TB生物标记物的制作方法

本发明涉及tb的检测，特别是儿童tb。
背景技术：
tb的检测是个问题，特别在儿童中。目前的金标准涉及到细菌学评估。但是，难以获得痰液样本。即使当成功获得时，儿童的痰液样本也可能表现为缺乏杆菌，使得样本中的直接检测变得困难或不可能。在这些情况下，必须进行培养以使样本中的低数量杆菌扩增至可检测的水平。这是费力且昂贵的并且需要专门的实验室资源，这是缺点。更重要的是，在儿童中，培养仍然缺乏敏感性。此外，培养需要大约六周，这对获得诊断带来了临床上显著的延迟，这对于患者预后是严重问题。此外，在实践和量方面，特别难以从儿童获得痰液样本。将患者，特别是儿童投入没有明确诊断的推测性治疗上是严重的成本负担以及这一步骤所带来的医疗风险和并发症。dhanasekaran等2013(genesandimmunityvol14pages356-364)描述了印度南部接种bcg疫苗的幼儿中结核分枝杆菌(m.tb.)感染和疾病的生物标记物的鉴定。用中等的区分能力描述了11种生物标记物的组合。未刺激的全血上清液未鉴定细胞因子表达差异(第359-360页)。wo2014/020343(proteinlogicltd)公开了用于诊断和/或监测结核病的生物标记物。本文件注重于成人。儿童tb仅提及一次，未明确受试者的年龄。唯一的示例仅限于成年人。kumar等2013(clinicalandvaccineimmunologyvol20pages704-711)公开了儿童肺和肺外结核的循环生物标记物。公开了儿科tb与升高的血浆tgf-β、il-21和il-23水平相关。公开了对于细胞因子，对于大多数17型和1型干扰素，或与免疫调节相关的大多数细胞因子，没有发现显著差异。hur等2015(journalofinfectionvol70page346-355)公开了用于改善结核病诊断和监测治疗效果的辅助生物标记物。讨论了vegf。没有公开儿童tb。serene等2012(biomarkersvol17pages1-8)公开了结核病中临床相关性的宿主标记物：基因和蛋白质表达研究的综述。提及到了il-6、il-22和ip-10。没有公开儿童tb。sutherland等2012(plosonevol7epubnumber:e30324)公开了通过胸腔积液的免疫学分析对胸膜结核的高度准确诊断。提及到了il-6和ip-10。本工作注重于成人。本工作注重于胸膜液。wo2015/040377(medicalresearchcouncil)公开了用于结核病的生物标记物。提及到了il-1ra、fgf和vegf。本工作注重于成人。本工作注重于痰液。目前用于诊断的金标准是在诸如痰液的临床标本中直接检测感染性病原体结核分枝杆菌(m.tb.)。区分活动性结核(tb)疾病与其他呼吸道感染(od)构成了患有疑似胸内结核病患儿管理的主要挑战。本发明试图克服与现有技术相关的问题。技术实现要素：现有技术方法基于痰液的分析，或者基于白细胞的提取和操作(例如刺激)。相反，本发明人将其检测基于可以直接在取自患者的样本中发现的指示物。特别地，本发明人将其检测基于血液样本，并直接检测血液样本中存在的标记物。这具有适合于开发即时检验的优势。这具有避免其为现有领域技术的一部分的操纵和刺激的优势。特别地，本发明有利地基于未刺激的血液上清液。因此，在一个方面，本发明提供了一种用于在受试者中诊断tb的方法，所述方法包括：(a)提供来自所述受试者的样本，所述样本选自：血液、血清和血浆组成的组；(b)确定以下生物标记物在所述样本中的浓度：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf；(c)将(b)中确定的每种生物标记物的浓度转换为十分位数值；以及(d)通过将(c)的十分位数值与下面的特定分位数截止值进行比较，将每个十分位数值转换为二进制存在或不存在：生物标记物特定分位数截止值il-1ra3il66il-78il-89il-12p709碱性fgf3ip-104vegf9其中，将匹配或超过特定分位数截止值的十分位数值转换为生物标记物的二进制存在，并将低于特定分位数截止值的十分位数值转换为生物标记物的二进制不存在；其中检测每种所述生物标记物的存在表明该受试者患有tb。适宜的是，步骤(c)将(b)中确定的每个浓度转换成十分位数值包括以下步骤：(ci)将(b)中确定的每种生物标记物的浓度与所述生物标记物浓度的参考频率分布进行比较；以及(cii)从所述生物标记物浓度的频率分布中读出十分位数值。适宜的是，步骤(c)将(b)中确定的每个浓度转换成十分位数值包括以下步骤：(ci)将(b)中确定的每种生物标记物的浓度与所述生物标记物浓度的核密度估计进行比较；以及(cii)从所述生物标记物浓度的核密度估计中读出十分位数值。适宜的是，通过测量多个受试者例如最少100个受试者中的生物标记物的浓度，并将这些测量结果编译成频率分布/核密度估计，来产生参考频率分布或核密度估计。或者，可以使用本文中图2-9中呈现的频率分布(核密度估计)。在该实施例中，步骤(c)将(b)中确定的每个浓度转换成十分位数值包括以下步骤：(ci)将(b)中确定的每种生物标记物的浓度与相应的选自图2-9的所述生物标记物浓度的参考频率分布/核密度估计进行比较；以及(cii)从所述生物标记物浓度的频率分布/核密度估计中读出十分位数值。适宜地确定每种标记物的浓度包括：(bi)通过使样本与能够特异性结合生物标记物的抗体或其抗原结合片段接触来进行检测；以及(bii)所述结合的量化。适宜的是，确定每种生物标记物的浓度包括检测生物标记物的mrna，其中mrna的检测包括：(bi)使样本与用于生物标记物的特定核酸探针或引物接触；以及(bii)定量所述(多个)探针或(多个)引物。适宜的是，所述探针或引物是非天然产生的核酸序列。适宜的是，所述探针或引物是人工或人造分子。适宜的是，所述探针或引物是分离和/或纯化的。适宜的是，所述探针或引物包含单链核酸。适宜的是，所述探针或引物包含与其连接的标记部分。适宜的是，所述标记是共价连接的。适宜的是，所述标记可以是荧光或放射性标记或qdot、纳米晶体或纳米颗粒，最合适的是荧光标记。适宜的是，所述样本是血清或血浆样本。适宜的是，所述血清或血浆基本上不含细胞。适宜的是，受试者为16岁或更小，优选15岁或更小。适宜的是，受试者是2岁或更大，优选5岁或更大。适宜的是，受试者是5岁-15岁。在一个实施例中，适宜的是，所述方法还包括测定所述生物标记物ec刺激的vegf在所述样本中的浓度(特定分位数截止值2)。在一个方面，本发明涉及试剂盒，其包含用于特异性检测以下生物标记物中的每一种的(多种)试剂：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf。在一个方面，本发明涉及试剂盒，其包含用于特异性检测编码以下生物标记物中的每一种的mrna的试剂：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf。适宜的是，所述试剂各自包含选自下组的抗体或其抗原结合片段，所述组由：fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv、fv、rigg和双抗体组成。在一个方面，本发明涉及包含材料阵列的设备，所述材料阵列一起能够特异性结合以下生物标记物中的每一种：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf，阵列中的每种材料能够特异性结合所述生物标记物中的一种。在一个方面，本发明涉及包含材料阵列的设备，所述材料阵列一起能够检测对以下生物标记物中的每一种特异性的mrna：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf，阵列中的每种材料能够特异性检测所述mrna中的一种。适宜的是，所述设备是侧流设备。在一个方面，本发明涉及治疗受试者的方法，包括实施如上所述的方法，其中如果确定受试者患有tb，则将2hrze/4hr的方案(2个月hrze随后4个月hr，其中h＝异烟肼，r＝利福平，z＝吡嗪酰胺，e＝乙胺丁醇)给予所述受试者。在一个方面，本发明涉及hrze的用途，其中h＝异烟肼，r＝利福平，z＝吡嗪酰胺，e＝乙胺丁醇，用于治疗受试者中的tb，其中如上所述的方法是针对所述受试者进行的，其中如果确定受试者患有tb，那么将hrze给予所述受试者两个月，然后将hr给予所述受试者四个月。适宜的是，选择在前两个月期间每周至少三次对所述受试者给药的治疗方案，优选选择在前两个月每天对所述受试者给药的治疗方案。在一个方面，本发明涉及用于治疗受试者中的tb的h75mg+r150mg+z400mg+e275mg的片剂，其中针对所述受试者进行如上所述的方法，其中如果是确定受试者患有tb，那么将hrze给予所述受试者两个月，接着给予3片h75mg+1.5片r150mg，持续4个月。在一个方面，本发明涉及选择治疗方案的过程，所述过程包括：实施如上所述的方法，其中如果确定受试者患有tb，则选择2hrze/4hr的治疗方案(2个月hrze随后4个月hr，其中h＝异烟肼，r＝利福平，z＝吡嗪酰胺，e＝乙胺丁醇)。在一个方面，本发明涉及材料组合的用途，每种材料识别，特异性结合于以下生物标记物中的一种或对其具有亲和性：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf,其中所述组合包括至用于每种所述生物标记物的至少一种这样的材料，用于帮助诊断受试者中的tb。适宜的是，所述材料包括抗体或其抗原结合片段。在一个方面，本发明涉及材料组合辅助诊断受试者中的tb的用途，每种材料识别，特异性结合于以下生物标记物中的一种或多种的mrna或对其具有亲和性：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf。适宜的是，所述材料包括核酸引物或探针。在一个方面，本发明涉及包括配置为实施如上所述的方法的逻辑的装置。在一个方面，本发明涉及一种可操作的计算机程序产品，当在计算机上执行时，可实施如上所述的方法步骤。具体实施方式本发明人教导识别针对儿童tb的新型宿主生物标记物。本发明人假设可以鉴定针对儿童结核病的独特生物标记。‘tb’是指结核病；这是由结核分枝杆菌(有时称为mtb)引起的疾病。提供简单的诊断测试是tb领域中的挑战。测试需要可靠性。测试需要准确性。理想地，测试应该包括最少的工具/设备，特别是因为在发展中国家，结核病通常是一个问题，那里实验室设施很少并且/或者在地理位置上远离被测试的患者。样本样本可以来自受试者。适宜的是，受试者为哺乳动物，最合适为人。适宜的是，方法不包括样本的实际收集。适宜的是，样本是体外样本。本发明的方法适合在来自研究对象的分离样本上进行。因此，适宜的是，所述方法是可以在实验室环境中进行而不需要受试者在场的方法。适宜的是，所述方法在体外进行，即合适的方法是体外方法。适宜的是，方法是离体方法。适宜的是，本发明可以应用于核酸的分析。适宜的是，核酸由从感兴趣的受试者收集的样本制备，例如，通过从样本中的白细胞中提取核酸。适宜的是，样本包括核酸。适宜的是，样本由核酸组成。适宜的是，核酸包括，或为mrna或cdna，适宜的是为mrna。最适宜的是，本发明可以应用于蛋白质生物标记物的分析。最适宜的是，分析样本中的蛋白质。适宜的是，样本是体外样本。适宜的是，样本是离体样本。适宜的是，样本是血液。适宜的是，样本是血液上清液。适宜的是，样本是血清。当从凝结的血液样本中收集液体时可以得到血清。适宜的是，样本是血浆。当从已经离心以沉淀存在的血细胞的血液样本中收集液体时可以得到血浆。或者可以通过过滤或除去存在的血细胞来得到血浆。适宜的是，血液或血液上清液/血清/血浆是未刺激的。本发明的优势是该分析将每个测得的生物标记物转换为二进制输出。例如，将所检查的每个细胞因子生物标记物转变为二进制yes/no数据点。相反，现有技术的方法需要定量读出。本发明的优势是在与细菌培养相当的水平上实现诊断准确性。本发明的优势是与经历细菌培养的那些相比没有时间延迟。现有技术使用细胞，细菌细胞或分离的血细胞。本发明的优势是不需要培养细胞，也不需要分离细胞。本发明的优势是分析了宿主响应/宿主特征。不希望受理论束缚，现有的创建针对tb的血液测试的尝试集中于激发或刺激来自受试者的免疫细胞并研究响应。但是，原则上这种方法总是在研究“回忆响应”。这是源自先前遇到过tb细菌的免疫系统的“记忆”的反应。首先，这需要用细菌或抗原刺激样本，这是劳动密集且昂贵的。然而，更重要的是，原则上，这类型方法只能化验二次应答。相反，本发明涉及初次应答的评估。当应用于儿童时，这尤其重要且有用，因为显然每个患者在他们的生命中的某个时刻首次暴露于tb。如果诸如现有技术方法的方法仅集中于评估二次应答，则在第一次这样的受试者遇到tb时不太可能能够检测到应答。本发明的优势是评估直接初次应答。适宜的是，样本是无细胞样本。适宜的是，样本不包含细胞。适宜的是，通过离心和取出上清液从血液样本中除去细胞。可以通过本领域已知的任何方法从样本中除去细胞。例如过滤。从分析中排除细胞的一个关键原因是由于红血球红细胞的存在，血液呈深红色。通常，用于评估生物标记物存在与否的检测步骤是光敏感的。因此，有利地，样本不含细胞，以避免被全血的红色所混淆。原则上，可以采用绕过全血的深红色的任何方法。适宜的是，这可以通过细胞裂解。更适宜的是，在分析之前从血液中除去细胞。适宜的是，这通过离心。适宜的是，这可以通过过滤。适宜的是，这可以通过侧向流动。在一些设置中，可以在本发明的方法中使用全血样本，例如通过使用侧向流动。在这种情况下，将全血样本置于侧流设备中。然后，诸如血浆/血清的流体成分迁移，因此它在评估点是无细胞的。侧流化验和其他设备侧流测试化验(lfa)-也称为侧流免疫色谱化验-需要最少的基础设施，并已用于开发廉价且简单的设备，用于快速医疗诊断和筛查，即时检验或实验室使用。该化验基于检测样本中特定目标分析物的存在，主要用于定性和偶然的定量分析。lfa的常见应用包括其在家庭妊娠试验，糖尿病监测以及hiv或寄生虫和细菌感染的快速诊断中的应用。正如在综述文章(诸如sajidm,kawdea,daudm.designs,formatsandapplicationsoflateralflowassay:aliteraturereview.journalofsaudichemicalsociety.2014)中广泛讨论的那样，典型的lfa条带由四部分组成：·样本应用垫：这是由纤维素或玻璃纤维制成的吸收垫，其上施加有样本，其主要功能是将含有分析物的样本(例如血液)向“下游”输送到lfa条带的另一部分。它还可以在输送之前对样本进行预处理，包括分离成诸如血浆的组分。·结合垫：这包含固定的和标记的抗体，其特异于目标分析物。将抗体与有色颗粒例如乳胶或纳米尺寸的颗粒缀合，并且标记的抗体缀合物当与移动的液体样本接触时被释放。·硝化纤维素或反应膜：该膜允许由结合垫产生的复合物在毛细作用下移动。将膜进一步分为测试线和对照线。·吸附垫：该垫在条带末端起“水槽”的作用，并且其设计用于通过毛细管作用进一步将样本拉过反应区。图10显示了侧流设备的标准布局(saiedassadollahi,christianereininger,rolandpalkovits,peterpointlandthomasschalkhammer.‘fromlateralflowdevicestoanovelnano-colormicrofluidicassay.’sensors2009(9)；6084-6100；doi:10.3390/s90806084)。侧流化验可以以两种主要形式起作用，即夹心和竞争性化验。夹心lfa设计用于大分子量分子的检测，包括具有多个抗原位点的蛋白质(例如hiv、hcg)，而竞争性化验设计用于测试具有单个表位的小分子。在夹心lfa中，阳性测试将在检测线上显示彩色条带，而在竞争性lfa中，检测线将在阴性样本中显示彩色条带。多重检测形式在临床诊断中，在相同条件下同时检测的多个相互依赖的分析物的更高特异性或预测准确性导致开发用于检测多于一种目标分析物的多重lfa检测形式。(panhotrabr,hassanzu,joshics,bahrania.visualdetectionofmultipleviralampliconsbydipstickassay:itsapplicationinscreeningofblooddonorsawelcometoolforthelimitedresourcesettings.journalofclinicalmicrobiology.2005dec；43(12):6218；authorreply-9.pubmedpmid:16333138.pubmedcentralpmcid:1317223；corstjenspl,dedoodcj,vanderploeg-vanschipjj,wiesmeijerkc,riuttamakit,vanmeijgaardenke,etal.lateralflowassayforsimultaneousdetectionofcellular-andhumoralimmuneresponses.clinicalbiochemistry.2011oct；44(14-15):1241-6.pubmedpmid:21763300.pubmedcentralpmcid:3177995)。在这种形式中，在条带上进行化验，其中检测线的数量等于目标分析物的数量，如最近描述的用于四种常见的人乳头瘤病毒(hpv)类型的化验(xuy,liuy,wuy,xiax,liaoy,liq.fluorescentprobe-basedlateralflowassayformultiplexnucleicaciddetection.analyticalchemistry.2014jun17；86(12):5611-4.pubmedpmid:24892496)。图11显示了lfa的多重检测形式(yexu,yinghualiu,yanwu,xiaohuxia,yiqunliaoandqinggeli.‘flourescentprobe-basedlateralflowassayformultiplexnucleicaciddetection.’analchem.,2014,86(12),5611-5614)。临床应用通过血浆、血清、尿液和其他临床样本中的临床分析物的检测，侧流化验已经在临床诊断和作为即时检验中发现了重要的应用。一个现成的例子是家庭妊娠检测试剂盒。在结核病(tb)中，尿液脂阿拉伯甘露聚糖(lam)试验是低灵敏度的lfa试验(52-59％，但高特异性(>94％)(lawnsd,dhedak,kerkhoffad,peterjg,dormans,boehmecc,etal.determinetb-lamlateralflowurineantigenassayforhiv-associatedtuberculosis:recommendationsonthedesignandreportingofclinicalstudies.bmcinfectiousdiseases.2013；13:407.pubmedpmid:24004840.pubmedcentralpmcid:3846798)。发明人最近还报道了使用结合lfa的荧光上转换荧光粉(ucp)报道子技术在同一条带上同时检测的ip-10和ccl4有潜力开发为胸膜tb的即时检验(sutherlandjs,mendyjf,gindeha,walzlg,togunt,owolabio,etal.useoflateralflowassaystodetermineip-10andccl4levelsinpleuraleffusionsandwholebloodfortbdiagnosis.tuberculosis(edinb).2015)。在非洲的多中心研究类似地报道了低技术和强大的ucp-lfa平台作为检测全血中多种趋化因子的方便的定量化验的应用(corstjenspl,tjonkonfatem,dedoodcj,vanderploeg-vanschipjj,frankenkl,chegounn,etal.multi-centerevaluationofauser-friendlylateralflowassaytodetermineip-10andccl4levelsinbloodoftbandnon-tbcasesinafrica.clinicalbiochemistry.2015aug15.pubmedpmid:26285074)。因此，本发明涉及包含材料阵列的设备，所述材料阵列一起能够结合以下生物标记物中的每一种：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf，阵列中的每种材料能够特异性结合所述生物标记物中的一种，其中所述设备是侧流装置。在该实施例中，材料阵列适宜地包含与生物标记物的数量相等的多个检测线。适宜的是，每个检测线包含能够结合一种这样的生物标记物的材料。适宜的是，每个检测线包含能够结合不同的这样的生物标记物的材料。或者，如果所述设备包含“芯片”或“生物芯片”，该阵列可以包含材料的空间阵列，诸如栅格或其他限定的布置(诸如几何图案)。适宜的是，能够结合所述生物标记物中的一种的每种材料在设备中是固定的。适宜的是，能够结合所述生物标记物中的一种的每种材料是经修饰的。适宜的是，能够结合所述生物标记物中的一种的每种材料是标记的。适宜的是，所述标记是共价连接的。适宜的是，所述标记是染料。适宜的是，能够结合所述生物标记物中的一种的每种材料是不同的抗体或其抗原结合片段，其中其抗原结合片段选自以下组成的组：fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv、fv、rigg和双抗体。适宜的是，抗体或其抗原结合片段是非人类抗体或其抗原结合片段。适宜的是，抗体或其抗原结合片段是重组子，例如由重组子核酸序列的体外表达制得。适宜的是，抗体或其抗原结合片段是纯化的和/或分离的。也可以使用用于检测的非抗体试剂，例如如上所述的蛋白质生物标记物(例如用于方法中的检测，作为设备中的材料，作为试剂盒中的试剂，或本发明的其他应用)，例如提供特异性结合肽的噬菌体展示颗粒、附属物(affimer)、核酸适配体、结合特定蛋白质或肽序列的核酸、具有特异性结合特性的小分子或所描述的生物标记物的其他此类特异性结合配偶体。特征现有技术方法已经鉴定了极大的特征，诸如需要分析50种或更多种单个生物标记物。本发明的优势是特征需要分析仅8个生物标记物。现有技术尝试涉及流式细胞术。然而，流式细胞术极其劳动密集、昂贵并且不适合提供床边/即时检验。现有技术方法涉及转录组(即mrna)的分析。然而，这些方法通常还涉及至少50个基因的评估，这是个问题。数据在实例部分中呈现，以支持本发明方法的auc/特异性/灵敏度。最重要的是，提供了阳性和阴性的预测值。在tb领域，甚至可以认为预测值比该方法的灵敏度/特异性更重要。本发明的优势是递送了极强的阳性和阴性的预测值。这在下面标题为“预测值/方法的应用”的部分中有更详细的讨论。发明人进行了大量且复杂的分析，涉及到达8种生物标记物特征的众多智力选择。特别地，值得注意的是此特定特征具有特殊属性。例如，它与7种生物标记物特征显著不同，这是不合适的。试图丢弃所公开的8种生物标记物中的任何一种的特征分析导致特异性下降约50％和/或预测值下降约25％。这些图清楚地说明，根据本发明的8种生物标记物特征的教导不仅仅是重复或任意选择，而且呈现临床上有用的信息，这是与甚至少一个标记物获得的信息相比的步骤变化。令人惊讶的是，可以以这种方式观察到这种尖锐和戏剧性的效果。适宜的是，特征包括8种生物标记物。适宜的是，生物标记物在下表中示出。参考序列适宜的是，感兴趣的生物标记物的参考序列如下表中所定义：所述序列在此通过引用并入本文。技术人员仅需要鉴定分析中使用的正确基因/蛋白质。所提供的指导并非旨在将本发明严格地限制于所提供的特定单个示例性序列。已知基因序列(以及由此而来的蛋白质序列)在个体之间变化，例如由于个体之间的等位基因变异或突变。所提供的信息是通过化验正确的基因来帮助操作者实施本发明。最终实际上化验了基因产物(诸如mrna或更合适的蛋白质)。因此，个体之间的次要或最小等位基因或突变差异并不重要，重要的是使用所提供的指导化验正确的基因(基因产物)。适宜的是，在使用生物标记物名称的情况下，这意味着来自上表的相应氨基酸或核酸序列。适宜的是，对于氨基酸序列，规范序列是优选的。适宜的是，对于核酸序列，最新的(例如编号最高的)核酸序列是优选的。应当理解，本发明可以同等地利用这些生物标记物的(多个)片段、(多个)变体或(多个)突变体的检测。适宜的是，任何这样的(多个)片段、(多个)变体或(多个)突变体与参考序列在所述(多个)片段、(多个)变体或(多个)突变体的全长上具有至少80％的序列同一性，适宜的是在所述(多个)片段、(多个)变体或(多个)突变体的全长上具有90％、95％、98％的序列同一性。数据库版本存储在数据库上的序列可以随时间变化。适宜的是依赖当前版本的(多个)序列数据库。或者，依赖于在递交日的强制发布。如技术人员所已知的，登录号可以是版本/日期登录号。当前数据库条目的可引用的登录号与上面一样，但省略小数点和任何后续数字，例如，对于vegf，版本/日期登录号是p15692-18；用p15692获取当前条目等。基因库是nih基因序列数据库，所有公开可获得的dna序列的有注释的集合(nationalcenterforbiotechnologyinformation,u.s.nationallibraryofmedicine8600rockvillepike,bethesdamd,20894usa；nucleicacidsresearch,2013jan；41(d1):d36-42)以及所提供的登录号与此相关，除非另有表现。适宜的是，所提及的基因库数据库版本是2015年10月15日，ncbi-genbank版本210.0。uniprot(通用蛋白质资源)是关于蛋白质的综合信息目录(‘uniprot：ahubforproteininformation’nucleicacidsres.43：d204-d212(2015).)。为避免疑义，依赖于uniprot版本2015_11。更详细地说，依赖于uniprot联盟欧洲生物信息学研究所(ebi)，sib瑞士生物信息学和蛋白质信息资源研究所(pir)的uniprot知识库(uniprotkb)版本2015_11(2015年11月11日)。治疗应当注意的是，tb的治疗为最少6个月的药物计划。这是昂贵的且对患者要求甚高。剂量必须非常有规律，诸如每周给予多次给药，理想地每天给予多次给药，这对于保健提供者及患者是沉重的负担。因此，避免对患者的误治疗，即对实际上并不患有tb的患者误开出tb药物，是本领域的一个问题。本发明通过对诊断(或辅助诊断)提供强大的工具来减轻这个问题。如果鉴于本发明的方法确定受试者患有tb，那么医师应该开出处方治疗tb。在一个实施例中，本发明提供治疗患者的方法，包括根据本文公开的方法确定他们是否患有tb，其中如果确定患者患有tb，则开出处方治疗tb，或更适宜地给予治疗。在另一个实施例中，本发明的方法用于帮助诊断在严格意义上的诊断步骤中不需要在场的患者(即，在该实施例中，本发明不针对严格意义上的治疗目的的诊断)；然后，医师可以在诊断和/或计划针对所述受试者的治疗时考虑由本发明提供的信息。因此，本发明的优势是避免了不必要的药物。在一个实施例中，本发明的测试将应用作为规则测试而不是排除测试。换句话说，如果使用本发明的方法来确定受试者患有tb，那么他们肯定应该接受tb治疗。在替代方案中，如果使用本发明的方法并且未确定受试者患有tb，那么进一步的研究可能是有用的-如果本发明的方法并不确定他们患有tb，可能不适合将受试者从可能患有tb中“排除”。根据“规则”测试，本发明的方法具有与本领域(细菌培养)中的金标准相当的表现。因此，本发明的优势是使用本发明方法的阳性发现提供了受试者患有tb并且应该治疗tb的非常高的置信度。适当的tb治疗符合世界卫生组织(who)的建议。who可能会不时修订其指南-适当的治疗为按照实施本发明时的指导原则来治疗受试者。更合适的是，该治疗符合本文件递交日期的指导原则。如果需要任何进一步的指导，最合适的治疗方法是根据who2010出版物“国家计划指南，第四版”isbn：9789241547833(例如http://www.who.int/tb/publications/9789241547833/en/)中的指南。该文件在此通过引入并入本文，特别是用于tb的特定治疗方案的教导。示例性治疗如下示出。适宜的tb治疗包括如who建议的4种抗菌药物的标准6个月疗程。适宜的是，tb治疗包括6个月的利福平。适宜的是，tb治疗包括用特定的抗-tb药物(前2个月使用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺和乙胺丁醇，随后4个月仅服用异烟肼和利福平)治疗六个月。适宜的是，患有tb的患者可以接受每日强化期，然后每周进行三次持续期[2hrze/4(hr)3]；适宜的是，直接观察每种剂量。在整个治疗期间每周三次给药[2(hrze)3/4(hr)3]可以用作替代方案，条件是直接观察每个剂量并且患者并不携带hiv或生活在hiv流行的环境中。适宜的是，不少于每周3次给药。适宜的是，每周给药3次或更多。最适宜的是，每天给药。最适宜的是，对于患有tb的患者的给药频率是在整个治疗过程中每天给药[2hrze/4hr]。适宜的是，如果患者携带hiv或生活在hiv流行的环境中，在整个治疗过程中每天给药。who治疗指南的总结(who2010出版物“国家计划指南，第四版”第五页)：表a对于新tb患者的标准给药方案和给药频率awho不再建议对于hiv阴性的，患有非空腔、涂片阴性的肺tb或者肺外疾病的患者在治疗强化期省略乙胺丁醇。注意：每天(而不是每周三次)强化期给药可有助于防止开始治疗异烟肼耐药性的tb患者中的获得性耐药性(参见附录2)用到的缩写：h＝异烟肼，r＝利福平，z＝吡嗪酰胺，e＝乙胺丁醇，s＝链霉素。以上的标准治疗并不适用于多药耐药性tb(mdrtb)。适宜的是，根据who指南，在治疗前进行药敏试验。如果对治疗失败的tb患者或其他患有多重耐药tb(mdr-tb)高可能性的患者进行治疗，应根据who建议的经验性mdr方案进行适当的治疗。最适宜的是，本发明应用于“新”tb，即根据本发明测出的新患者。进一步或额外的治疗可能取决于所做的任何诊断；如果是细菌性呼吸道感染，通常是抗生素疗程。给药可以通过片剂或注射进行，例如肌内注射。对于hrze/hr方案，适当的给药是通过片剂进行的。典型的片剂包括以下剂量：h75mg+r150mg+z400mg+e275mg片剂。根据受试者的体重(和/或必要时的任何其他相关因素)给受试者施用或开出许多片剂的处方以达到正确的剂量。该数字可包括片剂的分数。对于30-39kg体重的受试者的典型剂量是在治疗的前2个月中每天2片的h75mg+r150mg+z400mg+e275mg，接着是在治疗3至6个月期间1.5片的h150mg+r150mg。精确剂量的确定(例如基于体重)是医师的事情。统计分析发明人考虑了统计分析的标准方法。然而，发明人已经洞察到标准回归模型倾向于导致过度乐观。考虑到由大量细胞因子协变量引起的数据的多维性，这一点尤其如此，其中一些细胞因子协变量彼此高度相关。由于各种原因，发明人使用了不同的方法，同时试图缩小标记物组(即降低维数)，同时对统计分析中的收缩进行处罚。不希望受理论束缚，他们的推理是如果特征评估两个在相同方向上移动的标记物，则从两个可比较的来源定性地获得相同的信息。这提供了消除这些标记之一的机会，从而简化了特征而不损害所获得的信息的质量。这样做的推论是，如果两个分析在两个不同的方向上提供信息，那么可以看出这可以提供额外的信息来改进特征。以这种方式，发明人试图去除可能被认为在统计学上彼此相关的任何标记物，从而得到改进的经验(减少)特征，但所述特征仍然递送了优异的诊断特征。标记物选择发明人承担了无偏见的标记物选择。基于方法的现有技术倾向于使用“病例对照”方法。简而言之，这可能的特点是将tb作为一个需要解决的问题，选择健康的患者，选择患有tb的患者，并将健康患者与患有tb患者进行比较。相比之下，发明人设计了一种嵌套在前瞻性群组(即嵌套病例对照)方法中的病例对照研究。他们选择一群组儿童使用相同的选择过程来识别不同地理位置的儿童。只有到那时，他们才能识别在那些群组中患有tb的患者和没患tb的患者。更重要的是，发明人选择比较tb与od(即“其他呼吸系统疾病但不是tb”)。这是因为与那些表现为不是tb的其他疾病的患者相比，识别患有tb的那些患者是关键的临床决策。因此，将tb患者与“其他疾病”患者区分开来可以认为是本领域的一个问题。现有技术研究的另一个缺点是它们倾向于基于已经公开或与tb相关的生物标记物，例如细胞因子。相反，发明人采用完全无偏见的方法并且没有通过与tb相关联来挑选生物标记物。他们进行了盲法分析，并得出了8种生物标记物的特征，而不知道这些生物标记物每个是什么。然后，发明人才在其特征中分析生物标记物的身份。这个方法令人惊讶的一个实例是通过考虑ifn-γ。该领域中的观点是ifn-γ与tb有关。的确，现有技术方法尝试使用ifn-γ和/或ip-10作为tb的生物标记物。这是非常令人惊讶的，本文中所教导的该生物标记物特征并不包括ifn-γ。quantiferon(‘qft’-可从qiageninc.商购获得)是干扰素-gamma(ifn-γ)释放化验，通常称为igra，并且是结核菌素皮肤测试(tst或mantoux)的现代替代物。总之，qft测量细胞介导的对非常特异的tb抗原的免疫应答(细胞因子)。通过将全血(1ml)收集到三个血液收集管中的每一个中来进行测试。当在qft中用结核分枝杆菌特异性抗原刺激感染患者的血液时，它们的t细胞通过分泌称为ifn-γ的细胞因子而起作用。使用灵敏elisa测定血浆中的ifn-γ浓度。因此，quantiferon(‘qft’)是一种商业化验，在用m.tb特异性抗原刺激血液后仍测量ifn-gamma。在现有技术中还研究了一些ip-10化验。然而，虽然据报道ip-10比ifn-gamma更具强大(即在刺激后以更高的水平释放)，因为它本身无法区分tb疾病和tb敏感，类似于ifn-gamma，这是本领域中的一个问题。有利地，在本发明中，所教导的是标记物的组合，当它们一起使用-而不是单独使用时-可以将tb与od区分开。这是基于发明人的观点，即鉴于tb疾病的复杂性，标记物的组合而不是单个标记物具有更高的功效和特异性，以区分tb与tb敏感和/或其他疾病。更详细地，本发明人通过分析各种细胞因子和趋化因子并将每种细胞因子和趋化因子的值转化为十分位数来采取不寻常的方法。以27种细胞因子/趋化因子作为候选物为开始，每种转化为10个十分位数，每个受刺激的患者为270，对于未受刺激的每个患者为270。这代表了一种分类(而非连续)的方法，这种方法本身就是所采取的创新方法的关键部分。这种方法以前从未应用于细胞因子分析。这具有包括消除所使用的生物标记物中偏向或选择的混杂效应的优点。由27例初始候选物组成的小组之前与tb没有任何关联。例如，它们不是tb特异的。最多，它们可能视为“免疫小组”。它们仅仅是淋巴细胞中涉及的标记物，作为商业试剂盒的一部分，其不以任何方式销售或针对tb。为了说明这些发现有多么令人惊讶，即使发明者也没有预测到通过使用这种方法他们将发现什么。在一个实施例中，可以按如下进行分析：频率分布>10个十分位数>制得每个二进制分位数。在一个实施例中，可以按如下进行分析：频率分布>十分位数>10-相同大小分位数>使用每个分位数作为截止以产生二进制变量。应当注意的是，每种细胞因子可以在不同浓度范围内存在，使得十分位数中的每个在各个生物标记物之间可以不相同。然而，将每个单独的生物标记物的分布根据其自身存在时的浓度范围适宜地分成10个十分位数(即10个相等大小的分位数)；然后，为患者确定的每个生物标记物值从该频率分布转换成十分位数。应当注意的是，本发明旨在获得受试者是否患有tb或od的临床决策。可以将本发明用作筛选工具，例如群体筛选试验。本发明的优势在于它有助于帮助临床决策患者是否患有tb或od。十分位数确定根据标准统计技术生成十分位数。十分位数的生成是一种数学频率过程，可以由任何统计软件导出或生成。当从几个受试者测量时具有定量值的特定变量(例如测量的细胞因子)将具有频率分布，然后其用于产生由10个相等大小的分位数组成的十分位数。在需要任何进一步指导的情况下，如下面的实例部分中所描述的产生最合适的十分位数。受试者本发明可以应用于从新生儿往后的任何受试者。本发明可以应用于成年人或儿童。适宜的是，受试者是18岁或更年轻；适宜的是，16岁或更年轻；适宜的是，15岁或更年轻；适宜的是，7岁或更年轻；适宜的是，6岁或更年轻；适宜的是，5岁或更年轻；适宜的是，2岁或更年轻。应当注意的是，大多数免疫系统从2-5岁往后作为“成年人”发挥作用。因此，适宜的是，受试者至少是2岁-5岁。适宜的是，受试者至少是2岁。适宜的是，受试者至少是3岁；适宜的是，至少是4；最适宜的是，至少是5岁。适宜的是，受试者是儿童。适宜的是，受试者是16岁或更年轻。适宜的是，受试者是15岁或更年轻。适宜的是，受试者是2-16岁；适宜的是，3-16岁；适宜的是，4-16岁；适宜的是，5-16岁。适宜的是，受试者是2-15岁；适宜的是，3-15岁；适宜的是，4-15岁；适宜的是，5-15岁。适宜的是，待测试的受试者表现出以下至少一种症状：咳嗽、体重减轻、出汗、腺体肿胀和任选的败血症。本发明可以应用于胸内tb。本发明可以应用于肺tb。本发明可以应用于肺外tb。本发明可以应用于未感染hiv的患者。本发明可以应用于感染了hiv的患者。应当注意的是，因为该方法基于免疫应答，cd4计数为50或更少的任何受试者不可能显现应答。因此，适宜的是，受试者具有51或更高的cd4计数。以供参考，健康人的正常cd4计数为接近1000。检测适宜的是，通过本领域中的合适的方法检测本文描述的生物标记物。例如，可以通过特异性识别所述生物标记物的一种或多种抗体来检测生物标记物。例如，能够通过如上所描述的抗体或其抗原结合片段检测生物标记物，其中其抗原结合片段选自以下组成的组：fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv、fv、rigg和双抗体。评估抗体或其抗原结合片段的结合以检测标记物的模式是操作者选择的问题。在需要任何指导的情况下，elisa可以用于所识别的细胞因子中的每种，例如针对每种生物标记物的一种elisa。以下是合适的elisa试剂的实例。包含在本发明的特征中的细胞因子的elisa可以从以下公司商购获得，带有适当的示例性产品名称/细节：来自r&dsystemsuk的quantikinesandwichelisa，19bartonlane，abingdonsciencepark，abingdon，ox143nb，unitedkingdom(tel+44(0)800373415)。来自ebioscience，ltd(爱尔兰，英国)的人类platinumelisa或高灵敏度elisa，2ndfloor，titancourt，3bishopsquare，hatfield，al109na，unitedkingdom。来自bdbiosciences的bdopteia试剂盒，edmundhalleyroad，oxfordsciencepark，oxford，ox44dq(电话：+441865781666；传真：+441865781627)。如技术人员将意识到的，每种细胞因子的单个elisa可能是费力的，和/或需要更大的样本量。因此，在可能的情况下在多重或单个样本中进行检测是有利的。这提供了诸如体积小的优点(对于期望较小体积的血液/血清的儿科测试尤其重要)和细胞因子的组合(完成测试的劳动力较少)。有许多合适的多重试剂盒的商业供应商，其可用于检测特征的生物标记物，例如：milliplexmap人类细胞因子/趋化因子磁珠组-免疫学多重化验，目录号：hcytomag-60k，购自merck-millipore，suite21，building6，croxleygreenbusinesspark，watford，hertfordshirewd188yh，unitedkingdom。来自r&dsystemsuk的人类luminex性能化验基础试剂盒，a组[目录号luh000]，19bartonlane，abingdonsciencepark，abingdon，ox143nb，unitedkingdom(电话：+44(0)800373415)。来自ebioscience，ltd.(爱尔兰，英国)的人细胞因子/趋化因子/生长因子组1(45plex)，(目录号：epx450-12171-901)，2ndfloor，titancourt，3bishopsquare，hatfield，al109na，unitedkingdom。最适合使用的抗体可以是商业上可获得的bio-rad人类细胞因子th-1/th-227-plex试剂盒(目录号#m500kcaf0y，来自bio-radlaboratoriesltd.，bio-radhouse，maxtedroad，hemelhempstead，hertfordshire，hp27dx，unitedkingdom)。本发明的特征的细胞因子的最适合检测是使用该试剂盒的检测/化验。重要的是注意到本领域中普遍观点为：需要细胞的刺激用于分析。该刺激可以用细菌来展示，或者可以用抗原或其他合适的刺激形式来展示。但是，应当注意的是，这些类型的刺激都直接针对分析回忆应答。本发明的优势是分析未刺激样本。特别地，优势是样本来自未刺激的血液。特别地，当研究8个生物标记物的关键组的时候，本发明适宜地省略了刺激步骤；本发明适宜地并未包括刺激步骤；本发明适宜地排除了刺激步骤。在一些实施例中，可以采用第9个或进一步的标记物-如果合适可以采用刺激步骤用于这样进一步的(多个)标记物。最适宜的是，本发明省略了刺激步骤。最适宜的是，本发明未包括刺激步骤。最适宜的是，本发明排除了刺激步骤。核酸检测例如，可以以核酸形式检测生物标记物，例如，通过检测编码生物标记物的一种或多种mrna。如果技术人员期望通过微阵列方法读出/检测核酸，可参考andersonetal2014(nengljmed.2014may1；370(18):1712-23‘diagnosisofchildhoodtuberculosisandhostrnaexpressioninafrica.’iluluconsortium；kidstbstudygroup。)适宜的是，在实验室环境中开发mrna技术。概括地，mrna检测可以包括以下步骤：·rna的稳定-可以用特定试剂完成，·rna的提取，·转录至cdna，·扩增，·阵列，·数据读出。当然，本领域技术人员将意识到，一些步骤是可选的或可以合并，例如如果可以直接在样本上进行转录，可能并不需要稳定/提取。例如，如果直接化验扩增的材料，可能并不需要阵列。因此，本质上所需的步骤是：·核酸的提取·核酸的化验以确定感兴趣的标记物的mrna表达水平·数据读出。对于多重检测，适合使用对目标基因/扩增目标特异的荧光寡核苷酸探针。taqman探针通常用于多重检测，但如果不需要多重检测也可以使用。方案如制造商例如appliedbiosystems(5791vanallenway，carlsbad，california92008，us)所陈述的。不同的染料可用于荧光探针；根据缓冲条件和热循环仪类型可能有用的实例如下表所示(qiageninc的表格)：方案是本领域中公知的，例如根据制造商的说明(appliedbiosystems(5791vanallenway,carlsbad,california92008,us)使用stepone和/或stepone+实时pcr系统。如果不需要多重检测，可以使用其他化验，例如在逆转录后，使用结合双链dna并变成荧光的染料。例如可以使用sybrgreen1(qiageninc./qiagenltd.skeltonhouse,lloydstreetnorth,manchesterm156sh,uk)。可以设计本发明中有用的引物探针化验，或者购买针对感兴趣的基因目标预先设计好的，即本发明的生物标记物。例如，可以使用针对sybrgreen1定制设计(“designandoptimizationofsybrgreenassays”)的appliedbiosystems/thermofisherscientific的(5791vanallenway,carlsbad,california92008,us)方案，包括本文讨论的可公开获得的引物设计工具。该文件在此通过引入并入本文，特别是用于引物/探针设计方案和核酸检测教导。在需要任何进一步指导的情况下，参考下面的实例部分。分位数/十分位数的确定适宜的是，将确定的每个生物标记物浓度转换成十分位数值，包括以下步骤：(ci)将确定的每种生物标记物的浓度与所述生物标记物浓度的参考频率分布进行比较；以及(cii)从所述生物标记物浓度的频率分布中读出十分位数值。“频率分布”显示了分为互斥类的数据的汇总分组和类中出现的次数。因此，即使用诸如30的少量数据点(例如，一个班级中30个孩子的考试分数)，也可以准备频率分布。使用的受试者的数量(即数据点)越大，分布对于真实的总体就越有代表性，即频率分布将分布得更正常。生物变量例如体重、身高、血压、血红蛋白浓度、血液中的电解质、细胞因子测量等通常都是倾斜的。因此，为了使用例如正常直方图获得这种生物变量的正态分布曲线，需要非常大量的数据点，这可能是有问题的。因此，使用诸如kernel之类的非参数方法，其为数据平滑密度估计量。当我们想要以合理的良好样本大小(例如100或更多)呈现这种数据的分布表示时，这尤其有用。因此，当本文中提及“频率分布”时，这可以适宜地包括非参数等效物，诸如非参数密度估计量，诸如数据平滑密度估计量，最适宜的是是核密度估计量。考虑图2至图9，将y轴适宜地标记为“密度”，因为它们表明核密度估计。更详细地，核频率分布是用于显示频率分布的数据平滑统计方法。不像普通的“直方图”，它是一种非参数方法，使其非常适合我们的数据类型，与大多数生物数据一样，它不遵循正常的高斯分布。基本直方图以数量或比例显示频率，并且直方图的问题包括它不是平滑的并且取决于可以任意选择的区间(bin，即条)的宽度和区间的终点。然而，核密度估计通过假设在特定范围内的细胞因子测量值的间隔中没有间隙来消除对区间终点的依赖性，从而给出平滑的密度估计。图2至图9的y轴可简单地概括为：“每个单独的标记物的概率密度函数。”适宜的是，通过测量多个受试者例如最少100个受试者中的生物标记物的浓度，并将这些测量值编译成频率分布(或核密度估计)，来产生参考频率分布(或核密度估计)。或者可以使用本文中图2-9中呈现的频率分布(核密度估计)。适宜的是，步骤(c)将(b)中确定的每个浓度转换成十分位数值包括以下步骤：(ci)将(b)中确定的每种生物标记物的浓度与相应的选自图2-9的所述生物标记物浓度的参考频率分布/核密度估计进行比较；以及(cii)从所述生物标记物浓度的频率分布/核密度估计中读出十分位数值。在一个实施例中，可以用表示为样本中的(多个)生物标记物的绝对浓度的绝对截止来扩增或替代十分位数截止/分位数截止。示例性绝对截止值在下表中示出：在一个实施例中，可以用感兴趣的特定分位数的浓度范围来扩增或替代十分位数截止/分位数截止，其表示为样本中的(多个)生物标记物的绝对浓度范围。示例性的浓度范围在上表中提供。即时检验在很多实施例中，技术操作者可以选择以分析实验室或试验设备中的标记物的浓度。本发明还可以应用于即时检验。适宜的是，本发明也可以应用作床旁检验。当本发明是即时检验/床旁检验时，合适的样本为血液或血浆。当本发明是即时检验/床旁检验时，适宜的是，标记物以蛋白质形式进行分析。当本发明是即时检验/床旁检验时，适宜的是，检测为免疫学检测。当本发明是即时检验/床旁检验时，适宜的是，检测为侧流化验的格式。预测值/方法的应用下表提供了生物特征的预测值的附加结果。我们显示并比较了生物特征的ppv和npv与现有技术方法。我们进一步显示了，其与培养的金标准具有可论证的、可相比的表现。本发明的高特异性和阳性的预测值使得其自身改变了治疗决策。这使得能够针对根据本发明所检测的tb准确开出处方。这也可以避免在非必须药物的处方中的资源浪费。这进一步证明了本发明的用处。进一步应用从未刺激的样本有利地评估8个生物标记物的关键组。但是，在一些实施例中，可能有助于进一步评估第9个或进一步的标记物，适宜的是，这样的第9个或进一步的标记物包括经刺激的标记物(诸如ec刺激的vegf)。适宜的是，ec刺激的vegf的截止是十分位数2。为避免疑义，ec刺激的vegf的‘vegf’生物标记物的细节如上述在本发明(‘vegf’)的8个生物标记物的关键组中。一种用于在受试者中辅助诊断tb的方法，所述方法包括：(a)提供来自所述受试者的样本，所述样本选自：血液、血清和血浆组成的组；(b)确定以下生物标记物在所述样本中的浓度：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf；(c)将(b)中确定的每种生物标记物的浓度转换为十分位数值；以及(d)通过将(c)的十分位数值与下面的特定分位数截止值进行比较，将每个十分位数值转换为二进制存在或不存在：其中，将匹配或超过特定分位数截止值的十分位数值转换为生物标记的二进制存在，并将低于特定分位数截止值的十分位数值转换为生物标记的二进制不存在；其中检测所述生物标记物中的每种的存在表明该受试者患有tb的可能性增加。一种用于在受试者中区分tb与od的方法，所述方法包括：实施上述步骤(a)至(d)其中检测每种所述生物标记物的存在表明该受试者患有tb。一种收集用于在受试者中诊断tb的信息的方法，所述方法包括：实施上述步骤(a)至(d)其中检测所述生物标记物中的每种的存在，这识别该受试者患有tb。一种用于在受试者中诊断tb的方法，所述方法包括：实施上述步骤(a)至(d)其中检测所述生物标记物中的每种的存在，这提供了该受试者患有tb的诊断。一种用于选择受试者以接受tb治疗的方法，所述方法包括：实施上述步骤(a)至(d)其中检测所述生物标记物中的每种的存在，这选择所述受试者接受所述治疗。一种方法，包括选择受试者以接受tb治疗的步骤，通过：实施上述步骤(a)至(d)其中检测所述生物标记物中的每种的存在，这选择所述受试者接受所述治疗；以及向所述受试者给予所述治疗。在受试者中治疗tb的方法，包括对确定具有以下生物标记物中的每种的受试者给予2hrze/4hr的方案(2个月hrze随后4个月hr，其中h＝异烟肼，r＝利福平，z＝吡嗪酰胺，e＝乙胺丁醇)：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf。本发明还涉及所述方法进一步包括在给药步骤之前对受试者进行测试以确定所述受试者具有以下生物标记物：il-1ra、il6、il-7、il-8、il-12p70、碱性fgf、ip-10和vegf。合适的测试为通过实施上述步骤(a)至(d)来进行。至于如上描述的本发明的实施例至少部分地使用软件控制的数据处理装置来实施，应当理解，提供这种软件控制的计算机程序，以及通过其来储存这种计算机程序的存储介质可以设想为本发明的某些方面。显然，在本发明的几种方法或过程中，一个步骤(通常步骤(a))包括提供来自受试者的样本-显然该步骤通常不使用软件控制的数据处理装置进行；在使用软件控制的数据处理装置而实现的实施例中，适宜地手动执行或省略该步骤。因此，本发明涉及一种诸如计算机的装置，包括配置为执行如上所描述的方法的逻辑、电路或代码。因此，本发明涉及一种可操作的计算机程序产品，当在计算机上执行时可进行如上所描述的方法。进一步的特别和优选的方面在伴随的独立权利要求和从属权利要求中示出。从属权利要求的特征可以适宜地与独立权利要求的特征组合，并且可以与权利要求中明确阐述的那些以外的特征相组合。在将装置特征描述为可操作以提供功能的情况下，应当理解，这包括提供该功能的装置特征或者适于或配置为提供该功能的装置特征。附图说明现在将参考附图以实例的方式描述本发明的实施例，其中：图1显示了具有细胞因子协变量的最佳lasso模型，根据年龄和出身进行了调整。小组a、b、c：根据年龄和出身调整的最佳lasso模型，通过训练组中的5倍交叉验证确定。小组d、e、f：框和须状图，显示在细菌学证实的tb中的结核病的概率，在训练组中临床诊断的tb和od受试者，作为由所识别的生物特征所预测。小组g、h、i：auc显示对识别的生物特征的鉴别能力，以在独立测试组中从od分类确诊的tb。图2显示了il-1ra的频率分布图3显示了il-6的频率分布图4显示了il-7的频率分布图5显示了il-8的频率分布图6显示了il-12p70的频率分布图7显示了碱性fgf的频率分布图8显示了ip-10的频率分布图9显示了vegf的频率分布图10显示了侧流设备。图11显示了侧流设备的多重检测格式。实例方法简要群组描述积极跟踪小于15岁的那些在家庭环境中暴露于成年人感染tb情况的儿童，并筛选在各自的家庭中提示tb疾病的症状。对患有疑似胸内tb疾病的那些随后进行进一步详细的临床评估和调查以确定他们的tb疾病状态。使用免疫流行病学方法将在冈比亚(n＝150)和英国(n＝23)中前瞻性招募的总共173例接触疑似胸内tb疾病的儿童接触纳入生物特征发现实验中。全血刺激化验(wba)对于冈比亚群组，在招募的静脉穿刺后四小时内进行了wba。将100μl未稀释的肝素化全血与m.tb抗原esat-6/cfp-10融合蛋白(ec；10μg/ml终浓度，由professortomottenhoff,leidenuniversitymedicalcenter，thenetherlands友情提供)以及阳性(pha-l，sigmachemicals，uk；10μg/ml终浓度)和阴性(rpmi1640培养基；biowittaker，verviers，belgium)对照一式两份进行温育。在37℃下用5％co2温育过夜后，收集上清液，在分析前合并两份并在-20℃储存。由bk进行的英国家庭接触研究的同等设置中，将样本添加到该群组中。对于来自英国群组的儿童，我们还获得了相关的人口统计学和临床数据以及来自igra(quantiferon-tbgoldin-tube(qft-g)测试(cellestis,australia)的衍生上清液。与我们的内部化验相似，这种商业上可用的体外ifn-γ释放化验分别在含有m.tb抗原(esat-6，cfp10和tb7.7)、阳性(phytoheamaglutinin-l)和阴性(nil)对照的三个单独管中使用新鲜全血的刺激。将这些样本冷冻运送到冈比亚进行联合分析。来自冈比亚儿童的wba上清液和来自uk群组的儿童的qft上清液用于多重细胞因子检测化验(mca)。mca在冈比亚的mrctb免疫学实验室现场进行，冈比亚和英国样本随机分布在多重板上。多重细胞因子检测化验(mca)我们使用来自冈比亚儿童的未刺激和ec刺激的wba上清液和来自英国群组儿童的qft上清液(来自抗原和无qft管)，通过luminex进行了全面的mca。使用bio-radhuman细胞因子th-1/th-227-plex试剂盒根据制造商的说明并如前所描述的[1]来分析培养物上清液。评估的细胞因子是：il-1b、il-1ra、il-2、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、il-9、il-10、il-12p70、il-13、il-15、il-17、eotaxin、fgfbasic、g-csf、gm-csf、ifnγ、il-10、mcp-1(mcaf)、mip-1a、mip-1b、pdgf-bb、rantes、tnfα和vegf。在预湿润滤板后，向每个孔中加入50μl珠悬浮液并洗涤两次。然后加入50μl单独测试和一式两份分别测试的样本和标准品，将板密封并在1100rpm下振荡30秒，然后以300rpm温育1小时。将板洗涤三次，加入25μl预稀释的检测抗体，摇动板并在黑暗中以300rpm温育30分钟。洗涤后，向每个孔中加入50μl的1x链霉亲和素-pe，并以300rpm振荡温育10分钟。将板再次洗涤并重悬浮于125μl化验缓冲液中，密封，混合并立即使用bioplex管理器软件(版本4.0；bio-rad，usa)和低光电倍增管(pmt)设置在bio-plex分析仪上读数。低于检测水平的细胞因子浓度-在bioplex软件中报告为‘oor’-在分析中计算为零。统计分析我们分析了从未刺激和ec刺激的全血培养上清液的多重细胞因子化验(mca)获得的数据，用于识别与儿童中tb相关的宿主特异性多细胞因子生物特征。对于该分析，对来自27重mca的未刺激的和抗原特异性细胞因子应答作为单独的变量而进行分析。我们将研究对象随机分配到训练组(80％的受试者)和独立的试验组(20％)。然后，我们使用广义线性模型(glm)应用最小绝对收缩和选择算子(lasso)惩罚来拟合训练组中的逻辑回归模型，以调整年龄和样本来源，最初使用细菌学证实的tb(金标准)与模拟tb但不是tb(od组)作为二元结果变量的其他呼吸系统疾病相比较。lasso模型对回归系数的绝对大小应用最大惩罚可能性，将它们收缩到零，即对归因系数应用l1范数惩罚。该过程导致变量选择(一些回归系数等于零)和非零回归系数的估计收缩为零。这种方法适用于我们的细胞因子数据，其中有很多可能具有高度相关性的测量。我们将细胞因子协变量拟合为分类和连续变量以及两者的组合。通过将每个细胞因子值的频率分布划分为10个相等大小的分位数，将细胞因子值分成十分位数来构建分类细胞因子协变量，其使用10个分位数中的每一个作为截止将其作为每个细胞因子的10个二进制变量拟合到模型中。使用训练组中的5倍交叉验证来确定最佳lasso模型，随后将其应用于在原始的独立测试组中从od分类出细菌学确诊的tb。将最优模型定义为具有最高惩罚参数(‘lambda)的模型，产生最小的预测误差和最佳平均交叉验证auc。交叉验证过程考虑并取代了调整的经典方法或多个测试。此外，它自然防止过度拟合，并且它是一种评估模型将如何推广到独立数据集的方式。通过估计tb的预测概率和接收器操作特性曲线下面积(auc)来评估最佳lasso模型的预测表现。结果总体而言，来自组合群组的53例儿童诊断为患有tb并开始接受标准tb治疗；24例患有细菌学证实的tb，29例基于临床和放射学特征诊断为tb，没有阳性微生物学检测。诊断并针对od治疗一百二十人。详细地，150例冈比亚儿童中有35例患有tb，包括16例经细菌学证实和19例临床诊断tb病例，而115例患有od。在来自英国的23例儿童中，18例诊断为患有tb(8例确诊，10例临床诊断为tb)，而5例患有od。从冈比亚或英国招募的儿童都没有感染hiv。表1显示来自冈比亚和英国的儿童基线概况的分布具有可比性。表1按源位置的儿童的人口统计概况在确诊的tb与od中细胞因子和趋化因子产生的模式通过多重线性回归分析，将未经刺激的上清液和经过细菌学证实的tb儿童的ec刺激上清液的27重多重细胞因子分析获得的细胞因子和趋化因子的浓度与患有od的儿童的水平进行比较，并根据年岁和出身进行调整年龄。将每种细胞因子或趋化因子的未刺激的和ec特异性值(即ec刺激的减去未刺激的阴性对照值)作为单独的变量进行分析。表2.27个标记物的浓度(pg/ml)的平均差：确诊的tbvsodω在年岁和出身上进行调整年龄95％ci＝平均差的95％置信区间如表2所示，在分析的27种细胞因子和趋化因子中，与患有od的儿童相比，il1ra、il7、il12p70、il13、il15、il17、eotaxin、碱性fgf、gcsf、ifn-γ、ip10、mip1b和vegf的未刺激浓度均显著高于患有确诊tb的儿童。在所有分析物的ec特异性浓度中，只有il2和il7在两组之间显著不同。此外，我们发现，对于英国儿童的所有分析物，与冈比亚儿童相比，未受刺激的样本中所有分析物的浓度明显更高，无论年龄或诊断(对于所有，p值<0.001)，除了未受刺激的il7值，其中没有显著差异(数据未显示)。相反，与冈比亚儿童相比，英国儿童的分析物的ec特异性浓度明显更低，无论年龄和诊断(对于所有，p值<0.001)，但除了il2、il5、il7、il13、ifn-γ和rantes的ec特异性浓度，其中没有显著差异。识别用于诊断儿童tb的宿主特异性生物特征使用具有lasso惩罚的glm来拟合二进制逻辑回归模型，在年岁和出身上进行调整年龄以及在训练组中进行5倍交叉验证，九种分类细胞因子的组合通过0.82的平均交叉验证auc最佳地预测tb或od。九种细胞因子中的每种均为具有截止值的二进制变量。细胞因子-对于每种具有括号中的特定的分位数截止值-为：未刺激的il-1ra(3)、il6(6)、il-7(8)、il-8(9)、il-12p70(9)、碱性fgf(3)、ip-10(4)、vegf(9)和ec-刺激的vegf(2)。当应用于独立测试组时，该模型可靠地将确诊的tb从od分类出，其auc为0.91(95％ci0.80-1.0)，如图1中所图解描述的。诊断准确性和多细胞因子生物特征的附加值生物特征中每种细胞因子的分位数特异的截止值使我们能够将生物特征转换为二进制-阳性或阴性-测试。我们研究了作为两个单独的变量的生物特征的诊断准确性，即“生物特征1”(所有9种识别的细胞因子的组合)和“生物特征2”(来自未刺激上清液的仅8种细胞因子的组合)。当我们将新型多细胞因子生物特征的结果与疾病确定性分类(即细菌学证实的tb(＝确诊的tb))、临床诊断的tb(＝可能的tb)和由who[2]定义的其他非tb的呼吸系统疾病(od)进行比较时，‘生物特征1’在8％的确诊tb和7％临床诊断tb病例中呈阳性。然而，‘生物特征2’具有相对较高的敏感性，分别在21％和24％的确诊和临床诊断的tb病例为阳性结果。两种生物特征版本在120个od病例中的119个中均为阴性，给出了99.2％的非常高的特异性(表3)。表3：相对于tb疾病确定性分类的生物特征的表现+＝测试阳性；–＝测试阴性；％＝列百分比，即n/n(*w.h.o.结核病的定义和报告框架-2013版,geneva,switzerland.www.who.int/iris/bitstream/10665/79199/1/9789241505345_eng.pdf[accessed03december2014])使用所有诊断患有活动性tb疾病的儿童的复合参考标准，在未受刺激的上清液中仅来自标记物的‘生物特征2’在所有53例诊断患有活动性tb疾病的儿童中有12例呈阳性，给出23％的敏感性(95％ci12-36)。作为个体测试，‘生物特征2’的敏感性显著高于涂片镜检的敏感性(5.7％；p值＝0.020)，但与m.tb培养的敏感性相当(35.9％；p值＝0.127)。‘生物特征2’和涂片镜检结合在53例患有活动性结核病的儿童中有15例阳性，敏感性为28.3％，明显高于单独涂片镜检的灵敏度(5.7％；p<0.001)。类似地，‘生物特征2’与m.tb培养结合的灵敏度为49.1％，显着高于单独使用m.tb培养的灵敏度(35.9％；p<0.001)。‘生物特征2’结合m.tb培养的敏感性显著高于‘生物特征2’结合镜检(p<0.001)，但与‘生物特征2’、镜检和m.tb培养组合的敏感性相当(p＝0.320)。将‘生物特征2’与这些诊断测试结合的使用不会导致测试的特异性发生任何变化。总结由于诸如ifn-γ的宿主免疫因子已被证明是重要的，但不足以证实或排除tb[3,4]，本研究的目的是研究ifn-γ以外的细胞因子，这可能有助于在冈比亚和英国儿童中区分tb与od，因为这两个临床表现的区别对于开始正确的治疗非常重要。以前的研究报道了其他细胞因子，诸如tnf-α、il-12(p40)、il-6、il-10、il-18和il-17、fgf和vegf，已发现其在针对m.tb和/或区分tb与od[1,5,6]的免疫反应中具有重要作用。我们识别了一种独特的，分位数特异性的9-细胞因子生物特征，无论儿童的年龄和出身如何，都能最佳地区分细菌学证实的tb与od。生物特征还预测了患有临床诊断的tb的儿童中活动性tb疾病的可能性，这与细菌学证实的tb病例具有可比性。具体来说，我们使用年龄和出身调整的lasso回归模型来识别未受刺激的il-1ra、il-6、il-7、il-8、il-12p70、basicfgf、ip-10、vegf和ec刺激的vegf的分位数特异性组合，其在独立测试组中用0.91的auc最佳地区分细菌学证实的tb与od。该生物特征的表现与临床结果组中对m.tb的敏感性无关，而生物特征中9种细胞因子中的8种来自未刺激的上清液。我们研究的一个主要优势是在专门的儿科活动病例发现研究中使用的前瞻性方法，而我们群组中确定的生物特征包含已知与tb免疫密切相关的细胞因子。我们分别研究了8种细胞因子生物特征的诊断准确性，其仅包括来自未刺激上清液的标记物，以及我们完整的9-细胞因子生物特征，通过根据who病例定义和所有被诊断患有活动性tb疾病的儿童的复合参考标准，将其结果与疾病确定性分类进行比较。我们发现虽然未刺激的8-细胞因子生物特征具有比完整的9-细胞因子生物特征相对更高的敏感性，但两种生物特征版本都将活动性tb疾病与od区分开来，具有99.2％的非常高的特异性。在我们的研究中，相对于m.tb培养，未刺激的8-细胞因子生物特征在所有被诊断患有活动性tb的儿童中检测到相当数量的tb病例，并且当与常规tb诊断测试相结合时证实了实质性的附加值。它表现出相对较高的特异性，但相对于基于51-全血基因转录的风险评分，其灵敏度较低，该转录是在非洲南部和东部的多国儿童tb生物标记物以及在抗原刺激的成年冈比亚人的全血上清液中的tnf-α、il-12(p40)和il-17的三种标记物的组合研究中识别的[1,7]。然而，在冈比亚成人的另一项研究中，这种儿科生物特征的特异性与体外痰液样本中il-13、fgf和ifn-γ的组合相当，导致96％正确区分出连续招募的培养-确诊的tb病例与od，敏感性为85％，特异性为96％[6]。许多因素使得这种未受刺激的多细胞因子生物特征成为在高tb负担国家使用的特别有前途的方法。首先，成分细胞因子中每种的分位数特异性截止值意味着读数可以很容易地转换成具有阳性或阴性结果的二进制测试，这使得它更容易解释。其次，这种多细胞因子生物特征仅来源于未刺激上清液中的标记物，具有与m.tb培养相似的流行病学特性，但可能不会像培养一样具有同样的时间延迟或污染风险。第三，它具有明显的潜力，可以减少发展中国家初级保健机构中儿童tb疾病的推定治疗，在这样的地方tb疾病诊断主要基于使用涂片镜检，以及在具有x射线、xpert和/或培养设施的转诊中心。这是因为当与常规诊断测试结合使用时，认为患有活动性tb疾病的儿童数量大幅增加。第四，这种未受刺激的多细胞因子生物特征可以直接在血清或血浆样本中测量，而无需在实验室中进行抗原刺激和温育所需的额外成本，培训或基础设施。因此，8-细胞因子生物特征是本发明最优选的实施例。实例2：基于核酸的检测在这个实例中，我们描述了样本的处理，以通过核酸检测如rna(mrna)检测说明本发明/基因签名在tb辅助诊断中(诸如儿童tb)中的应用。1.样本采集将血液样本采集到含有rna稳定剂的管中，诸如paxgene管或tempus管。或者，将trizol加入样本中。这样的样本可以储存在冰箱或冷冻箱中直到处理。如果存储在冰箱中，则存储时间为数天，如果存储在冷冻箱中，则存储时间可以是数月。2.样本处理取决于采集管和稳定剂，根据制造商的说明选择和使用合适的市售rna提取试剂盒。在该实例中，使用包括用于rna提取的旋转柱和洗涤缓冲液的qiagen试剂盒。使用这些已建立的方法提取包括微rna的总rna。3.逆转录为了获得可以扩增的dna，转录反应需要首先将mrna转换为cdna。这通过以适当的量添加rt随机引物、dntp、逆转录酶和rt缓冲液，然后如本领域已知的热循环温育来完成。以这种方式，将rna逆转录成dna。4.扩增然后可以使用特异于如上所述感兴趣的生物标记物的转录本的引物和/或探针来扩增cdna，适宜地与特异于参考基因的引物和/或探针一起进行标准化。为了方便起见，在此实例中将针对讨论中的每种细胞因子引物和/或探针、内部对照和内源性对照基因，与cdna模板一起加入到主混合物中，并且在单重或多重中使用实时pcr仪器一式三份进行实时pcr测定。参考文献：1.sutherlandjs,dejongbc,jeffriesdj,adetifaim,otamo.productionoftnf-alpha,il-12(p40)andil-17candiscriminatebetweenactivetbdiseaseandlatentinfectioninawestafricancohort.plosone2010:5(8):e12365.2.w.h.o.definitionsandreportingframeworkfortuberculosis-2013revision.,geneva,switzerland.www.who.int/iris/bitstream/10665/79199/1/9789241505345_eng.pdf[accessed03december2014],2013.3.kaufmannsh.factandfictionintuberculosisvaccineresearch:10yearslater.thelancetinfectiousdiseases2011:11(8):633-640.4.flynnjl,chanj,trieboldkj,daltondk,stewartta,bloombr.anessentialroleforinterferongammainresistancetomycobacteriumtuberculosisinfection.thejournalofexperimentalmedicine1993:178(6):2249-2254.5.algoodhm,chanj,flynnjl.chemokinesandtuberculosis.cytokinegrowthfactorrev2003:14(6):467-477.6.otamo,mendyjf,donkors,togunt,daramym,gomezmp,chegounn,sillahak,owolabio,kampmannb,walzlg,sutherlandjs.rapiddiagnosisoftuberculosisusingexvivohostbiomarkersinsputum.theeuropeanrespiratoryjournal:officialjournaloftheeuropeansocietyforclinicalrespiratoryphysiology2014:44(1):254-257.7.andersonst,kaforoum,brentaj,wrightvj,banwellcm,chagalukag,crampinac,dockrellhm,frenchn,hamiltonms,hibberdml,kernf,langfordpr,lingl,mlothar,ottenhoffth,pienaars,pillayv,scottja,twahirh,wilkinsonrj,coinlj,heydermanrs,levinm,eleyb.diagnosisofchildhoodtuberculosisandhostrnaexpressioninafrica.thenewenglandjournalofmedicine2014:370(18):1712-1723.序列表>sp|p05231|il6_humaninterleukin-6os＝homosapiensgn＝il6pe＝1sv＝1mnsfstsafgpvafslglllvlpaafpapvppgedskdvaaphrqpltsseridkqiryildgisalrketcnksnmcesskealaennlnlpkmaekdgcfqsgfneetclvkiitgllefevyleylqnrfesseeqaravqmstkvliqflqkkaknldaittpdpttnaslltklqaqnqwlqdmtthlilrsfkeflqsslralrqm>sp|p18510|il1ra_humaninterleukin-1receptorantagonistproteinos＝homosapiensgn＝il1rnpe＝1sv＝1meicrglrshlitlllflfhseticrpsgrksskmqafriwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleekidvvpiephalflgihggkmclscvksgdetrlqleavnitdlsenrkqdkrfafirsdsgpttsfesaacpgwflctameadqpvsltnmpdegvmvtkfyfqede>sp|p18510-2|il1ra_humanisoform2ofinterleukin-1receptorantagonistproteinos＝homosapiensgn＝il1rnmaleticrpsgrksskmqafriwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleekidvvpiephalflgihggkmclscvksgdetrlqleavnitdlsenrkqdkrfafirsdsgpttsfesaacpgwflctameadqpvsltnmpdegvmvtkfyfqede>sp|p18510-3|il1ra_humanisoform3ofinterleukin-1receptorantagonistproteinos＝homosapiensgn＝il1rnmaladlyeeggggggegednadsketicrpsgrksskmqafriwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleekidvvpiephalflgihggkmclscvksgdetrlqleavnitdlsenrkqdkrfafirsdsgpttsfesaacpgwflctameadqpvsltnmpdegvmvtkfyfqede>sp|p18510-4|il1ra_humanisoform4ofinterleukin-1receptorantagonistproteinos＝homosapiensgn＝il1rnmqafriwdvnqktfylrnnqlvagylqgpnvnleekidvvpiephalflgihggkmclscvksgdetrlqleavnitdlsenrkqdkrfafirsdsgpttsfesaacpgwflctameadqpvsltnmpdegvmvtkfyfqede>sp|p13232|il7_humaninterleukin-7os＝homosapiensgn＝il7pe＝1sv＝1mfhvsfryifglpplilvllpvassdcdiegkdgkqyesvlmvsidqlldsmkeigsnclnnefnffkrhicdankegmflfraarklrqflkmnstgdfdlhllkvsegttillnctgqvkgrkpaalgeaqptksleenkslkeqkklndlcflkrllqeiktcwnkilmgtkeh>sp|p13232-2|il7_humanisoform2ofinterleukin-7os＝homosapiensgn＝il7mfhvsfryifglpplilvllpvassdcdiegkdgkqyesvlmvsidqlldsmkeigsnclnnefnffkrhicdankvkgrkpaalgeaqptksleenkslkeqkklndlcflkrllqeiktcwnkilmgtkeh>sp|p13232-3|il7_humanisoform3ofinterleukin-7os＝homosapiensgn＝il7mkeigsnclnnefnffkrhicdankeenkslkeqkklndlcflkrllqeiktcwnkilmgtkeh>sp|p10145|il8_humaninterleukin-8os＝homosapiensgn＝cxcl8pe＝1sv＝1mtsklavallaaflisaalcegavlprsakelrcqciktyskpfhpkfikelrviesgphcanteiivklsdgrelcldpkenwvqrvvekflkraens>sp|p10145-2|il8_humanisoform2ofinterleukin-8os＝homosapiensgn＝cxcl8mtsklavallaaflisaalcegavlprsakelrcqciktyskpfhpkfikelrviesgphcanteiivklsdgrelcldpkenwvqrvvekaevpenrgmds>sp|p29460|il12b_humaninterleukin-12subunitbetaos＝homosapiensgn＝il12bpe＝1sv＝1mchqqlviswfslvflasplvaiwelkkdvyvveldwypdapgemvvltcdtpeedgitwtldqssevlgsgktltiqvkefgdagqytchkggevlshsllllhkkedgiwstdilkdqkepknktflrceaknysgrftcwwlttistdltfsvkssrgssdpqgvtcgaatlsaervrgdnkeyeysvecqedsacpaaeeslpievmvdavhklkyenytssffirdiikpdppknlqlkplknsrqvevsweypdtwstphsyfsltfcvqvqgkskrekkdrvftdktsatvicrknasisvraqdryyssswsewasvpcsfgf-basic；p09038；fgf2>sp|p02778|cxl10_humanc-x-cmotifchemokine10os＝homosapiensgn＝cxcl10pe＝1sv＝2mnqtailicclifltlsgiqgvplsrtvrctcisisnqpvnprslekleiipasqfcprveiiatmkkkgekrclnpeskaiknllkavskerskrsp>sp|p15692|vegfa_humanvascularendothelialgrowthfactoraos＝homosapiensgn＝vegfape＝1sv＝2mnfllswvhwslalllylhhakwsqaapmaegggqnhhevvkfmdvyqrsychpietlvdifqeypdeieyifkpscvplmrcggccndeglecvpteesnitmqimrikphqgqhigemsflqhnkcecrpkkdrarqekksvrgkgkgqkrkrkksrykswsvyvgarcclmpwslpgphpcgpcserrkhlfvqdpqtckcsckntdsrckarqlelnertcrcdkprr>sp|p15692-2|vegfa_humanisoformvegf189ofvascularendothelialgrowthfactoraos＝homosapiensgn＝vegfamnfllswvhwslalllylhhakwsqaapmaegggqnhhevvkfmdvyqrsychpietlvdifqeypdeieyifkpscvplmrcggccndeglecvpteesnitmqimrikphqgqhigemsflqhnkcecrpkkdrarqekksvrgkgkgqkrkrkksrykswsvpcgpcserrkhlfvqdpqtckcsckntdsrckarqlelnertcrcdkprr>sp|p15692-3|vegfa_humanisoformvegf183ofvascularendothelialgrowthfactoraos＝homosapiensgn＝vegfamnfllswvhwslalllylhhakwsqaapmaegggqnhhevvkfmdvyqrsychpietlvdifqeypdeieyifkpscvplmrcggccndeglecvpteesnitmqimrikphqgqhigemsflqhnkcecrpkkdrarqekksvrgkgkgqkrkrkksrpcgpcserrkhlfvqdpqtckcsckntdsrckarqlelnertcrcdkprr>sp|p15692-4|vegfa_humanisoformvegf165ofvascularendothelialgrowthfactoraos＝homosapiensgn＝vegfamnfllswvhwslalllylhhakwsqaapmaegggqnhhevvkfmdvyqrsychpietlvdifqeypdeieyifkpscvplmrcggccndeglecvpteesnitmqimrikphqgqhigemsflqhnkcecrpkkdrarqenpcgpcserrkhlfvqdpqtckcsckntdsrckarqlelnertcrcdkprr>sp|p15692-5|vegfa_humanisoformvegf148ofvascularendothelialgrowthfactoraos＝homosapiensgn＝vegfamnfllswvhwslalllylhhakwsqaapmaegggqnhhevvkfmdvyqrsychpietlvdifqeypdeieyifkpscvplmrcggccndeglecvpteesnitmqimrikphqgqhigemsflqhnkcecrpkkdrarqenpcgpcserrkhlfvqdpqtckcsckntdsrckm>sp|p15692-6|vegfa_humanisoformvegf145ofvascularendothelialgrowthfactoraos＝homosapiensgn＝vegfamnfllswvhwslalllylhhakwsqaapmaegggqnhhevvkfmdvyqrsychpietlvdifqeypdeieyifkpscvplmrcggccndeglecvpteesnitmqimrikphqgqhigemsflqhnkcecrpkkdrarqekksvrgkgkgqkrkrkksrykswsvcdkprr>sp|p15692-8|vegfa_humanisoformvegf165bofvascularendothelialgrowthfactoraos＝homosapiensgn＝vegfamnfllswv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