分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物的提取与分离领域，具体涉及使用分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺方法。
【背景技术】
[0002]林可霉素化学名称为6-(1-甲-反-丙基-L-2-吡咯烷甲酰氨基)-1_硫代-6，8- 二脱氧-D-赤式-a-D-半乳辛吡喃糖苷，是从链霉菌林可变种培养液中获得的一类抗生素。它可作用于敏感菌核糖体的50S亚基，阻止肽键的生成，从而抑制细菌的蛋白质合成，达到抗菌的目的。它适用于治疗革兰氏阳性菌所致的各种感染，例如肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌引起的肺炎、脓胸、败血症、皮肤软组织感染、腹腔感染、骨关节感染、妇科感染疾病等。林可霉素具有生物医药的特性，并且抗菌能力强、抗菌谱广、用药较为简便(可口服、滴注、外用等)，因而医学界加大了对其药理学性质以及临床应用等方面的研究力度，各生产厂家也对林可霉素的分离提纯工艺进行了大量的探索，目前国内生产厂家采用的林可霉素提取分离方法主要以溶剂萃取、树脂吸附等为主。
[0003]专利CN104356179A使用LSA-100型大孔树脂柱提纯林可霉素，是先将林可霉素粗品加水溶解，水溶液经脱色、稀释、调节PH之后，上样吸附，饱和的树脂吸附柱经水洗后，以正丁醇解吸，再经浓缩结晶得到成品。此方法得到的林可霉素B组分小于1%，纯度高，不足之处在于林可霉素水溶液处理过程较为复杂。
[0004]专利CN103724380A使用陶瓷超滤膜对林可霉素发酵液进行直接过滤，再以仲辛醇与盐酸进行萃取与反萃取，一次反萃取液调碱性以后经过陶瓷超滤膜第二次过滤，再经过仲辛醇与盐酸的第二次萃取与反萃取后，结晶干燥得到成品。此方法林可霉素收率高，可达96%以上，并可有效地降低生产废水C0D，不足之处在于其过滤操作需反复调节pH值，萃取、反萃过程较为繁琐。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种高效分离提纯林可霉素的工艺方法。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方案:
[0007]分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺，包括以下步骤:
[0008]将林可霉素发酵液过滤，以氢氧化钠水溶液调pH至10?11，用氯仿反复萃取2?3次得到萃取液；
[0009]将萃取液栗入林可霉素分子印迹聚合物填装的吸附柱，吸附分离至吸附柱达到饱和；
[0010]吸附达到饱和后，吸附柱用甲醇-醋酸混合液于25?40°C条件下以3?5ml/min的流速洗脱，洗脱液在60?70°C条件下真空浓缩至原体积1/3?1/2，调节pH为0.5?2.0，冷却至O?10°C结晶干燥得到林可霉素。
[0011]按上述方案，所述分子印迹聚合物按以下方法制备而来:
[0012]I)以苯乙烯为聚合单体，在分散剂的作用下，热聚合得到聚苯乙烯微球并作为种球；
[0013]2)以此种球为溶胀核心，在溶胀剂的作用下增大其体积并通过溶剂的作用形成多孔结构；
[0014]3)在多孔结构的表面使林可霉素与功能单体进行结合，并引发再次的聚合，在交联剂的作用下形成多孔网状分子印迹聚合物微球。
[0015]本发明的有益效果是:
[0016]分离流程较为简单，溶剂消耗低，萃取液与洗脱液可反复使用，吸附过程在有机溶剂中进行，因而吸附剂不会受到酸碱等物质的影响，并且分子印迹聚合物稳定性好，可多次重复再生使用。
[0017]按照本发明的工艺步骤，所制得林可霉素纯度为94.6%，收率81.93%，分离效果良好，适合于工业分离提取林可霉素。
【具体实施方式】
[0018]以下仅是对本发明的解释与说明，本发明保护范围不限于以下实施例。
[0019]方案中林可霉素分子印迹聚合物的制备过程如下:
[0020]I)将苯乙烯单体与无水乙醇混合，并加入聚乙烯吡咯烷酮与偶氮二异丁腈，其中控制苯乙烯与乙醇的体积比为1: (I?1.4)，偶氮二异丁腈与聚乙烯吡咯烷酮的质量比为1: (5?7.5);在隔绝空气的条件下60?70°C搅拌反应20?24h，分离、干燥得到成品聚苯乙烯微球；
[0021]2)取步骤I)聚苯乙烯微球与十二烷基硫酸钠均匀分散到超纯水中，搅拌溶胀，其中聚苯乙烯微球与十二烷基硫酸钠的质量比为(4?5):1 ;再加入偶氮二异丁腈、邻苯二甲酸二丁酯与甲苯搅拌溶胀20?24h，其中偶氮二异丁腈、邻苯二甲酸二丁酯、甲苯的质量比为 1: (5.2 ?6.3): (8.7 ?9.6)；
[0022]3)取模板分子林可霉素、甲基丙烯酸、二甲基丙烯酸乙二醇酯、十二烷基硫酸钠、聚乙烯醇、辛醇与氯仿低温混合均匀后加入上述装置内，继续进行搅拌20?24h，其中控制模板分子，功能单体，交联剂三者物质的量之比为1: (4?6): (20?25)，分散剂与乳化剂的质量比为1: (4?5)，致孔剂体积比为(5?7): (9?10) ο
[0023]4)热引发聚合制备林可霉素分子印迹聚合物
[0024]取分散剂聚乙烯醇溶于超纯水中，其中控制聚乙烯醇水溶液浓度为8?10g/l ο此体系加入上述反应装置中，再升温至60?70°C并反应20?24h，得到分子印迹聚合物；
[0025]5)模板分子的去除
[0026]将所制得的印迹聚合物离心分离，洗涤干燥后，将其以甲醇与醋酸的混合溶剂清洗20?24h，再用纯甲醇与超纯水反复离心洗涤、干燥，获得最终的成品分子印迹聚合物。
[0027]使用林可霉素分子印迹聚合物分离提纯林可霉素的工艺如下:
[0028]将林可霉素发酵液过滤，以氢氧化钠水溶液调pH至10?11，用氯仿反复萃取2?3次得到萃取液；
[0029]将萃取液栗入林可霉素分子印迹聚合物填装的吸附柱，吸附分离至吸附柱达到饱和；
[0030]吸附达到饱和后，吸附柱用甲醇-醋酸混合液于25?40°C条件下以3?5ml/min的流速洗脱，洗脱液在60?70°C条件下真空浓缩至原体积1/3?1/2，调节pH为0.5?2.0，冷却至O?10°C结晶干燥得到林可霉素。
[0031]实施例1
[0032]取一定量的林可霉素发酵液，以氢氧化钠水溶液将其pH值调节至10.2，用同体积的氯仿反复萃取2次，得到待吸附的萃取液；
[0033]将苯乙烯单体与无水乙醇混合，并加入分散剂聚乙烯吡咯烷酮与引发剂偶氮二异丁腈，在超声细胞粉碎仪上超声分散，使其均匀混合后加入四口烧瓶内，加热聚合，将获得的聚合物离心分离、清洗、干燥后，最终得到成品聚苯乙烯微球。取干燥后的聚苯乙烯微球与分散剂十二烷基硫酸钠加入到超纯水中，在超声细胞粉碎仪上超声分散，使其均匀混合后加入四口烧瓶内；取引发剂偶氮二异丁腈，溶胀剂邻苯二甲酸二丁酯与致孔剂甲苯加入到超纯水中，在超声细胞粉碎仪上超声分散，所得混合物加入上述烧瓶内，搅拌溶胀24h。取模板分子林可霉素，功能单体甲基丙烯酸，交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯，以及分散剂十二烷基硫酸钠、聚乙烯醇，溶剂辛醇与氯仿，加入到超纯水中，在超声细胞粉碎仪上超声分散，所得混合物