一种大果桉醛C的制备方法与流程

本发明属于化学领域，涉及一种大果桉醛b、大果桉醛c的制备方法。

背景技术

大果桉醛b、大果桉醛c是存在于蓝桉叶中的天然产物，化学结构如下：

研究发现，大果桉醛b、大果桉醛c具有优异的抗肿瘤活性(中国专利2018110395176、2018110400136、2018110400193)，具备开发成抗肿瘤药物的前景。

目前，现有技术尚没有简单、成熟的制备方法用于制备大果桉醛b、大果桉醛c。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种大果桉醛b、大果桉醛c的制备方法。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

大果桉醛b的制备：

一种大果桉醛b的制备方法，包括如下步骤：

步骤s1，提取：收集蓝桉eucalyptusglobulus叶，阴干，粉碎，用体积分数75％的乙醇水溶液热回流提取，提取多次，过滤，合并滤液浓缩至无醇味；

步骤s2，大孔树脂富集：将浓缩至无醇味的提取液上样于ab-8型大孔吸附树脂柱，先用6bv的25％乙醇以6bv/h的流速洗脱，再用12bv的70％乙醇以6bv/h的流速洗脱，收集10-12bv洗脱液，浓缩至无醇味、冷冻干燥得到富集物冻干粉；

步骤s3，hsccc分离纯化：

s3.1两相溶剂系统配制

两相溶剂系统选择体积比为5:18:4:18的正丁醇/乙酸乙酯/四氢呋喃/水，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层，上、下相分离，超声待用。

s3.2样品溶液配制

取富集物冻干粉用等体积上相和下相混合溶剂超声溶解配制，即为样品溶液。

s3.3hsccc分离

将配制好的溶剂系统上相泵入hsccc螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.2ml/min、检测波长245nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡；进样阀注入样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。

s3.4根据色谱图收集大果桉醛b对应的洗脱流份，浓缩干燥即分别得到大果桉醛b。

优选地，步骤s1提取时固液比为1:20。

优选地，步骤s1提取3次，每次1.5h。

优选地，步骤s2中，大孔吸附树脂柱的树脂径高比为1:10。

优选地，步骤s2中采取湿法装柱，拌树脂上样，拌样树脂占树脂总量的1/10。

优选地，步骤s3中，两相溶剂系统配制时，上、下相分离后超声0.5h待用。

优选地，步骤s3中，样品溶液配制时，取富集物冻干粉用10ml上相和10ml下相混合溶剂超声溶解配制成浓度为10mg/ml的溶液。

大果桉醛c的制备：

一种大果桉醛c的制备方法，包括如下步骤：

步骤s1，提取：收集蓝桉eucalyptusglobulus叶，阴干，粉碎，用体积分数75％的乙醇水溶液热回流提取，提取多次，过滤，合并滤液浓缩至无醇味；

步骤s2，大孔树脂富集：将浓缩至无醇味的提取液上样于ab-8型大孔吸附树脂柱，先用6bv的25％乙醇以6bv/h的流速洗脱，再用12bv的70％乙醇以6bv/h的流速洗脱，收集10-12bv洗脱液，浓缩至无醇味、冷冻干燥得到富集物冻干粉；

步骤s3，hsccc分离纯化：

s3.1两相溶剂系统配制

两相溶剂系统选择体积比为5:18:4:18的正丁醇/乙酸乙酯/四氢呋喃/水，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层，上、下相分离，超声待用。

s3.2样品溶液配制

取富集物冻干粉用等体积上相和下相混合溶剂超声溶解配制，即为样品溶液。

s3.3hsccc分离

将配制好的溶剂系统上相泵入hsccc螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.2ml/min、检测波长245nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡；进样阀注入样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。

s3.4根据色谱图收集大果桉醛c对应的洗脱流份，浓缩干燥即分别得到大果桉醛c。

优选地，步骤s1提取时固液比为1:20。

优选地，步骤s1提取3次，每次1.5h。

优选地，步骤s2中，大孔吸附树脂柱的树脂径高比为1:10。

优选地，步骤s2中采取湿法装柱，拌树脂上样，拌样树脂占树脂总量的1/10。

优选地，步骤s3中，两相溶剂系统配制时，上、下相分离后超声0.5h待用。

优选地，步骤s3中，样品溶液配制时，取富集物冻干粉用10ml上相和10ml下相混合溶剂超声溶解配制成浓度为10mg/ml的溶液。

有益效果：

本发明制备方法简单易于工业化生产，制备得到的大果桉醛b、c纯度高。

附图说明

图1为hsccc分离色谱图；

图2为大果桉醛b纯度检测hplc色谱图；

图3为大果桉醛c纯度检测hplc色谱图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料

蓝桉叶片采集于云南昆明北郊黑龙潭后山。

ab-8型大孔吸附树脂购于天津浩聚树脂科技有限公司。

高速逆流色谱仪teb300b购于上海同田生物技术股份有限公司。

二、实验方法和结果

包括如下步骤：

步骤s1，提取：收集蓝桉eucalyptusglobulus叶，阴干，粉碎，用体积分数75％的乙醇水溶液热回流提取，固液比为1:20，提取3次，每次1.5h，过滤，合并滤液浓缩至无醇味；

步骤s2，大孔树脂富集：将浓缩至无醇味的提取液上样于ab-8型大孔吸附树脂柱，树脂径高比为1:10，拌样树脂占树脂总量的1/10，湿法装柱，拌树脂上样；先用6bv的25％乙醇以6bv/h的流速洗脱，再用12bv的70％乙醇以6bv/h的流速洗脱，收集10-12bv洗脱液，浓缩至无醇味、冷冻干燥得到富集物冻干粉；

步骤s3，hsccc分离纯化：

s3.1两相溶剂系统配制

两相溶剂系统选择体积比为5:18:4:18的正丁醇/乙酸乙酯/四氢呋喃/水，将各溶剂按照体积比例加入分液漏斗中，剧烈振摇使充分混合，后静置分层，上、下相分离，超声0.5h待用。

s3.2样品溶液配制

取富集物冻干粉用10ml上相和10ml下相混合溶剂超声溶解配制成浓度为10mg/ml的溶液，即为样品溶液。

s3.3hsccc分离

将配制好的溶剂系统上相泵入hsccc螺旋管中作为固定相，待上相完全充满整个柱子，打开高速逆流色谱仪，设置转速900r/min、体积流量1.2ml/min、检测波长245nm，将溶剂系统下相泵入螺旋管中，待流动相开始从检测器尾端持续流出时，表明螺旋管内两相溶剂达到流体动力学平衡；进样阀注入20ml样品溶液，开始记录色谱图并持续泵入流动相分离。

s3.4根据色谱图(图1)分别收集大果桉醛b、大果桉醛c对应的洗脱流份，浓缩干燥即分别得到大果桉醛b、大果桉醛c。

步骤s4，纯度检测：

色谱仪：lc-20adxr高压泵；spd-m20a二极管阵列紫外可见光检测器；cto-20ac柱温箱；cbm-20a系统控制器；sil-20acxr自动进样器；

色谱柱：agilentzorbaxextend-c18(250mm×4.6mm，5μm)；

流动相a相：水(含千分之五甲酸)；流动相b相：乙腈(含千分之五甲酸)；

洗脱程序：0-40min，0％→100％b相；

流速：1.0ml/min；

柱温：30℃；

检测波长：245nm；

进样量：10μl。

纯度检测结果表明，hsccc分离制备得到的大果桉醛b、大果桉醛c的纯度分别为99.1％、98.6％，与标准品比对具有相同的色谱保留行为。纯度检测谱图如图2、3所示。

上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容，但本领域技术人员应当知道，不应将本发明的保护范围局限于该具体实施例。