一种乙肝DNA检测试剂盒的制作方法

本发明涉及一种乙肝DNA检测试剂盒，属于生物技术装置技术领域。

背景技术：

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）是引起乙型肝炎（简称乙肝）的病原体，属嗜肝DNA病毒科，该科病毒包含正嗜肝DNA病毒属和禽嗜肝DNA病毒属两个属，引起人体感染的是正嗜肝DNA病毒属。

HBV DNA检测，通过扩增病毒核酸，对体内低水平的HBV病毒敏感，是判断病毒复制的常用手段。DNA检测对确诊HBV和评估HBV治疗效果也具有十分重要的作用，可了解机体内病毒的数量、复制水平、传染性、药物治疗效果、制定治疗策略等并作为评估指标，也是唯一能帮助确诊隐匿性HBV感染和隐匿性慢性HBV的实验室检测指标。

在HBV DNA检测时，PCR过程需要配大量的反应体系，非常容易混淆，给实验工作者带来较大的影响。

技术实现要素：

针对上述问题，本发明提供了一种乙肝DNA检测试剂盒，本发明结构简单，可根据工作者实际需要配制PCR反应体系，避免配制反应体系时多加或少加某一组分；本发明提高了工作效率。同时，本发明乙肝DNA检测试剂盒中所用的PCR缓冲液有效避免了组分析出的情况，提高了检测准确性。本发明的技术方案如下：

一种乙肝DNA检测试剂盒，包括盒体、试剂瓶、固定架、防震海绵块和PCR板；所述固定架包括顶面、底面和两个侧壁，顶面和底面之间设有隔板，隔板将固定架分割成A部和B部，固定架的顶面上设有固定孔，防震海绵块上设有与固定孔相配合的凹槽，防震海绵设置于固定架的A部，且防震海绵的顶面贴合固定架顶面的内侧，试剂瓶置于凹槽内，PCR板置于固定架的B部；

所述PCR板包括板架、多个单列板和多个横向标记块，所述板架为长方体框架，且顶部由第一纵杆、第二纵杆、第一横杆和第二横杆组成；所述单列板上设有多个PCR管放置槽，单列板的两端分别设有穿孔A和穿孔B，通过第一横杆穿过穿孔A、第二横杆穿过穿孔B将多个单列板置于板架上，且单列板宽度的总和小于第一横杆或第二横杆的长度；所述横向标记块上设有穿孔C，通过第一纵杆穿过穿孔C将横向标记块置于板架上，所述横向标记块上设有标记。

本发明的使用方法，首先将固定架从盒体中取出，然后将试剂瓶以及PCR板在固定架中取出，根据乙肝DNA检测方法，利用试剂瓶中的试剂在PCR板上配制PCR反应体系，首先配制第一列单列板上的PCR反应体系，配制完成后移动至最左侧（靠近第一纵杆的一侧），将配制好的单列板依次进行排列，未配制好的靠近另一侧；当需要暂停反应体系的配制时，通过横向标记块记录横向PCR管中是否加入了试剂。本发明中用于盛装试剂的试剂瓶有大有小，因此与试剂瓶相配合的固定孔及凹槽的内径有大有小。

在上述技术方案的基础上，所述横向标记块的个数与每个单列板上PCR管放置槽的个数相同，优选的，横向标记块的个数与每个单列板上PCR管放置槽的个数均为9个；这一结构与普通PCR仪中单列PCR的数目相同，便于实验操作。

在上述技术方案的基础上，所述横向标记块上的标记为三角形标记；三角形一般表示开始，这一个标记更利用工作者记住在此行开始加试剂；优选的，所述横向标记块为正方体型，标记位于横向标记块的一个面上。

在上述技术方案的基础上，所述单列板为9个，这一结构与普通PCR仪中单行PCR的数目相同，便于实验操作。

本发明中，所述乙肝DNA检测试剂盒中包括PCR缓冲液，所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.5-4.8g/L、硫酸铵5-5.5mM、海藻糖1-3g/L、氯化钙1-3g/L、Triton X-1000 2-4%（v/v）、叠氮钠0.1-0.2g/L，余量为去离子水。

进一步的，所述PCR缓冲液由以下组分组成：三甲基甘氨酸4.6g/L、硫酸铵5.3mM、海藻糖2g/L、氯化钙2g/L、Triton X-1000 3%（v/v）、叠氮钠0.1g/L，余量为去离子水。

更进一步的，所述PCR缓冲液的pH为9.0-9.5；优选的，所述pH为9.3；更优选的，利用氢氧化钠调节PCR缓冲液的pH。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

利用本发明可以快速大量的配置PCR反应体系，且不易出错；检测试剂盒PCR板中的单列板可在板架上滑动，从而区别出已经加了试剂盒没有加试剂的列，横向标记块可以标记出还未加试剂的行，进而确定没有加试剂的确定位置。

附图说明

为更清楚地说明背景技术或本发明的技术方案，下面对现有技术或具体实施方式中结合使用的附图作简单地介绍；显而易见地，以下结合具体实施方式的附图仅是用于方便理解本发明实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图；

图1为检测试剂盒剖视图；

图2为固定架结构示意图；

图3为固定架俯视图；

图4为防震海绵块俯视图；

图5为PCR板结构示意图；

图6为PCR板中板架结构示意图；

图7为单列板中穿孔A和穿孔B结构示意图。

符号说明：

1.盒体、2.试剂瓶、3.固定架、4.防震海绵块、5.PCR板、6.隔板、7.A部、8.B部、301.固定孔、401.凹槽、501.板架、502.单列板、503.横向标记块、504.第一纵杆、505.第二纵杆、506.第一横杆、507.第二横杆、508.PCR管放置槽、509.穿孔A、510.穿孔B、511.穿孔C、512.标记。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1一种乙肝DNA检测试剂盒

如图1-图7所示，检测试剂盒包括盒体1、试剂瓶2、固定架3、防震海绵块4和PCR板5；所述固定架3包括顶面、底面和两个侧壁，顶面和底面之间设有隔板6，隔板6将固定架分割成A部7和B部8，固定架3的顶面上设有固定孔301，防震海绵块4上设有与固定孔301相配合的凹槽401，防震海绵4设置于固定架3的A部7，且防震海绵4的顶面贴合固定架3顶面的内侧，试剂瓶2置于凹槽401内，PCR板5置于固定架3的B部5；

所述PCR板5包括板架501、9个单列板502和9个横向标记块503，所述板架501为长方体框架，且顶部由第一纵杆504、第二纵杆505、第一横杆506和第二横杆507组成；所述单列板502上设有9个PCR管放置槽508，每个单列板502的两端分别设有穿孔A 509和穿孔B 510，通过第一横杆506穿过穿孔A 509、第二横杆507穿过穿孔B 510将9个单列板502置于板架501上，且9个单列板502宽度的总和小于第一横杆506或第二横杆507的长度；所述横向标记块503上设有穿孔C 511，通过第一纵杆504穿过穿孔C 511将横向标记块503置于板架501上。

实施例2一种乙肝DNA检测试剂盒

在实施例1的基础上，如图1-图7所示，所述横向标记块503上设有三角形标记512；所述横向标记块503为正方体型，三角形标记512位于横向标记块503的一个面上。