.30-259.30-258.30-257.30-256.30-255.30-254.30-253.30-252.30-251,29-259.29-258.29-257.29-256.29-255.29-254.29-253.29-252.29-251.28-259.28-25 028-257.28-256.28-255.28-254.28-253.28-252.28-251.27-259.27-258.27-257.27-256,
27-255.27-254.27-253.27-252.27-251.26-259.26-258.26-257.26-256.26-255.26-254,26-253.26-252.26-251.25-259.25-258.25-257.25-256.25-255.25-254.25-253.25-255°
25-251.24-259.24-258.24-257.24-256.24-255.24-254.24-253.24-252.24-251,
〔0831UGomo3 §"65 S 28-245.28-244.28-243.28-242.28-24r28-24 28-239.
28-238.28-237.27-245.27-244.27-243.27-242.27-241.27-240.27-239.27-238.27-237,
26-245.26-244.26-243.26-242.26-241.26-240.26-239.26-238.26-237.25-245.25-244,
25-243.25-242.25-241.25-240.25-239.25-238.25-237.24-245.24-244.24-243.24-245°
24-241.24-240.24-239.24-238.24-237.23-245.23-244.23-243.23-242.23-241.23-24 23-239.23-238.23-237.22-245.22-244.22-243.22-242.22-241.22-240.22-239.22-23 °
22-237.21-245.21-244.21-243.21-242.21-241.21-240.21-239.21-238.21-237.20-245,20-244.20-243.20-242.20-241.20-240.20-239.20-238.20-237,
I--10832UGomo3 NO :66 S 28-241.28-240.28-239.28-238.28-237.28-236.281235.28-234.28-233.27-241.27-240.27-239.27-238.27-237.27-236.27-235.27-234.27-233,
26-241.26-240.26-239.26-238.26-237.26-236.26-235.26-234.26-233.25-241.25-24
25-239.25-238.25-237.25-236.25-235.25-234.25-233.24-241.24-240.24-239.24-23 °24丨237.24-236.24-235.24-234.24-23.°°23-241.23-24 23-239.23-23 °23-237.23-236,
23—235.23-234.23-233.22-241.22-24 22-239.22-23 °22-237.22-236.22-235.22-234,22-233.21-241.21-240.21-239.21-238.21-237.21-236.21-235.21-234.21-233.20-241,20-240.20-239.20-238.20-237.20-236.20-235.20-234.20-233,
I--10833UGomo3 NO :67 S 28-255.28-254.28-253.28-252.28-25r28-25 28-249,28-248.28-247.27-255.27-254.27-253.27-252.27-251.27-250.27-249.27-248.27-247.261255.26-254.26-253.26-252.26-25r26-25p26-249.26-248.26-247.251255.25-254.25-253.25-252.25-251.25-250.25-249.25-248.25-247.24-255.24-254.24-253.24-255°24-251、24-250、24-249、24-248、24-247、23-255、23-254、23-253、23-252、23-251、23-250、23-249、23-248、23-247、22-255、22-254、22-253、22-252、22-251、22-250、22-249、22-248、
22-247、21-255、21-254、21-253、21-252、21-251、21-250、21-249、21-248、21-247、20-255、
20-254,20-253,20-252,20-251,20-250,20-249,20-248,20-247o其它适合的非人类灵长类动物B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段
SEQ ID NO 17 或 SEQ ID NO 19 的 27-249、27-250、27-251、27-252、27_253、
27-254、27-255、27-256、27-257、27-259、27-260、28-249、28-250、28-251、28-252、28-253、28-254、28-255、28-256、28-257、28-259、28-260、29-249、29-250、29-251、29-252、29-253、29-254、29-255、29-256、29-257、29-259、29-260、30-249、30-250、30-251、30-252、30-253、30-254、30-255、30-256、30-257、30-259、30-260、31-249、31-250、31-251、31-252、31-253、31-254、31-255、31-256、31-257、31-259、31-260、32-249、32-250、32-251、32-252、32-253、32-254、32-255、32-256、32-257、32-259、32-260，任选在N末端附接信号肽的I到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO :2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。其它适合的非人类灵长类动物B7-H4片段包括(但不限于)以下各片段SEQ ID NO 15 的 23-245、23-246、23-247、23-248、23-249、23-250、23_251、
23-252、23-253、23-254、23-255、24-245、24-246、24-247、24-248、24-249、24-250、24-251、24-252、24-253、24-254、24-255、25-245、25-246、25-247、25-248、25-249、25-250、25-251、25-252、25-253、25-254、25-255、26-245、26-246、26-247、26-248、26-249、26-250、26-251、26-252、26-253、26-254、26-255、27-245、27-246、27-247、27-248、27-249、27-250、27-251、27-252、27-253、27-254、27-255、28-245、28-246、28-247、28-248、28-249、28-250、28-251、28-252、28-253、28-254、28-255，任选在N末端附接信号肽的I到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO :2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的任何信号肽。其它适合的非人类灵长类动物B7-H4片段包括(但不限于)含有SEQ ID NO :83、SEQ ID N0:84或SEQ ID NO :85中所述IgV结构域的至少25、20、75、100或125个氨基酸的片段。示范性片段包括(但不限于)SEQ ID NO 65, SEQ ID NO :66 或 SEQ ID NO :67 中任一者的 20_148、20_149、
20-150、20-151、20-152、20-153、20-154、20-155、20-156、21-148、21-149、21-150、21-151、
21-152、21-153、21-154、21-155、21-156、22-148、22-149、22-150、22-151、22-152、22-153、
22-154、22-155、22-156、23-148、23-149、23-150、23-151、23-152、23-153、23-154、23-155、
23-156、24-148、24-149、24-150、24-151、24-152、24-153、24-154、24-155、20-156、25-148、
25-149、25-150、25-151、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、26-148、26-149、26-150、
26-151、26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、27-148、27-149、27-150、27-151、27-152、
27-153、27-154、27-155、27-156、28-148、28-149、28-150、28-151、28-152、28-153、28-154、
28-155、28-156，或SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :77、SEQ ID NO :78或SEQID NO 79 中任一者的 24-152、24-153、24-154、24-155、24-156、24-157、24-158、24-159、24-160、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、25-157、25-158、25-159、25-160、26-152、
26-153、26-154、26-155、26-156、26-157、26-158、26-159、26-160、27-152、27-153、27-154、
27-155、27-156、27-157、27-158、27-159、27-160、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156、
28-157、28-158、28-159、28-160、29-152、29-153、29-154、29-155、29-156、29-157、29-158、
29-159、29-160、30-152、30-153、30-154、30-155、30-156、30-157、30-158、30-159、30-160、
31-152、31-153、31-154、31-155、31-156、31-157、31-158、31-159、31-160、32-152、32-153、
32-154、32-155、32-156、32-157、32-158、32-159、32-160，
任选在N末端附接信号肽的I到5个氨基酸。信号肽可为本文中揭示的任一者，包括SEQ ID NO :2、3、5、6、9、10、12、13、15、17和19内所含者，或者可为此项技术中已知的
任何信号肽。2. B7-H4多肽变异体有用的变异体包括由本文所述任一分析法指示增加生物活性或者增加蛋白质半衰期或稳定性的变异体。B7-H4多肽和B7-H4片段，或其具有B7-H4活性的融合物可经过工程改造以增加生物活性。在一个优选实施例中，已经用至少一个增加分子与免疫细胞(例如T细胞)的结合并将抑制信号传输到T细胞中的氨基酸取代、缺失或插入来修饰B7-H4多肽或融合蛋白。其它优选的变异体是工程改造成相对于其它免疫细胞选择性结合于一种类型的T细胞的B7-H4多肽。举例来说，B7-H4多肽可经过工程改造以优先结合于Treg、ThO、ThUThl7或Th22细胞。优先结合是指与一种类型的细胞的结合比与另一种类型的细胞的结合高至少 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95% 或更高。B7-H4的其它变异体可工程改造成与免疫细胞的结合低于野生型B7-H4。这些变异体可与具有较强结合性质的变异体组合使用，以适度的影响调节免疫应答。最后，变异的B7-H4多肽可工程改造成具有比野生型长的半衰期。这些变异体通常经过修饰以抵抗酶降解作用。示范性修饰包括抵抗酶降解作用的经过修饰的氨基酸残基和经过修饰的肽键。此项技术中已知实现此目的的各种修饰。举例来说，B7-H4的近膜区包括二碱性基元KRRS，其可潜在地被例如蛋白酶的蛋白原转化酶家族成员识别并裂解。此基元(KRRS)可被去除以增加半衰期。这些变异体可经过修饰以调整在血清和内体pH下与受体的亲和力对B7-H4多肽、其片段或融合物的半衰期的影响。B.第二多肽B7-H4多肽可与第二多肽融合。第二多肽的存在可改变B7-H4融合多肽的溶解性、稳定性、亲和力和/或价态。本文中使用的“价态”是指每一分子可用的结合位点的数量。在一个实施例中，第二多肽是来自不同来源或不同蛋白质的多肽。 在一个实施例中，第二多肽含有免疫球蛋白重链恒定区的一个或一个以上结构域，优选具有对应于人类免疫球蛋白C Y I链的铰链区、G2区和Ch3区或对应于鼠类免疫球蛋白C Y 2a链的铰链区、Ch2区和Ch3区的氨基酸序列。SEQ ID NO 88和89提供了人类免疫球蛋白C y I的铰链区、Ch2区和Ch3区的示范性序列。在一种优选的二聚融合蛋白中，所述二聚体由两个Ig重链的铰链区中Cys残基共价键接产生，所述Cys残基是在二聚化正常Ig重链中以二硫键连接的相同Cys残基。所述蛋白质称为B7_H4_Ig。在一个实施例中，免疫球蛋白恒定结构域可含有一个或一个以上增强B7-H4多肽、其融合蛋白或片段与特定细胞类型的结合、增加其生物利用率或增加其稳定性的氨基酸插入、缺失或取代。适合的氨基酸取代包括保守性和非保守性取代，如上文所述。在另一实施例中，第二多肽可具有可使其它分子结合于B7-H4融合蛋白的连结结构域(conjugation domain)。在一个此类实施例中，连结的分子能够使融合蛋白祀向特定器官或组织。在另一此类实施例中，连结的分子是可增强或加强B7-H4融合蛋白的作用的另一免疫调节剂。在另一实施例中，连结的分子是聚乙二醇(Polyethylene Glycol,PEG)。融合蛋白的Fe部分可随同种型或亚类而变化，可为嵌合或杂交的，和/或可经过修饰例如以改进效应功能、半衰期的控制、组织可接近性，加强生物物理特性(例如稳定性)并改进生产效率(且降低成本)。可用于构建所揭示的融合蛋白的许多修饰以及其制备方法是此项技术中已知的，参看例如穆勒(Mueller)等人，分子免疫学(Mol Immun.),34 (6) :441-452 (1997)；许旺(Swann)等人，免疫学当代视点(Cur. Opin. Immun.), 20 493-499(2008);和普雷斯塔(Presta)，免疫学当代视点，20 :460-470 (2008)。在一些实施例中，Fe区是原生IgGl、IgG2或IgG4Fc区。在一些实施例中，Fe区是杂交区，例如由IgG2/IgG4Fc恒定区组成的嵌合区。Fe区修饰包括(但不限于)经修饰以防止结合于Fe Y受体和补体的IgG4 ;经修饰以改进与一种或一种以上Fe Y受体的结合的IgGl ;经修饰以使效应功能(氨基酸变化)最少的IgGl ;具有改变的/无聚糖(通常通过改变表达宿主)的IgGl ;以及具有改变的与FcRn的pH依赖性结合的IgGl。Fe区可包括完整铰链区，或不完整铰链区。用利妥昔单抗(rituximab)(针对⑶20的嵌合小鼠/人类IgGl单克隆抗体)治疗非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin' s lymphoma)或瓦尔登史特姆氏巨球蛋白血症(Waldenstrom' s macroglobulinemia)患者的治疗成果与个体对与人类IgGl的Fe结构域具有不同固有亲和力的Fe Y受体等位基因变异体的表达有关。具体说来，具有低亲和力活化Fe受体⑶16A的高亲和力等位基因(FcyRIIIA)的患者显示出较高的应答率，并且在非霍奇金氏淋巴瘤的情况下显示出提高的无发展存活率。在另一实施例中，Fe结构域可含有一个或一个以上减少与低亲和力抑制性Fe受体CD32B(Fc YRIIB)结合并保持与低亲和力活化Fe受体CD16A(Fc y RIIIA)结合的野生型水平或增进与低亲和力活化Fe受体⑶16A (Fe y RIIIA)结合的氨基酸插入、缺失或取代。另一实施例包括与FcR的结合减少且半衰期增加的IgG2_4杂交物和IgG4突变体。代表性IG2-4杂交物和IgG4突变体描述于安格S. (Angal，S.)等人，分子免疫学(Molecular Immunology), 30 (I) 105-108 (1993);穆勒 J. (Mueller, J.)等人，分子免疫学，34 (6) =441-452(1997);以及颁予王(Wang)等人的美国专利第6，982，323号中。在一些实施例中，例如缺失IgGl和/或IgG2结构域，安格等人描述IgGl和IgG2的丝氨酸241被脯氨酸置换。在一个优选实施例中，Fe结构域含有增强与CD16A的结合的氨基酸插入、缺失或取代。人类IgGlFc结构域中增加与CD16A的结合并减少与CD32B的结合的大量取代是此项技术中已知的，并描述于斯塔文哈根(Stavenhagen)等人,癌症研究(Cancer Res.),57(18) :8882-90(2007)中。与CD32B的结合减少和/或与CD16A的结合增加的示范性人类IgGlFc结构域变异体含有？2431、1 929 、￥30(^、￥3051或？2961取代。这些氨基酸取代可在人类IgGlFc结构域中以任何组合形式存在。在一个实施例中，人类IgGlFc结构域变异体含有F243L、R929P和Y300L取代。在另一实施例中，人类IgGlFc结构域变异体含有F243L、R929P、Y300L、V305I和P296L取代。在另一实施例中，人类IgGlFc结构域变异体含有N297Q取代，而此突变消除了 FcR结合。C.肽或多肽连接子结构域所揭示的B7-H4融合蛋白任选含有使B7-H4多肽与第二多肽分离的肽或多肽连接子结构域。I.抗体的铰链区在一个实施例中，连接子结构域含有免疫球蛋白铰链区。在一个优选实施例中，铰链区源自于人类免疫球蛋白。可获得铰链的适合的人类免疫球蛋白包括IgG、IgD和IgA。在一个优选实施例中，铰链区源自于人类IgG。此项技术中众所周知免疫球蛋白铰链区和其 它结构域的氨基酸序列。在一个实施例中，B7-H4融合多肽含有由与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性的核酸编码的人类免疫球蛋白C y I链的铰链区、Ch2区和Ch3区gagcctaagt catgtgacaa gacccatacg tgcccaccct gtcccgctcc agaactgctg 60gggggaccta gcgttttctt gttcccccca aagcccaagg acaccctcat gatctcacgg 120actcccgaag taacatgcgt agtagtcgac gtgagccacg aggatcctga agtgaagttt 180aattggtacg tggacggagt cgaggtgcat aatgccaaaa ctaaacctcg ggaggagcag 240tataacagta cctaccgcgt ggtatccgtc ttgacagtgc tccaccagga ctggctgaat 300ggtaaggagt ataaatgcaa ggtcagcaac aaagctcttc ccgccccaat tgaaaagact 360atcagcaagg ccaagggaca accccgcgag ccccaggttt acacccttcc accttcacga 420gacgagctga ccaagaacca ggtgtctctg acttgtctgg tcaaaggttt ctatccttcc 480gacatcgcag tggagtggga gtcaaacggg cagcctgaga ataactacaa gaccacaccc 540ccagtgcttg atagcgatgg gagctttttc ctctacagta agctgactgt ggacaaatcc 600cgctggcagc agggaaacgt tttctcttgt agcgtcatgc atgaggccct ccacaaccat 660tatactcaga aaagcctgag tctgagtccc ggcaaa696(SEQ ID NO :86)或gacaagaccc atacgtgccc accctgtccc gctccagaac tgctgggggg acctagcgtt 60ttcttgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctcatgatct cacggactcc cgaagtaaca 120tgcgtagtag tcgacgtgag ccacgaggat cctgaagtga agtttaattg gtacgtggac 180ggagtcgagg tgcataatgc caaaactaaa cctcgggagg agcagtataa cagtacctac 240cgcgtggtat ccgtcttgac agtgctccac caggactggc tgaatggtaa ggagtataaa 300tgcaaggtca gcaacaaagc tcttcccgcc ccaattgaaa agactatcag caaggccaag 360ggacaacccc gcgagcccca ggtttacacc cttccacctt cacgagacga gctgaccaag 420aaccaggtgt ctctgacttg tctggtcaaa ggtttctatc cttccgacat cgcagtggag 480tgggagtcaa acgggcagcc tgagaataac tacaagacca cacccccagt gcttgatagc 540gatgggagct ttttcctcta cagtaagctg actgtggaca aatcccgctg gcagcaggga 600
aacgttttct cttgtagcgt catgcatgag gccctccaca accattatac tcagaaaagc660ctgagtctga gtcccggcaa a681(SEQ ID NO :87)。由SEQ ID NO :86编码的人类免疫球蛋白C y I链的铰链区、CH2区和CH3区具有以下氨基酸序列EPKSCDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVWD VSHEDPEVKF60NffYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRWSV LTVLHQDffLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT120ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP180
PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RffQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK232(SEQ ID NO 88)。由SEQ ID NO 87编码的人类免疫球蛋白C y I链的铰链区、CH2区和CH3区具有以下氨基酸序列DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CWVDVSHED PEVKFNWYVD60GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK120GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS180DGSFFLYSKL TVDKSRffQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK227(SEQ ID NO :89)。铰链可进一步缩短成去除SEQ ID NO 89的氨基酸1、2、3、4、5或其组合。在一个实施例中，SEQ ID NO 89的氨基酸I和2缺失。在另一实施例中，B7-H4融合多肽含有由与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性的核酸编码的鼠类免疫球蛋白C Y 2a链的铰链区、CH2区和Ch3 区gagccaagag gtcctacgat caagccctgc ccgccttgta aatgcccagc tccaaatttg60ctgggtggac cgtcagtctt tatcttcccg ccaaagataa aggacgtctt gatgattagt120ctgagcccca tcgtgacatg cgttgtggtg gatgtttcag aggatgaccc cgacgtgcaa180atcagttggt tcgttaacaa cgtggaggtg cataccgctc aaacccagac ccacagagag240gattataaca gcaccctgcg ggtagtgtcc gccctgccga tccagcatca ggattggatg300agcgggaaag agttcaagtg taaggtaaac aacaaagatc tgccagcgcc gattgaacga360accattagca agccgaaagg gagcgtgcgc gcacctcagg tttacgtcct tcctccacca420gaagaggaga tgacgaaaaa gcaggtgacc ctgacatgca tggtaactga ctttatgcca480gaagatattt acgtggaatg gactaataac ggaaagacag agctcaatta caagaacact540gagcctgttc tggattctga tggcagctac tttatgtact ccaaattgag ggtcgagaag600aagaattggg tcgagagaaa cagttatagt tgctcagtgg tgcatgaggg cctccataat660catcacacca caaagtcctt cagccgaacg cccgggaaa699(SEQ ID NO 90)。由SEQ ID NO 90编码的鼠类免疫球蛋白C Y 2a链的铰链区、CH2区和CH3区具有以下氨基酸序列EPRGPTIKPC PPCKCPAPNL LGGPSVFIFP PKIKDVLMIS LSPIVTCWV DVSEDDPDVQ60ISWFVNNVEV HTAQTQTHRE DYNSTLRVVS ALPIQHQDWM SGKEFKCKVN NKDLPAPIER120
TISKPKGSVR APQVYVLPPP EEEMTKKQVT LTCMVTDFMP EDIYVEffTNN GKTELNYKNT 180EPVLDSDGSY FMYSKLRVEK KNWVERNSYS CSWHEGLHN HHTTKSFSRT PGK233(SEQ ID NO :91)在另一实施例中，连接子结构域含有如上文所述的免疫球蛋白铰链区，并且进一步包括一个或一个以上额外的免疫球蛋白结构域。2.其它肽/多肽连接子结构域其它适合的肽/多肽连接子结构域包括天然存在或非天然存在的肽或多肽。肽连接子序列为至少2个氨基酸长。优选肽或多肽结构域为柔性肽或多肽。“柔性连接子”在本文中是指含有两个或两个以上由肽键连接的氨基酸残基的肽或多肽，柔性连接子使两个以此方式连接的多肽的旋转自由度高于在柔性连接子不存在下两个连接的多 肽的旋转自由度。此种旋转自由度使得由柔性连接子连接的两个或两个以上抗原结合位点各自更有效地接近目标抗原。示范性柔性肽/多肽包括(但不限于)氨基酸序列Gly-Ser, Gly-Ser-Gly-Ser (SEQ ID NO 92), Ala-Ser, Gly-Gly-Gly-Ser (SEQ ID NO :93)、(Gly4-Ser) 3 (SEQ ID NO :94)和(Gly4_Ser) 4 (SEQ ID NO :95)。此项技术中众所周知其它的柔性肽/多肽序列。D. 二聚、多聚和靶向结构域本文中揭示的融合蛋白任选含有用以使两种或两种以上融合蛋白二聚或多聚的二聚或多聚结构域。用以使融合蛋白二聚或多聚的结构域可为独立结构域，或者可包含在融合蛋白其它结构域(B7-H4多肽、第二多肽或肽/多肽连接子结构域)中的一者内。I. 二聚结构域“二聚结构域”是由至少两个氨基酸残基或至少两个肽或多肽(其可具有相同或不同的氨基酸序列)缔合形成。所述肽或多肽彼此可通过共价和/或非共价缔合相互作用。优选二聚结构域含有至少一个半胱氨酸，其能够与搭配物融合蛋白上的半胱氨酸形成分子间二硫键。二聚结构域可含有一个或一个以上半胱氨酸残基，以致二硫键可形成于搭配物融合蛋白之间。在一个实施例中，二聚结构域含有1、2或3个到约10个半胱氨酸残基。在一个优选实施例中，二聚结构域是免疫球蛋白铰链区。其它示范性二聚结构域可为此项技术中已知的任何结构域，并且包括(但不限于)卷曲螺旋、酸片(acid patch)、锌指、I丐手(calcium hand)、ChI-C1j对、与工程改造的“鼓起(knob) ”和/或“突起(protruberance) ”的“界面(interface) ” (如美国专利第5，821，333号中所述)、亮氨酸拉链(例如来自jun和/或fos)(美国专利第5，932，448号)、SH2 (src同系物2)、SH3 (src同系物3)(韦德尔(Vidal)等人,生物化学(Biochemistry)，43, 7336-44 ((2004))、憐酸酪氨酸结合(phosphotyrosine binding, PTB)(周(Zhou)等人，自然(Nature)，378 :584-592(1995))、Wff (苏朵(Sudol)，生物物理学与分子生物学进展(Prog. Biochys. MolBio. )，65 :113-132 (1996))、PDZ (金(Kim)等人，自然(Nature),378 :85-88(1995);科曼(Komau)等人，科学(Science)，269 :1737-1740 (1995)) 14-3-3、WD40(胡(Hu)等人，生物化学杂志(J Biol Chem. )，273，33489-33494 (1998))EH、Lim、异亮氨酸拉链、受体二聚体对(例如白细胞介素-8受体(IL-8R);和整合素(integrin)杂二聚体，例如LFA-I和GPIIIb/IIIa)或其二聚区域、二聚配体多肽(例如神经生长因子(nerve growth factor, NGF)、神经营养因子 _3 (neurotrophin-3, NT-3)、白细胞介素-8 (IL-8)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、VEGF-C、VEGF-D> PDGF 成员和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)(阿卡瓦(Arakawa)等人，生物化学杂志，269 (45) =27833-27839(1994)和雷德结瓦斯基(Radziejewski)等人，生物化学(Biochem.), 32 (48) :1350 (1993)),并且也可为这些结构域的亲和力改变的变异体。多肽对可借助此项技术中已知的方法(包括酵母双杂交筛选法)鉴别。酵母双杂交筛选法描述于美国专利第5，283，173号和第6，562，576号中。一对相互作用结构域之间的亲和力可使用此项技术中已知的方法确定，包括如片平(Katahira)等人，生物化学杂志，227，9242-9246 (2002))中所述的方法。或者，可例如使用WO 01/00814中所述的方法，针对杂二聚化筛选肽序列文库。适用于蛋白质-蛋白质相互作用的方法也描述于美国专利第6，790，624号中。2.多聚结构域“多聚结构域”是使三个或三个以上肽或多肽彼此通过共价和/或非共价缔合相互作用的结构域。适合的多聚结构域包括(但不限于)卷曲螺旋结构域。卷曲螺旋是通常在 组装(折叠)形成多聚螺旋束的7个氨基酸(七肽重复区)或11个氨基酸(十一肽重复区)的序列中具有主要疏水性残基间隔3和4个残基的邻近模式的肽序列。也涵盖序列包括具有3和4个残基间隔的一些不规则分布的卷曲螺旋。疏水性残基尤其是疏水性氨基酸Val, lie、Leu、Met、Tyr, Phe和Trp。“主要疏水性”意指至少50%的残基必须选自所提到的疏水性氨基酸。卷曲螺旋结构域可来源于层粘连蛋白(Iaminin)。在细胞外空间中，杂三聚的卷曲螺旋蛋白层粘连蛋白在基底膜形成中起到重要作用。很明显，多官能寡聚结构是层粘连蛋白的功能所必需的。卷曲螺旋结构域也可来源于三个(TSP-1和TSP-2)或五个(TSP-3、TSP-4 和 TSP-5)链连接的凝血栓蛋白(thrombospondin)，或来源于 COMP (COMPcc)(郭(Guo)等人，欧洲分子生物学学会会刊(EMB0 J.)，1998，17 :5265-5272)，其折叠成平行的五条链的卷曲螺旋(马拉斯科维奇(Malashkevich)等人,科学(Science), 274 :761-765(1996))。来源于其它蛋白质的其它卷曲螺旋结构域以及介导多肽多聚作用的其它结构域是此项技术中已知的，并且适用于所揭示的融合蛋白。在另一实施例中，B7-H4多肽、其融合蛋白或片段可经过诱导以结合于第二多价多肽(例如抗体)形成多聚体。适用于使B7-H4多肽、其融合蛋白或片段多聚的抗体包括(但不限于)IgM抗体和交联的多价IgG、IgA、IgD或IgE复合物。3.靶向结构域B7-H4多肽和融合蛋白可含有靶向结构域以使分子靶向体内特定部位。优选的靶向结构域使分子靶向炎症区域。示范性靶向结构域是对发炎组织或包括(但不限于)IL17、IL-4、IL-6、IL-12、IL-21、IL-22和IL-23的促炎性细胞因子具有特异性的抗体或其抗原结合片段。在例如多发性硬化等神经病症的情况下，靶向结构域可使分子靶向CNS，或可结合于血管上皮上的VCAM-I。其它靶向结构域可为对促炎性分子具有特异性的肽适体。在其它实施例中，B7-H4融合蛋白可包括对例如T细胞等免疫细胞表面上呈现的多肽具有特异性的结合搭配物。在其它实施例中，靶向结构域特异性靶向活化的免疫细胞。优选作为目标的免疫细胞包括ThO、Thl、Thl7和Th22T细胞；分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I P、TNF- a、TGF- ^、IFN- y、IL-17、IL-6、IL-23, IL-22、IL-21 以及 MMP 和 Treg 的发炎性分子的其它细胞。举例来说，针对Treg的靶向结构域可特异性结合CD25。
E.示范性融合蛋白代表性鼠类B7-H4融合蛋白是由与以下序列具有至少80 %、85 %、90 %、95 %、99%或100%序列一致性的核酸编码atggcttcct tggggcagat catcttttggagtattatta acatcatcat catcctggct60ggggccatcg cactcatcat tggctttggcatttcaggca agcacttcat cacggtcacg120accttcacct cagctggaaa cattggagaggacgggaccc tgagctgcac ttttgaacct180gacatcaaac tcaacggcat cgtcatccagtggctgaaag aaggcatcaa aggtttggtc240
cacgagttca aagaaggcaa agacgacctctcacagcagc atgagatgtt cagaggccgc300acagcagtgt ttgctgatca ggtggtagttggcaatgctt ccctgagact gaaaaacgtg360cagctcacgg atgctggcac ctacacatgttacatccgca cctcaaaagg caaagggaat420gcaaaccttg agtataagac cggagccttcagtatgccag agataaatgt ggactataat480gccagttcag agagtttacg ctgcgaggctcctcggtggt tcccccagcc cacagtggcc540tgggcatctc aagtcgacca aggagccaatttctcagaag tctccaacac cagctttgag600ttgaactctg agaatgtgac catgaaggtcgtatctgtgc tctacaatgt cacaatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaacgacattgccaaag ccaccgggga catcaaagtg720acagattcag aggtcaaaag gcgaagtcagctgcagttgc tgaactctgg ggagccaaga780ggtcctacga tcaagccctg cccgccttgtaaatgcccag ctccaaattt gctgggtgga840ccgtcagtct ttatcttccc gccaaagataaaggacgtct tgatgattag tctgagcccc900atcgtgacat gcgttgtggt ggatgtttcagaggatgacc ccgacgtgca aatcagttgg960ttcgttaaca acgtggaggt gcataccgctcaaacccaga cccacagaga ggattataac1020agcaccctgc gggtagtgtc cgccctgccgatccagcatc aggattggat gagcgggaaa1080gagttcaagt gtaaggtaaa caacaaagatctgccagcgc cgattgaacg aaccattagc1140aagccgaaag ggagcgtgcg cgcacctcaggtttacgtcc ttcctccacc agaagaggag1200atgacgaaaa agcaggtgac cctgacatgcatggtaactg actttatgcc agaagatatt1260tacgtggaat ggactaataa cggaaagacagagctcaatt acaagaacac tgagcctgtt1320ctggattctg atggcagcta ctttatgtactccaaattga gggtcgagaa gaagaattgg1380gtcgagagaa acagttatag ttgctcagtggtgcatgagg gcctccataa tcatcacacc1440acaaagtcct tcagccgaac gcccgggaaa1470(SEQ ID NO :96)、atggagtggt catgggtttt tctgttctttcttagcgtga ctacaggcgt ccattcagga60ttcggcataa gcggcaagca cttcatcacagttacaacgt ttacaagtgc ggggaacatt120ggggaagatg gaacattgtc atgtacatttgagccagata tcaaactcaa tggaatagta180attcagtggc ttaaggaggg catcaagggcctggtccacg aatttaagga ggggaaagac240gatctgtctc agcagcacga gatgttcaggggcagaaccg ccgtcttcgc agaccaggtt300gtggtaggca acgccagttt gcggctgaaaaacgtgcagc tgactgacgc cggcacctac360acatgctata tccggtcctc taagggcaaggggaacgcta atctcgagta caaaacaggc420gccttttcta tgccagagat caacgtggactataacgcaa gctctgaaag tctgagatgc480
gaggcgccaa ggtggttccc tcagcccacc gtcgcgtggg cttcccaggtggatcaaggc540gccaactttt ctgaggtttc taacaccagc ttcgaactga acagcgaaaatgtgacaatg600aaggtagtca gcgttctgta taacgtgacc atcaacaata cttactcctgtatgatagaa660aatgatatag ccaaggctac aggagatatt aaagtgacgg attcagaagtgaaaaggagg720agtcaactgc aactcttgaa tagcggcgag ccaagaggtc ctacgatcaagccctgcccg780ccttgtaaat gcccagctcc aaatttgctg ggtggaccgt cagtctttatcttcccgcca840aagataaagg acgtcttgat gattagtctg agccccatcg tgacatgcgttgtggtggat900gtttcagagg atgaccccga cgtgcaaatc agttggttcg ttaacaacgtggaggtgcat960accgctcaaa cccagaccca cagagaggat tataacagca ccctgcgggtagtgtccgcc1020ctgccgatcc agcatcagga ttggatgagc gggaaagagt tcaagtgtaaggtaaacaac1080aaagatctgc cagcgccgat tgaacgaacc attagcaagc cgaaagggagcgtgcgcgca1140cctcaggttt acgtccttcc tccaccagaa gaggagatga cgaaaaagcaggtgaccctg1200acatgcatgg taactgactt tatgccagaa gatatttacg tggaatggactaataacgga1260aagacagagc tcaattacaa gaacactgag cctgttctgg attctgatggcagctacttt1320atgtactcca aattgagggt cgagaagaag aattgggtcg agagaaacagttatagttgc1380tcagtggtgc atgagggcct ccataatcat cacaccacaa agtccttcagccgaacgccc1440gggaaa1446(SEQ ID NO 97)或atggagtggt catgggtttt tctgttcttt cttagcgtga ctacaggcgtccattcagga60ttcggcataa gcggcaagca cttcatcaca gttacaacgt ttacaagtgcggggaacatt120ggggaagatg gaacattgtc atgtacattt gagccagata tcaaactcaatggaatagta180attcagtggc ttaaggaggg catcaagggc ctggtccacg aatttaaggaggggaaagac240gatctgtctc agcagcacga gatgttcagg ggcagaaccg ccgtcttcgcagaccaggtt300gtggtaggca acgccagttt gcggctgaaa aacgtgcagc tgactgacgccggcacctac360acatgctata tccggacctc taagggcaag gggaacgcta atctcgagtacaaaacaggc420gccttttcta tgccagagat caacgtggac tataacgcaa gctctgaaagtctgagatgc480gaggcgccaa ggtggttccc tcagcccacc gtcgcgtggg cttcccaggtggatcaaggc540gccaactttt ctgaggtttc taacaccagc ttcgaactga acagcgaaaatgtgacaatg600aaggtagtca gcgttctgta taacgtgacc atcaacaata cttactcctgtatgatagaa660aatgatatag ccaaggctac aggagatatt aaagtgacgg attcagaagtgaaaaggagg720agtcaactgc aactcttgaa tagcggcgag ccaagaggtc ctacgatcaagccctgcccg780ccttgtaaat gcccagctcc aaatttgctg ggtggaccgt cagtctttatcttcccgcca840aagataaagg acgtcttgat gattagtctg agccccatcg tgacatgcgttgtggtggat900、[1017]gtttcagagg atgaccccga cgtgcaaatc agttggttcg ttaacaacgtggaggtgcat960accgctcaaa cccagaccca cagagaggat tataacagca ccctgcgggtagtgtccgcc1020ctgccgatcc agcatcagga ttggatgagc gggaaagagt tcaagtgtaaggtaaacaac1080aaagatctgc cagcgccgat tgaacgaacc attagcaagc cgaaagggagcgtgcgcgca1140cctcaggttt acgtccttcctccaccagaa gaggagatga cgaaaaagcaggtgaccctg1200acatgcatgg taactgactt tatgccagaa gatatttacg tggaatggactaataacgga1260[1023]aagacagagc tcaattacaa gaacactgag cctgttctgg attctgatgg cagctacttt1320atgtactcca aattgagggt cgagaagaag aattgggtcg agagaaacag ttatagttgc1380tcagtggtgc atgagggcct ccataatcat cacaccacaa agtccttcag ccgaacgccc1440gggaaa1446(SEQ ID NO :98) [1028]在另一实施例中，代表性鼠类B7-H4融合蛋白与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或 100%序列一致性MASLGQIIFff SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP60DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQWV GNASLRLKNV120QLTDAGTYTC YIRSSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TDSEVKRRSQ LQLLNSGEPR GPTIKPCPPC KCPAPNLLGG PSVFIFPPKI KDVLMISLSP300IVTCWVDVS EDDPDVQISff FVNNVEVHTA QTQTHREDYN STLRVVSALP IQHQDWMSGK360EFKCKVNNKD LPAPIERTIS KPKGSVRAPQ VYVLPPPEEE MTKKQVTLTC MVTDFMPEDI420YVEffTNNGKT ELNYKNTEPV LDSDGSYFMY SKLRVEKKNff VERNSYSCSV VHEGLHNHHT480TKSFSRTPGK490(SEQ ID NO :99)、MASLGQIIFff SIINIIIILA GAIALIIGFG ISGKHFITVT TFTSAGNIGE DGTLSCTFEP60DIKLNGIVIQ WLKEGIKGLV HEFKEGKDDL SQQHEMFRGR TAVFADQWV GNASLRLKNV120QLTDAGTYTC YIRTSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEINVDYN ASSESLRCEA PRWFPQPTVA180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TDSEVKRRSQ LQLLNSGEPR GPTIKPCPPC KCPAPNLLGG PSVFIFPPKI KDVLMISLSP300IVTCWVDVS EDDPDVQISff FVNNVEVHTA QTQTHREDYN STLRVVSALP IQHQDWMSGK360EFKCKVNNKD LPAPIERTIS KPKGSVRAPQ VYVLPPPEEE MTKKQVTLTC MVTDFMPEDI420YVEffTNNGKT ELNYKNTEPV LDSDGSYFMY SKLRVEKKNff VERNSYSCSV VHEGLHNHHT480TKSFSRTPGK490(SEQ ID NO :100)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV60IQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY120TCYIRSSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR240SQLQLLNSGE PRGPTIKPCP PCKCPAPNLL GGPSVFIFPP KIKDVLMISL SPIVTCWVD300VSEDDPDVQI SWFVNNVEVH TAQTQTHRED YNSTLRWSA LPIQHQDWMS GKEFKCKVNN360KDLPAPIERT ISKPKGSVRA PQVYVLPPPE EEMTKKQVTL TCMVTDFMPE DIYVEffTNNG420KTELNYKNTE PVLDSDGSYF MYSKLRVEKK NffVERNSYSC SWHEGLHNH HTTKSFSRTP480GK482(SEQ ID NO :101)或MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGKHFIT VTTFTSAGNI GEDGTLSCTF EPDIKLNGIV6DIQWLKEGIKG LVHEFKEGKD DLSQQHEMFR GRTAVFADQV VVGNASLRLK NVQLTDAGTY120[1061]TCYIRTSKGK GNANLEYKTG AFSMPEINVD YNASSESLRC EAPRWFPQPT VAffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTDSEVKRR240SQLQLLNSGE PRGPTIKPCP PCKCPAPNLL GGPSVFIFPP KIKDVLMISL SPIVTCWVD300VSEDDPDVQI SWFVNNVEVH TAQTQTHRED YNSTLRWSA LPIQHQDWMS GKEFKCKVNN360KDLPAPIERT ISKPKGSVRA PQVYVLPPPE EEMTKKQVTL TCMVTDFMPE DIYVEffTNNG420KTELNYKNTE PVLDSDGSYF MYSKLRVEKK NffVERNSYSC SWHEGLHNH HTTKSFSRTP480GK482(SEQ ID NO :102)。
不含信号序列的鼠类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO 99和SEQ ID NO :101的氨基酸序列为GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK60DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ WVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRSSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAffASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180 [1073]MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG EPRGPTIKPC240PPCKCPAPNL LGGPSVFIFP PKIKDVLMIS LSPIVTCVW DVSEDDPDVQ ISWFVNNVEV300HTAQTQTHRE DYNSTLRVVS ALPIQHQDWM SGKEFKCKVN NKDLPAPIER TISKPKGSVR360APQVYVLPPP EEEMTKKQVT LTCMVTDFMP EDIYVEffTNN GKTELNYKNT EPVLDSDGSY420FMYSKLRVEK KNWVERNSYS CSWHEGLHN HHTTKSFSRT PGK463(SEQ ID NO :103)。不含信号序列的鼠类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :100和SEQ ID NO :102的氨基酸序列为GFGISGKHFI TVTTFTSAGN IGEDGTLSCT FEPDIKLNGI VIQWLKEGIK GLVHEFKEGK60DDLSQQHEMF RGRTAVFADQ WVGNASLRL KNVQLTDAGT YTCYIRTSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEINV DYNASSESLR CEAPRWFPQP TVAffASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTDSEVKR RSQLQLLNSG EPRGPTIKPC240PPCKCPAPNL LGGPSVFIFP PKIKDVLMIS LSPIVTCVW DVSEDDPDVQ ISWFVNNVEV300HTAQTQTHRE DYNSTLRVVS ALPIQHQDWM SGKEFKCKVN NKDLPAPIER TISKPKGSVR360APQVYVLPPP EEEMTKKQVT LTCMVTDFMP EDIYVEffTNN GKTELNYKNT EPVLDSDGSY420FMYSKLRVEK KNWVERNSYS CSWHEGLHN HHTTKSFSRT PGK463(SEQ ID NO :104)。代表性人类B7-H4融合蛋白是由与以下序列具有至少80%、85%、90%、95%、99%或100%序列一致性的核酸编码atggcttccc tggggcagat cctcttctgg agcataatta gcatcatcat tattctggct60ggagcaattg cactcatcat tggctttggt atttcaggga gacactccat cacagtcact120actgtcgcct cagctgggaa cattggggag gatggaatcc tgagctgcac ttttgaacct180gacatcaaac tttctgatat cgtgatacaa tggctgaagg aaggtgtttt aggcttggtc240catgagttca aagaaggcaa agatgagctg tcggagcagg atgaaatgtt cagaggccgg300acagcagtgt ttgctgatca agtgatagtt ggcaatgcct ctttgcggct gaaaaacgtg360caactcacag atgctggcac ctacaaatgt tatatcatca cttctaaagg caaggggaat420[1097]gctaaccttg agtataaaac tggagccttc agcatgccgg aagtgaatgtggactataat480gccagctcag agaccttgcg gtgtgaggct ccccgatggt tcccccagcccacagtggtc540tgggcatccc aagttgacca gggagccaac ttctcggaag tctccaataccagctttgag 600ctgaactctg agaatgtgac catgaaggtt gtgtctgtgc tctacaatgttacgatcaac660aacacatact cctgtatgat tgaaaatgac attgccaaag caacaggggatatcaaagtg 720acagaatcgg agatcaaaag gcggagtgag cctaagtcat gtgacaagacccatacgtgc780ccaccctgtc ccgctccaga actgctgggg ggacctagcg ttttcttgttccccccaaag 840cccaaggaca ccctcatgat ctcacggact cccgaagtaa catgcgtagtagtcgacgtg 900 [1105]agccacgagg atcctgaagt gaagtttaat tggtacgtgg acggagtcgaggtgcataat960gccaaaacta aacctcggga ggagcagtat aacagtacct accgcgtggtatccgtcttg 1020acagtgctcc accaggactg gctgaatggt aaggagtata aatgcaaggtcagcaacaaa 1080gctcttcccg ccccaattga aaagactatc agcaaggcca agggacaaccccgcgagccc1140caggtttaca cccttccacc ttcacgagac gagctgacca agaaccaggtgtctctgact1200tgtctggtca aaggtttcta tccttccgac atcgcagtgg agtgggagtcaaacgggcag 1260cctgagaata actacaagac cacaccccca gtgcttgata gcgatgggagctttttcctc1320tacagtaagc tgactgtgga caaatcccgc tggcagcagg gaaacgttttctcttgtagc1380gtcatgcatg aggccctcca caaccattat actcagaaaa gcctgagtctgagtcccggc1440aaa1443(SEQ ID NO :105)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgtccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgctggcaatata 120ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg 180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaaggaagggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta 300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgctggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagtataaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaacattgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggttgatcagggg 540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaatgtgaccatg 600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatgcatgattgaa 660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagatcaaacggcgg 720tctgagccta agtcatgtga caagacccat acgtgcccac cctgtcccgctccagaactg 780ctggggggac ctagcgtttt cttgttcccc ccaaagccca aggacaccctcatgatctca 840cggactcccg aagtaacatg cgtagtagtc gacgtgagcc acgaggatcctgaagtgaag 900tttaattggt acgtggacgg agtcgaggtg cataatgcca aaactaaacctcgggaggag 960cagtataaca gtacctaccg cgtggtatcc gtcttgacag tgctccaccaggactggctg 1020aatggtaagg agtataaatg caaggtcagc aacaaagctc ttcccgccccaattgaaaag 1080actatcagca aggccaaggg acaaccccgc gagccccagg tttacacccttccaccttca 1140cgagacgagc tgaccaagaa ccaggtgtct ctgacttgtc tggtcaaaggtttctatcct1200[1136]tccgacatcg cagtggagtg ggagtcaaac gggcagcctg agaataactacaagaccaca 1260cccccagtgc ttgatagcga tgggagcttt ttcctctaca gtaagctgactgtggacaaa 1320tcccgctggc agcagggaaa cgttttctct tgtagcgtca tgcatgaggccctccacaac1380cattatactc agaaaagcct gagtctgagt cccggcaaa1419(SEQ ID NO :106)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgtccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgctggcaatata 120ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg 180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaaggaagggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta 300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac 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gcctgagaat aactacaaga ccacacccccagtgcttgat1260agcgatggga gctttttcct ctacagtaag ctgactgtgg acaaatcccgctggcagcag 1320ggaaacgttt tctcttgtag cgtcatgcat gaggccctcc acaaccattatactcagaaa 1380agcctgagtc tgagtcccgg caaa1404(SEQ ID NO :107)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgtccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgctggcaatata 120ggtgaggatg gcatccagtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg 180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaaggaagggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta 300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgctggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagtataaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaacattgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggttgatcagggg 540[1175]gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaatgtgaccatg 600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatgcatgattgaa 660aacgacatcg ccaaggcaac 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gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg 180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaaggaagggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta 300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgctggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagtataaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaacattgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggttgatcagggg 540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaatgtgaccatg 600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatgcatgattgaa 660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagatcaaacggcgg 720tctcacctgc agctgctgaa ctccaaggac aagacccata cgtgcccaccctgtcccgct780ccagaactgc tggggggacc tagcgttttc ttgttccccc caaagcccaaggacaccctc840atgatctcac ggactcccga agtaacatgc gtagtagtcg acgtgagccacgaggatcct900gaagtgaagt ttaattggta cgtggacgga gtcgaggtgc ataatgccaaaactaaacct960cgggaggagc agtataacag tacctaccgc gtggtatccg tcttgacagtgctccaccag 1020gactggctga atggtaagga gtataaatgc aaggtcagca acaaagctcttcccgcccca 1080attgaaaaga ctatcagcaa ggccaaggga caaccccgcg agccccaggtttacaccctt1140ccaccttcac gagacgagct gaccaagaac caggtgtctc tgacttgtctggtcaaaggt1200ttctatcctt ccgacatcgc agtggagtgg gagtcaaacg ggcagcctgagaataactac1260aagaccacac ccccagtgct tgatagcgat gggagctttt tcctctacagtaagctgact1320gtggacaaat cccgctggca gcagggaaac gttttctctt gtagcgtcatgcatgaggcc1380[1214]ctccacaacc attatactca gaaaagcctg agtctgagtc ccggcaaa1428(SEQ ID NO :109)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgtccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgctggcaatata 120ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg 180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaaggaagggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta 300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgctggcacgtat3 60aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagtataaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaacattgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggttgatcagggg 540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaatgtgaccatg 600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatgcatgattgaa 660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagatcaaacggcgg 720tctgagccta agtcatgtga caagacccat acgtgcccac cctgtcccgctccagaactg 780ctggggggac ctagcgtttt cttgttcccc ccaaagccca aggacaccctcatgatctca 840cggactcccg aagtaacatg cgtagtagtc gacgtgagcc acgaggatcctgaagtgaag 900tttaattggt acgtggacgg agtcgaggtg cataatgcca aaactaaacctcgggaggag 960cagtataaca gtacctaccg cgtggtatcc gtcttgacag tgctccaccaggactggctg 1020aatggtaagg agtataaatg caaggtcagc aacaaagctc ttcccgccccaattgaaaag 1080actatcagca aggccaaggg acaaccccgc gagccccagg tttacacccttccaccttca 1140cgagacgagc tgaccaagaa ccaggtgtct ctgacttgtc tggtcaaaggtttctatcct1200tccgacatcg cagtggagtg ggagtcaaac gggcagcctg agaataactacaagaccaca 1260cccccagtgc ttgatagcga tgggagcttt ttcctctaca gtaagctgactgtggacaaa 1320tcccgctggc agcagggaaa cgttttctct tgtagcgtca tgcatgaggccctccacaac1380cattatactc agaaaagcct gagtctgagt cccggcaaa1419(SEQ ID NO :110)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgtccattcaggc60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgctggcaatata 120ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg 180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaaggaagggaaggat240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta 300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgctggcacgtat360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagtataaaacaggc420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaacattgcgctgt480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggttgatcagggg 540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaatgtgaccatg 600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatgcatgattgaa 660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagatcaaacggcgg 720[1253]tctgacaaga cccatacgtg cccaccctgt cccgctccag aactgctggggggacctagc 780gttttcttgt tccccccaaa gcccaaggac accctcatga tctcacggactcccgaagta 840acatgcgtag tagtcgacgt gagccacgag gatcctgaag tgaagtttaattggtacgtg 900gacggagtcg aggtgcataa tgccaaaact aaacctcggg aggagcagtataacagtacc 960taccgcgtgg tatccgtctt gacagtgctc caccaggact ggctgaatggtaaggagtat1020aaatgcaagg tcagcaacaa agc tcttccc gccccaattg aaaagactatcagcaaggcc1080aagggacaac cccgcgagcc ccaggtttac acccttccac cttcacgagacgagctgacc1140aagaaccagg tgtctctgac ttgtctggtc aaaggtttct atccttccgacatcgcagtg1200gagtgggagt caaacgggca gcctgagaat aactacaaga ccacacccccagtgcttgat1260agcgatggga gctttttcct ctacagtaag ctgactgtgg acaaatcccgctggcagcag1320ggaaacgttt tctcttgtag cgtcatgcat gaggccctcc acaaccattatactcagaaa1380agcctgagtc tgagtcccgg caaa1404(SEQ ID NO :111)、atggaatgga gctgggtatt tctgtttttc ctgtcagtaa cgactggcgtccattcaggc 60ttcggcatca gtggacggca cagtatcaca gtgaccaccg tcgcctccgctggcaatata 120ggtgaggatg gcatcctgtc ctgtaccttt gagccggaca tcaaactgtctgacatagtg 180atacaatggc tgaaggaggg ggtgctcggt ctggtacatg agtttaaggaagggaaggat 240gaactgtccg agcaggatga gatgttccgg gggaggaccg ctgtgttcgccgatcaggta 300atcgtcggaa atgcaagtct cagattgaaa aatgtgcaac tgactgatgctggcacgtat 360aaatgctaca ttatcacaag taagggcaaa ggaaatgcta accttgagtataaaacaggc 420gcattctcaa tgcccgaggt caatgtcgac tataatgcca gcagtgaaacattgcgctgt 480gaagctcccc gctggttccc ccagccaacc gtggtctggg cctctcaggttgatcagggg 540gctaactttt ccgaggtgag caacaccagc ttcgaactca actctgagaatgtgaccatg 600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatgcatgattgaa 660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagatcgacaagacc 720catacgtgcc caccctgtcc cgctccagaa ctgctggggg gacctagcgttttcttgttc 780cccccaaagc ccaaggacac cctcatgatc tcacggactc ccgaagtaacatgcgtagta 840gtcgacgtga gccacgagga tcctgaagtg aagtttaatt ggtacgtggacggagtcgag 900gtgcataatg ccaaaactaa acctcgggag gagcagtata acagtacctaccgcgtggta 960tccgtcttga cagtgctcca ccaggactgg ctgaatggta aggagtataaatgcaaggtc 1020agcaacaaag ctcttcccgc cccaattgaa aagactatca gcaaggccaagggacaaccc 1080cgcgagcccc aggtttacac ccttccacct tcacgagacg 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actctgagaa tgtgaccatg600aaagttgtgt ctgtcctgta taatgtaaca atcaacaaca cttattcatg catgattgaa660aacgacatcg ccaaggcaac aggtgatatt aaggtaactg aatccgagat caaacggcgg720tctcacctgc agctgctgaa ctccaaggac aagacccata cgtgcccacc ctgtcccgct780ccagaactgc tggggggacc tagcgttttc ttgttccccc caaagcccaa ggacaccctc840atgatctcac ggactcccga agtaacatgc gtagtagtcg acgtgagcca cgaggatcct900gaagtgaagt ttaattggta cgtggacgga gtcgaggtgc ataatgccaa aactaaacct960cgggaggagc agtataacag tacctaccgc gtggtatccg tcttgacagt gctccaccag1020gactggctga atggtaagga gtataaatgc aaggtcagca acaaagctct tcccgcccca1080attgaaaaga ctatcagcaa ggccaaggga caaccccgcg agccccaggt ttacaccctt1140ccaccttcac gagacgagct gaccaagaac caggtgtctc tgacttgtct ggtcaaaggt1200ttctatcctt ccgacatcgc agtggagtgg gagtcaaacg ggcagcctga gaataactac1260aagaccacac ccccagtgct tgatagcgat gggagctttt tcctctacag taagctgact1320gtggacaaat cccgctggca gcagggaaac gttttctctt gtagcgtcat gcatgaggcc1380ctccacaacc attatactca gaaaagcctg agtctgagtc ccggcaaa1428(SEQ ID NO :113)。在另一实施例中，代表性人类B7-H4融合蛋白与以下序列具有至少80 %、85 %、90%、95%、99%或 100%序列一致性MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKY240TESEIKRRSE PKSCDKTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVWDV300SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDffLNG KEYKCKVSNK360ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRD ELTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ420PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG480、[1325]K481(SEQ ID NO :114)。在另一实施例中，代表性人类B7-H4融合蛋白与以下序列具有至少80 %、85 %、90%、95%、99%或 100%序列一致性MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP60[1329]DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC WVDVSHEDP300EVKFNffYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP360IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEff ESNGQPENNY420KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRffQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK476(SEQ ID NO :115)、 MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVWD VSHEDPEVKF300NffYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRWSV LTVLHQDffLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT360ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP420PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RffQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK472(SEQ ID NO :116)、MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGIQSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCW300VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRW SVLTVLHQDff LNGKEYKCKV360SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES420NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRffQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL480SPGK484(SEQ ID NO :117)、MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSE PKSCDKTHTC PPCPAPELLG GPSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVWDV300SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDffLNG KEYKCKVSNK360ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPPSRD ELTKNQVSLT CLVKGFYPSD IAVEWESNGQ420PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG480K481(SEQ ID NO :118)、MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITV TTVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120[1368]QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC WVDVSHEDP300EVKFNffYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP360IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEff ESNGQPENNY420KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRffQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK476(SEQ ID NO :119)、MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60 [1376]DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVWD VSHEDPEVKF300NffYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRWSV LTVLHQDffLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT360ISKAKGQPRE PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP420PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RffQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP GK472(SEQ ID NO :120)、MASLGQILFff SIISIIIILA GAIALIIGFG ISGRHSITVT TVASAGNIGE DGILSCTFEP60DIKLSDIVIQ WLKEGVLGLV HEFKEGKDEL SEQDEMFRGR TAVFADQVIV GNASLRLKNV120QLTDAGTYKC YIITSKGKGN ANLEYKTGAF SMPEVNVDYN ASSETLRCEA PRWFPQPTW180WASQVDQGAN FSEVSNTSFE LNSENVTMKV VSVLYNVTIN NTYSCMIEND IAKATGDIKV240TESEIKRRSH LQLLNSKDKT HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCW300VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRW SVLTVLHQDff LNGKEYKCKV360SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES420NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD KSRffQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL480SPGK484(SEQ ID NO :121)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240SEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCWV DVSHEDPEVK300FNWYVDGVEV HNAKTKPREE QYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK360TISKAKGQPR EPQVYTLPPS RDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT420PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRffQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK473(SEQ ID NO :122)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI[1407]KVTESEIKRR 240SDKTHTCPPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVWDVSHE DPEVKFNWYV300DGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA360KGQPREPQVY TLPPSRDELTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD420SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK468(SEQ ID NO :123)、MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKDELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WWASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIDKT240HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCW VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE300VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDff LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP360REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS420FFLYSKLTVD KSRWQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK464(SEQ ID NO : 124)、MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGIQSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKDELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WWASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240SHLQLLNSKD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC WVDVSHEDP300EVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP360IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEff ESNGQPENNY420KTTPPVLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK476(SEQ ID NO : 125)、MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKDELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WWASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240SEPKSCDKTH TCPPCPAPEL LGGPSVFLFP PKPKDTLMIS RTPEVTCWV DVSHEDPEVK300FNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYNSTYRVVS VLTVLHQDWL NGKEYKCKVS NKALPAPIEK360TISKAKGQPR EPQVYTLPPSRDELTKNQVS LTCLVKGFYP SDIAVEWESN GQPENNYKTT420PPVLDSDGSF FLYSKLTVDK SRWQQGNVFS CSVMHEALHN HYTQKSLSLS PGK473(SEQ ID NO : 126)、MEWSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKDELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WWASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR240SDKTHTCPPC PAPELLGGPSVFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVWDVSHE DPEVKFNWYV300DGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRWSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA360[1446]KGQPREPQVY TLPPSRDELT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD420SDGSFFLYSK LTVDKSRffQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK468(SEQ ID NO :127)、MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIDKT240HTCPPCPAPE LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCW VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE300VHNAKTKPRE EQYNSTYRW SVLTVLHQDff LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP360REPQVYTLPP SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS420FFLYSKLTVD KSRffQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK464(SEQ ID NO :128)或MEffSWVFLFF LSVTTGVHSG FGISGRHSIT VTTVASAGNI GEDGILSCTF EPDIKLSDIV60IQWLKEGVLG LVHEFKEGKD ELSEQDEMFR GRTAVFADQV IVGNASLRLK NVQLTDAGTY120KCYIITSKGK GNANLEYKTG AFSMPEVNVD YNASSETLRC EAPRWFPQPT WffASQVDQG180ANFSEVSNTS FELNSENVTM KVVSVLYNVT INNTYSCMIE NDIAKATGDI KVTESEIKRR 240SHLQLLNSKD KTHTCPPCPA PELLGGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC WVDVSHEDP300EVKFNffYVDG VEVHNAKTKP REEQYNSTYR VVSVLTVLHQ DWLNGKEYKC KVSNKALPAP360IEKTISKAKG QPREPQVYTL PPSRDELTKN QVSLTCLVKG FYPSDIAVEff ESNGQPENNY420KTTPPVLDSD GSFFLYSKLT VDKSRffQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK476(SEQ ID NO :129)。不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :114和SEQ ID NO :122的氨基酸序列为GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSEPKSCDKT HTCPPCPAPE240LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCW VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE300EQYNSTYRW SVLTVLHQDff LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP360SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD420KSRffQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK454(SEQ ID NO :130)。不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :115和SEQ ID NO :123的氨基酸序列为GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSDKTHTCPP CPAPELLGGP240SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS300[1483]TYRVVSVLTV LHQDffLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL 360TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRffQ 420QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK449(SEQ ID NO :131)。不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :116和SEQ ID NO :124的氨基酸序列为GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180 MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL 240FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV WDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV 300VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ 360VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRffQQGNV 420FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LS PGK445(SEQ ID NO :132)。不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :117和SEQ ID NO :125的氨基酸序列为GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGIQSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK DKTHTCPPCP240APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVWDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK 300PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT360LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL 420TVDKSRffQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK457(SEQ ID NO :133)。不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :118和SEQ ID NO :126的氨基酸序列为GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSEPKSCDKT HTCPPCPAPE240LLGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCW VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE300EQYNSTYRW SVLTVLHQDff LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP360SRDELTKNQV SLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLYSKLTVD420KSRffQQGNVF SCSVMHEALH NHYTQKSLSL SPGK454(SEQ ID NO :134)。不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :119和SEQ ID NO :127的氨基酸序列为[1518]GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSDKTHTCPP CPAPELLGGP 240SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVWDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS 300TYRVVSVLTV LHQDffLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL 360TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRffQ 420QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLS PGK449 (SEQ ID NO :135)。不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :120和SEQ ID NO :128的氨基酸序列为GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIDK THTCPPCPAP ELLGGPSVFL 240FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV WDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV 300VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSRDELTKNQ 360VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRffQQGNV 420FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGK445(SEQ ID NO :136)。不含信号序列的人类B7-H4融合蛋白SEQ ID NO :121和SEQ ID NO :129的氨基酸序列为GFGISGRHSI TVTTVASAGN IGEDGILSCT FEPDIKLSDI VIQWLKEGVL GLVHEFKEGK 60DELSEQDEMF RGRTAVFADQ VIVGNASLRL KNVQLTDAGT YKCYIITSKG KGNANLEYKT 120GAFSMPEVNV DYNASSETLR CEAPRWFPQP TVWASQVDQ GANFSEVSNT SFELNSENVT 180MKWSVLYNV TINNTYSCMI ENDIAKATGD IKVTESEIKR RSHLQLLNSK DKTHTCPPCP 240APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVWDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK 300PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT 360LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL 420TVDKSRffQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLS PGK457(SEQ ID NO :137)。上述示范性融合蛋白可并入本文所述变异体的任何组合。在另一实施例中，上述示范性融合蛋白的末端赖氨酸缺失。所揭示的融合蛋白可使用标准分子生物学技术分离。举例来说，将含有编码B7-H4-Ig融合蛋白的DNA序列的表达载体通过磷酸钙沉淀转染到293细胞中并在无血清DMEM中培养。72小时时收集上清液并通过蛋白质G或优选蛋白质ASEPHAROSE 柱(法玛西亚公司(Pharmacia),位于瑞典乌普萨拉(Uppsala, Sweden))纯化融合蛋白。F.融合蛋白二聚体和多聚体B7-H4融合多肽可发生二聚或多聚。二聚或多聚反应可通过二聚或多聚结构域(包括上文所述者)在两种或两种以上融合蛋白之间发生。或者，融合蛋白的二聚或多聚反应可通过化学交联发生。融合蛋白二聚体可为均二聚体或杂二聚体。融合蛋白多聚体可为均多聚体或杂多聚体。本文揭示的融合蛋白二聚体具有式II N_R「R2_R3_CN_R4_R5_R6_C或者具有式III N_R「R2_R3_CC_R4_R5_R6_N [1557]其中由式II提供的二聚体的融合蛋白是以平行定向定义，且由式III提供的二聚体的融合蛋白是以反平行定向定义。平行和反平行二聚体又分别称为顺式和反式二聚体。“N”和“C”分别表示融合蛋白的N末端和C末端。融合蛋白成分“R/’、“R2”和“R3”如上文关于式I所定义。对于式II和式111，14”是87-114多肽或第二多肽，“R5”是任选存在的肽/多肽连接子结构域，且“R6”是B7-H4多肽或第二多肽，其中当“R4”是第二多肽时，“R6”是B7-H4多肽，且当“R4”是B7-H4多肽时，“R6”是第二多肽。在一个实施例中，“R/’是B7-H4多肽，“R4”也是B7-H4多肽，且“V和“R6”都是第二多肽。当“V’ = “R4”、“R2” = “R5”且“R3” = “R6”时，式II的融合蛋白二聚体定义为均二聚体。类似地，当“R/’ == “R5”且“R3” = “R4”时，式III的融合蛋白二聚体定义为均二聚体。当这些条件出于任何原因而未得到满足时，融合蛋白二聚体定义为杂二聚体。举例来说，杂二聚体可含有满足这些条件(即，对于根据式II的二聚体，“R/’和“R4”都为B7-H4多肽，“R2”和“R5”都为肽/多肽连接子结构域，且“R3”和“R6”都为第二多肽)的结构域定向，但这些结构域中一者或一者以上的种类不同。举例来说，尽管“R3”和“r6”可都为B7-H4多肽，但一个多肽可含有野生型B7-H4氨基酸序列，而另一多肽可为变异的B7-H4多肽。示范性变异B7-H4多肽是经过修饰而与目标细胞的结合增加或减少、对免疫细胞的活性增加、半衰期或稳定性增加或降低的B7-H4多肽。含有免疫球蛋白C0I或Q区作为多肽连接子结构域一部分的融合蛋白二聚体优选形成杂二聚体，其中二聚体的一个融合蛋白含有ChI区且二聚体的另一融合蛋白含有Q区。融合蛋白也可用于形成多聚体。与二聚体一样，多聚体可为平行多聚体，其中多聚体的所有融合蛋白都关于其N末端和C末端呈相同定向排列。多聚体可为反平行多聚体，其中多聚体的融合蛋白另外关于其N末端和C末端呈相反定向排列。多聚体(平行或反平行)可为均多聚体或杂多聚体。G.肽和多肽修饰融合蛋白可利用可存在于处于正常细胞环境中的多肽中的化学部分来修饰，例如磷酸化、甲基化、酰胺化、硫酸化、酰化、糖基化、小泛素样因子修饰(sumoylation)和泛素化。融合蛋白也可用能够直接或间接提供可检测信号的标记修饰，所述标记包括(但不限于)放射性同位素和荧光化合物。融合蛋白也可用通常未添加到处于细胞环境的多肽中的化学部分来修饰。举例来说，所揭示的融合蛋白也可通过共价附接聚合物链，包括(但不限于)聚乙二醇聚合物(PEG)链(即聚乙二醇化)来修饰。近来，将大分子连结到PEG已经成为改变多种药物的药物动力学(PK)曲线并由此改进其治疗潜力的有效策略。PEG连结通过防止酶促降解，减慢肾过滤以及减少中和抗体的产生来增加药物在循环中的滞留时间。此外，PEG连结物还可用于使融合蛋白发生多聚作用。可通过使多肽的靶向氨基酸残基与能够与所选侧链或末端残基反应的有机衍生化剂反应来将修饰引入分子中。另一修饰是蛋白质的环化。多肽的化学衍生物的实例包括用琥珀酸酐或其它羧酸酐衍生化的赖氨酰基和氨基末端残基。用环状羧酸酐衍生化具有逆转赖氨酰基残基的电荷的作用。其它适用于衍生化含氨基残基的试剂包括酰亚胺基酯，例如甲基吡啶亚胺甲酯；磷酸吡哆醛；吡哆醛；氯氢硼化物；三硝基苯磺酸；0-甲基异脲；2，4戊二酮；和转氨酶催化的与乙醛酸的反应。羧基侧基、天冬氨酰基或谷氨酰基可通过与碳化二亚胺(R-N = C = N-R')，例如I-环己基-3- (2-吗啉基-(4-乙基)碳化二亚胺或I-乙基-3- (4-氮阳离子-4，4- 二甲基戊基)碳化二亚胺反应来选择性修饰。此外，天冬氨酰基和谷氨酰基残基可通过与氨反应而转化成天冬酰胺酰基和谷氨酰胺酰基残基。融合蛋白也可包括一个或一个以上可取代一个或一个以上L-氨基酸的D-氨基酸。H.改变的结合性质B7-H4多肽、其片段和融合物(统称为B7-H4多肽)的结合性质与待投予的剂量和剂量方案有关。在一个实施例中，所揭示的B7-H4多肽具有结合T细胞上至少一种受体的结合性质，对免疫细胞上的受体分子展现出比受体分子的其它配体更高级或更高百分比的占有率。在其它实施例中，所揭示的B7-H4多肽与T细胞上受体的结合亲和力低于野生型B7-H4，使蛋白质在投药后不到3个月、2个月、I个月、3周、2周、I周或数天的时间里解离。在一些实施例中，B7-H4多肽或者其片段或融合物对其受体具有相对较高的亲和力，并且因此可具有相对较慢的解离速率。在其它实施例中，B7-H4多肽经数天、数周或数月时间间歇性投予以阻止免疫应答，此举允许在下一次投药前恢复免疫应答，可用于减少免疫应答，而不是完全切断免疫应答，并且可避免长期副作用。III.分离的核酸分子本文中揭示编码B7-H4多肽、其片段和融合物的分离的核酸序列。适用的鼠类B7-H4核酸与具有基因库寄存编号NM_178594或AY280973的B7-H4核酸具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列一致性。适用的人类B7-H4核酸与具有基因库寄存编号AK026071的B7-H4核酸具有至少约80%、85%、90%、95%或100%序列一致性。本文中使用的“分离的核酸”是指与哺乳动物基因组中存在的其它核酸分子分离的核酸，所述其它核酸分子包括通常在哺乳动物基因组中侧接所述核酸的一侧或两侧的核酸(例如编码非B7-H4蛋白的核酸)。本文中使用的关于核酸的术语“分离的”也包括与任何非天然存在的核酸序列的组合，因为这些非天然存在的序列未在自然界中发现，并且在天然存在的基因组中不具有直接邻近的序列。分离的核酸可为例如DNA分子，条件是在天然存在的基因组中通常发现的直接侧、接所述DNA分子的一个核酸序列被去除或不存在。因此，分离的核酸包括(不限于)以独立于其它序列的单独分子形式存在的DNA分子(例如化学合成的核酸，或者由PCR或限制性内切核酸酶处理产生的cDNA或基因组DNA片段)，以及并入载体、自主复制的质粒、病毒(例如逆转录病毒、慢病毒、腺病毒或疱疹病毒)或并入原核生物或真核生物的基因组DNA中的重组DNA。此外，分离的核酸可包括经过工程改造的核酸，例如作为杂交或融合核酸的一部分的重组DNA分子。存在于例如cDNA文库或基因组文库或者含有基因组DNA限制性消化物的凝胶切片内的数百到数百万其它核酸间的核酸不能视为分离的核酸。编码B7-H4融合多肽的核酸可经过优化以在所选表达宿主中表达。密码子可用编码同一氨基酸的替代性密码子取代，以说明获得B7-H4核酸序列的哺乳动物与表达宿主之间密码子用法的差异。按这种方式，可使用表达宿主优选的密码子合成核酸。核酸可呈有义(sense)或反义定向，或者可与编码B7-H4多肽的参考序列互补。核酸可为DNA、RNA或核酸类似物。核酸类似物的碱基部分、糖部分或磷酸酯主链可经修饰。此种修饰可改进例如核酸的稳定性、杂交性或溶解性。碱基部分的修饰可包括脱氧尿苷(对于脱氧胸苷)和5-甲基-2'-脱氧胞苷或5-溴-2'-脱氧胞苷(对于脱氧胞苷)。糖部分的修饰可包括核糖的2'羟基修饰，由此形成2' -O-甲基或2' -0-烯丙基糖。脱氧核糖磷酸酯主链可经过修饰以产生吗啉基核酸，其中每一碱基部分连接到一个6元吗啉环；或产生肽核酸，其中脱氧磷酸酯主链经假肽(pseudop印tide)主链置换并保留4个碱基。参看例如萨姆顿(Smnmerton)和维勒(Weller) (1997)反义核酸药物开发(Antisense Nucleic Acid Drug Dev. )7 187-195 ;和海鲁普(Hyrup)等人(1996)生物有机与药物化学(Bioorgan. Med Chem.) 4 :5_23。此外,脱氧磷酸酯主链可用例如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯主链、氨基磷酸酯或烷基磷酸三酯主链置换。编码多肽的核酸可投予有需要的受试者。核酸传递涉及将“外来”核酸引入细胞中并最终引入活动物中。用于将核酸传递到受试者的组合物和方法是此项技术中已知的(参看基因疗法知识(Understanding Gene Therapy)，乐莫宁 N. R. (Lemoine,N. R.)编辑,BIOS科技出版社(BIOS Scientific Publishers),牛津(Oxford), 2008)。
IV.载体和宿主细胞也提供编码B7-H4多肽、其片段和融合物的载体。核酸，例如上文所述者，可插入载体中以在细胞中表达。本文中使用的“载体”是一种复制子，例如质粒、噬菌体、病毒或柯斯质粒，其中可插入另一 DNA区段以引起插入的区段的复制。载体可为表达载体。“表达载体”是包括一个或一个以上表达控制序列的载体，且“表达控制序列”是控制并调控另一 DNA序列的转录和/或翻译的DNA序列。载体中的核酸可按可操作方式连接到一个或一个以上表达控制序列。本文中使用的“按可操作方式连接”意指并入遗传构建体中以使表达控制序列能有效地控制相关编码序列的表达。表达控制序列的实例包括启动子、增强子和转录终止区。启动子是由通常在转录开始点(一般接近RNA聚合酶II的起始位点)上游100个核苷酸以内的DNA分子区构成的表达控制序列。为了使编码序列处于启动子控制下，需要将多肽翻译阅读框的翻译起始位点定位在启动子下游I与约50个核苷酸之间。增强子在时间、位置和水平方面提供表达特异性。与启动子不同，增强子当位于距转录位点各种距离处时皆可起作用。增强子也可位于转录起始位点下游。当RNA聚合酶能够将编码序列转录到mRNA中,所述mRNA随后可翻译成所述编码序列所编码的蛋白质时，编码序列在细胞中“按可操作方式连接”并且处于表达控制序列的“控制下”。适合的表达载体包括(不限于)来源于例如曬菌体、杆状病毒、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus)、抱疫病毒、巨细胞病毒(cytomegalo virus)、逆转录病毒、牛痘病毒(vaccinia virus)、腺病毒和腺相关病毒的质粒和病毒载体。多种载体和表达系统可从例如以下公司购得诺瓦杰公司(Novagen)(位于威斯康星州麦迪逊(Madison,WI))、克隆泰克公司(Clontech)(位于加利福尼亚州帕洛阿尔托(Palo Alto, CA))、斯塔杰公司(Stratagene)(位于加利福尼亚州拉荷亚(La Jolla, CA))和英杰生命技术公司(Invitrogen Life Technologies)(位于加利福尼亚州卡尔斯巴德(Carlsbad, CA))。表达载体可包括标签序列(tag sequence)。标签序列通常表达成与编码的多肽的融合物的形式。所述标签可插入多肽内的任何位置，包括羧基或氨基末端。适用的标签的实例包括(但不限于)绿色突光蛋白(green fluorescent protein,GFP)、谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)、聚组氨酸、c_myc、血凝素、FlagTM 标签(柯达公司(Kodak),位于康乃狄克州纽黑文(New Haven, CT))、麦芽糖E结合蛋白和蛋白质A。在一个实施例中，编码B7-H4融合多肽的核酸分子存在于含有编码Ig重链恒定区的一个或一个以上结构域的核酸的载体中，所述结构域优选具有对应于人类免疫球蛋白C Y I链铰链区、Ch2区和Ch3区的氨基酸序列。 含有待表达的核酸的载体可转移到宿主细胞中。术语“宿主细胞”拟包括可引入重组表达载体的原核和真核细胞。本文中使用的“转化”和“转染”涵盖通过多种技术中的一种将核酸分子(例如载体)引入细胞中。尽管不局限于特定技术，但多种所述技术是此项技术中充分确立的。原核细胞可利用核酸通过例如电穿孔法或氯化钙介导的转化法来转化。可通过包括例如磷酸钙共沉淀、DEAE-葡聚糖介导的转染、脂转染、电穿孔或显微注射在内的技术将核酸转染到哺乳动物细胞中。宿主细胞(例如原核细胞或真核细胞，例如CHO细胞)可用于例如产生本文所述的B7-H4融合多肽。所述载体可用于在细胞(例如移植细胞，例如胰岛细胞)中表达B7-H4。示范性载体包括(但不限于)腺病毒载体。一种方法包括将核酸转移到培养的原代细胞中，随后将离体转化的细胞经全身自体移植到宿主中或自体移植到特定器官或组织中。离体方法可包括例如从受试者采集细胞、培养细胞、用表达载体转导细胞以及在适于表达编码的多肽的条件下维持细胞的步骤。这些方法是分子生物学技术中已知的。转导步骤可通过用于离体基因疗法的任何标准方式，包括例如磷酸钙法、脂转染法、电穿孔法、病毒感染法和生物射弹基因转移法(biolistic gene transfer)实现。或者，可使用脂质体或聚合物微粒。接下来，可例如针对编码序列或药物抗性基因的表达来选择成功转导的细胞。接着，可对细胞进行致死性照射(必要时)并注入或植入受试者中。在一个实施例中，将含有编码融合蛋白的核酸的表达载体转染到投予有需要的受试者的细胞中。体内核酸疗法可通过在体内将功能活性DNA直接转移到哺乳动物体细胞组织或器官中来实现。举例来说，编码本文揭示的多肽的核酸可直接投予淋巴组织或肿瘤。或者，可以使用淋巴组织特异性转录调控元件(transcriptional regulatory element,TRE),例如B淋巴细胞特异性TRE、T淋巴细胞特异性TRE或树突状细胞特异性TRE，实现淋巴组织特异性靶向。淋巴组织特异性TRE是此项技术中已知的。核酸也可通过病毒方式在体内投予。此项技术中众所周知，编码融合蛋白的核酸分子可使用产生复制缺陷型逆转录病毒的包装细胞系包装到逆转录病毒载体中。也可使用其它非复制性病毒载体，包括重组腺病毒和牛痘病毒。除裸DNA或RNA或者病毒载体外，经过工程改造的细菌也可用作载体。核酸也可通过其它载体，包括脂质体、聚合物微粒和纳米粒子以及例如脱唾液酸糖蛋白/聚赖氨酸等聚阳离子来传递。除病毒和载体介导的体内基因转移外，也可使用此项技术中众所周知的物理方式直接转移DNA，包括投予质粒DNA和粒子轰击介导的基因转移。V.药物组合物本发明提供包括本文中揭示的B7-H4多肽、片段、融合多肽、核酸和载体的药物组合物。含有肽或多肽的药物组合物可通过肠胃外(肌肉内、腹膜内、静脉内(IV)或皮下注射)、透皮(被动或使用离子电渗疗法或电穿孔实现)或透粘膜(鼻、阴道、直肠或舌下)投药途径或使用生物腐蚀性插入物投予，并且可配制成适于每一投药途径的剂型。在一些体内方法中，本文揭示的组合物是以治疗有效量投予受试者。本文中使用的术语“有效量”或“治疗有效量”意指足以治疗、抑制或减轻所治疗病症的一种或一种以上症状或以其它方式提供所需药理和/或生理作用的剂量。确切剂量将根据例如受试者相关性变量(例如年龄、免疫系统健康等)、疾病和实现的治疗等多种因素而变化。 对于本文揭示的多肽组合物以及编码所述多肽组合物的核酸，随着进一步研究的进行，将得出关于适于治疗各种患者的各种病况的剂量的信息，并且所属领域技术人员考虑受体的治疗情况、年龄和一般健康状况将能够确定适宜的给药方案。所选剂量取决于所需治疗效果、投药途径和所需治疗持续时间。对于多肽组合物，一般以每日每公斤体重0. 001到20mg的剂量投予哺乳动物。一般说来，对于静脉内注射或输注，剂量可较低。在某些实施例中，通过例如直接注射到待治疗部位来局部投予多肽组合物。通常，注射使多肽组合物的局部浓度增加，高于通过全身投药所达到的程度。举例来说，在如多发性硬化等神经病症的情况下，可将蛋白质局部投予靠近CNS的部位。多肽组合物可与上述基质组合以通过减少多肽被动扩散到待治疗部位外来帮助产生增加的局部多肽组合物浓度。A.供肠胃外投药的制剂在一个优选实施例中，本文揭示的组合物，包括含有肽和多肽者，是以水溶液形式通过肠胃外注射投予。所述制剂也可为悬浮液或乳液的形式。一般说来，提供的药物组合物包括有效量的肽或多肽，并且任选包括药学上可接受的稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、佐剂和/或载剂。所述组合物任选包括以下一者或一者以上稀释剂，无菌水、具有各种缓冲剂含量(例如Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、pH和离子强度的缓冲生理盐水；和添加剂，例如清洁剂和增溶剂(例如TWEEN 20 (聚山梨醇酯-20)、TWEEN 80 (聚山梨醇酯-80))、抗氧化剂(例如抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠)和防腐剂(例如硫柳汞、苯甲醇)和增积物质(例如乳糖、甘露糖醇)。非水性溶剂或媒剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油和玉米油)、明胶和可注射有机酯(例如油酸乙酯)。制剂可冻干并且在即将使用前再溶解/再悬浮。制剂可通过例如滤过细菌截留过滤器、通过将灭菌剂并入组合物中、通过照射组合物或通过加热组合物来进行灭菌。B.供表面投药的制剂本文揭示的融合蛋白可施用于表面。表面投药对于大多数肽制剂来说作用并不理想，但其在施用于肺、鼻、口(舌下、口腔)、阴道或直肠粘膜时特别有效。组合物可在吸入的同时传递到肺部，并且当传递时以空气动力学直径小于约5微米的气雾剂或喷雾干燥粒子形式横过肺上皮内层进入血流。[1594]可以使用设计用于肺传递治疗产品的多种机械装置，包括(但不限于)雾化器、定剂量吸入器和粉末吸入器，所有这些装置都是所属领域技术人员熟知的。市售装置的一些具体实例是Ultravent雾化器(马林斯科特有限公司(Mallinckrodt Inc.),位于密苏里州圣路易斯(St. Louis,Mo. )) ；Acorn II雾化器(马奎斯特医疗产品公司(Marquest MedicalProducts),位于科罗拉多州恩格尔伍德(Englewood,Colo.)) ;Ventolin定剂量吸入器(葛兰素有限公司(Glaxo Inc.),位于北卡罗来纳州三角研究园(Research Triangle Park,N. C.));和Spinhaler粉末吸入器(费森斯公司(Fisons Corp.),位于马萨诸塞州贝德福德(Bedford,Mass.))。纳克塔(Nektar)、艾克姆斯(Alkermes)和曼恩凯德(Mannkind)都具有获批准或处于临床试验中的可吸入胰岛素粉末制剂，其中所述技术可适用于本文所述的制剂。投予粘膜的制剂通常将为喷雾干燥的药物粒子，其可并入片剂、凝胶、胶囊、悬浮液或乳液中。标准药物赋形剂可从任何配方设计师获得。口服制剂可为咀嚼胶、凝胶带、片剂或锭剂的形式。 [1596]也可制备透皮制剂。这些制剂通常将为油膏、洗液、喷雾剂或贴片，都可使用标准技术制备。透皮制剂将需要包括渗透增强剂。C.控制传递聚合物基质本文揭示的融合蛋白也可以控制释放制剂形式投予。控制释放聚合物装置可制备用于在植入聚合物装置(杆、圆筒、膜、圆盘)或注射(微粒)后长期全身释放。基质可为微粒形式，例如微球，其中肽分散于固体聚合物基质内；或微胶囊，其中核心具有不同于聚合物壳的材料，且肽分散或悬浮于核心(其本质上可为液体或固体)中。除非本文中具体定义，否则微粒、微球和微胶囊可互换使用。或者，聚合物可浇铸为在数纳米到4厘米范围内的薄板或薄膜形式、通过研磨或其它标准技术产生的粉末形式，或甚至是凝胶形式，例如水凝胶。非生物可降解或生物可降解基质可用于传递融合多肽或编码融合多肽的核酸，但优选生物可降解基质。这些基质可为天然或合成聚合物，但合成聚合物因为降解和释放曲线得到良好表征而成为优选的。聚合物是根据需要释放的时间段来选择。在一些情况下，线性释放可能最有用，但在其它情况下，脉冲释放或“大量释放(bulk release)”可提供更有效的结果。聚合物可为水凝胶形式(通常吸收高达约90重量％水)并且可任选与多价离子或聚合物交联。基质可通过溶剂蒸发、喷雾干燥、溶剂萃取和所属领域技术人员已知的其它方法形成。生物腐蚀性微球可使用开发用于制备供药物传递的微球的任何方法制备，例如，如麦索维兹(Mathiowitz)和朗阁(Langer),控制释放杂志(J. ControlledRelease), 5 13-22(1987);麦索维兹等人，反应性聚合物(Reactive Polymers)，6 :275-283 (1987);和麦索维兹等人，应用聚合物科学杂志(J. Appl. Polymer Sci)，35 :755-774 (1988)中所述。这些装置可配制用于局部释放以治疗植入或注射区域-其通常传递的剂量将比用于全身治疗或系统性传递的剂量少得多。这些装置可皮下植入或注射到肌肉、脂肪中或加以吞咽。VI.制造方法A.用于产生融合蛋白的方法[1604]所揭示的融合蛋白可使用此项技术中已知的常规技术制造。分离的融合蛋白可通过例如化学合成或通过在宿主细胞中重组产生来获得。为了重组产生融合蛋白，可以使用含有编码融合蛋白的核苷酸序列的核酸来转化、转导或转染细菌或真核宿主细胞(例如昆虫、酵母或哺乳动物细胞)。一般说来，核酸构建体包括按可操作方式连接到编码融合蛋白的核苷酸序列的调控序列。调控序列(本文中又称作表达控制序列)通常不编码基因产物，而是影响其按可操作方式连接的核酸序列的表达。适用于表达和产生多肽的原核和真核系统是此项技术中众所周知的，包括例如大肠杆菌菌株，例如BL-21，以及培养的哺乳动物细胞，例如CHO细胞。在真核宿主细胞中，可利用多种基于病毒的表达系统来表达融合蛋白。基于病毒的表达系统是此项技术中众所周知的，并且包括 (但不限于)基于杆状病毒、SV40、逆转录病毒或牛痘的病毒载体。稳定表达变异融合蛋白的哺乳动物细胞系可使用具有适宜控制元件和可选择标记物的表达载体产生。举例来说，真核表达载体PCR3. I (英杰生命技术公司)和p91023(B)(参看王(Wong)等人(1985)科学(Science) 228 :810-815)适于表达例如中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CH0)细胞、C0S-1 细胞、人胚肾 293 细胞、NIH3T3 细胞、BHK21 细胞、MDCK细胞和人血管内皮细胞(human vascular endothelial cell,HUVEC)中的变异多肽。其它适合的表达系统包括由龙沙集团有限公司(Lonza Group Ltd.)获得的GS GeneExpression System 。在通过电穿孔法、脂转染法、磷酸钙法或氯化钙共沉淀法、DEAE葡聚糖法或其它适合的转染方法引入表达载体后，可选择稳定细胞系(例如通过代谢选择，或对G418、卡那霉素(kanamycin)或潮霉素(hygromycin)的抗生素抗性)。可培养转染的细胞以表达相关多肽，并且可从例如细胞培养物上清液或从溶解的细胞回收多肽。或者，可通过(a)将扩增的序列连接到例如pcDNA3(英杰生命技术公司)等哺乳动物表达载体中，和(b)在体外使用麦芽提取物或兔网织红细胞溶解产物进行转录和翻译，来产生融合蛋白。融合蛋白可使用例如色谱法(例如亲和色谱法、离子交换色谱法、疏水相互作用色谱法、DEAE离子交换法、凝胶过滤法和羟磷灰石色谱法)分离。在一些实施例中，融合蛋白可工程改造成含有含使得多肽能够被捕获到亲和基质上的氨基酸序列的额外结构域。举例来说，细胞培养物上清液或细胞质提取物中的Fe-融合多肽可使用蛋白质A柱分离。此夕卜，还可使用例如c-myc、血凝素、聚组氨酸或Flag (柯达公司)等标签来帮助多肽纯化。所述标签可插入多肽内的任何位置，包括羧基或氨基末端。可适用的其它融合物包括有助于检测多肽的酶，例如碱性磷酸酶。也可使用免疫亲和色谱法来纯化多肽。融合蛋白可另外工程改造成含有使产生所述融合蛋白的细胞分泌所述融合蛋白的分泌信号(如果还未存在分泌信号的话)。随后宜从细胞培养基分离出分泌的融合蛋白。B.用于产生分离的核酸分子的方法分离的核酸分子可通过标准技术，包括(不限于)常用分子克隆和化学核酸合成技术来产生。举例来说，可以使用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术获得编码变异多肽的分离的核酸。PCR是一种酶促扩增目标核酸的技术。通常，可采用来自相关区域末端或之外的序列信息来设计序列与待扩增模板的相对链一致的寡核苷酸引物。可使用PCR扩增来自DNA以及RNA的特定序列，包括来自总基因组DNA或总细胞RNA的序列。引物通常为14到40个核苷酸长，但长度可在10个核苷酸到数百个核苷酸的范围内。常用PCR技术描述于例如PCR引物实验指南(PCR Primer ALaboratory Manual),达芬贝奇(Dieffenbach)和德维斯勒(Dveksler)编辑,冷泉港实验出版社(Cold Spring HarborLaboratory Press), 1995中。当使用RNA作为模板来源时,可使用逆转录酶来合成互补DNA(cDNA)链。也可使用连接酶链反应、链置换扩增、自身持续序列复制(self-sustainedsequence replication)或基于核酸序列的扩增来获得分离的核酸。参看例如莱维斯(Lewis) (1992)遗传工程新闻(Genetic Engineering News) 12 :1 ;盖特里(Guatelli)等人
(1990)美国国家科学院院刊(Proc.Natl. Acad. Sci. USA)87 :1874-1878 ;和维斯(Weiss)
(1991)科学(Science)254 :1292-1293。分离的核酸可借助化学方式以单一核酸分子形式或以一系列寡核苷酸形式合成(例如使用在3'到5'方向上进行自动DNA合成的氨基磷酸酯技术)。举例来说，可合成 含有所需序列的一个或一个以上长寡核苷酸对(例如> 100个核苷酸)，其中每一对含有短互补区段(例如约15个核苷酸)，由此当寡核苷酸对退火时形成双链体。可使用DNA聚合酶来延伸寡核苷酸，使每一寡核苷酸对产生单一双链核酸分子，随后可将其连接到载体中。分离的核酸也可通过诱变法获得。可使用标准技术，包括寡核苷酸引导的诱变法和/或定点诱变法经由PCR使编码融合蛋白的核酸发生突变。参看精编分子生物学实验指南(Short Protocols in Molecular Biology).第8章,格林出版协会与约翰威立父子出版公司(Green Publishing Associates and John Wiley & Sons),奥苏贝尔(Ausubel)等人编辑，1992。可修饰的氨基酸位置的实例包括本文所述的位置。VII.治疗使用的方法本文揭示的B7-H4多肽或者其片段或融合物可用作治疗剂。可使免疫细胞，优选T细胞在体外或离体与B7-H4融合多肽接触以减少或抑制免疫应答，包括(但不限于)炎症。与B7-H4融合多肽接触的T细胞可为表达T细胞受体的任何细胞，包括a / 0和Y / S T细胞受体。T细胞包括表达⑶3的所有细胞，包括也表达⑶4和⑶8的T细胞子集。T细胞包括原生和记忆细胞以及效应细胞(例如CTL)。T细胞也包括调控细胞，例如Thl、Tcl、Th2、Tc2、Th3、Thl7、Th22、Treg和Trl细胞。T细胞也包括NKT细胞和类似的独特T细胞谱系类别。举例来说，可使用组合物来调节Thl、Thl7、Th22，或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I P、TNF- a、TGF- ^、IFN- y、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 和 MMP 的发炎性分子的其它细胞。组合物也可用于增加或促进Treg活性；增加Treg的细胞因子(例如IL-10)产生；增加Treg的分化；增加Treg的数量；或增加Treg的存活率。在一些实施例中，所揭示的B7-H4多肽或者其片段或融合物是与第二治疗剂组合投予。组合疗法可用于免疫调节。在一些实施例中，可使用B7-H4多肽或片段或融合物来降低或逆转促炎性药物的活性和/或限制这些药物的副作用。可用所揭示的B7-H4多肽、其片段或融合物处理的其它免疫细胞包括T细胞前体、抗原提呈细胞(例如树突状细胞和单核细胞)或其前体、B细胞或其组合。可使用B7-H4组合物，通过使B细胞与有效量的B7-H4组合物接触来相对于对照物抑制或减少B细胞的抗体产量，由此调节B细胞的抗体产量。B7-H4组合物也可调节B细胞的细胞因子产量。A.治疗发炎性应答的方法优选的实施例提供用于治疗或减轻一种或一种以上炎症症状的方法。在一个更优选的实施例中，所揭示的组合物和方法可用于治疗慢性和持久炎症。一般说来，可使用所揭示的B7-H4多肽或者其片段或融合物来治疗炎症。可以通过投予有效量的B7-H4多肽或者其片段或融合物以抑制或降低免疫细胞的生物活性或减少炎症部位处促炎性分子的量来抑制或减少受试者(优选人类)的免疫应答(包括炎症)。示范性促炎性分子包括(但不限于)IL-I P、TNF- a、TGF- ^、IFN- y、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22, IL-21 和 MMP。Thl和Thl7是可作为B7-H4多肽、其融合蛋白或片段的抑制目标以抑制或减少炎症的示范性T细胞。B7-H4融合蛋白可用于通过以下任一或所有方式来治疗炎症抑制或减少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I P、TNF-a ,TGF-^、IFN- y , IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP的发炎性分子的其它细胞的分化；抑制或降低Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I ^、TNF- a、TGF-P、IFN-Y、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP的发炎性分子的其它细胞的活性；抑制或减少Thl和/或Thl7路径；抑制或减少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I P、TNF- a、TGF- P、IFN- y、IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21 和MMP的发炎性分子的其它细胞的细胞因子产生和/或分泌；抑制或减少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I P、TNF- a、TGF- ^、IFN- y、IL-17,IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP的发炎性分子的其它细胞的增殖。此外，B7-H4_Ig可使Treg对免疫应答的抑制作用增强。Treg可抑制Thl、Thl7、Th22，和/或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I P、TNF-a、TGF-^、IFN-Y、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP的发炎性分子的其它细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌。举例来说，B7-H4-Ig可使Treg对Thl和/或Thl7细胞的抑制作用增强，由此分别降低产生的IFN-Y和IL-17的水平。B7-H4-Ig也可直接作用于Treg以促进或增进IL-10的产生，由此抑制Thl和Thl7路径，或增加Treg的数量。图IA和IB显示B7-H4融合蛋白用于抑制炎症的两个推荐的作用模式。图IA显示B7-H4-Ig作用于多个T细胞路径中的多个点。举例来说，B7-H4-Ig可抑制原生T细胞分化成Thl或Thl7细胞。或者，B7-H4-Ig可与Thl细胞或Thl7细胞或二者相互作用，以抑制或减少促炎性分子的产生。此外，B7-H4-Ig可增加Treg的分化和/或使Treg对Thl和Thl7路径的抑制作用增强，由此降低产生的INF- Y和/或IL-17的水平。B7-H4-Ig增进Treg的IL-10产生，且此结果抑制Thl和Thl7细胞的活性。图IB显示B7-H4_Ig靶向不成熟抗原提呈细胞(例如树突状细胞(DC))并抑制细胞成熟的第二模型。不成熟的抗原捕获性树突状细胞能够成熟成为抗原提呈性T细胞预致敏细胞；将抗原转化成免疫原并且表达例如细胞因子、趋化因子、共刺激分子和蛋白酶等分子以起始免疫应答。DC调控免疫性的能力取决于DC成熟。多种因子可在DC内抗原吸收和处理后诱导成熟，包括全细菌或细菌源性抗原(例如脂多糖，LPS)、发炎性分子、所选细胞表面受体(例如CD40)与病毒产物(例如双链RNA)的连接。成熟过程涉及信号传导到DC，使I类和II类MHC分子的表面表达以及共刺激分子的产生增加。在图IB提供的模型中，B7-H4_Ig阻止DC成熟，从而防止原生T细胞发育成Th I或Thl7细胞，并减少促炎性分子的产生。此外，B7-H4-Ig可增加有助于Treg的分化和/或使Treg对Thl和Thl7路径的抑制作用增强并由此降低产生的INF-Y和/或IL-17的水平的不成熟DC池。以此方式，B7-H4-Ig增进Treg的IL-IO产生，且此结果抑制Thl和Thl7细胞的活性。I 抑制Thl路径a 抑制Thl发育一种用于抑制或减少炎症的方法包括对有需要的受试者投予有效量的B7-H4多肽、融合蛋白、其变异体或其片段以抑制Thl发育。已经发现，通过投予B7-H4多肽、融合蛋白、其片段或其变异体，来阻止原生T细胞分化成Thl细胞，从而可抑制或减少炎症。在一个实施例中，B7-H4多肽或其融合蛋白增加Treg对原生T细胞的抑制能力，由此抑制或减少原生T细胞分化成Thl细胞，并借此减少受试者体内Thl细胞的数量。或者，B7-H4多肽或其融合蛋白抑制或减少Thl细胞增殖。B7-H4多肽、其片段或融合蛋白也可通过阻止抗原提呈细胞成熟来减少原生T细胞分化成Thl细胞。通过限制受试者体内可发育的Thl细胞的数量，可减少或遏制促炎性分子(例如INF- y)的量。INF- y刺激包括IL-I ^、TNF- a和MMP在内的其它促炎性分子的产生或释放。因此，通过控制受试者体内Thl细胞的数量，可控制这些其它促炎性分子的水平，由此减少炎性应答。b.抑制促炎性分子另一实施例提供一种通过对受试者投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段以抑制或减少Thl细胞的促炎性分子产生，来抑制或减少受试者的炎症的方法。示范性由Thl细胞产生的促炎性分子包括IFN- y。在此实施例中，B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段可与Thl细胞直接相互作用，并抑制或减少Thl细胞的IFN-Y产生。在此实施例中，促炎性分子的量而不是Thl细胞群受到调控。2.抑制Th 17路径a.抑制Thl7发育也可通过投予有效量的B7-H4多肽、其片段或融合物以抑制或阻止原生T细胞发育成Thl7细胞，来抑制或减少受试者的炎症。在一个实施例中，B7-H4多肽或融合蛋白以足以减少受试者体内Thl7细胞数量的量增加Treg对原生T细胞分化成Thl7细胞的抑制活性。或者，B7-H4多肽或其融合蛋白抑制或减少Thl7细胞增殖。B7-H4多肽或其融合蛋白也可通过阻止抗原提呈细胞成熟来减少原生T细胞分化成Thl7细胞。通过减少受试者体内的Thl7细胞群，可减少产生的IL-17以及IL-22和IL-21的量。IL-17是使例如IL-I ^、TNF-a和MMP等其它促炎性分子增加的促炎性分子。因此，通过减少IL-17的量，可减少这些其它促炎性分子，由此减少或抑制炎症。b.抑制 IL-17 产生另一实施例提供一种通过投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段以抑制Thl7细胞产生IL-17以及IL-22和IL-21，来治疗受试者的炎症的方法。在此实施例中，B7-H4多肽或融合蛋白可例如通过结合于Thl7细胞来直接作用于Thl7细胞，由此抑制这些Thl7细胞产生IL-17 (或IL-22和IL-21)。如上文所述，抑制或减少IL-17 (和IL-22或IL-21)导致其它促炎性分子的减少，由此减少或抑制炎症。3.抑制Thl和Th 17路径所揭示的B7-H4多肽、其融合蛋白和片段可用于同时抑制Thl和Thl7路径。使用一种消炎剂抑制两种独立路径将更稳固地抑制或减少免疫应答。、[1637]4. Treg也可通过对受试者投予有效增强产生IL-IO的Treg的抑制活性的量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段以增强对Thl和/或Thl7路径的抑制活性，来治疗炎症。在此实施例中，所揭示的B7-H4多肽和融合蛋白使得对IFN- y的抑制活性和/或IL-17的产生相对于单独Treg有所增加。另一实施例提供一种通过投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白或其片段以增加Treg的IL-10产生来治疗炎症的方法。IL-10的产生增加使Thl7细胞产生的IL-17减少，并使Thl细胞产生的IFN-Y减少。在此实施例中，B7-H4多肽、其融合蛋白和片段可与Treg直接相互作用以增加Treg的IL-10产生。另一实施例提供一种通过投予有效量的B7-H4多肽、其融合蛋白和其片段以抑制或干扰Thl路径、Thl7路径并增强Treg对Thl和Thl7路径的抑制作用来治疗炎症的方法(参看图1A) A7-H4多肽或其融合蛋白也可通过阻止抗原提呈细胞成熟来增加Treg池(参看图1B)。 B7-H4多肽、其融合蛋白和其片段也可以有效增加Treg细胞群或数量的量投予受试者。通过使Treg与有效量的B7-H4多肽、B7-H4融合蛋白或其具有B7-H4活性的片段接触，可相对于对照物增加Treg的IL-l(^PTGF-0产生。所述增加可在体外或体内发生。5.可溶性 B7-H4可溶性B7_H4(sH4)充当诱饵分子(decoy molecule)，其与细胞表面B7-H4竞争结合于B7-H4受体，并且不对T细胞产生抑制信号。B7-H4在抗原刺激存在下抑制T细胞的细胞周期进程。B7-H4可通过抑制嗜中性粒细胞祖细胞增殖来抑制固有的免疫性。相信升高sH4水平将阻止内源性B7-H4的抑制作用。因此，可例如通过对有需要的个体投予有效量的抑制或降低sH4结合于B7-H4受体的能力或增大内源抑制性B7-H4分子的活性的试剂在体内干扰sH4的生物活性，来治疗发炎性应答。干扰sH4生物活性可通过投予本文揭示的B7-H4融合多肽来实现。投药不局限于治疗现有的病况、疾病或病症(即，现有的发炎性或自体免疫疾病或病症)，而且还可用于预防个体发生这些疾病或降低个体发生这些疾病的风险，即用于预防用途。适于预防接种的潜在候选者包括具有发生发炎性或自体免疫疾病或病症的高风险(即，具有某些类型自体免疫病症的个人或家族病史)的个体。B.待治疗的发炎性疾病可使用B7-H4融合多肽治疗的示范性发炎性或自体免疫疾病和病症包括(但不限于)类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、斑秃、强直性脊椎炎、抗磷脂综合症、自体免疫性爱迪生氏病(autoimmune Addison' s disease)、自体免疫性溶血性贫血、自体免疫性肝炎、自体免疫性内耳疾病、自体免疫性淋巴细胞增生综合症(autoimmunelymphoproliferative syndrome, alps)、自体免疫性血小板减少性紫癒(autoimmunethrombocytopenic purpura, ATP)、贝赫切特氏病(Behcet ' s disease)、大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid)、心肌病(cardiomyopathy)、乳糜湾性皮炎(celiacsprue-dermatitis)、慢性疲劳综合症免疫缺陷综合症(chronic fatigue syndromeimmune deficiency syndrome, CFIDS)、慢性发炎性脱髓鞘性多发性神经病(chronicinflammatory demyelinating polyneuropathy)、瘢痕性类天疱疮、冷凝集素疾病(cold agglutinin disease)、肢端硬皮综合症(Crest syndrome)、克隆氏病(Crohn' sdisease)、德戈氏病(Dego ' s disease)、皮肌炎、青少年型皮肌炎、盘状狼疮(discoidlupus)、原发性混合型冷球蛋白血症(essential mixed cryoglobulinemia)、纤维肌痛-纤维性肌炎、葛瑞夫兹氏病(grave' s disease)、格林-巴利综合症(guillain-barre)、桥本氏甲状腺炎(hashimoto' s thyroiditis)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenia purpura, ITP)、Iga 肾病、胰岛素依赖型糖尿病(I 型)、青少年性关节炎、美尼尔氏病(Meniere' s disease)、混合型结缔组织疾病、多发性硬化、重症肌无力、寻常性天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合症、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺氏现象(Raynaud' s phenomenon)、瑞特氏综合症(Reiter' s syndrome)、风湿热、类肉瘤病、硬皮病、修格连氏综合症(Sjogren' s syndrome)、僵人综合症(stiff-man syndrome)、高安氏动脉炎(Takayasu arteritis)、颞动脉炎(temporal arteritis)/巨细胞性动脉炎、溃瘍性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿(Wegener' s granulomatosis)。 [1649]B7-H4以较高水平作用于发炎路径中的多个点，由此其充当主要调控子以控制从而影响例如TNF-a等效应细胞因子的表达和/或活性。因此，本文所述的B7-H4组合物特别适用于治疗对TNF-a阻断剂(例如Enbrel、Remicade、Cimzia和Humira)无应答或TNF-a阻断剂不安全或无效的患者。此外，由于所揭示的B7-H4组合物具有作为发炎路径中的主要调控子的活性，故其特别适用于治疗慢性和持久炎症。在一个优选实施例中，使用本文所述的B7-H4组合物来治疗复发和/或缓解型多发性硬化。C.抑制表位扩展表位扩展是指B细胞和T细胞免疫应答能够同时在特异性层面上(从单一决定子到自体抗原上多个位点)和V基因用法层面上多样化(莫纳斯F. (Monneaux, F.)等人，关节炎与风湿病(Arthritis & Rheumatism), 46 (6) : 1430-1438 (2002))。表位扩展不局限于系统性自体免疫疾病。其已描述于具有多种髓磷脂蛋白的人类和诱发EAE的实验动物的T细胞依赖性器官特异性疾病中，例如IDDM和多发性硬化。表位扩展涉及同一自体分子中新表位的后天识别以及同一大分子复合物相关性蛋白质中的表位驻留。表位扩展可通过测量迟发型超敏反应(DTH)应答来评估，评估方法是此项技术中已知的。一个实施例提供一种通过对受试者投予有效量的B7-H4多肽、其片段或融合蛋白来抑制或减少受试者体内的表位扩展的方法。在一个优选实施例中，B7-H4多肽、其片段或融合蛋白抑制患有多发性硬化的个体体内的表位扩展。优选B7-H4多肽或其融合物抑制或阻断发炎性路径的多个点。另一实施例提供一种通过对受试者投予有效量的B7-H4多肽、其片段或融合蛋白以抑制或减少Thl、Thl7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I ^、TNF- a、TGF- ^、IFN- y、IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21 和 MMP 的发炎性分子的其它细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌来抑制或减少受试者体内的表位扩展的方法。另一实施例提供一种通过对受试者投予有效量的B7-H4多肽、其片段或融合蛋白以与Treg相互作用、增强Treg活性、促进或增进Treg对IL-IO的分泌、增加Treg数量、增加Treg的抑制能力或其组合，来治疗多发性硬化的方法。D.组合疗法B7-H4融合多肽可单独使用或与其它治疗剂组合使用。所述其它治疗剂包括(但不限于)免疫抑制剂(例如针对其它淋巴细胞表面标记物(例如⑶40、a-4整合素)或针对细胞因子的抗体)、其它融合蛋白(例如CTLA-4-Ig(Orencia )、TNFR-Ig (Enbrel ))、TNF- a 阻断剂(例如 Enbrel> Remicade、Cimzia 和 Humira)、环憐酸胺(CTX)(即Endoxan 、Cytoxan 、Neosar 、Procytox 、Revimmune )、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)(即Rheumatrex 、Trexall )、贝利单抗(belimumab)(或其它免疫抑制药物(例如环孢霉素A (cyclosporin A)、类FK506化合物、雷帕霉素化合物或类固醇)、抗增生药、细胞毒性剂或可能有助于免疫抑制的其它化合物。在一个优选实施例中，所述其它治疗剂用于抑制或减少通过单独路径的T细胞活化。在一个此类实施例中，所述其它治疗剂是CTLA-4融合蛋白，例如CTLA-4-Ig(阿巴西 普)。CTLA-4-Ig融合蛋白与T细胞上的共刺激受体⑶28竞争结合于抗原提呈细胞上的⑶80/⑶86(B7-l/B7-2)并由此用于抑制T细胞活化。在另一实施例中，所述其它治疗剂是称为贝拉西普(belatacept)的CTLA-4-Ig融合蛋白。贝拉西普含有在体内明显增加其对CD86的亲合力的两个氨基酸取代(L104E和A29Y)。在另一实施例中，所述其它治疗剂是Maxy-4o在另一实施例中，第二治疗剂是环磷酰胺(CTX)。环磷酰胺(Endoxan 、Cytoxan 、Neosar 、Procytox 、Revimmune 的通用名称),又称作塞托非 安(cytophosphane),是来自B,惡唑菲林(oxazophorine)组的氮芥烧化剂。其用于治疗各种类型的癌症和一些自体免疫病症。在一个优选实施例中，B7-H4-Ig与CTX以有效量共投予以预防或治疗慢性自体免疫疾病或病症，例如系统性红斑狼疮(SLE)。环磷酰胺(CTX)是用于肾狼疮患者的弥漫性增生性肾小球肾炎的主要药物。如下文实例18中详述，已经发现，低剂量环磷酰胺(50mg/kg，每2周一次)(当前用于人类的治疗形式)加B7-H4-Ig的组合治疗在MRL/lpr狼疮模型中引起对狼疮疾病进展的预防。在一些实施例中，以有效量投予所述组合疗法以降低有需要的患者体内的血液或血清抗双链DNA (抗ds DNA)自体抗体水平和/或减少蛋白尿。在另一实施例中，第二治疗剂使血清中腺苷的量增加，参看例如WO 08/147482。在一个优选实施例中，第二治疗剂是⑶73-Ig、重组⑶73或另一增加⑶73表达的试剂(例如细胞因子或单克隆抗体或小分子)，参看例如WO 04/084933。在另一实施例中，第二治疗剂是干扰素。在另一实施例中，第二治疗剂是Tysabri或另一 MS治疗剂。在一个优选实施例中，B7-H4-Ig与Tysabri —起循环或在停药期期间使用以便降低给与第二治疗剂的频率并降低例如PML等副作用的风险，且防止对第二治疗剂产生抗性。在另一实施例中，第二治疗剂优先治疗慢性炎症，由此所述治疗方案同时靶向急性和慢性炎症。在一个优选实施例中，第二治疗剂是TNF-a阻断剂。在另一实施例中，第二治疗剂是抑制或减少Thl、Thl7、Th22，和/或分泌或使其它细胞分泌包括(但不限于)IL-I P、TNF- a、TGF- P、IFN- y、IL-17, IL-6, IL-23, IL-22,IL-21和MMP的发炎性分子的其它细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌的小分子。在另一实施例中，第二治疗剂是与Treg相互作用、增强Treg活性、促进或增进Treg对IL-IO的分泌、增加Treg数量、增加Treg的抑制能力或其组合的小分子。通常，有用小分子是有机分子，优选分子量大于100道尔顿(dalton)且小于约2，500道尔顿，更优选在100与2000之间，更优选在约100与约1250之间，更优选在约100与约1000之间，更优选在约100与约750之间，更优选在约200与约500道尔顿之间的小有机化合物。小分子包含与蛋白质发生结构相互作用，尤其氢键接必需的官能团，并且通常包括至少一个胺、羰基、羟基或羧基，优选至少两个化学官能团。小分子通常包含经一个或一个以上上述官能团取代的环状碳或杂环结构和/或芳香族或聚芳香族结构。小分子还包括生物分子，包括肽、糖、脂肪酸、类固醇、嘌呤、嘧啶、其衍生物、结构类似物或组合。在一个实施例中，小分子是视黄酸或其衍生物。下文的实例证实，视黄酸抑制或减少Thl7细胞分化和/或活性。在一个优选实施例中，所述组合物与增加Treg活性或产生的化合物组合或相继使用。示范性Treg增强剂包括(但不限于)糖皮质激素氟替卡松(fluticasone)；沙美特罗(salmeteroal);针对IL-12、IFN-y和IL-4的抗体；维生素D3 ;和地塞米松 (dexamethasone),和其组合。针对其它促炎性分子的抗体也可与所揭示的B7-H4多肽、其融合蛋白或片段组合或间隔使用。优选抗体结合于IL-6、IL-23、IL-22或IL-21。如本文所用，术语“雷帕霉素化合物”包括中性三环化合物雷帕霉素、雷帕霉素衍生物、雷帕霉素类似物，和其它大环内酯类化合物，这些化合物被认为具有与雷帕霉素相同的作用机制(例如抑制细胞因子功能)。“雷帕霉素化合物”的表述包括结构类似于雷帕霉素的化合物，例如具有类似的大环结构的化合物，其经过修饰以增强其治疗功效。示范性雷帕霉素化合物是此项技术中已知的(参看例如W095122972、WO 95116691、WO 95104738 ；美国专利第6，015，809号；第5，989，591号；美国专利第5，567，709号；第5，559，112号；第 5，530，006 号；第 5，484，790 号；第 5，385，908 号；第 5，202，332 号；第 5，162，333 号；第5，780，462 号；第 5，120，727 号)。“类FK506化合物”的表述包括FK506以及FK506衍生物和类似物，例如结构类似于FK506的化合物，例如具有类似的大环结构的化合物，其经过修饰以增强其治疗功效。类FK506化合物的实例包括例如WO 00101385中所述的化合物。优选本文中使用的“雷帕霉素化合物”的表述不包括类FK506化合物。其它适合的治疗剂包括(但不限于)消炎剂。消炎剂可为非类固醇、类固醇或其组合。一个实施例提供含有约1% (w/w)到约5% (w/w),通常约2. 5 % (w/w)或消炎剂的口服组合物。非类固醇消炎剂的代表性实例包括(不限于)昔康类(oxicams)，例如批罗昔康(piroxicam)、伊索昔康(isoxicam)、替诺昔康(tenoxicam)、舒多昔康(sudoxicam);水杨酸类(salicylates),例如阿司匹林(aspirin)、双水杨酯(disalcid)、贝诺酯(benorylate)、曲利塞特(trilisate)、萨法比恩(safapryn)、索尔比林(solprin)、二氟尼柳(diflunisal)和芬度柳(fendosal);乙酸衍生物,例如双氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、 口引哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)、伊索克酸(isoxepac)、呋罗芬酸(furofenac)、硫平酸(tiopinac)、齐多美辛(zidometacin)、阿西美辛(acematacin)、芬替酸(fentiazac)、佐美酸(zomepirac)、克林达酸(clindanac)、奥昔平酸(oxepinac)、联苯乙酸(felbinac)和丽洛酸(ketorolac)；芬那酸类(fenamates)，例如甲芬那酸(mefenamic)、甲氯芬那酸(meclofenamic)、氟芬那酸(flufenamic)、尼氟酸(nifIumic)和托芬那酸(tolfenamic acid);丙酸衍生物，例如布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、苯卩惡洛芬(benoxaprofen)、氟洛芬(flurbiprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、非诺洛芬(fenoprofen)、芬布芬(fenbufen)、卩引哚洛芬(indopropfen)、卩比洛芬(pirprofen)、卡洛芬(carprofen)、奥沙普秦(oxaprozin)、普拉洛芬(pranoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、硫卩惡洛芬(tioxaprofen)、舒洛芬(suprofen)、阿明洛芬(alminoprofen)和噻洛芬酸(tiaprofenic);卩比唑类，例如保泰松(phenylbutazone)、轻基保泰松(oxyphenbutazone)、非普拉宗(feprazone)、阿扎丙宗(azapropazone)和三甲保泰松(trimethazone)。也可釆用这些非类固醇消炎剂的混合物。类固醇消炎药的代表性实例包括(不限于)皮质类固醇，例如氢化可的松(hydrocortisone)、轻基-曲安西龙(h ydroxyl-triamcinolone)、ct -甲基地塞米松(alpha-methyl dexamethasone)、憐酸地塞米松、二丙酸倍氯米松(beclomethasonedipropionate)、戊酸氯倍他索(clobetasol valerate)、地奈德(desonide)、去氧米松(desoxymethasone)、乙酸去氧皮质酮(desoxycorticosterone acetate)、地塞米松、二氯松(dichlorisone)、二乙酸二氟拉松(diflorasone diacetate)、戊酸二氟可龙(dif lucortolone valerate)、氟氢缩松(f Iuadrenolone)、氟氯奈德(f Iucloroloneacetonide)、氟氢可的松(fludrocortisone)、特戊酸二氟美松(flumethasone pivalate)、氟西奈德(fluosinolone acetonide)、醋酸氟轻松(fIuocinonide)、氟卩比汀丁基酯(f lucortine butylester)、氟可龙(f Iuocortolone)、乙酸氟泼尼定(f Iuprednidene (氟甲叉龙(fluprednylidene))acetate)、氟氢缩松(flurandrenolone)、哈西奈德(halcinonide)、乙酸氢化可的松(hydrocortisone acetate)、丁酸氢化可的松、甲泼尼龙(methylprednisolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、可的松(cortisone)、可托多松(cortodoxone)、氟轻松(fIucetonide)、氟氢可的松(fludrocortisone)、二乙酸二氟拉松(dif luorosone diacetate)、氟拉诺龙(f Iuradrenolone)、氟氢可的松(fludrocortisone)、二乙酸二氟拉松、氟拉奈德(f luradrenolone acetonide)、甲轻松(medrysone)、安西那非(amcinafel)、安西非特(amcinafide)、倍他米松(betamethasone)和其其它酯、氯泼尼松(chloroprednisone)、乙酸氯泼尼松(chlorprednisone acetate)、氯可托龙(clocortelone)、克辛诺龙(clescinolone)、二氯松(dichlorisone)、二氟泼尼酯(difIurprednate)、氟氯奈德(fIucloronide)、氟尼缩松(fIunisolide)、氟米龙(fIuoromethalone)、氟培龙(fIuperolone)、氟泼尼龙(fIuprednisolone)、戊酸氢化可的松(hydrocortisone valerate)、环戊基丙酸氢化可的松(hydrocortisonecyclopentylpropionate)、氢可他酯(hydrocortamate)、甲泼尼松(meprednisone)、帕拉米松(paramethasone)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、曲安西龙(triamcinolone)和其混合物。在另一实施例中，所述其它治疗剂包括抑制或干扰sH4活性以治疗受试者的发炎性病症的组合物。在一个实施例中，投予受试者B7-H4融合多肽以治疗发炎性疾病，其中所述受试者具有极少或不可检测量的sH4。在另一实施例中，投予B7-H4融合多肽以治疗sH4水平升高的受试者的发炎性疾病的一种或一种以上症状。sH4水平升高可通过将已知患有发炎性病症的受试者的sH4水平与未患发炎性病症的受试者的sH4水平相比较来确定。[1670]E.药效标记物使用B7-H4多肽、其片段或其融合蛋白进行治疗的功效可通过分析从接受用B7-H4多肽或其融合蛋白进行的治疗以改变例如血清蛋白，优选促炎性细胞因子、趋化因子、急性期标记物和/或抗体(例如总IgG，或特定疾病相关性IgG)或其它血清蛋白(例如sH4)等生物标记物的水平的受试者获得的样品来确定。举例来说，从受试者获得的血清样品中生物标记物的基线水平可在用B7-H4多肽或融合蛋白进行治疗前确定。在用B7-H4多肽或其融合蛋白进行治疗之后或期间，可监测来自受试者的血液样品中的生物标记物水平。生物标记物水平的改变(例如细胞因子水平相对于基线水平的下降)指示，所述治疗有效减少发炎性病症的一种或一种以上症状。或者，可将由经历用B7-H4多肽或其融合蛋白进行的治疗的受试者获得的血液样品中的细胞因子水平与由未患发炎性病症的受试者确定的预定生物标记物水平相比较。在一些实施例中，仅监测一种生物标记物的水平。在其它实施例中，监测2、3、4、5种或更多种生物标记物的水平。使用B7-H4多肽、其片段或融合蛋白进行治疗的功效也可通过分析从接受用B7-H4多肽或其融合蛋白进行的治疗以改变淋巴细胞群水平(例如与对照物相比较，Treg 数量增加，或活化的Thl或Thl7细胞数量减少)的受试者获得的样品来确定。在一些实施例中，使用B7-H4多肽、其片段或融合蛋白进行治疗的功效是通过使用此项技术中已知的方法监测疾病特异性标记物或症状来确定。举例来说，可采用成像法来评估针对多发性硬化的治疗的功效，或可监测迟发型超敏反应(DTH)以评估针对狼疮的治疗的功效。使用B7-H4多肽、其片段或其融合蛋白进行治疗的功效也可通过分析从接受用B7-H4多肽或其融合蛋白进行的治疗以改变基因表达水平的受试者获得的样品来确定，所述基因包括(但不限于)编码血清蛋白，优选促炎性细胞因子和/或趋化因子，以及分泌的因子、细胞表面受体和Thl、Thl7和Treg细胞特有的转录因子的基因。测量基因表达的方法是此项技术中众所周知的，并且包括(但不限于)定量RT-PCR和微阵列分析法。可经过监测以确定用B7-H4多肽、其片段和融合蛋白进行治疗的功效的示范性标记物可见于下文的实例，尤其图7、8、9、57和58中，并且包括(但不限于)IL-I P、TNF-a、TGF-P、IFN-Y、IL-10、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21 和 MMP 中一者或一者以上。特别适用于监测关节炎的生物标记物描述于下文实例3以及图7、8和9中，并且优选包括(但不限于)CRP、ET-I、IL-6、MCP-I、MCP-3、MIP-2 和 TNF-a。适用于监测用 B7-H4 多肽、其片段和融合物以及并入这些蛋白质的组合疗法进行治疗的功效的另一标记物是患者组织液中的CD73水平，参看例如WO 09/05352。F.患者选择可通过针对生物标记物的水平或如上文所述的基因表达或在编码下游效应基因的基因内的多态现象预先筛选目标患者，来预测本文所述的B7-H4多肽、其片段和融合蛋白的功效。在一个非限制性实例中，可选择一种或一种以上发炎性细胞因子或趋化因子水平相对于未患发炎性病症的受试者升高的患者以用B7-H4多肽、片段或融合蛋白进行治疗。或者，可选择在一个或一个以上发炎性细胞因子或趋化因子基因中具有多态现象的患者以用B7-H4多肽或融合蛋白进行治疗。举例来说，根据多态现象的性质，预期在IL-10基因内具有特定多态现象的患者可或多或少对用B7-H4组合物进行的治疗作出应答。可经过筛选以确定B7-H4组合物治疗是否会有效的示范性分子和其相应基因包括(但不限于)IL-I ^、TNF-a、TGF-P、IFN-Y、IL-10, IL-17, IL-6, IL-23, IL-22, IL-21 和 MMP 中一者或一者以上。适用于选择患者以用B7-H4多肽、其片段和融合物以及并入这些蛋白质的组合疗法进行治疗的另一标记物是患者组织液中的CD73水平。可通过已知方法，包括(但不限于)定量RT-PCR和ELISA，来测量发炎性分子的水平。鉴别基因多态现象的方法是此项技术中众所周知的，并且包括(但不限于)DNA测序和DNA微阵列法。也可通过针对在治疗过程期间一种或一种以上发炎性分子的水平来筛选患者，并在受试者体内一种或一种以上细胞因子水平相比未患发炎性病症的对照受试者体内水平有所升高的情况下，增加投予受试者的B7-H4的量，或在受试 者体内一种或一种以上细胞因子水平相比未患发炎性病症的对照受试者体内水平有所降低的情况下，降低投予受试者的B7-H4的量，来监测患者用B7-H4多肽或融合蛋白治疗发炎性病症的功效。实例实例I :胶原蛋白诱发的关节炎(CIA)的预防模型中的B7-H4_Ig(鼠类)方法与材料CIA是充分表征的人类RA的小鼠模型，其中将胶原蛋白II(CH)注射到DBA/1J小鼠中以在关节中诱发肿胀和进行性炎症，从而引起关节炎。如图2中所示，在用CII免疫的同一天，经腹膜内(IP)投予DBA/1J小鼠(杰克森实验室(JacksonLabs))0. 5mgB7-H4-Ig(20mg/kg)。每周继续用 B7_H4_Ig 治疗 2 次，持续 6 周。第 21 天，用在IFA中乳化的CII对小鼠进行再激发。图2略述了简要实验设计。第40天进行最后一次B7-H4-Ig治疗。从第26天开始，每周2次使用表I中呈现的关节炎评分系统监测小鼠爪/关节。表I :主观评价关节炎严重程度的评分系统。
疾病评分炎症程度 0无明显红斑及肿胀
I局限于跗骨或踝关节的红斑和轻微肿胀
I从踝延伸到跗骨的红斑和轻微肿胀
I从踝延伸到跖骨关节的红斑和中度肿胀
~覆盖踝、足和足趾的红斑和重度肿胀，或关节僵硬。MS如图3中所示，在第33天和之后，B7-H4_Ig治疗的CIA小鼠的总关节炎评分明显低于注射媒剂的CIA小鼠的评分。实例2:治疗性CIA模型方法与材料[1690]图4略述了 CIA治疗研究的简要实验设计。DBA/1J小鼠先用在CFA中乳化的鸡CII免疫。21天后，用在IFA中乳化的CII再激发小鼠，并随机分为2组。第I组(n = 10)腹膜内注射300 u g B7-H4-Ig, 一周3次，持续4周。第2组(n = 10)注射媒剂。一周3次监测小鼠爪/关节并评分。MS如图5中所示，B7-H4_Ig可明显抑制关节炎发生。在第38天和之后，B7_H4_Ig治疗的CIA小鼠的总关节炎评分明显低于注射媒剂的CIA小鼠的评分。实例3 :使用人类B7-H4_Ig治疗CIA材料与方法动物 [1696]DBA/1 小鼠(塔康农场有限公司(Taconic Farms, Inc. ), DBA1B0)耳标(国立标牌(NationalBand) 1005-1)电动剪毛机(奥斯特公司(Oster))诱发CIAHooke Kit 鸡胶原蛋白/CFA乳液(虎克实验公司(Hooke Laboratories)EK-0210)Hooke Kit 鸡胶原蛋白/IFA乳液(虎克实验公司EK-0211)治疗B7-H4-IgRPAl 10010Synagis (帕利珠单抗(palivizumab),麦德免疫公司(MedImmune)NDC#60574-4112-1);用作人类IgG1同种型对照物鼠类B7-H4_Ig鼠类IgG2a同种型对照物(拜塞尔公司(BioXCell)Cl. 18)注射器，3mL，带有鲁尔-卢克(Luer-Lok)针尖(BD 309585)针，27号(BD 305109)安普免疫公司(Amplimmune)制剂缓冲液(IOmM磷酸钠,pH 7. 5,8% w/w鹿糖、0.01%聚山梨醇酯-80)血清收集柳叶刀，(麦迪普特公司(Medipoint)Goldenrod4mm)Microtainer 血清分尚管(BD 365956)诱发关节炎7-9周龄的DBA/1小鼠(每组10只)用于CIA模型。对来自数家供应商(杰克森实验公司、哈兰实验公司(Harlan Laboratories)和塔康农场有限公司)的小鼠进行测试，并确定塔康小鼠最适用于CIA研究。塔康小鼠显现较为一致且严重的疾病症状，并显示持续疾病进展，而来自其它供应商的小鼠通常显示稳定、不太严重的疾病，甚至在不治疗的情况下也是如此。对AA#79中的雌性(F)小鼠和AA#80中的雄性(M)小鼠进行测试以确定哪种性别适用于未来的实验中。起始研究前一天，使用电动剪毛机除去每只小鼠右侧腹上的毛发。将金属标识标签放到每只小鼠的右耳上。第O天，在右侧腹中用IOOiiL II型鸡胶原蛋白/完全弗氏佐剂(Complete Freund' s Adjuvant) (CII/CFA)乳液对小鼠免疫。第20天,使用电动剪毛机除去每只小鼠左侧腹上的毛发，并在第21天，在左侧腹中用IOOyL II型鸡胶原蛋白/不完全弗氏佐剂(CII/IFA)乳液对小鼠免疫。使用预先填充购自虎克实验公司的CII/CFA和CII/IFA乳液的注射器来确保一致的剂量以及免疫原效力。疾病监测早期关节炎症状，例如红斑和轻微肿胀，常常在第21天出现，并且在第28天，通常出现较为严重的症状，例如许多足趾肿胀以及炎症延伸到跗骨关节。一周三次使用普遍认可的关节炎严重程度评分系统(如表2所示)来评价每一肢体关节炎症状的严重程度。将四肢中每一者的评分相加，得到每只小鼠的疾病评分。表2.用于评价每一肢体的关节炎严重程度的评分系统
[1720]
权利要求
1.一种融合蛋白，其包含第一融合搭配物，所述融合搭配物包含与第二多肽直接融合或经由与所述第二多肽融合的连接肽或多肽序列间接融合的B7-H4多肽或其片段，其中所述B7-H4多肽或其片段包含SEQ ID NO 63的IgV或SEQ ID NO 64的IgV，或所述B7-H4融合蛋白缺乏SEQ ID NO 57的KRRS序列。
2.根据权利要求I所述的融合蛋白，其中所述B7-H4多肽是人类或鼠类B7-H4多肽。
3.根据权利要求I所述的融合蛋白，其中所述B7-H4多肽包含人类B7-H4的细胞外结构域，或其具有B7-H4结合活性的片段。
4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其中所述B7-H4多肽是所述人类B7-H4细胞外结构域的至少50个氨基酸的片段，选自由以下组成的群组SEQ ID N0:49 或 SEQ ID NO :52 的 32-249、32-248、32-247、32-246、32-245、32_244、32-243、32-242、32-241、31-249、31-248、31-247、31-246、31-245、31-244、31-243、31-242、31-241、30-249、30-248、30-247、30-246、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、29-249、29-248、29-247、29-246、29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、28-249、28-248、28-247、28-246、28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、27-249、27-248、27-247、27-246、27-245、27-244、27-243、27-242、27-241、26-249、26-248、26-247、26-246、26-245、26-244、26-243、26-242、26-241、25-249、25-248、25-247、25-246、25-245、25-244、25-243、25-242、25-241、24-249、24-248、24-247、24-246、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241，或SEQ ID N0:50 或 SEQ ID NO :53 的 32-245、32-244、32-243、32-242、32-241、32_240、32-239、32-238、32-237、31-245、31-244、31-243、31-242、31-241、31-240、31-239、31-238、31-237、30-245、30-244、30-243、30-242、30-241、30-240、30-239、30-238、30-237、29-245、29-244、29-243、29-242、29-241、29-240、29-239、29-238、29-237、28-245、28-244、28-243、28-242、28-241、28-240、28-239、28-238、28-237、27-245、27-244、27-243、27-242、27-241、27-240、27-239、27-238、27-237、26-245、26-244、26-243、26-242、26-241、26-240、26-239、26-238、26-237、25-245、25-244、25-243、25-242、25-241、25-240、25-239、25-238、25-237、24-245、24-244、24-243、24-242、24-241、24-240、24-239、24-238、24-237,或SEQ ID NO:51 或 SEQ ID NO :54 的 32-259、32-258、32-257、32-256、32-255、32_254、32-253、32-252、32-251、31-259、31-258、31-257、31-256、31-255、31-254、31-253、31-252、31-251、30-259、30-258、30-257、30-256、30-255、30-254、30-253、30-252、30-251、29-259、29-258、29-257、29-256、29-255、29-254、29-253、29-252、29-251、28-259、28-258、28-257、28-256、28-255、28-254、28-253、28-252、28-251、27-259、27-258、27-257、27-256、27-255、27-254、27-253、27-252、27-251、26-259、26-258、26-257、26-256、26-255、26-254、26-253、26-252、26-251、25-259、25-258、25-257、25-256、25-255、25-254、25-253、25-252、25-251、24-259、24-258、24-257、24-256、24-255、24-254、24-253、24-252、24-251，或SEQ ID NO:43 或 SEQ ID NO :46 的 24-241、24-240、24-239、24-238、24-237、24_236、24-235、24-234、24-233、23-241、23-240、23-239、23-238、23-237、23-236、23-235、23-234、23-233、22-241、22-240、22-239、22-238、22-237、22-236、22-235、22-234、22-233、21-241、、21-240、21-239、21-238、21-237、21-236、21-235、21-234、21-233、20-241、20-240、20-239、、20-238、20-237、20-236、20-235、20-234、20-233、19-241、19-240、19-239、19-238、19-237、19-236、19-235、19-234、19-233、18-241、18-240、18-239、18-238、18-237、18-236、18-235、18-234、18-233、17-241、17-240、17-239、17-238、17-237、17-236、17-235、17-234、17-233、16-241、16-240、16-239、16-238、16-237、16-236、16-235、16-234、16-233，或SEQ ID NO :44 或 SEQ ID NO :47 的 24-237、24-236、24-235、24-234、24-233、24_232、24-231、24-230、24-229、23-237、23-236、23-235、23-234、23-233、23-232、23-231、23-230、23-229、22-237、22-236、22-235、22-234、22-233、22-232、22-231、22-230、22-229、21-237、21-236、21-235、21-234、21-233、21-232、21-231、21-230、21-229、20-237、20-236、20-235、20-234、20-233、20-232、20-231、20-230、20-229、19-237、19-236、19-235、19-234、19-233、19-232、19-231、19-230、19-229、18-237、18-236、18-235、18-234、18-233、18-232、18-231、18-230、18-229、17-237、17-236、17-235、17-234、17-233、17-232、17-231、17-230、17-229、16-237、16-236、16-235、16-234、16-233、16-232、16-231、16-230、16-229，或SEQ ID NO:45 或 SEQ ID NO :48 的 24-251、24-250、24-249、24-248、24-247、24_246、24-245、24-244、24-243、23-251、23-250、23-249、23-248、23-247、23-246、23-245、23-244、23-243、22-251、22-250、22-249、22-248、22-247、22-246、22-245、22-244、22-243、21-251、21-250、21-249、21-248、21-247、21-246、21-245、21-244、21-243、20-251、20-250、20-249、20-248、20-247、20-246、20-245、20-244、20-243、19-251、19-250、19-249、19-248、19-247、19-246、19-245、19-244、19-243、18-251、18-250、18-249、18-248、18-247、18-246、18-245、18-244、18-243、17-251、17-250、17-249、17-248、17-247、17-246、17-245、17-244、17-243、16-251、16-250、16-249、16-248、16-247、16-246、16-245、16-244、16-243。
5.根据权利要求I所述的融合蛋白，其中所述B7-H4多肽包含如SEQID NO :63、SEQID NO :64、SEQ ID NO :83、SEQ ID NO 84 或 SEQ ID NO 85 中所述的 IgV 结构域的至少 25个氨基酸。
6.根据权利要求I所述的融合蛋白，其中所述B7-H4多肽是所述人类B7-H4IgV结构域的至少50个氨基酸的片段，选自由以下组成的群组SEQ ID NO :43、SEQ ID NO :44、SEQ ID NO :45、SEQ ID NO :46、SEQ ID NO 47 或 SEQID NO 48 中任一者的 16-144、16-145、16-146、16-147、16-148、16-149、16-150、16-151、16-152、17-144、17-145、17-146、17-147、17-148、17-149、17-150、17-151、17-152、18-144、18-145、18-146、18-147、18-148、18-149、18-150、18-151、18-152、19-144、19-145、19-146、19-147、19-148、19-149、19-150、19-151、19-152、20-144、20-145、20-146、20-147、20-148、20-149、20-150、20-151、20-152、21-144、21-145、21-146、21-147、21-148、21-149、21-150、21-151,21-152,22-144,22-145,22-146,22-147,22-148,22-149,22-150,22-151,22-152,23-144、23-145、23-146、23-147、23-148、23-149、23-150、23-151、23-152、24-144、24-145、24-146、24-147、24-148、24-149、24-150、24-151、24-152，或SEQ ID NO :49、SEQ ID NO :50、SEQ ID NO :51、SEQ ID NO :52、SEQ ID NO 53 或 SEQID NO 54 中任一者的 24-152、24-153、24-154、24-155、24-156、24-157、24-158、24-159、24-160、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、25-157、25-158、25-159、25-160、26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、26-157、26-158、26-159、26-160、27-152、27-153、27-154、27-155、27-156、27-157、27-158、27-159、27-160、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156、28-157、28-158、28-159、28-160、29-152、29-153、29-154、29-155、29-156、29-157、29-158、29-159、29-160、30-152、30-153、30-154、30-155、30-156、30-157、30-158、30-159、30-160、31-152、31-153、31-154、31-155、31-156、31-157、31-158、31-159、31-160、32-152、32-153、32-154、32-155、32-156、32-157、32-158、32-159、32-160，SEQ ID NO :65、SEQ ID NO 66 或 SEQ ID NO 67 中任一者的 20-148、20-149、20_150、20-151、20-152、20-153、20-154、20-155、20-156、21-148、21-149、21-150、21-151、21-152、21-153、21-154、21-155、21-156、22-148、22-149、22-150、22-151、22-152、22-153、22-154、22-155、22-156、23-148、23-149、23-150、23-151、23-152、23-153、23-154、23-155、23-156、24-148、24-149、24-150、24-151、24-152、24-153、24-154、24-155、20-156、25-148、25-149 、25-150、25-151、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、26-148、26-149、26-150、26-151、 26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、27-148、27-149、27-150、27-151、27-152、27-153、27-154、27-155、27-156、28-148、28-149、28-150、28-151、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156，或SEQ ID NO :71、SEQ ID NO :72、SEQ ID NO :73、SEQ ID NO :77、SEQ ID NO 78 或 SEQID NO 79 中任一者的 24-152、24-153、24-154、24-155、24-156、24-157、24-158、24-159、24-160、25-152、25-153、25-154、25-155、25-156、25-157、25-158、25-159、25-160、26-152、26-153、26-154、26-155、26-156、26-157、26-158、26-159、26-160、27-152、27-153、27-154、27-155、27-156、27-157、27-158、27-159、27-160、28-152、28-153、28-154、28-155、28-156、28-157、28-158、28-159、28-160、29-152、29-153、29-154、29-155、29-156、29-157、29-158、29-159、29-160、30-152、30-153、30-154、30-155、30-156、30-157、30-158、30-159、30-160、31-152、31-153、31-154、31-155、31-156、31-157、31-158、31-159、31-160、32-152、32-153、32-154、32-155、32-156、32-157、32-158、32-159、32-160， 任选在N末端附接信号肽的I到5个氨基酸。
7.根据权利要求I所述的融合蛋白，其中所述第二多肽包含免疫球蛋白恒定结构域。
8.根据权利要求7所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白恒定结构域包含鼠类免疫球蛋白C Y 2a链的铰链区、Ch2区和Ch3区。
9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白恒定结构域是由与SEQIDNO 86,SEQ ID N0:87 或 SEQ ID NO :90 具有至少 80%、85%、90%、95%、99%或 100%—致性的核苷酸序列编码。
10.根据权利要求I所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白恒定结构域包含人类免疫球蛋白C Y I链的铰链区、Ch2区和Ch3区。
11.根据权利要求I到10中任一权利要求所述的融合蛋白，其进一步包含介导所述融合蛋白的二聚或多聚作用以形成均二聚体、杂二聚体、均多聚体或杂多聚体的结构域。
12.根据权利要求11所述的融合蛋白，其中所述介导二聚或多聚作用的结构域选自由以下组成的群组一个或一个以上能够与所述搭配物融合蛋白上的半胱氨酸形成分子间二硫键的半胱氨酸、卷曲螺旋结构域、酸片(acid patch)、锌指结构域、I丐手(calcium hand)结构域、ChI区、Q区、亮氨酸拉链结构域、SH2(src同系物2)结构域、SH3(src同系物3)结构域、PTB (磷酸酪氨酸结合)结构域、Wff结构域、PDZ结构域、14-3-3结构域、WD40结构域、EH结构域、Lim结构域、异亮氨酸拉链结构域和受体二聚体对的二聚结构域。
13.根据权利要求I所述的融合蛋白，其包含多肽SEQID NO 130,SEQ ID NO :131、SEQID NO 132 或 SEQ ID NO :133。
14.根据权利要求I所述的融合蛋白，其包含多肽SEQID NO 134,SEQ ID NO :135、SEQID NO 136 或 SEQ ID NO :137。
15.一种二聚蛋白，其包含第一和第二融合蛋白，其中所述第一和所述第二融合蛋白包含根据权利要求I到14中任一权利要求所述的融合蛋白，其中所述第一和所述第二融合蛋白通过共价或非共价键相互结合形成二聚体。
16.根据权利要求I到15中任一权利要求所述的二聚或多聚蛋白，其中所述融合蛋白借助二硫键结合在一起。
17.一种分离的核酸分子，其包含编码根据权利要求I到16中任一权利要求所述的融合蛋白的核酸序列。
18.—种载体，其包含根据权利要求17所述的核酸。
19.一种宿主细胞,其包含根据权利要求18所述的载体。
20.一种用于治疗或抑制有需要的个体的发炎性应答的一种或一种以上症状的方法，其包含 对所述个体投予有效减少或抑制所述个体的所述发炎性应答的所述一种或一种以上症状的量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述发炎性应答与自体免疫疾病或病症有关。
22.根据权利要求21所述的方法，其中所述个体患有选自由以下组成的群组的自体免疫疾病类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、斑秃、强直性脊椎炎、抗磷脂综合症、自体免疫性爱迪生氏病(autoimmune addison' s disease)、自体免疫性溶血性贫血、自体免疫性肝炎、自体免疫性内耳疾病、自体免疫性淋巴细胞增生综合症(alps)、自体免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、贝赫切特氏病(Behcet' s disease)、大疱性类天疱疮、心肌病、乳糜湾性皮炎(celiac sprue-dermatitis)、慢性疲劳综合症免疫缺陷综合症(CFIDS)、慢性发炎性脱髓鞘性多发性神经病、瘢痕性类天疱疮、冷凝集素疾病、肢端硬皮综合症(Crestsyndrome)、克隆氏病(Crohn' s disease)、德戈氏病(Dego ' s disease)、皮肌炎、青少年型皮肌炎、盘状狼疮(discoid lupus)、原发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维性肌炎、葛瑞夫兹氏病(grave ' s disease)、格林-巴利综合症(guillain-barre)、桥本氏甲状腺炎(hashimoto' s thyroiditis)、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、Iga肾病、胰岛素依赖型糖尿病(I型)、青少年性关节炎、美尼尔氏病(Meniere' sdisease)、混合型结缔组织疾病、多发性硬化、复发_缓解型多发性硬化、重症肌无力、寻常性天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多软骨炎、多腺体综合症、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、雷诺氏现象(Raynaud' sphenomenon)、瑞特氏综合症(Reiter' s syndrome)、风湿热、类肉瘤病、硬皮病、修格连氏综合症(Sjogren, s syndrome)、僵人综合症、高安氏动脉炎(Takayasu arteritis)、颞动脉炎/巨细胞性动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎、白癜风和韦格纳氏肉芽肿(Wegener; s granulomatosis)。
23.一种用于治疗受试者的炎症的方法，其包含对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白以抑制或减少选自由以下组成的群组的免疫细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌Thl、Thl7、Th22、分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞。
24.根据权利要求23所述的方法，其中根据权利要求I到18中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白是以有效量投予以抑制或减少Thl7、Thl或Th22细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌。
25.一种用于治疗受试者的炎症的方法，其包含对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白以增强其对Thl或Thl7细胞的抑制作用。
26.一种用于治疗受试者的炎症的方法，其包含对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白以促进或增进Treg的IL-IO产生。
27.一种用于治疗受试者的炎症的方法，其包含对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白以增加Treg细胞数量或增加Treg群。
28.一种用于治疗受试者的炎症的方法，其包含对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白以抑制Thl和Thl7路径并增强Treg对所述Thl7路径的抑制活性，或促进或增进Treg对IL-10的分泌。
29.一种用于减少受试者体内的促炎性分子产生的方法，其包含对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到18中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白或其片段以抑制所述受试者体内一种或一种以上细胞因子的产生。
30.根据权利要求20到29中任一权利要求所述的方法，其进一步包含投予第二治疗剂。
31.一种用于选择用B7-H4融合蛋白治疗的受试者的方法，其包含 针对一种或一种以上选自由 IL-I β、TNF-a、TGF-β、IFNi、IL-10, IL-17、IL-6、IL-23、IL-22和IL-21组成的群组的细胞因子或MMP的水平筛选受试者， 将所述细胞因子的水平与未患发炎性病症的对照受试者体内细胞因子或MMP的水平相比较，和 如果所述受试者体内一种或一种以上细胞因子的水平比所述未患发炎性病症的对照受试者体内的水平高，那么对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白以抑制或减少发炎性病症的一种或一种以上症状。
32.一种用于选择用B7-H4融合蛋白治疗的受试者的方法，其包含针对编码一种或一种以上选自由 IL-I β , TNF- a , TGF- β、IFN-Y、IL-10、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22 和 IL-21组成的群组的细胞因子或MMP的mRNA的水平筛选受试者， 将所述编码细胞因子或MMP的mRNA的水平与未患发炎性病症的对照受试者体内所述编码细胞因子或MMP的mRNA的水平相比较，和 如果所述受试者体内一种或一种以上编码细胞因子的mRNA的水平比所述未患发炎性病症的对照受试者体内的水平高，那么对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白以抑制或减少发炎性病症的一种或一种以上症状。
33.一种用于选择用B7-H4融合蛋白治疗的受试者的方法，其包含 针对编码一种或一种以上选自由 IL-I β ,TNF-α JGF-β、IFNi、IL-10、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22和IL-21组成的群组的细胞因子或MMP的基因的多态现象筛选受试者，和 如果一个或一个以上所述编码细胞因子或MMP的基因具有多态现象，那么对所述受试者投予有效量的根据权利要求I到16中任一权利要求所述的B7-H4融合蛋白以抑制或减少发炎性病症的一种或一种以上症状。
34.根据权利要求20到31中任一权利要求所述的方法，其中所述受试者先前对用TNF阻断剂进行的治疗无应答。
35.根据权利要求20到34中任一权利要求所述的方法，其中所述受试者患有慢性和持久炎症。
全文摘要
本发明揭示含有B7-H4多肽的融合蛋白。所述B7-H4融合蛋白可包括全长B7-H4多肽，或者可含有全长B7-H4多肽的片段，包括所述B7-H4多肽的一部分或全部细胞外结构域。本发明还揭示使用所述融合蛋白下调T细胞活化以及治疗发炎性和自体免疫疾病和病症的方法。所述B7-H4融合蛋白适用于通过以下途径治疗炎症抑制或减少ThI、ThI 7、Th22和/或分泌或使其它细胞分泌发炎性分子的其它细胞的分化、增殖、活性和/或细胞因子产生和/或分泌，所述发炎性分子包括(但不限于)IL-1β、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-17、IL-6、IL-23、IL-22、IL-21和MMP；或增进Treg对IL-IO的分泌；增加Treg的分化；增加Treg的数量；或其组合。
文档编号A61K47/48GK102741279SQ201080048867
公开日2012年10月17日 申请日期2010年8月31日 优先权日2009年8月31日
发明者斯特芬·D·米勒, 沙浓·马沙尔, 琳达·刘, 索罗蒙·兰格曼, 约瑟夫·R·波多基尔 申请人:艾普利穆恩公司