用于对存在于表面上的微生物取样的浸渍有至少一种组合物的基体的制作方法

本发明涉及浸渍有含至少一种酶组分的至少一种组合物的基体(substrate)，所述基体用于对存在于表面上的微生物进行取样，特别地用于对在所述表面上形成或未形成生物膜的微生物进行取样。

根据本发明，术语“经浸渍的基体”是指其中液体在所有部分中分散或扩散的基体。也可以使用术语经渗透的基体，术语“经浸渍的”和“经渗透的”根据本发明可互换使用。

背景技术：

在许多工作领域(诸如农业食品部门、农村社区、医学部门和兽医部门)，经常观察到由于微生物的存在而导致的成问题的污染。然而，近来，需要严格的卫生标准，并且必须确保造成这种污染的微生物的数量保持在可接受的阈值以下，该阈值对于每个工作领域是特定的。通常来说，在医院和医学诊所和兽医诊所中，微生物的存在是造成医院传染病的原因，而在农业食品和农村社区，这些微生物是造成易腐烂物品变质的原因，也是污染物向产品消费者转移的原因，例如，来自肉类生产链的产品。

浮游细菌，即游离在液体基体或固体基体上的细菌，因为能够直接污染任何类型的表面(诸如食物、医疗工具或人类患者或动物患者)，所以它们本身就会造成问题。然而，今天人们普遍认识到，这些微生物污染的问题特别重要，因为它们形成生物膜。

生物膜是微生物粘附在表面上并由此分泌覆盖微生物且促进其粘附的聚合物之后，在所有这些表面上生长的粘液层。因此，生物膜在微生物周围形成保护层，并且代表产生问题的周围环境(例如在食品工业和医院环境中)的复发污染源。

更具体地说，由细菌分泌的聚合物的积累产生基本上由多糖、dna、蛋白质以及脂质形成的基质(matrix)，其保护这些微生物免受外部侵害，并且非常耐受常规的清洁和消毒程序。因此，微生物容易在该保护性基质内发展，并通过形成难以消除的特别关键的细菌库而污染周围环境。

众所周知，生物膜存在的问题是双重的。首先，如上所述，它们代表了很难通过常规手段，甚至最具侵略性的手段消除的永久污染源。实际上，常见的消毒剂通常是无效的，正如已经观察到它们不会到达由多糖、dna、蛋白质和脂质形成的生物膜基质所保护的微生物。

其次，生物膜通常是混合的，因为它最初是由某些细菌菌株发展而来的，但其可以容纳其他菌株，这些菌株在菌落中生存和发育。然而，这些菌落促进了细菌之间的交流，以及包括某些细菌携带的抗性基因的交换和传播。因此，通过这些基因交换形成的生物膜更难以消除，然而，经常面临抗性和/或耐受性的主要问题使得必须采用越来越强大的消毒或处理手段。

在医院和兽医环境中，而且在农业食品环境中，形势更为关键，因为在许多地方检测到许多负责生物膜形成的微生物。在医院和兽医诊所中，在个体(患者和动物)周围以及周围区域(手术室、手术工具、用于维护所述工具的装置、内窥镜、尿管、导管，医疗装置、个体用透析或辅助呼吸机器等)和表面上(地板、墙壁、手术台等)检测生物膜。在农业食品领域，且特别是在制造食品的工厂中，可以在机器、桌子、包装周围以及操作员身上找到生物膜，即使他们采取一切可能的预防措施以避免污染表面和工作工具。

从所有这些看来，生物膜似乎是一个真正的问题，特别是在医疗保健(医院、牙科诊所等)、兽医护理和农业食品领域中。这个问题更为重要，因为生物膜可能涉及导致感染的细菌，如果这些细菌存在于医院、兽医诊所或食品中，这些细菌可能对个体致命。

如上所述，生物膜的问题是双重的。一方面，常见的消毒剂通常是无效的，因为已经观察到它们不能到达由多糖、dna、蛋白质和脂质形成的生物膜基质所保护的微生物。另一方面，生物膜通常是混合的，它可能含有若干种细菌菌株，从而促进抗生素基因在生物膜内存在的不同菌株之间传播，从而使处理它们非常困难或无效。

因此，从一个环境到另一个环境或从一个工作领域到另一个工作领域，检测到的生物膜完全不同并不罕见且实际上非常频繁。为了检测生物膜，存在用于检测表面上或在更具体的装置(水系统等)中存在生物膜的试剂盒，这些试剂盒(诸如文献ep2537601中公开的试剂盒)使得能够进行生物膜的染色。因此，目前可以确定存在生物膜的区域，以便在不知道目标生物膜原点处的微生物(细菌)的确切性质的情况下进行去除。

结果导致使用了用于去除生物膜的包含多种酶的组合物，但却不知道所用的酶和可选配制在洗涤剂基体中的酶(参见，例如，文献ep2243821)是否真的适合作用于给定的生物膜。因此，目前的处理方法更随机且非特异性的，这在经济上是不可行的。

此外，已经开发了用于对来自表面的微生物进行取样的技术，以表征和/或量化存在于表面并导致污染的微生物。因此，这些取样方法使得能够确定在表面上存在的不同类型的(菌株)细菌和微生物。

在对表面上存在的微生物进行取样的方法中，关于该主题的参考文献之一是iso标准18593：2004(f)，其提供并定义了用于从表面(更具体地，来自在农业食品工业的环境中发现的表面)取样的技术的标准方法。“布/海绵(cloth/sponge)”方法是本标准中引用的取样技术的一个实例，该方法使得能够检测和量化表面上存在的微生物。简而言之，根据这种取样方法，这涉及用来自生理学无菌血清的一定量的稀释剂将布/海绵润湿，在将布/海绵放入具有稀释剂的无菌接收器之前，在两个垂直方向上对表面取样。随后，在样品的潜在储存之后，对其进行定量分析和/或定性分析。

遗憾的是，如果这种方法使得能够确保对游离在基体表面上微生物进行取样，即对浮游细菌进行取样，那么当表面被在其上形成生物膜的微生物污染时，该方法其实是无效的。事实上，如上所解释的，由多糖、dna、蛋白质和脂质形成的生物膜的基质在微生物上形成聚合物层，该基质形成真正的屏障，保护微生物免受外部因子(化学的和/或物理的)的影响。

如上所述，用于取样微生物的某些现有技术取决于浸渍水的基体的使用，如iso标准18593：2004(f)中描述的基体的情况。然而，使用例如浸渍有生理无菌水的布/海绵在两个垂直方向上对表面取样的简单事实并不能确保取样代表污染表面的所有微生物。

此外，已发现：即使在从表面进行取样之后，取决于浸渍有水的基体的取样技术相反地也可以对微生物的发育产生有益的影响。事实上，众所周知，某些细菌在水的存在下表现出加速的生长，因此，不仅在取样过程中而且在取样之后，渗透有水的基体也促进了这种生长，原因在于水的薄膜残留在发生取样的经处理的基体上。因此，这可以促进未被布/海绵收集的某些微生物的发育。

文献wo98/37229涉及一种从表面对微生物进行取样以验证其性质的方法和装置，该装置包括浸渍有酶(即荧光素酶)的基体。更具体地说，它是一种在其末端具有吸收材料的杆，其中固定有荧光素酶和荧光素。通过将杆移动到表面上，对存在于其中的微生物进行取样，随后根据荧光素/荧光素酶生物发光反应检测atp，这使得能够根据微生物的存在确定表面的清洁度。

不幸的是，使用这种取样装置，似乎没有有效地收集已经形成生物膜的微生物。因此，从表面取样的微生物不能代表那里存在的细菌群。

技术实现要素：

本发明的目的是通过获得基体来克服现有技术的缺点，所述基体使得能够以适当和代表性的方式有效地收集表面上存在的所有微生物。特别地，本发明的目的是获得基体，所述基体使得不仅能够收集游离的(浮游的)微生物而且还能够收集在所述表面上形成生物膜的微生物，而不会使根据本发明的这种基体的取样方法更限制性更强或必然更长(基体施加到进行取样的表面的时长)。

因此，本发明旨在获得一种装置和方法，其使得能够在所述表面上同时对游离的(浮游的)细菌和已形成生物膜的微生物进行取样，因此对代表污染表面的微生物群体进行取样。当用浸渍有生理水的基体取样时或用根据文献wo98/37229的装置进行取样期间时，肯定不是这种情况。

为了解决这个问题，根据本发明提供了一种如开头所述经浸渍的基体，其特征在于所述至少一种组合物的动态粘度为50-2000mpa.s。

有利地，所述至少一种组合物的动态粘度为100-1000mpa.s，优选200-800mpa.s，更优选300-600mpa.s，仍更优选400-500mpa.s。

在本发明的范围内，已经确定用含至少一种酶组分且具有50-2000mpa.s的动态粘度的组合物浸渍基体使得能够收集/取样显著更多数量的微生物(即游离微生物(浮游细菌)和负责形成保护微生物的生物膜的微生物(细菌))。与如上所述的常见取样技术和方法相反，根据本发明的基体使得能够对表面上存在的微生物进行真正具有代表性的取样，而不仅仅是对游离(浮游)细菌的取样。

令人惊奇的是，已经确定用本发明的酶组合物浸渍/渗透织物型基体(或任何其它类型的基体)使得能够收集在表面上既不被预期也不怀疑存在的细菌和其他微生物。事实上，对于根据本发明的基体，已经示出：

-以与现有技术的取样技术(经浸渍的取样基体)收集的那些相比至少相等的方式收集游离微生物，并且

-使用根据本发明的基体收集不能由常用基体所收集的微生物。

结果，与现有基体不同，使用根据本发明的基体使得能够获得对表面上存在的污染物的真实代表性和完全的取样。因此，根据本发明的基体的使用使得能够进行随后处理，所述处理通过使用适当的化合物，而不再使用化合物混合物(该混合物中的一些化合物对给定污染是没用的)来去除具有靶向性的生物膜以及能够有效应用。这具有相当大的经济优势。

因此，就本发明基体使得能够对表面上的所有污染物进行取样，并且然后使得能够精确地确定用于去除微生物的处理的意义而言，根据本发明的基体的吸引力倍增。最后，使用根据本发明的基体，可以用根据本发明的酶组合物浸渍该基体来在取样的下游适当地且有靶向性地去除所有微生物(浮游的和受生物膜保护的微生物)。

需要强调的是，根据本发明，取样基体能够收集和鉴定那些用普通取样基体和方法(诸如用生理水渗透的基体的“布/海绵”方法或根据文献wo98/37229的方法)检测不到的微生物。因此，本发明通过采用浸渍有包含至少一种酶组分并且动态粘度为50-2000mpa.s的组合物的基体的方式，真正地改善了对来自表面的微生物的取样，所进行的取样既不存在更多限制，也不必然比普通取样更长。

特别地，在本发明的范围内，已经强调的是：根据本发明的粘性组合物(即含至少一种酶组分且具有50-2000mpa.s的动态粘度的组合物)能够在沿着不同轴排列的表面上收集微生物。事实上，根据本发明的经浸渍基体的粘性方面使得基体能够“粘在”/粘附到表面上，并因此可以放置在垂直表面上或“倒置”放置(例如，在工作计划(workplan)下)。根据本发明的经浸渍基体的粘性方面还使得微生物能够“分离”并以最佳方式将它们“固定”到经浸渍的基体上：根据本发明的组合物的动态粘度使得从表面(垂直和水平)的微生物的取样的有效性能够改善，并确保所进行的取样代表真正存在于形成取样对象的表面上的细菌群。

根据本发明，粘性组合物(诸如凝胶)可以通过混合几种表面活性剂(无论是阴离子、非离子或两性的，可选地与无机化合物(诸如氯化钠)混合)来获得。凝胶(即粘性组合物)也可以通过添加化合物(诸如天然或合成聚合物(黄原胶衍生物、纤维素、聚丙烯酸酯等))来获得。

此外，在本发明的范围内，已经确定具有如上所述的动态粘度值的粘性组合物使得存在于表面上的生物膜所需以便将它们分解而足以释放细菌的接触时间显著减少，从而能够收集和/或鉴定细菌。已经表明，粘性组合物真正地使得其能够保持在适当的位置并且包围仍然以薄层(finelayers)(对应于大约几微米厚度的“突起”)形式存在的生物膜，而用非粘性组合物保持在该位置不是最佳的。换句话说，在本发明范围内包含至少一种酶组分的组合物的动态粘度使得生物膜能够被完全包围并更快速和更有效地分解生物膜，组合物的粘度也有助于“捕获”从表面收集的微生物(细菌)。此外，使用根据本发明的粘性组合物，不会遇到液体组合物快速蒸发的问题。

优选地，根据本发明，所述至少一种酶组分包括至少一种蛋白酶和/或至少一种漆酶和/或至少一种多糖酶。在本发明的范围内，已经强调使用这种酶可以使生物膜有效地分解。

优选地，所述至少一种酶组分包括至少一种额外的酶，所述额外的酶选自由氧化还原酶、裂解酶(果胶裂解酶等)、转移酶、肽酶(金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、外肽酶、内切蛋白酶、胱氨酸蛋白酶等)、脂肪酶和酯酶(溶血磷脂酶、磷脂酶等)和氨基葡萄糖苷酶形成的组。

优选地，根据本发明，所述经浸渍的基体是擦拭物(wipe)或海绵或布或任何其他类型的合适基体。在本发明的范围内，基体可以浸渍有至少一种本发明的组合物，并使得微生物附着在基体上。

有利地，根据本发明，所述含至少一种一种酶组分的至少一种组合物具有5-11的ph。

在根据本发明的装置的一个特别有利的实施方案中，所述基体和所述含至少一种酶组分的至少一种组合物是无菌的。事实上，有利的是，所述经浸渍的基体与包至少一种酶组分的至少一种组合物一起均是无菌的，使得其他外部污染物不会从定性和定量的角度来使所收集的微生物的分析失真，目的是进行忠实反映表面微生物的污染的取样。

有利地，根据本发明，所述含至少一种酶组分的至少一种组合物进一步包括至少一种洗涤剂组分。

优选地，根据本发明，所述至少一种洗涤剂组分包括至少一种润湿剂和/或至少一种多价螯合剂和/或至少一种分散剂。

洗涤剂组分的润湿剂是两亲性化学物质，或含所述两亲性化学物质的组合物，其改变两个表面之间的表面张力。润湿剂具有促进液体在固体上扩散，并且也有助于促进两个表面之间的接触的优点。更特别地，润湿剂促进洗涤剂组分与表面之间的接触，并因此促进酶与其底物之间的接触。例如，在农业食品工业中以及在医院或兽医环境中经常发现的不锈钢表面上，润湿剂使得组合物能够均匀扩散，并因此完美分布在待去污表面上(例如，生产工具、工作计划、地板或手术台和医疗工具)。

润湿剂可以是阴离子的、阳离子的、非离子的或两性离子的。优选地，润湿剂可以是阴离子或非离子润湿剂(即亲水部分带负电或不带电荷)，或者可以是包含阴离子润湿剂的组合物。更特别地，润湿剂可以是蔗糖酯或包含烷基硫酸钠和醇的组合物。

螯合剂是一种具有与矿物离子形成络合物的能力的化学物质，其以一种形式排列，防止它们通过标准反应沉淀。例如，螯合剂可以是乙二胺四乙酸、葡糖酸δ-内酯、葡糖酸钠、葡萄糖酸钾、葡萄糖酸钙、柠檬酸、磷酸、酒石酸、乙酸钠、山梨糖醇、包含磷原子的化合物。优选地，螯合剂可以是含磷氧化物(诸如膦酸盐/酯、亚膦酸盐/酯或磷酸盐/酯或其混合物)或其盐、在其结构中单独或组合地至少具有磷化氢官能基团、氧化膦、次磷酸盐/酯(phosphinite)、亚膦酸盐/酯(phosphonite)、亚磷酸盐/酯(phosphite)、膦酸盐/酯(phosphonate)、次膦酸盐/酯(phosphinate)或磷酸盐/酯(phosphate)的胺或氧化胺或其盐。

更优选地，螯合剂可以是膦酸盐/酯或其盐、在其结构中单独或组合地至少至少包括磷化氢官能基团、氧化膦、次磷酸盐/酯、亚膦酸盐/酯、亚磷酸盐/酯、膦酸盐/酯、次膦酸盐/酯或磷酸盐/酯的胺或氧化胺或其盐。作为非限制性实例，膦酸酯可具有通式r¹(r²o)(r³o)p＝o，其中r¹、r²和r³独立地表示氢、烷基、取代的烷基、取代或未取代的烷基-氨基、取代或未取代的氨基烷基、芳基或取代的芳基。作为非限制性实例，胺或氧化胺可包含一种、两种或三种通式cr⁴r⁵w的取代，其中r⁴和r⁵彼此独立地表示氢、烷基、取代的烷基、取代或未取代的烷基-氨基、取代或未取代的氨基烷基、芳基或芳基取代的基团，且w代表膦酸盐/酯、次膦酸盐/酯或磷酸盐/酯基团。

螯合剂可以是钠盐、钙盐、锂盐、镁盐或钾盐的形式；优选地，螯合剂可以是钠盐、钙盐或钾盐的形式。

优选地，螯合剂是可以在食品工业中单独或与其他组分组合安全使用(因为螯合剂对健康没有风险)的试剂。

洗涤剂组分的分散剂使得能够改善悬浮液颗粒的分离，以防止凝集、聚集和/或倾析。该分散剂可以是可溶于或部分溶于水的聚合物(诸如聚乙二醇、纤维素衍生物或包含至少一种丙烯酸或丙烯酸酯或多磷酸酯单元的聚合物)。优选地，分散剂是包含至少一种通式-(ch2-ch-coor)-的丙烯酸或丙烯酸酯单元的聚合物，其中，r表示烷基或取代的烷基、芳基或取代的芳基或者氢基。例如，分散剂是平均分子量mw约为500-10000的聚合物。

更优选地，分散剂是丙烯酸聚合物。例如，分散剂可以是平均分子量为约2000至6000的丙烯酸均聚物。

因此，在根据本发明的组合物中存在分散剂使得能够避免在清洁表面期间细菌颗粒的任何聚集，这确保在酶的作用下最佳地去除从基体上分离的生物膜颗粒。事实上，这些颗粒不是连接在一起，而是在悬浮液中保持分离，而不是重新沉积或重新粘附到经清洁的表面上。

优选地，根据本发明，相对于洗涤剂组分的总重量，所述至少一种洗涤剂组分包含1至10wt％比例的螯合剂、1至10wt％比例的分散剂和1至30wt％比例的润湿剂。优选地，相对于洗涤剂组分的总重量，所述至少一种洗涤剂组分包含一定比例的润湿剂，其范围为5-20wt％，优选润湿剂的比例等于15wt％。

在所附权利要求中指出了浸渍有至少一种组合物的基体的其他实施方案。

本发明还涉及一种用于使用根据本发明的基体对表面上存在的微生物进行取样，特别是对在所述表面上形成或未形成生物膜的微生物进行取样的方法，所述方法包括以下步骤：

-用预定量的含至少一种酶组分的至少一种组合物来浸渍基体，所述组合物具有50-2000mpa.s的动态粘度；

-在预定的一段时间内将经浸渍的基体施加到所述表面，以从所述表面收集在其上形成或未形成生物膜的微生物；和

-从所述表面去除所述基体。

根据本发明的基体的浸渍可以在将基体施加到表面之前或在将尚未浸渍的基体施加到表面之后进行。

有利地，根据本发明，将经浸渍的基体施加到所述表面的所述预定的一段时间范围为1至45分钟，且优选为15分钟。

在一个具体实施方案中，根据本发明的所述方法包括将所述含至少一种酶组分的至少一种组合物加热至15至65℃，优选至45℃的温度的优先步骤。加热酶的这一步骤使得酶被激活并实现100％的酶活性。

优选地，根据本发明，所述方法包括擦拭所述表面的额外步骤，因此通过擦拭体(swabs)的方式收集未被所述经浸渍的基体收集的微生物。这种额外的取样执行了这样的事实，即所进行的取样真实地反映了微生物在表面或基体上的污染。或者，不进行擦拭，而是可以使用与根据本发明的经浸渍的基体基本相同但未浸渍的基体。

有利地，根据本发明，所述方法包括在无菌去除溶液中去所述收集的微生物的额外步骤。

在根据本发明的方法的特别有利的实施方案中，所述方法包括定量和/或鉴定所去除的微生物的额外步骤。

根据本发明的用于对存在于表面上的微生物取样的方法的其他实施方案在所附权利要求中指出。

本发明还涉及用于对表面上存在的微生物进行取样，特别是用于对在所述表面上形成或未形成生物膜的微生物进行取样的试剂盒，所述试剂盒包括：

-基体，例如织物型基体；和

-在溶液中或固体形式的至少一种酶组分的样品。

至少一种酶组分的样品在溶液中具有50-2000mpa.s的动态粘度。当至少一种酶组分的样品最初为固体形式时，将其溶解以获得动态粘度为50-2000mpa.s的酶组分。

有利地，根据本发明，所述试剂盒进一步包含至少一种洗涤剂组分。显然，根据本发明的试剂盒可以具有含所述至少一种酶组分和所述至少一种洗涤剂组分的样品，它们一起或分别地在溶液中或以固体形式配制。当样品为固体形式时，在浸渍/渗透基体之前进行稀释/溶解。

优选地，根据本发明，所述至少一种洗涤剂的样品包括至少一种润湿剂和/或至少一种螯合剂和/或至少一种分散剂。

此外，在一个具体实施方案中，所述至少一种酶组分的一个样品包括至少一种蛋白酶和/或一种漆酶和/或至少一种多糖酶。

在所附权利要求中指出了用于对表面上存在的微生物进行取样，特别是用于对在所述表面上形成或未形成生物膜的微生物进行取样的试剂盒的其他实施方案。

本发明还涉及根据本发明的经浸渍的基体用于对表面上存在的微生物进行取样，特别是在所述表面上形成或未形成生物膜的微生物进行取样的用途。

本发明还涉及根据本发明的试剂盒用于对表面上存在的微生物进行取样，特别是在所述表面上形成或未形成生物膜的微生物进行取样的用途。

在所附权利要求中指出了根据本发明的用于对表面上存在的微生物进行取样，特别是在所述表面上形成或未形成生物膜的微生物进行取样的经浸渍的基体或试剂盒的用途的其他形式。

附图说明

图1显示了通过从用具有不同动态粘度并在包含由表皮葡萄球菌和蛋白质污染(bsa)形成的生物膜的不锈钢表面上施加5或15分钟的组合物浸渍的基体上去除而获得的溶液的atp-测定分析中获得的结果(细菌cfu/ml)。

图2显示了通过从用具有不同动态粘度并在包含由表皮葡萄球菌和蛋白质污染(bsa)形成的生物膜的不锈钢表面上施加5或15分钟的组合物浸渍的基体上去除而产生的细菌菌落计数期间获得的结果(细菌cfu/ml)。

具体实施方式

实施例1：取决于根据本发明的基体是否浸渍有不同动态粘度的组合物，从表面对受生物膜保护的微生物的取样效果

浸渍根据本发明的用于对表面上存在的微生物取样，特别是对在该表面上形成生物膜的微生物取样的基体的不同动态粘度的组合物，已经依照从表面取样微生物的效果进行了测试。为此，观察到以下过程。

a)在不锈钢表面上发展生物膜的过程

第-1天：在含有20ml无菌tsb培养基(胰蛋白酶大豆液体培养基)的锥形瓶中接种表皮葡萄球菌培养物，同时在35℃保持搅拌(120rpm)一夜。

第0天：

-沿表面轮廓绘制的疏水线将无菌不锈钢表面置于无菌培养皿中，以使bsa污染物保持在表面上(见下文：沉积bsa污染物的过程)；

-添加tsb培养基以覆盖不锈钢表面；

-取样前一天制备1ml表皮葡萄球菌预培养物并将该取样放入培养皿中；

-根据培养皿的旋转运动进行搅拌，然后在35℃下将培养皿培养至少20小时。

第+1天：

-去除培养基，用20ml无菌软水冲洗表面两次；

-在40℃的温度下干燥表面至少一小时。

b)沉积bsa污染(牛血清白蛋白)的过程

将一层蛋白质污染(stain)加入到根据上述a)点的过程形成的生物膜层中，这使得能够模拟生物膜可非常频繁地与残留污染物组合的真实情况。在将7ml溶液施加到每个表面上之前制备含有10mg/mlbsa的溶液，随后在最高40℃的温度下干燥表面数小时。

c)对不锈钢表面上存在的污染物进行取样的过程

切割无菌布基体(来自供应商conformat的kaliwipepremiumkw-p8030)，使其与待分析的表面尺寸相同，即10×10cm，并用预先加热至45℃的下列组合物之一渗透：

a)水性溶液，其含有：量为5.4v/v％的月桂基醚硫酸钠(洗涤剂)、量为3v/w/％的月桂胺氧化物(润湿剂)、量为0.11vv％的羧甲基菊粉钠盐(螯合)、量为0.31v/v％的蛋白酶(16lex型savinase和2.5ldx型alcalase)、量为0.005v/v％的漆酶(novozym51003)、量为0.07v/v％的脂肪酶(lipolase100l)、量为0.035v/v％的α-淀粉酶(amplify12l)、量为0.017v/v％的纤维素酶(carezyme4500l)和量为0.005v/v％的甘露聚糖酶(mannaway4/0l)：动态粘度为8.4mpa.s；

b)水性溶液，其含有：量为5.4v/v％的月桂基醚硫酸钠(洗涤剂)、量为1v/v％的氯化钠(使溶液变稠)，量为3v/w/％的月桂胺氧化物(润湿剂)、量为0.11vv％的羧甲基菊粉钠盐(螯合)、量为0.31v/v％的蛋白酶(16lex型savinase和2.5ldx型alcalase)、量为0.005v/v％的漆酶(novozym51003)、量为0.07v/v％的脂肪酶(lipolase100l)、量为0.035v/v％的α-淀粉酶(amplify12l)、量为0.017v/v％的纤维素酶(carezyme4500l)和量为0.005v/v％的甘露聚糖酶(mannaway4/0l)：动态粘度为396.5mpa.s；

c)水性溶液，其含有：量为5.4v/v％的月桂基醚硫酸钠(洗涤剂)、量为1.2v/v％的氯化钠(使溶液变稠)，量为3v/w/％的月桂胺氧化物(润湿剂)、量为0.11v/v％的羧甲基菊粉钠盐(螯合)、量为0.31v/v％的蛋白酶(16lex型savinase和2.5ldx型alcalase)、量为0.005v/v％的漆酶(novozym51003)、量为0.07v/v％的脂肪酶(lipolase100l)、量为0.035v/v％的α-淀粉酶(amplify12l)、量为0.017v/v％的纤维素酶(carezyme4500l)和量为0.005v/v％的甘露聚糖酶(mannaway4/0l)：动态粘度为2213mpa.s

然后将这些经浸渍的基体中的每一个置于由上述步骤a)和b)得到的垂直不锈钢表面上。在5或15分钟的接触时间之后，无菌地收集(取回)布。然后，在30秒内，将无菌、干燥、未经渗透的布施加到表面上，以吸收仍存在于其中的取样溶液。对于给定的不锈钢表面，然后将经渗透和未经渗透的布收集到无菌小包中。

d)去除收集的样品的过程

为了从上述c)项的过程产生的布中去除从不锈钢表面收集的分子(污染物)，在通过混合器前，将90mlthio溶液加入无菌小包中2分钟以获得准备好进行分析的溶液。thio溶液是一种无菌溶液，其含有几种能够中和可用于表面的产品(例如，在工业中的清洁/消毒阶段使用的消毒剂)的抗微生物剂(biocide)效果的组分。该溶液包含3g/l聚山梨醇酯80、0.3g/l卵磷脂、0.1g/ll-组氨酸、0.5g/l硫酸硫代硫酸盐。将这些组分在去矿物质水中稀释，使体积达到1升。在使用前将溶液在高压灭菌器中灭菌。

e)溶液的分析

进行了两种类型的分析：

1、第二代atp-测定(atp-2g)

根据atp-2g技术进行去除后获得的溶液的分析，该技术使得能够在几分钟内测量样品中细胞内atp的量。该剂量对生活在液体培养基中的所有微生物进行了定量。该测量用公司销售的qga2g试剂盒，通过观察制造商的说明和过程进行，该说明和过程指示如何将atp测量转换成菌落数。

得到的结果示于图1中。可以看出，atp-度量分析显示，与具有更低或更高粘度的溶液相比，动态粘度为50-2000mpa.s的溶液中的污染物水平更高。这意味着，根据浸渍根据本发明的取样基质的动态粘度为50-2000mpa.s的组合物，实现了所有细菌污染物和类似物的取样。至少，采用根据本发明的具有这种动态粘度的组合物浸渍的取样基体实现了改进的取样。

2、细菌计数

从上述d)项的过程获得的溶液也在含有非特异性通用pca培养基(n＝3)的培养皿中分散，然后将培养皿在35℃培养24小时，然后计数在那里培养的菌落。

得到的结果如图2所示。可以看出，与atp-测定发生观察到的趋势相同，即在动态粘度为50-2000mpa.s的溶液中可以看到更大的溶液污染物。检测到的污染水平远低于atp-测定，这可以通过以下事实解释：生物膜中的微生物在培养皿中培养不良(应激条件使得它们通过这种常见的微生物技术无法检测到)。

这再次意味着，通过浸渍根据本发明的取样基体的这样动态粘度的组合物，时限了所有细菌污染物和类似物的取样。至少，采用根据本发明的具有这种动态粘度的组合物浸渍的取样基体实现了改进的取样。

实施例2：取决于根据本发明的取样基本基体中浸渍的组合物的动态粘度，该基体在垂直表面和水平表面上的粘附性

如实施例1中所述的取样过程应用不同粘度的三种溶液(a、b、c)。对于每种溶液(组合物)，在垂直表面和水平表面上进行测试，因为能够在表面下收集可能在工业中变得特别令人关注。

在施用取样基体后确定了几个参数：

-布的渗透及其组成和分布；

-将布保持在表面上；

-取样组合物从布到表面的径流；和

-当从表面去除布时，取样组合物在表面上的分布：当去除第一布时，表面应优选完全被取样组合物的精细层覆盖。

下表1给出了这些不同参数的结果。

表1

对所鉴定的不同参数的比较使得能够注意到，用动态粘度为50-2000mpa.s的组合物浸渍的根据本发明的取样基体，其具有最佳特性，使得其能够保证取样将是适当的并且代表表面上存在的微生物群体。

应当理解，本发明决不限于上述实施方案，并且可以在不脱离所附权利要求的范围的情况下应用修改。