本发明涉及细胞技术领域，具体为一种优化的treg细胞诱导方法。
背景技术：
treg(调节性t细胞)细胞是一种极其重要的免疫调节细胞，近些年人们试图利用treg细胞对免疫系统的调节作用对自身免疫病、肿瘤以及其他免疫相关的疾病进行调控，维持机体的免疫平衡。但是treg细胞在体内的含量极少，从外周血中无法分离到足够的细胞，因此，从其他途径获取treg细胞就显得很有意义。
技术实现要素：
本发明所解决的技术问题在于提供一种优化的treg细胞诱导方法，以解决上述背景技术中的问题。
本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：一种优化的treg细胞诱导方法，包括以下步骤：
s1、从志愿者体内采集全血，然后使用密度梯度离心法获得单个核细胞(pbmc)；
s2、制备cd4+cd25-细胞：
1)、使用免疫磁珠从pbmc中分离出cd4+细胞；
2)、使用cd25正选磁珠从1)获取的cd4+细胞中去除cd4+cd25+细胞；
3)、使用双荧光染色发对2)去除去除cd4+cd25+细胞细胞后的溶液进行染色，并流式检测样品中cd4、cd25细胞的比例；
s3、诱导产生treg细胞：
1)、使用1640+10％fbs培养基悬浮cd4+cd25-细胞使细胞浓度为1×105cells/ml；
2)、取10ml步骤5中获取的浓度为1×105cells/ml的细胞悬液将其接种到培养瓶里；
3)、第二天向2)中培养瓶里的培养基中添加anti-cd3、il-2和tgf-β；
4)、第六天收集经过3)中溶液培养的细胞，并取部分细胞双荧光染色，流式检测样品中cd4、cd25细胞的比例。
优选的、所述s3中的培养瓶为t25培养瓶。
优选的，所述anti-cd3、il-2和tgf-β的添加量分别为10ug/ml、100u/ml和10ng/ml。
与已公开技术相比，本发明存在以下优点：本发明通过对现有的treg细胞的诱导表达体系进行优化，建立的一个更高效，更便捷的诱导表达技术。节约了大量的实验时间，极大地缩短了诱导表达的周期。
具体实施方式
为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种优化的treg细胞诱导方法，包括以下步骤：
s1、从志愿者体内采集全血，然后使用密度梯度离心法获得单个核细胞(pbmc)；
s2、制备cd4+cd25-细胞：
1)、使用免疫磁珠从pbmc中分离出cd4+细胞；
2)、使用cd25正选磁珠从1)获取的cd4+细胞中去除cd4+cd25+细胞；
3)、使用双荧光染色发对2)去除去除cd4+cd25+细胞细胞后的溶液进行染色，并流式检测样品中cd4、cd25细胞的比例；
s3、诱导产生treg细胞：
1)、使用1640+10％fbs培养基悬浮cd4+cd25-细胞使细胞浓度为1×105cells/ml；
2)、取10ml步骤5中获取的浓度为1×105cells/ml的细胞悬液将其接种到培养瓶里；
3)、第二天向2)中培养瓶里的培养基中添加anti-cd3、il-2和tgf-β；
4)、第六天收集经过3)中溶液培养的细胞，并取部分细胞双荧光染色，流式检测样品中cd4、cd25细胞的比例。
实施例2
一种优化的treg细胞诱导方法，包括以下步骤：
s1、从志愿者体内采集全血，然后使用密度梯度离心法获得单个核细胞(pbmc)；
s2、制备cd4+cd25-细胞：
1)、使用免疫磁珠从pbmc中分离出cd4+细胞；
2)、使用cd25正选磁珠从1)获取的cd4+细胞中去除cd4+cd25+细胞；
3)、使用双荧光染色发对2)去除去除cd4+cd25+细胞细胞后的溶液进行染色，并流式检测样品中cd4、cd25细胞的比例；
s3、诱导产生treg细胞：
1)、使用1640+10％fbs培养基悬浮cd4+cd25-细胞使细胞浓度为1×105cells/ml；
2)、取10ml步骤5中获取的浓度为1×105cells/ml的细胞悬液将其接种到培养瓶里；
3)、第二天向2)中培养瓶里的培养基中添加anti-cd3、il-2和tgf-β；
4)、第六天收集经过3)中溶液培养的细胞，并取部分细胞双荧光染色，流式检测样品中cd4、cd25细胞的比例。
优选的、所述s3中的培养瓶为t25培养瓶。
优选的，所述anti-cd3、il-2和tgf-β的添加量分别为10ug/ml、100u/ml和10ng/ml。
本发明通过对现有的treg细胞的诱导表达体系进行优化，建立的一个更高效，更便捷的诱导表达技术。节约了大量的实验时间，极大地缩短了诱导表达的周期。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明的要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。