一种从黄连中提取吡喃葡萄糖苷衍生物的工艺的制作方法

[0001]
本发明属于化学提纯领域，具体涉及一种从黄连中提取吡喃葡萄糖苷衍生物的工艺。


背景技术：

[0002]
黄连为毛茛科植物黄连(coptis chinensisfranch.)(味连)的干燥根茎。味连，又名川连、鸡爪黄连，主产四川，湖北、湖南、陕西、甘肃等省亦有栽培。味苦、性寒，归心、脾、胃、肝、胆、大肠经。具有清热燥湿，泻火解毒的功效。主要用于湿热痞满、呕吐吞酸、泻痢、黄疸、高热神昏、心火亢盛、心烦不寐、血热、目赤、牙痛、痈肿疔疮，外治湿疹、湿疮、耳道流脓。
[0003]
文献“黄连水提液化学成分的分离与鉴定，李雪改等”公开了一种从黄连水提液中分离化合物的方法，并提取鉴定了22个化合物，其提取分离方法如下：黄连干燥根茎1kg，用水回流提取2次(第一次8倍量，第二次6倍量)，每次2h，合并提取液，48℃下减压回收溶剂，浓缩后得到总浸膏(1l0 g)。采用重结晶、反复开放硅胶柱色谱、sephadex lh一20柱色谱、制备薄层色谱以及phplc等手段，对黄连的水提液进行系统分离，共得到22个化合物，并鉴定了它们的结构。得到的22个化合物中，包括一种吡喃葡萄糖苷衍生物，即其化合物15：3-(3’,4’二羟基苯基)-(2r)-乳酸-4
’-
o-β-d-吡喃葡萄糖苷(3-(3’,4'-dihydroxyphe
·
ny1)-(2r)-lactic acid-4
’-
o-β-d-glucopyranoside)。
[0004][0005]
本申请人申请的中国专利201610459981.5中公开了上述化合物15(即其式iv所示化合物)在制备用于预防和/或治疗糖尿病药物中的用途，该化合物的10mg/kg，20mg/kg及40mg/kg三个剂量组对正常小鼠糖耐量试验中给葡萄糖后60min血糖均有显著的降低作用，20mg/kg及40mg/kg还能降低auc并升高血糖抑制率，且未见明显毒副作用，药物安全有效。因此，上述式iv所示化合物在制备用于预防和/或治疗糖尿病药物中具有非常好的应用前景。
[0006]
但是，该化合物的制备方法非常复杂，成本高，收率低，不适合商业化生产。因此，寻找一种简单耗时短、操作简单、收率高的方法来制得上述化合物，具有非常好的应用前景。


技术实现要素：

[0007]
本发明的目的在于提供一种从黄连中提取式iv所示化合物的工艺。
[0008]
本发明提供了一种式iv所示化合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
[0009]
1)将黄连干燥、粉碎，得到药材粉末；
[0010]
2)将步骤1)所得药材粉末用提取溶剂提取，得到提取液；所述提取溶剂选自水，醇类溶剂，或水和醇类溶剂的混合溶液；
[0011]
3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0012]
4)取步骤3)所得滤液，采用层析柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为20％-60％时的洗脱液a；
[0013]
5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用层析柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％-40％的洗脱液b，浓缩，干燥，即得；
[0014]
其中，式iv所示化合物的结构为：
[0015]
进一步地，步骤4)中，收集的是乙醇体积百分数为40％的洗脱液a；步骤5)中，收集的是乙醇体积百分数为30％的洗脱液b。
[0016]
进一步地，步骤1)中，所述干燥方式包括阴干、阳干、烘干，干燥后产物中水分重量在14％以下；所述粉碎为粉碎至10-80目；
[0017]
优选地，所述干燥方式为在以下条件下烘干：在40-200℃下干燥0.5-10小时。
[0018]
进一步地，步骤2)中，所述提取方式选自回流提取、超声提取、浸泡提取中的一种或两种以上；其中，所述浸泡提取的温度为60-90℃；
[0019]
和/或，所述药材粉末与提取溶剂的质量比为1：(2-10)，优选为1：(6-8)；
[0020]
和/或，所述提取次数为2-3次，每次的提取时间为1.5-2h；
[0021]
和/或，所述提取溶剂选自水或体积浓度为30％的乙醇。
[0022]
进一步地，步骤3)中，所述酸选自盐酸、硫酸、醋酸的一种或两种以上，酸化后体系的ph值为1.5-6.5；
[0023]
和/或，浓缩后体系的体积为浓缩前的15％。
[0024]
进一步地，步骤4)中，所述梯度洗脱的条件如下：
[0025][0026]
进一步地，步骤5)中，所述梯度洗脱的条件如下：
[0027][0028]
进一步地，步骤4)中，所述层析柱选自hpd-400树脂柱、d-101树脂柱、hpd-100树脂柱、mcl树脂柱、ab-8树脂柱、ods柱；优选为ods柱或mcl树脂柱；
[0029]
步骤5)中，所述层析柱的填料选自mcl树脂柱、ods柱、hpd-300树脂柱、d-301树脂柱、x-5树脂柱；优选为ods柱。
[0030]
进一步地，步骤5)中，所述干燥的方式选自喷雾干燥、真空干燥、冷冻干燥、近红外干燥以及微波干燥中的一种或两种以上，干燥温度为70℃以下；
[0031]
和/或，浓缩液的体积为洗脱液a的5％。
[0032]
进一步地，步骤1)中，所述黄连选自黄连花、黄连叶、黄连根、黄连茎和黄连须中的一种或两种以上；优选为黄连根或黄连叶。
[0033]
ods柱即十八烷基硅烷键合硅胶柱。
[0034]
实验结果表明，本发明提供的方法能够从黄连中提取得到式iv所示化合物，本方法操作简单、工艺流程短耗时少，层析柱填料可重复利用，生产总成本降低，产品收率、纯度高，适合商业化生产。
[0035]
本发明中，阴干指在没有阳光直射、通风性很好的地方自然干燥；阳干指在阳光直射下干燥；烘干指加热干燥。
[0036]
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离
本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0037]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
[0038]
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
[0039]
实施例1、本发明的提取工艺
[0040]
1、提取
[0041]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0042]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入6倍量水，在60hz下超声提取2次，每次提取1小时，得到提取液；
[0043]
2、提纯
[0044]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0045]
(4)取步骤3)所得滤液，采用hpd-400树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％时的洗脱液a；所述梯度洗脱的条件如下：
[0046][0047]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用mcl树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液b，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物：
[0048]
[0049]
所述梯度洗脱的条件如下：
[0050][0051]
3、表征
[0052]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为91％；称量干燥后化合物计算得出收率为36％。
[0053]
实施例2、本发明的提取工艺
[0054]
1、提取
[0055]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0056]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加8倍量30％乙醇水溶液，在80℃下回流提取2次，每次提取1.5小时，得到提取液；
[0057]
2、提纯
[0058]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0059]
(4)取步骤3)所得滤液，采用d-101树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为20％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；
[0060]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用ods柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0061]
3、表征
[0062]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为92％；称量干燥后化合物重量计算得出收率为35％。
[0063]
实施例3、本发明的提取工艺
[0064]
1、提取
[0065]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0066]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入6倍量水，在90℃下浸泡提取3次，每次提取1小时，得到提取液；
[0067]
2、提纯
[0068]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0069]
(4)取步骤3)所得滤液，采用hpd-100树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为20％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；
[0070]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用hpd-300树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0071]
3、表征
[0072]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为88％；称量干燥后化合物计算得出收率为34％。
[0073]
实施例4、本发明的提取工艺
[0074]
1、提取
[0075]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0076]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入8倍量水，在70℃下浸泡提取2次，每次提取2小时，得到提取液；
[0077]
2、提纯
[0078]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0079]
(4)取步骤3)所得滤液，采用hpd-400树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为20％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；
[0080]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用mcl树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0081]
3、表征
[0082]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为90％；称量干燥后化合物计算得出收率为32％。
[0083]
实施例5、本发明的提取工艺
[0084]
1、提取
[0085]
(1)将黄连的提取部位黄连叶干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0086]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入6倍量水，在80℃下浸泡提取2次，每次提取2小时，得到提取液；
[0087]
2、提纯
[0088]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0089]
(4)取步骤3)所得滤液，采用mcl树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为60％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；
[0090]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用d-301树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0091]
3、表征
[0092]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为80％；称量干燥后化合物计算得出收率为15％。
[0093]
实施例6、本发明的提取工艺
[0094]
1、提取
[0095]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0096]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入6倍量水，在70℃下浸泡提取2次，每次提取2小时，得到提取液；
[0097]
2、提纯
[0098]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0099]
(4)取步骤3)所得滤液，采用ab-8树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；
[0100]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用x-5树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0101]
3、表征
[0102]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为85％；称量干燥后化合物计算得出收率为28％。
[0103]
实施例7、本发明的提取工艺
[0104]
1、提取
[0105]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0106]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入6倍量30％乙醇水溶液，在70℃下回流提取2次，每次提取1.5小时，得到提取液；
[0107]
2、提纯
[0108]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0109]
(4)取步骤3)所得滤液，采用ods柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用ods柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0110]
3、表征
[0111]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为94％；称量干燥后化合物计算得出收率为38％。
[0112]
实施例8、本发明的提取工艺
[0113]
1、提取
[0114]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0115]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入8倍量30％乙醇水溶液，在80℃下回流提取2次，每次提取2小时，得到提取液；
[0116]
2、提纯
[0117]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0118]
(4)取步骤3)所得滤液，采用mcl柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；
[0119]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用ods柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0120]
3、表征
[0121]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为92％；称量干燥后化合物计算得出收率为40％。
[0122]
实施例9、本发明的提取工艺
[0123]
1、提取
[0124]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0125]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入8倍量，在60hz下回流提取3次，每次提取1小时，得到提取液；
[0126]
2、提纯
[0127]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0128]
(4)取步骤3)所得滤液，采用ods柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为30％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；
[0129]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，mcl树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0130]
3、表征
[0131]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为90％；计算原药材中iv所示化合物含量，称量干燥后化合物计算得出收率为38％。
[0132]
实施例10、本发明的提取工艺
[0133]
1、提取
[0134]
(1)将黄连的提取部位黄连根干燥，在40-200℃,干燥0.5-10小时，至水分14％以下，然后粉碎10-80目，得到药材粉末；
[0135]
(2)将步骤(1)所得药材粉末中加入6倍量水，在90℃下浸泡提取2次，每次提取2小时，得到提取液；
[0136]
2、提纯
[0137]
(3)将步骤2)所得提取液浓缩，加入酸，酸化，析出固体，然后过滤，去除固体，保留滤液；
[0138]
(4)取步骤3)所得滤液，采用mcl树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液a，所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(4)相同；
[0139]
(5)将步骤4)所得洗脱液a浓缩，得浓缩液，采用mcl树脂柱，以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂对浓缩液进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分数为40％的洗脱液b(所述梯度洗脱的条件与实施例1的步骤(5)相同)，浓缩，得浸膏，将浸膏干燥，即得式iv所示化合物。
[0140]
3、表征
[0141]
通过核磁检测与对照品核磁图谱比较，确认为iv所示化合物。通过色谱条件与系
统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以水为流动相b，hplc检测分析纯度为90％；称量干燥后化合物计算得出收率为33％。
[0142]
表1各样品的提取工艺及收率、纯度对比
[0143][0144][0145]
从表1可以看出，采用本发明实施例1-10的方法均能够从黄连中提取得到式iv所示化合物。特别是采用实施例7或8的方法，能够得到高收率、高纯度的目标产物，即采用回流提取的方式、提取两次后，再以乙醇体积百分数为0-80％的水溶液为洗脱剂，依次通过2次ods柱进行梯度洗脱，或者依次通过mcl树脂柱和ods柱进行梯度洗脱，分别收集乙醇体积百分数为40％和30％的洗脱液，得到的目标产物的收率高达38％-40％，纯度高达92％-94％。
[0146]
综上，实验结果表明，本发明提供的方法能够从黄连中提取得到式iv所示化合物，本方法操作简单、层析柱填料可重复利用，使总体成本降低，产品收率高、纯度高，适合商业化生产。