具有抗氧化能力的乳酸菌菌株的筛选方法及应用与流程

文档序号:18736712发布日期:2019-09-21 01:17阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一株具有抗氧化能力的乳酸菌菌株的筛选方法,其特征在于,从传统腌菜中分离纯化得到多株乳酸菌菌株,通过过氧化氢耐受能力初筛,自由基清除能力复筛得到具有抗氧化能力的乳酸菌菌株;

筛选步骤如下:

1)分离纯化:从传统腌菜中分离乳酸菌,并纯化得到多株乳酸菌菌株;

2)初筛:检测步骤1)中得到的乳酸菌菌株过氧化氢耐受能力,初步筛选得到过氧化氢耐受能力较高的乳酸菌菌株;

3)复筛:检测步骤2)中得到的过氧化氢耐受能力较高的乳酸菌菌株的DPPH自由基、羟自由基以及超氧阴离子自由基清除能力,复筛得到具有抗氧化能力的乳酸菌菌株。

2.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述的传统腌菜为东北酸菜,新鲜白菜经清理后放入容器中,加满凉开水以及适量盐,用重物压在最上面,防止白菜漂起,注意不要让白菜露出水面,防止腐烂,于10-20℃放置20天以上,即可食用。

3.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述的分离纯化:

将所述的传统腌菜倍比稀释,取10-3、10-4、10-5、10-6四个稀释梯度,涂布在MRS平板,每个稀释梯度至少3个平板,于37℃厌氧培养48h左右获得单菌落,用接种环挑取单菌落,接种在MRS液体培养基中,24h后,用接种环挑取菌液,在MRS平板上划线,48h后,MRS平板上单菌落即为所得到纯分离的乳酸菌菌株。

4.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述的初筛:

不耐受过氧化氢的细菌在高浓度过氧化氢溶液中无法生长,或者生长缓慢而被淘汰,因此可以通过检测菌株在不同浓度过氧化氢溶液中生长状况而筛选得到对过氧化氢耐受能力较强的菌株;

具体步骤是,在MRS液体培养基中加入适量过氧化氢溶液,使得培养基中的过氧化氢起始浓度分别为0,0.4,0.7,1.0mmol/L,随后按照体积分数为1%的接种量接入分离所得的菌体浓度为1×108CFU/mL菌株培养液,置于37℃恒温培养箱中静置培养,每2h取1次菌液,用可见分光光度计测其OD值,检测菌株在不同起始过氧化氢浓度下的生长趋势,筛选具有较高过氧化氢耐受性的乳酸菌菌株。

5.根据权利要求1或4所述的筛选方法,其特征在于,所述的复筛:

采用所述初筛得到的较高抗氧化能力乳酸菌,制备乳酸菌无菌生理盐水菌悬液,以鼠李糖乳杆菌LGG作为参考菌株,以菌株DPPH自由基、羟自由基、及超氧阴离子自由基清除能力高于LGG为依据指标复筛得到高抗氧化能力乳酸菌菌株。

6.根据权利要求1所述的筛选方法,其特征在于,所述的复筛得到具有抗氧化能力的乳酸菌菌株包括戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)ZJUAF-4,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏日期为2018年11月21日,保藏编号为CGMCC NO:16767。

7.一种根据权利要求6中所述的戊糖片球菌ZJUAF-4,具有产生抗氧化酶和抗氧化物质的能力。

8.一种根据权利要求7中所述的戊糖片球菌ZJUAF-4的应用,其特征在于,用于发酵饲料。

9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述的发酵饲料的过程如下:

1)发酵菌液制备

在MRS液体培养基中接种权利要求6所述戊糖片球菌ZJUAF-4,静置培养24h,使菌液浓度达到1.0×109~1.0×1010 CFU/mL,制备戊糖片球菌ZJUAF-4发酵菌液;

2)发酵饲料制备

称取发酵原料,包括玉米10g,豆粕10g,麸皮24g,大豆皮6g,随后加入步骤1)制备的发酵菌液,添加量为总体系的5%,随后添加并接入适量温水,使总水分含量占发酵体系总质量的35%~40%,搅拌混匀,得到发酵体系,静置发酵24~48h,得到发酵饲料;所述的饲料经发酵后抗氧化水平提高,主要体现发酵饲料中抗氧化酶T-AOC、SOD、GSH-Px、CAT活性增加,同时含有抗氧化物质谷胱甘肽、肌肽、叶酸。

10.一种根据权利要求9中所述的发酵饲料的应用,其特征在于,用于提高育肥猪生长性能和抗氧化水平。

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