一种无患子三萜类皂苷单体的制备方法与流程

文档序号:24530007发布日期:2021-04-02 10:08阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种无患子三萜类皂苷单体的制备方法,其特征在于,它包括以下步骤:

1)用无患子果皮制备无患子皂苷提取液;

2)对无患子皂苷提取液进行萃取提纯除杂,浓缩成稠膏;

3)稠膏用水稀释成溶液,用大孔吸附树脂柱对溶液进行吸附;对吸附后的大孔吸附树脂柱进行洗脱,并收集洗脱液;

4)将收集的洗脱液蒸发至干,得固体物;

5)将固体物用溶剂制成溶液或混悬液后加入硅胶中吸收制成样品-硅胶混合物,然后装入已预装硅胶的层析柱中,用洗脱液洗脱,控制流速为每克层析柱中硅胶0.002-0.05ml/min的范围,分份收集洗脱液,每份体积为40-120ml/kg柱填料,根据薄层色谱和高效液相色谱显示无成分流出后,停止洗脱;根据薄层色谱和高效液相色谱显示,对含有相同皂苷成分的洗脱液分别进行合并;对合并后的洗脱液蒸发至干,得固体物;

6)取固体物真空干燥,主要得以下四类组分:

a类组分包含:sapindosideb和/或sapindosidec混合物;

b类组分包含:rarasaponinii、sapinmusaponionk和/或sapinmusaponionl混合物;

c类组分包含:rarasaponiniii和/或rarasaponinvi混合物;

d类组分包含:sapinmusaponionm和/或sapinmusaponionn;

7)对步骤6)得到的上述四类组分进行色谱分离,最后得到包含sapindosideb、sapindosidec、rarasaponinii、sapinmusaponionk、sapinmusaponionl、rarasaponiniii、rarasaponinvi、sapinmusaponionm和sapinmusaponionn中一种或多种的皂苷成分单体。

2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤7)中的色谱分离方式包括:取步骤6)中的四类组分各一份,每份分别用50%-80%甲醇溶液溶解成浓度为0.1-1.0g/ml的溶液,分别将溶液加入装有反相硅胶的层析柱,溶液与反相硅胶的质量比为1:5-1:40;并用梯度或等度洗脱方式洗脱,控制流速为每克反相硅胶0.001-0.1ml/min的范围;对层析柱中的洗脱液进行分份收集,每份体积占柱填料体积的0.05:1-0.5:1;根据薄层色谱和高效液相色谱液显示无成分流出后,停止洗脱;根据薄层色谱和高效液相色谱显示,对含有相同皂苷成分的洗脱液进行合并,合并后的洗脱液蒸发至干,得固体物,真空干燥,得sapindosideb、sapindosidec、rarasaponinii、sapinmusaponionk、sapinmusaponionl、rarasaponiniii、rarasaponinvi、sapinmusaponionm和sapinmusaponionn中一种或多种的皂苷成分单体。

3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤7)中色谱分离方式包括:取步骤7)中的四类组分各一份,每份分别用60%-100%甲醇溶液溶解,制成浓度为0.1-0.2g/ml溶液,经制备高效液相色谱仪分离,制备的具体过程和条件为:制备高效液相色谱仪为单泵、二元泵或者四元泵中的一种,其检测器为检测波长为203±2nm的紫外检测器或二极管阵列检测器;色谱柱种类为制备柱和半制备柱,进样体积为0.5ml-5ml,流动相种类为甲醇-水和乙腈-水,比例为40:60-50:50,流速:3-15ml/min,循环1-5次,对流动相进行分份收集,每份收集体积为10-100ml,根据高效液相色谱液显示无成分流出后,停止洗脱;根据高效液相色谱显示,对含有相同皂苷成分的洗脱液进行合并,合并后的洗脱液蒸发至干,得固体物,真空干燥,得sapindosideb、sapindosidec、rarasaponinii、sapinmusaponionk、sapinmusaponionl、rarasaponiniii、rarasaponinvi、sapinmusaponionm和sapinmusaponionn中一种或多种的皂苷成分单体。

4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤7)中的色谱分离方式为:

a)取b、c、d三种组分各一份,分别按步骤5处理,得到固体物,对所得固体物进行真空干燥,得rarasaponinii、sapinmusaponionk、sapinmusaponionl、rarasaponiniii、rarasaponinvi、sapinmusaponionm、sapinmusaponionn中一种或多种的皂苷成分单体;

b)取a类组分的皂苷混合物,用50%-80%甲醇溶液溶解成浓度为0.1-1.0g/ml的溶液,将溶液加入装有反相硅胶的层析柱,混合物与反相硅胶的质量比为1:5-1:40;并用梯度或等度洗脱方式洗脱,控制流速为每克反相硅胶0.001-0.1ml/min的范围;分份收集洗脱液,每份体积占柱填料体积的0.05:1-0.5:1;根据薄层色谱和高效液相色谱液显示无成分流出后,停止洗脱;根据薄层色谱和高效液相色谱显示,对含有相同皂苷成分的洗脱液进行合并,合并后的洗脱液蒸发至干,得固体物,真空干燥,得sapindosideb或sapindosidec皂苷单体。

5.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤1)中制备无患子皂苷提取液的具体步骤为:将无患子果皮原料粉碎,按料液重量比1:5-1:10加入60%-80%的乙醇溶液,在沸浴下提取2-3次,每次提取30-150min,过滤,合并,回收乙醇,浓缩液加入水至每l中相当于果皮原料2.0-4.0kg,搅匀,得提取液。

6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)的具体操方式为:按提取液与溶剂体积比为1:1-3:1的剂量,将提取液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取除杂,得萃取液;按萃取液与正丁醇体积比为1:0.4-1:2.5的剂量,将萃取液用正丁醇再萃取2-4次,合并正丁醇萃取液,浓缩至近干的稠膏,稠膏的含水量为15%-20%。

7.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤3)的洗脱步骤为:用ab-8型或d101型大孔吸附树脂柱对溶液进行吸附,大孔树脂和溶液的体积比为1:1.5-1:3,用水洗脱大孔吸附树脂柱至无色,弃去洗脱液,再按洗脱体积与大孔树脂柱填料体积比为1:1-10:1,依次分别以10%、30%、50%、70%、80%、90%的乙醇溶液洗脱,按流份收集50%-80%乙醇洗脱液,根据薄层色谱和高效液相色谱跟踪富集目标成分,显示无成分流出后,停止洗脱。

8.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤5)中制备样品-硅胶混合物的具体方式为:将固体物用氯仿-甲醇溶液溶解或分散,制成浓度为0.1-1.0g/ml溶液或混悬液,分次加至硅胶中吸收,挥干溶剂,重复操作至完全添加,制得样品-硅胶混合物;其中氯仿-甲醇溶液的体积比为1:2-1:5,固体物与硅胶的质量比为0.1:1-0.8:1。

9.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤5)中的层析柱为装有80-300目的正相硅胶的层析柱,其中固体物与层析柱中硅胶的重量比为1:5-1:25,并且层析柱的内径范围为20mm-200mm,装柱后混合物的厚度比与层析柱中的预装硅胶高度比为1:4-1:50。

10.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述步骤5)中洗脱液为体积比为20:1-10:1的氯仿-甲醇溶液;或者为体积比为5:1-1:1的石油醚-丙酮溶液;或者为体积比为5:1-1:2的石油醚-乙酸乙酯溶液;或者为体积比为10:1-1:2的氯仿-丙酮溶液。


技术总结
一种无患子三萜类皂苷单体的制备方法,其步骤为:1)用无患子果皮制备无患子皂苷提取液;2)对提取液进行萃取除杂,浓缩成稠膏;3)稠膏稀释成溶液,用大孔吸附树脂柱吸附;而后进行洗脱,并收集洗脱液;4)将收洗脱液蒸发得固体物;5)将固体物溶解或分散后加入硅胶中吸收制成样品‑硅胶混合物,装入层析柱中,用洗脱液洗脱,分份收集洗脱液,对相同皂苷成分的洗脱液进行合并;再对洗脱液蒸发得固体物;6)固体物真空干燥,得四类主要组分;7)对四类组分进行色谱分离,最后得包含Sapindoside B、Sapindoside C、Rarasaponin II、Sapinmusaponion K、Sapinmusaponion L、Rarasaponin III、Rarasaponin VI、Sapinmusaponion M和Sapinmusaponion N中一种或多种的皂苷成分单体。本法制备的三萜类皂苷为无患子果皮表面活性物质的主要成分。

技术研发人员:吴泽君;李洪权;唐小鹏;陈珉珉
受保护的技术使用者:株洲市食品药品检验所
技术研发日:2020.12.30
技术公布日:2021.04.02
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