G蛋白的制作方法

文档序号:15733708发布日期:2018-10-23 21:06阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种亲本异源三聚体G蛋白α(Gα)亚基的突变体,所述突变体(i)缺乏所述亲本Gα亚基的螺旋结构域的至少一个螺旋;(ii)能够在异源三聚体G蛋白β(Gβ)亚基和异源三聚体G蛋白γ(Gγ)亚基不存在的情况下与GPCR结合;并且(iii)具有与所述亲本异源三聚体Gα亚基的氨基酸序列相比包含一个或多个突变的氨基酸序列,所述突变选自缺失、取代和插入。

2.根据权利要求1所述的突变Gα亚基,其中所述突变体缺乏所述亲本Gα亚基的螺旋结构域的螺旋A、B、C、D、E或F中的任何一个或多个螺旋,任选地其中所述突变体缺乏螺旋A到E或缺乏所述亲本Gα亚基的螺旋结构域的螺旋A到F。

3.根据权利要求1或2所述的突变Gα亚基,其中所述突变体缺乏所述亲本异源三聚体Gα亚基的螺旋结构域的根据如图1中列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与氨基酸残基70到193、71到193、85到193或85到199相对应的区域。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的突变Gα亚基,其中将所述突变Gα亚基与GPCR结合增大了所述GPCR针对激动剂的亲和力。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的突变Gα亚基,其中将所述突变Gα亚基与GPCR结合活化了所述Gα亚基。

6.根据权利要求5所述的突变Gα亚基,其中所述Gα亚基的活化在细胞中生成Gα蛋白信号,任选地其中所述G蛋白信号是环AMP(cAMP)的增加、cAMP的减少或钙的细胞内移动。

7.根据权利要求1到6中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述突变Gα亚基与其亲本Gα亚基相比在变性条件下具有增大稳定性和/或在表达在细胞中时以比其亲本Gα亚基更高的水平进行表达。

8.根据权利要求1到7中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述突变Gα亚基能够在与所述GPCR结合时稳定所述GPCR的特定构象,任选地其中所述特定构象是激动剂构象。

9.根据权利要求1到8中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述突变Gα亚基能够与核苷酸如鸟嘌呤核苷酸结合,和/或其中所述突变Gα单元能够与异源三聚体G蛋白的Gβ和/或Gγ亚基结合。

10.根据权利要求1到9中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述Gα亚基是Gαs亚基、Gαi/o亚基、Gαq/11亚基或Gα12/13亚基中的任何亚基。

11.根据权利要求1到10中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体G蛋白α亚基的开关I区未缺失。

12.根据权利要求1到10中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体G蛋白α亚基的开关I区缺失。

13.根据权利要求12所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体G蛋白α亚基的开关I区被小GTP酶的开关I区代替。

14.根据权利要求11到13中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体G蛋白α亚基的开关I区根据如图1中列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与氨基酸残基194到207相对应。

15.根据权利要求1到14中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体G蛋白α亚基的螺旋结构域或其部分和/或开关I区或其部分被连接子序列代替。

16.根据权利要求1到15中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体Gα亚基的根据如图1中列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与氨基酸残基65到203相对应的区域缺失,任选地其中所述区域被连接子序列代替。

17.根据权利要求1到16中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基具有N端截短氨基酸序列,任选地其中所述N端截短的长度为5个到20个或5个到25个氨基酸残基。

18.根据权利要求1到11和13到16中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基包含开关I区的一个或多个突变。

19.根据权利要求18所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基在根据如图1列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与以下位置中的任何一个或多个位置相对应的位置处具有不同氨基酸:Leu 197和Cys 200。

20.根据权利要求1到19中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体G蛋白α亚基的开关III区缺失,任选地其中所述亲本异源三聚体Gα亚基的开关III区根据如图1中列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与氨基酸残基254到263相对应。

21.根据权利要求1到20中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体Gα亚基的开关II区或其部分被连接子序列代替。

22.根据权利要求21所述的突变Gα亚基,其中所述亲本异源三聚体Gα亚基的开关II区根据如图1中列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与氨基酸残基227到230相对应。

23.根据权利要求15、16、21和22中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述连接子序列包括一个或多个甘氨酸残基和/或一个或多个丝氨酸残基。

24.根据权利要求1到23中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基在根据如图1列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与以下位置中的任何一个或多个位置相对应的位置处具有不同氨基酸:Val 36、His 41、Ala 48、Gly 49、Glu 50、Met 60、Leu 63、Leu 197、Cys 200、Arg 201、Phe 208、Asn 218、Gly 226、Glu 230、Ala 249、Ser 252、Leu 272、Ile 372、Val 375;任选地其中所述突变Gα亚基是在与亲本Gα亚基进行比较时在根据如图1列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与以下位置相对应的位置处具有不同氨基酸的突变Gα亚基:Gly 49、Glu 50、Ala 249、Ser 252、Leu 272、Ile 372和Val 375。

25.根据权利要求1到24中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基具有长度为20个氨基酸残基的N端截短、开关III区的缺失并且在根据如图1列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与以下位置中的一个或多个位置相对应的位置处具有不同氨基酸:His 41、Leu 197、Cys 200、Ala 249和Leu 272。

26.根据权利要求1到25中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基在根据如图1列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与以下位置中的一个或多个位置相对应的位置处具有不同氨基酸:Gly 49、Glu 50、Gly 226和Ser 252。

27.根据权利要求1到26中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述突变Gα亚基与如图1列出的人Gα-s亚基长同种型的氨基酸序列(SEQ ID NO:91)具有至少20%的序列一致性。

28.根据权利要求1到27中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述突变Gα亚基与如图26、图29、图35、图36、图37、图38和图40中的任何图列出的氨基酸序列中的任何氨基酸序列具有至少20%的序列一致性。

29.根据权利要求1到28中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基包括一个或多个显性负向突变。

30.根据权利要求29所述的突变Gα亚基,其中所述突变Gα亚基任选地通过螯合G蛋白βγ亚基、螯合活化受体和/或通过螯合下游结合配偶体来抑制G蛋白信号传导。

31.根据权利要求29或30所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基在根据如图1列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与Ser 54相对应的位置处具有不同氨基酸。

32.根据权利要求29到31中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基相比较时,所述突变Gα亚基在NKXD基元内具有一个或多个不同氨基酸,任选地其中所述NKXD基元的Asn用Asp代替和/或其中所述NKXD基元的Asp用Asn代替。

33.根据权利要求29到32中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基在根据如图1列出的Gαs的编号与Gln 227相对应的位置处具有不同氨基酸。

34.根据权利要求29到33中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基在根据如图1列出的人Gα-s亚基长同种型的编号与以下位置中的一个或多个位置相对应的位置处具有一个或多个不同氨基酸:Gly 226、Glu 268和Ala 366。

35.根据权利要求29到34中任一项所述的突变Gα亚基,所述突变Gα亚基是突变Gαt亚基(嵌合体6)并且在与所述亲本Gα亚基进行比较时所述突变Gα亚基在根据如图27列出的Gαt亚基(嵌合体6)的编号与Arg 238相对应的位置处具有不同氨基酸。

36.根据权利要求29到35中任一项所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基包括已知增大了Gα亚基针对GPCR的亲和力的一个或多个突变。

37.根据权利要求36所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基在根据如图25列出的Gαi1亚基的编号与Ile 56和Gln 333相对应的位置中的每个位置处具有半胱氨酸残基。

38.根据权利要求36或37所述的突变Gα亚基,在与所述亲本Gα亚基进行比较时,所述突变Gα亚基在根据如图25列出的Gαi1亚基的编号与Asp 328相对应的位置处具有不同氨基酸。

39.根据权利要求36到38中任一项所述的突变Gα亚基,所述突变Gα亚基是突变Gαs亚基,其中所述亲本Gαs亚基的α3/β5环用Gαi2亚基的α3/β5环代替。

40.根据权利要求1到39中任一项所述的突变Gα亚基,所述突变Gα亚基是突变Gαt亚基,其中根据如图25列出的Gαt亚基的编号与Cys 347相对应的位置处的氨基酸残基被化学修饰,任选地其中所述氨基酸残基被羧甲基化或氰基化。

41.根据权利要求1到40中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述突变Gα亚基包括可检测部分如组氨酸标签或麦芽糖结合蛋白标签或绿色荧光蛋白标签和/或包括蛋白酶切割位点如烟草蚀纹病毒(TEV)切割位点。

42.根据权利要求1到41中任一项所述的突变Gα亚基,其中所述突变体与其亲本体相比针对热、洗涤剂、离液剂和pH极值中的任何一种具有增大稳定性。

43.一种组合物,其包括根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基,其特征在于,所述突变Gα暴露于对于以比所述突变Gα亚基更大的程度去稳定所述亲本Gα有效的去稳定条件。

44.一种多核苷酸,所述多核苷酸对根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基进行编码。

45.根据权利要求44所述的多核苷酸,其中所述多核苷酸与SEQ ID NO:46-90中的任何项的多核苷酸序列具有至少20%的序列一致性。

46.一种宿主细胞,其包括根据权利要求44或45所述的多核苷酸。

47.一种复合物,其包括:(i)根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或其能够与GPCR结合的部分,以及(ii)GPCR或其能够与根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基结合的部分。

48.根据权利要求47所述的复合物,其中所述GPCR是1类GPCR或2类GPCR或3类GPCR,任选地其中所述GPCR是β肾上腺素受体、腺苷受体、毒蕈碱受体或神经降压素受体中的任何受体。

49.根据权利要求47或48所述的复合物,其中所述GPCR以特定构象状态如激动剂结合构象驻留。

50.根据权利要求47到49中任一项所述的复合物,其中所述GPCR是在变性条件下、在特定构象下与其亲本GPCR在变性条件下、在相同特定构象下的稳定性相比具有增大稳定性的突变GPCR。

51.根据权利要求47到50中任一项所述的复合物,其中(i)和(ii)中的一者或两者被可检测地标记。

52.根据权利要求47到51中任一项所述的复合物,所述复合物进一步包括GPCR配体。

53.根据利要求52所述的复合物,其中所述GPCR配体是小分子、蛋白质、肽、蛋白支架、核酸、离子、碳水化合物或抗体中的任何项。

54.根据权利要求47到53中任一项所述的复合物,所述复合物进一步包括G蛋白βγ亚基。

55.根据权利要求47到54中任一项所述的复合物,所述复合物进一步包括核苷酸,任选地其中所述核苷酸是鸟嘌呤核苷酸如GDP或GTP,或者任选地其中所述核苷酸是黄嘌呤核苷酸。

56.根据权利要求47到55中任一项所述的复合物,其中所述复合物呈结晶形式。

57.一种能够对以下项进行编码的多核苷酸或表达载体:(i)根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或其能够与GPCR结合的部分以及(ii)GPCR或其能够与根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基结合的部分。

58.根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物,所述突变Gα亚基或所述复合物呈溶解形式。

59.根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物,所述突变Gα亚基或所述复合物基本上没有其它蛋白质。

60.根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物,所述突变Gα亚基或所述复合物被固定到固体支持物。

61.一种固体支持物,根据权利要求1到42中任一项所述的一个或多个突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物被固定到所述固体支持物。

62.一种根据权利要求1到42和58到60中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55和58到60中任一项所述的复合物用于结晶化的用途。

63.一种根据权利要求1到42和58到60中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55和58到60中任一项所述的复合物用于药物发现的用途。

64.根据权利要求63所述的用途,其中所述突变Gα亚基或所述复合物用于配体结合筛选或测定开发。

65.一种根据权利要求1到42和58到60中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55和58到60中任一项所述的复合物用作生物传感器的用途,任选地其中所述生物传感器能够测量体内配体水平。

66.一种产生GPCR-Gα亚基复合物的晶体的方法,所述方法包括:

(i)提供根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基、GPCR和任选地GPCR配体;

(ii)形成所述突变Gα亚基、所述GPCR和任选地所述GPCR配体的复合物;以及

(iii)使所述复合物结晶化以形成晶体。

67.根据权利要求66所述的方法,其中所述GPCR以特定构象结晶化。

68.一种确定特定构象的GPCR的结构的方法,所述方法包括:提供根据权利要求47到55中任一项所述的GPCR-Gα亚基复合物以及确定所述复合物的结构。

69.根据权利要求68所述的方法,其中所述GPCR-Gα亚基复合物以结晶形式提供并且所述复合物的晶体结构被确定。

70.根据权利要求68或69所述的方法,所述方法进一步包括从所述晶体获得原子坐标。

71.根据权利要求68所述的方法,其中所述复合物的NMR结构被确定。

72.根据权利要求67到71中任一项所述的方法,其中所述特定构象是激动剂构象或拮抗剂构象。

73.一种用于选择亲本异源三聚体Gα亚基的突变体的方法,所述突变体能够在所述亲本异源三聚体G蛋白的β和γ亚基不存在的情况下与GPCR偶联,所述方法包括:

(a)在所述亲本异源三聚体G蛋白的β和γ亚基不存在的情况下提供亲本异源三聚体Gα亚基的一个或多个突变体;

(b)提供GPCR;以及

(c)确定所述或每个突变Gα亚基是否能够与所述GPCR结合,并且选择能够与所述GPCR结合的那些突变体。

74.根据权利要求73所述的方法,其中步骤(c)包括确定所述或每个突变Gα亚基是否在与所述GPCR结合时增大了所述GPCR针对激动剂的亲和力。

75.根据权利要求73或74所述的方法,其中所述方法进一步包括确定所述或每个突变Gα亚基是否能够在与所述GPCR结合时稳定所述GPCR的特定构象,任选地其中所述特定构象是激动剂构象。

76.根据权利要求73到75中任一项所述的方法,其中在步骤(c)之前,所述GPCR暴露于能够稳定特定构象的试剂,任选地其中所述试剂是纳米抗体。

77.根据权利要求73到76中任一项所述的方法,其中将所述GPCR提供在含膜组合物中。

78.根据权利要求73到77中任一项所述的方法,所述方法进一步包括:确定所述突变Gα亚基与其亲本Gα亚基相比在变性条件下是否具有增大稳定性和/或确定所述突变Gα亚基在表达在细胞中时是否以比其亲本Gα亚基更高的水平进行表达。

79.根据权利要求73到78中任一项所述的方法,其中所述GPCR是在变性条件下、在特定构象下与其亲本GPCR在变性条件下、在相同特定构象下的稳定性相比具有增大稳定性的突变GPCR。

80.一种用于制备亲本异源三聚体Gα亚基的突变体的方法,所述突变体能够在所述亲本异源三聚体G蛋白的β和γ亚基不存在的情况下与GPCR偶联,所述方法包括:

(a)实施根据权利要求73到79中任一项所述的方法,

(b)标识所述一个或多个突变Gα亚基中的所述一个或多个突变氨基酸残基的所述一个或多个位置,所述一个或多个突变Gα亚基是针对增大稳定性选择的,以及

(c)合成突变Gα亚基,所述突变Gα亚基包含所标识的所述位置中的一个或多个位置处的代替氨基酸。

81.一种能够通过权利要求80所述的方法获得的突变Gα亚基。

82.一种稳定特定构象的GPCR的方法,所述方法包括:

(a)提供根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基以及靶GPCR,以及

(b)形成所述突变Gα亚基和所述GPCR的复合物,其中所述GPCR以特定构象稳定。

83.根据权利要求82所述的方法,其中所述突变Gα亚基被固定到固体支持物上。

84.根据权利要求82或83所述的方法,其中所述靶GPCR以包含处于多个构象状态的所述GPCR的溶液形式提供。

85.根据权利要求82到84中任一项所述的方法,所述方法进一步包括纯化所述复合物。

86.一种用于选择具有增大稳定性的GPCR的方法,所述方法包括;

(a)提供亲本GPCR的一个或多个突变体和根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基,

(b)选择配体,所述配体是在所述GPCR以特定构象驻留时与所述亲本GPCR结合的配体,

(c)确定与所述亲本GPCR关于结合所选配体或关于结合所述突变Gα亚基的稳定性相比,所述或每个突变GPCR是否关于结合所述配体或关于结合所述突变Gα亚基具有增大稳定性,以及

(d)选择与所述亲本GPCR相比关于结合所选配体或关于结合所述突变Gα亚基具有增大稳定性的那些突变体,其中步骤(c)中所述GPCR驻留的所述特定构象与步骤(b)中选择的配体的种类相对应。

87.根据权利要求86所述的方法,其中在步骤(c)之前,亲本GPCR的所述一个或多个突变体与所选配体接触。

88.根据权利要求86或87所述的方法,其中所述所选配体来自激动剂类配体并且所述特定构象是激动剂构象。

89.根据权利要求86到88中任一项所述的方法,其中选择在如以下项的变性条件下具有增大稳定性的突变GPCR:热、洗涤剂、离液剂和pH极值中的任何一种或多种。

90.一种用于制备突变GPCR的方法,所述方法包括:

(a)实施根据权利要求86到89中任一项所述的方法,

(b)标识所述一个或多个突变GPCR中的所述一个或多个突变氨基酸残基的所述一个或多个位置,所述一个或多个突变GPCR是针对增大稳定性选择的,以及

(c)合成突变GPCR,所述突变GPCR包含所标识的所述位置中的一个或多个位置处的代替氨基酸。

91.一种能够通过权利要求90所述的方法获得的突变GPCR。

92.一种标识GPCR的结合配偶体的方法,所述方法包括:

e)提供根据权利要求47到55中任一项所述的复合物;

f)提供一种或多种测试化合物;

g)确定所述或每种测试化合物是否与所述复合物结合;以及

h)分离与所述复合物结合的一种或多种测试化合物。

93.根据权利要求92所述的方法,其中步骤(a)所提供的复合物不包含GPCR配体。

94.根据权利要求92或93所述的方法,其中所述方法用于片段文库筛选。

95.根据权利要求92到94中任一项所述的方法,所述方法进一步包括:

(iii)确定所述或每种测试化合物是否与根据权利要求47到55中任一项所述的不同复合物结合;以及

(iv)分离未与根据权利要求47到55中任一项所述的不同复合物结合的所述或每种测试化合物。

96.根据权利要求95所述的方法,其中所述不同复合物包括:与权利要求92所述的步骤(a)的所述复合物中的所述Gα亚基的种类不同的种类的Gα亚基和/或与权利要求92所述的步骤(a)的所述复合物中的所述GPCR不同的GPCR。

97.一种标识Gα亚基的结合配偶体的方法,所述方法包括:

e)提供根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基;

f)提供一种或多种测试化合物;

g)确定所述或每种测试化合物是否与所述突变Gα亚基结合;以及

h)分离与所述突变Gα亚基结合的一种或多种测试化合物。

98.一种与根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物选择性地结合的抗体。

99.一种评估G蛋白与GPCR之间的结合的方法,所述方法包括:提供根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基和GPCR,以及评估所述突变Gα亚基与所述GPCR之间的结合。

100.一种评估试剂对G蛋白与GPCR之间的偶联的影响的方法,所述方法包括:提供根据权利要求1到31中任一项所述的突变Gα亚基和GPCR,以及评估所述试剂对所述突变Gα亚基与所述GPCR之间的偶联的影响。

101.根据权利要求99或100所述的方法,其中所述突变Gα亚基被荧光标记。

102.根据权利要求99到101中任一项所述的方法,其中所述突变Gα亚基和所述GPCR提供在细胞内,任选地其中所述方法在体内或体外实施。

103.一种用于选择或设计GPCR、G蛋白或GPCR-G蛋白复合物的一个或多个结合配偶体的方法,所述方法包括:

(a)提供根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物的三维结构表示,以及

(b)使用分子建模法来选择或设计所述GPCR、所述G蛋白或所述GPCR-G蛋白复合物的一个或多个结合配偶体,其中将所述突变Gα亚基或所述复合物的至少一部分的所述三维结构表示与一个或多个候选结合配偶体的三维结构表示进行比较,并且选择预测与所述GPCR、所述G蛋白或所述GPCR-G蛋白复合物相互作用的一个或多个结合配偶体。

104.一种用于分析一个或多个结合配偶体与GPCR、G蛋白或GPCR-G蛋白复合物的相互作用的方法,所述方法包括:

(a)提供根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物的三维结构表示,以及

(b)提供欲与所述突变Gα亚基或所述复合物的结构或所述结构的一部分拟合的一个或多个结合配偶体的三维结构表示;以及

(c)将所述一个或多个结合配偶体与所述结构拟合。

105.根据权利要求103或104所述的方法,其中根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物的所述三维结构表示是如下获得的:提供根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物,以及确定所述突变Gα亚基或所述复合物的三维结构。

106.根据权利要求104中任一项所述的方法,所述方法进一步包括:改进所述一个或多个结合配偶体的所述结构表示以增大或减小所述一个或多个结合配偶体与GPCR、G蛋白或GPCR-G蛋白复合物的相互作用。

107.一种药物组合物,其包括根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物或根据权利要求98所述的抗体。

108.根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物或根据权利要求98所述的抗体,所述突变Gα亚基或所述复合物或所述抗体用于医学。

109.根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或根据权利要求47到55中任一项所述的复合物或根据权利要求98所述的抗体,所述突变Gα亚基或所述复合物或所述抗体用于对抗癌症。

110.一种多部分试剂盒,其包括:(i)根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基或其能够与GPCR结合的部分,或对所述突变Gα亚基或其部分进行编码的多核苷酸;以及(ii)GPCR或其能够与根据权利要求1到42中任一项所述的突变Gα亚基结合的部分,或对所述GPCR或其部分进行编码的多核苷酸。

111.根据权利要求110所述的多部分试剂盒,其中所述GPCR如权利要求48到50中任一项所定义的。

112.根据权利要求110或111所述的多部分试剂盒,其中(i)和(ii)中的一者或两者被可检测地标记。

113.根据权利要求110到112中任一项所述的多部分试剂盒,所述多部分试剂盒进一步包括GPCR配体。

114.根据权利要求113所述的多部分试剂盒,其中所述GPCR配体是小分子、蛋白质、肽、蛋白支架、核酸、离子、碳水化合物或抗体中的任何项。

115.根据权利要求111到114中任一项所述的多部分试剂盒,所述多部分试剂盒进一步包括G蛋白βγ亚基。

116.根据权利要求110到115中任一项所述的多部分试剂盒,所述多部分试剂盒进一步包括核苷酸,任选地其中所述核苷酸是鸟嘌呤核苷酸如GDP或GTP,或任选地其中所述核苷酸是黄嘌呤核苷酸。

117.基本上如本文所公开的任何新型突变Gα亚基、复合物、多核苷酸、抗体、组合物或方法。

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