一种金刚烷胺有机酸离子盐及其制备方法与应用与流程

本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种金刚烷胺有机酸离子盐及其制备方法与应用。

背景技术：

病毒是由核酸分子与蛋白质构成的非细胞形态的营寄生生活的生命体，由于病毒具有极强的繁殖能力，一旦发生感染，则会出现发热、头痛、咳嗽等全身中毒症状及病毒寄主和侵袭组织器官导致炎症损伤而引起的局部症状(腹泻、皮疹、肝脏功能损伤等)。根据病毒的不同产生症状不同，有些病毒还会使心肌受到损伤，引起病毒性心肌炎。因此，通常需要服用抗病毒类药物。

金刚烷胺又被称为三环葵胺，是一种常用的抗病毒类药物，通常由金刚烷溴化后与尿素反应制得。早期用于抑制流感病毒，但由于其治疗剂量与副作用剂量想接近，临床推广应用受到限制。20世纪初，金刚烷胺作为帕金森病和流感病毒a型感染性疾病的治疗药。金刚烷胺不溶于水，易溶于有机溶剂。在药理学上，金刚烷胺可以促进体神经末梢的多巴胺释放，加强中枢神经系统。此外，金刚烷胺具有抗rna病毒作用，可以阻止rna病毒穿透宿主细胞；如病毒已经传入人体细胞，金刚烷胺能阻止病毒的脱壳和释放核酸，从而干扰病毒的早期复制。在临床上，金刚烷胺对a型流感病毒具有作用。由于金刚烷胺对于肾脏具有一定的损失副作用，肾功能障碍者应小心服用；对胚胎有一定毒性且致畸形，孕妇应慎用。

有机酸有指广泛存在于生物中的一种含有羧基的酸性有机化合物，有机酸(如水杨酸、苯甲酸、香草酸、肉桂酸、原儿茶酸等)通常具有一定的抑菌作用，但尚其对病毒的抑菌效果有限。水杨酸具有脂溶性，存在于柳树皮、白珠树叶等植物中，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等细菌及白色假丝酵母、黑曲霉等真菌均有明显的抑制作用，然而高浓度的水杨酸具有一定的毒性副作用，在临床上，应谨慎使用。苯甲酸又称安息香酸，微溶于水，易溶于乙醇、乙醚、丙酮等有机溶剂。苯甲酸是弱酸，酸性比脂肪酸要强，可以与碱性物质进行反应生成苯甲酸盐。苯甲酸主要以游离酸或衍生物形式存在。在药理学上，苯甲酸通常作为抑菌剂，具有抑制真菌、细菌和霉菌的生长，涂在皮肤上可以治疗癣类皮肤疾病。香草酸属于肉桂酸类衍生物，广泛存在于自然界中，属于植物酚酸类天然原材料，在香夹兰蔻、香子兰、胡黄连、安息香膏等许多植物及精油中均有发现。香草酸微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。香草酸是胡黄连有效成分之一，具有抗菌消炎、抗氧化、抑制酪氨酸酶活性、促凝血活性等作用。相对于其它有机酸药物原料，香草酸毒性较小，在小于100μg/ml浓度范围内对v79细胞无毒性。肉桂酸是从肉桂皮或安息香分离出的天然植物有机酸，不溶于冷水，溶于乙醇、丙酮、乙醚等有机溶剂。在药理学上，肉桂酸对人肺腺癌细胞有抑制作用，在抗癌方面有极大的应用价值。肉桂酸还具有镇痛、抑菌、抗氧化等作用，可以用于细菌和真菌抑制剂。原儿茶酸来自于天然植物原料，广泛存在于鳞始蕨科植物乌蕨叶、冬青科植物冬青叶等植物中。原儿茶酸溶于50份水中，溶于乙醇、乙醚等有机溶剂；具有抗菌作用，尤其是对大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌、产碱杆菌及枯草杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑菌作用。

综上所述，有机酸虽然低毒性，但却对病毒作用力有限，金刚烷胺对病毒具有较好地抑制作用，但却毒性较强。

技术实现要素：

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种金刚烷胺有机酸离子盐，能够降低金刚烷胺的毒性，且还意外地具有较金刚烷胺更强的抗毒效果。

本发明还提出一种上述离子盐的制备方法。

本发明还提出一种上述离子盐的应用。

根据本发明的第一方面实施例的离子盐，所述离子盐包含阴离子和阳离子，所述阴离子的前体为有机酸，所述阳离子的前体为金刚烷胺。

根据本发明的一些实施方式，有机酸选自具有抑菌作用的有机酸；优选为水杨酸、苯甲酸、香草酸、肉桂酸、原儿茶酸。

根据本发明实施例的离子盐，至少具有如下有益效果：本发明实施例方案的金刚烷胺有机酸离子盐不仅兼具金刚烷胺和有机酸前体的药理性质(抗病毒及抑菌性等)，而且还具有良好的水溶性；避免了由于金刚烷水溶性差导致口服过程中引起的对脏器的损伤(尤其是对肾功能较弱的患者具有致命的副作用)。

根据本发明的第二方面实施例的制备方法，包括以下步骤：

在保护气氛、40～60℃下，向添加有机酸的有机溶剂中添加金刚烷胺，反应后所得产物即为金刚烷胺有机酸离子盐；优选地，反应过程在45～50℃下进行。

根据本发明的一些实施方式，所述保护气氛为n2或惰性气体气氛。

根据本发明的一些实施方式，所述有机酸与金刚烷胺的摩尔比为1:(0.9～1.1)；优选地，所述有机酸与金刚烷胺的摩尔比为1：1。

根据本发明的一些实施方式，所述反应是在回流下进行2～4h。

根据本发明的一些实施方式，所述方法还包括分离提纯的步骤；优选地，所述分离提纯具体为将所得产品溶液用乙酸乙酯进行重结晶处理。

根据本发明的一些实施方式，所述方法还包括在重结晶后干燥的步骤；优选地，具体为将重结晶后的产物，经过抽滤后，再经真空干燥处理；优选地，所述干燥温度为30～50℃，干燥时间为24～48h。

根据本发明的一些实施方式，所述有机溶剂为丙酮或乙醇。

根据本发明的一些实施方式，所述反应是在回流下进行；优选地，所述反应是在水浴回流、油浴或砂浴回流下进行。

根据本发明实施例的制备方法，至少具有如下有益效果：本发明方案的制备方法反应条件温和，合成步骤操作简便，所得产品纯度高，收率高；通过有机酸等助溶剂与金刚烷胺所制备得到的金刚烷胺有机酸离子盐大大提高了在水中的溶解性，更能促进机体吸收。

根据本发明的第三方面实施例的应用，将上述离子盐用于抗病毒和/或抗菌药物制备中；优选地，所述病毒为流感病毒；优选地，所述药物剂型为溶液剂；更优选地，所述药物剂型为透皮注射剂。

根据本发明的第三方面实施例的应用，将上述离子盐用于制备病毒抑制剂或抑菌剂。

根据本发明实施例的应用，至少具有如下有益效果：本发明实施例方案的有机酸离子盐水溶性好，可通过透皮吸收起到一定的缓释作用，从而降低药物毒性、增强药物抗菌抗病毒性能。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1为本发明实施例1制得的金刚烷胺有机酸离子盐的mtt细胞毒性测试实验结果图。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明的实施例一为：一种金刚烷胺有机酸离子盐，该离子盐的阴离子前体为水杨酸，阳离子前体为金刚烷胺；其可通过如下步骤制备而得：称取1.38g水杨酸(10mmol)，加入20ml乙醇，通入n2，且反应全程在n2氛围下进行，将反应容器置于热水浴中，使反应温度保持在45℃左右，回流下进行。称取3.11g金刚烷胺(10mmol)，配制成乙醇饱和溶液，将该饱和溶液少量多次(约3～5次，本实施例为4次)快速加入反应容器中，保证n2氛围及反应实时温度为45℃左右。添加完毕后，回流反应3h。用乙酸乙酯对反应后的产物进行重结晶处理，再经抽滤后，在真空干燥箱中40℃下干燥36h后，即得该离子盐。其反应原理如下：

本发明的实施例二为：一种金刚烷胺有机酸离子盐，其与实施例一的区别在于：阴离子前体为苯甲酸；制备过程中称取的苯甲酸的质量为1.22g。

本发明的实施例三为：一种金刚烷胺有机酸离子盐，其与实施例一的区别在于：阴离子前体为香草酸；制备过程中称取的香草酸的质量为1.68g。

本发明的实施例四为：一种金刚烷胺有机酸离子盐，其与实施例一的区别在于：阴离子前体为肉桂酸；制备过程中称取的肉桂酸的质量为1.48g。

本发明的实施例五为：一种金刚烷胺有机酸离子盐，其与实施例一的区别在于：阴离子前体为原儿茶酸；制备过程中称取的肉桂酸的质量为1.54g。

取上述实施例制得的离子盐进行应用效果测试，具体如下：

1、毒理学测试

噻唑蓝(四甲基偶氮唑盐，3(4,5dimethylthiazol)2,5diphenyltetrazoliumbromide，mtt)比色法是目前应用最广泛的一种检验细胞活性的方法。其检验原理为线粒体中的琥铂酸脱氢酶能使外源性mtt还原为难溶解的蓝色结晶formazan。实验中将mtt溶于ph为7.2的磷酸盐缓冲液中，浓度为5mg/ml，除菌后2ml分装，放入4℃冰箱(2～8℃间均可)避光保存。本实验采用的细胞为v79仓鼠肺细胞，将v79细胞计数，调节细胞数至10⁵/ml，制备10ml细胞悬液，加入96孔板。然后在细胞培养箱(5％co2，37℃)中培养24小时。在96孔板中每五个孔(五组重复试验)加入含5％血清的(dulbecco’smodifiedeagle’smedium，dmem)稀释的待测样品“金刚烷胺水杨酸离子盐”溶液10μg/ml，20μg/ml，40μg/ml，80μg/ml，100μg/ml。阴性对照孔只加入待测样品溶剂20％乙醇溶液，在细胞培养箱中培养12小时(两组重复试验为24小时，48小时)。吸除药液120μl，每孔加入新鲜配制的mtt溶液20μl，细胞培养箱中培养4小时。吸去上清液5μl，每孔加入150μl含10％十二烷基磺酸钠(sodiumlaurylsulfonate，sds)的0.01mhcl溶液，摇晃30分钟。最后用酶标仪测定不同浓度、不同培养时间段待测样品的a490吸光值(od值)计算细胞存活率。

细胞存活率(％)＝(样品a490-空白a490)/(阴性对照a490-空白a490)×100％

实施例1制得的离子盐的测试结果如图1所示，从图1中可以看出，本发明实施例1制备的离子盐即使在100μg/ml下，细胞存活率仍可达50％以上，因此，其具有低毒性。其余实施例制得的离子盐样品测试条件类似设计，且同样取得了类似的效果，即使在100μg/ml下，细胞存活率均可达50％以上。

2、抗菌测试

制作接种五种菌(大肠杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、白假丝酵母菌和真菌黑曲霉)的试验平板，每种菌种重复3次。在试验平板中，用灭菌小刀在试验平板上切割正方形(0.5cm×0.5cm)，用镊子将中间培养基挑去成正方形，往正方形中加入10μl浓度(重复试验为40μl和80μl浓度)为20μg/ml的金刚烷胺水杨酸离子盐样品，细菌在37℃培养箱中培养24h，真菌、霉菌放置28℃下培养7天。空白对照组添加的是空白溶剂，即去离子水。

表1为实施例1制得的金刚烷胺水杨酸离子盐的抑菌效果定性结果

上述供试菌均为市购。

从表1可以看出，金刚烷胺水杨酸离子盐对于细菌有着比较好的抑制效果，而对于真菌的抑制效果较差。

3、抗病毒测试

甲型h1n1流感病毒也称人感染猪流感，属于rna病毒，主要是通过飞沫经呼吸道传播，也可以通过口腔、鼻腔、眼睛等传染。取实施例1制得的离子盐进行体内动物测试，使用三组平行小白鼠通过鼻腔感染甲型h1n1流感病毒，感染观察期为8天(通常可为5～10天)。待出现症状，加入金刚烷胺水杨酸离子盐溶液20μg/ml(根据金刚烷胺和水杨酸在医学上的建议用量)，每三天进行注射治疗，并观察小鼠血液中病毒、抗体、血凝素、白细胞含量等指标的变化情况，连续观察2周。观察结果表明，使用药物一周后，小鼠病毒感染症状得到缓解，两周后，小鼠基本得到治愈，并且无副反应情况发生。由此表明，本发明实施例制得的离子盐具有较好的抗病毒效果，其他实施例制得的离子盐的测试条件类似，且同样取得了类似的效果，在两周左右均可使得小鼠基本治愈。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。