技术特征：
1.用于raa恒温扩增的免提取快速释放核酸的裂解液，其特征在于，为50-200mm的naoh水溶液。2.根据权利要求1所述的用于raa恒温扩增的免提取快速释放核酸的裂解液，其特征在于，为50-100mm的naoh水溶液。3.根据权利要求2所述的用于raa恒温扩增的免提取快速释放核酸的裂解液，其特征在于，为80mm的naoh水溶液。4.一种核酸释放和荧光检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：s1、取保存在样本保存液中的拭子样本的上清液待用；s2、在室温条件下，按照体积比1:(1-50)，取权利要求1-3任一项所述的裂解液和步骤s1的上清液，混合均匀，静置反应5-15min；s3、以步骤s2所得混合液为模板，直接进行恒温扩增和荧光检测。5.根据权利要求4所述的核酸释放和荧光检测的方法，其特征在于，步骤s2中，裂解液和步骤s1的上清液的体积比为1:25。6.根据权利要求4所述的核酸释放和荧光检测的方法，其特征在于，步骤s2中，混合均匀的方法为1500-3000rpm涡旋混合3-10s。7.根据权利要求4所述的核酸释放和荧光检测的方法，其特征在于，步骤s2中，静置反应的时间为15min。8.根据权利要求4所述的核酸释放和荧光检测的方法，其特征在于，是针对hpv16病毒的核酸检测；步骤s3中，恒温扩增的引物的核苷酸序列如seq idno.1、seq id no.2所示。9.根据权利要求8所述的核酸释放和荧光检测的方法，其特征在于，步骤s3中，荧光检测所使用的探针是在如seq id no.3所示的序列上设计四个修饰位点：在距离5’端的32bp的中部位置插入dspacer作为核酸外切酶的识别位点；在dspacer的上游距离1个碱基的位置标记1个荧光基团；在dspacer的下游距离1个碱基的位置标记1个淬灭基团；再在3’端末端标记一个封闭基团。10.根据权利要求9所述的核酸释放和荧光检测的方法，其特征在于，所述封闭基团为胺基、磷酸基团、生物素、生物素-teg或者c3-spacer。
技术总结
本发明公开了一种用于RAA恒温扩增的免提取快速释放核酸的裂解液及其应用，涉及核酸提取检测技术领域，具体为为50-200mM的NaOH水溶液。采用这种裂解液，只需要在室温条件下，按照体积比1:(1-50)，取裂解液和待测样本上清液混合均匀，静置反应5-15min；最后直接以所得混合液为模板，进行恒温扩增和荧光检测。使用本发明提供的裂解液不需要加入任何额外原料，热裂解或常温裂解都能适用；也不需要在裂解后进行任何洗涤纯化处理，直接进行恒温扩增或荧光PCR检测，检测结果精度高，不产生干扰；操作简便，裂解过程仅需5-15min，健康环保，可以常温运输，适用于出现需要大规模样本前处理以及现场检测的样本快速处理。场检测的样本快速处理。场检测的样本快速处理。
技术研发人员：黄丽萍 陈友倩 刘钢 何佳俊
受保护的技术使用者：量准（武汉）生命科技有限公司
技术研发日：2022.07.25
技术公布日：2023/3/14