22（z）-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮简易制备方法与流程

本发明涉及一种22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮简易制备方法。

背景技术：

(22z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮((22z)-ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one，(22z)-eto)，是我们从中药虎杖中获得的化学新成分(专利号：zl201310205435.5)，无色片状结晶。但现有的制备方法复杂，需要进一步改进。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种制备简便、效果好的22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮简易制备方法。

本发明的技术解决方案是：

一种22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮简易制备方法，其特征是：包括下列步骤：

(1)超声波提取

将虎杖药材粉碎至粉末状，称取约适量，按1:4(w/v)的比例加入乙酸乙酯，浸泡12h，超声提取2次，1.5h/次；减压浓缩干燥，称取重量；按下式计算干膏得率：

(2)碱化初分离

取干燥的虎杖药材超声提取物，按1:5(w/v)比例，加入至3％naoh溶液中，搅拌，超声助溶；按1:1(v/v)比例，加入石油醚，搅拌，萃取20min；萃取2次，合并萃取液；萃取液加适量水洗涤，浓缩，干燥，备用；

(3)制备色谱纯化

色谱条件:色谱柱c1810.0×250mm5μm；流动相85％的甲醇溶液；柱温25℃；荧光检测器rf-10axl，波长ex＝395nm，em＝465nm；紫外检测器spd-20a,波长390nm；进样量200μl。

22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮

本发明制备简便、效果好。22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮该化合物在药材中含量较低，按照传统的方法(如柱层析、制备色谱)获取该化合物成本高、且费时。因此，本发明采用简便的分离纯化方法，以便降低其成本。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

图1是tlc色谱：①碱化分离产物，②超声提取物。

图2是串联紫外-荧光检测器hplc图：a荧光色谱图，b紫外色谱图。

图3是22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮分离纯化流程图。

具体实施方式

一种22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮简易制备方法，包括下列步骤：

(1)超声波提取

将虎杖药材粉碎至粉末状，称取约适量，按1:4(w/v)的比例加入乙酸乙酯，浸泡12h，超声提取2次，1.5h/次；减压浓缩干燥，称取重量；按下式计算干膏得率：

(2)碱化初分离

取干燥的虎杖药材超声提取物，按1:5(w/v)比例，加入至3％naoh溶液中，搅拌，超声助溶；按1:1(v/v)比例，加入石油醚，搅拌，萃取20min；萃取2次，合并萃取液；萃取液加适量水洗涤，浓缩，干燥，备用；

利用tlc对碱化初分离产物以及超声提取物进行检测，检测结果如图。结果显示，碱化初分离产物经tlc后，能够观察到一个很明显的绿色荧光斑点(即22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮)，其它成分很少。超声提取物经tlc后，能够观察到几个大的黄色斑点，没有出现绿色荧光斑点，这是由于22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮量少以及其斑点与黄色斑点重叠的原因。结果表明，通过碱化初分离，能够将样品中的大部分酸性及水溶性杂质去除，样品中22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮量得到很大程度的净化。水洗的目的，是为了消除样品中残存的碱，以免样品在碱性条件下不稳定。

(3)制备色谱纯化

色谱条件:色谱柱c1810.0×250mm5μm；流动相85％的甲醇溶液；柱温25℃；荧光检测器rf-10axl，波长ex＝395nm，em＝465nm；紫外检测器spd-20a,波长390nm；进样量200μl。

采用串联紫外-荧光检测器对制备后的纯品22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮进行检测，得到其荧光和紫外色谱图。

22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮是一种极性很小的化合物，不易与酸或者碱发生化学反应。虎杖提取物中含有很多种类的酸性成分，如大黄素、白藜芦醇等，其酸性强弱不同。选择不同强度碱性溶液作为净化剂，其纯化效果不同，碱性太弱，净化效果不理想。通过对不同碱溶液的比较，本试验最终选择3％的naoh溶液作为净化液。水洗的目的，是为了消除样品中残存的碱，以免样品在碱性条件下不稳定。

22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮是一种极性很小的化学成分，容易溶解于极性小的溶剂中。选择极性较大的溶剂为萃取溶剂时，22(z)-麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮萃取不完全，而且容易将其它极性杂质一并萃取。曾选择乙酸乙酯作为萃取溶剂，但发现在强碱性溶液中，乙酸乙酯出现水解现象。故最终试验选择石油醚作为萃取溶剂，萃取效果好。