一种生产纽莫康定B0的基因工程菌及其制备方法和应用与流程

文档序号:37159016发布日期:2024-02-26 17:25阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基因工程菌,其出发菌株为丝状真菌glarea lozoyensis,其特征在于,所述基因工程菌过表达编码非核糖体肽合成酶的基因;所述非核糖体肽合成酶的ncbi登录号为xp_008078276.1。

2.如权利要求1所述的基因工程菌,其特征在于,编码所述非核糖体肽合成酶的基因的ncbi登录号为xm_008080085.1;和/或,所述丝状真菌glarea lozoyensis为g.lozoyensisatcc 20868;

3.如权利要求2所述的基因工程菌,其特征在于,所述强启动子整合于g.lozoyensisatcc 20868的基因组上,并使编码所述非核糖体肽合成酶的基因过表达;

4.一种制备如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:将含有强启动子的质粒或线性片段转化入丝状真菌glarea lozoyensis细胞内,使所述强启动子替换所述基因组中编码非核糖体肽合成酶的基因的原启动子,获得过表达编码非核糖体肽合成酶的基因的基因工程菌;所述强启动子选自gpd启动子或tef1启动子;所述gpd启动子的核苷酸序列如seq id no:4所示;所述tef1启动子的核苷酸序列如seq id no:6所示;

5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,所述丝状真菌glarea lozoyensis在所述转化前通过溶解细胞壁的酶液酶解其细胞壁;

6.一种纽莫康定b0的制备方法,其特征在于,其包括:在适合培养如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌的条件下发酵即得;

7.一种表达盒,其特征在于,所述表达盒包括启动子,编码非核糖体肽合成酶的基因和终止子;

8.一种重组质粒,其特征在于,所述重组质粒包括如权利要求7所述的表达盒;优选所述的重组质粒的骨架质粒为puc57质粒。

9.一种重组质粒组合,其特征在于,其包括cas9表达质粒、sgrna质粒,以及如权利要求8所述的重组质粒;所述cas9表达质粒和sgrna质粒的线性片段用于将如权利要求7所述的表达盒同源重组至纽莫康定b0的生产菌的基因组中;

10.如权利要求1-3任一项所述的基因工程菌或如权利要求7所述的表达盒或如权利要求8所述的重组质粒或如权利要求9所述的重组质粒组合在制备纽莫康定b0中的应用。


技术总结
本发明公开了一种生产纽莫康定B0的基因工程菌及其制备方法和应用。其中,该所述基因工程菌过表达编码非核糖体肽合成酶的基因;所述非核糖体肽合成酶的NCBI登录号为XP_008078276.1。本发明提供的基因工程菌克服了现有技术中纽莫康定B0合成产量较低、生产成本高的缺陷。利用本发明基因工程菌生产纽莫康定B0具有产量高且整体成本低的优势。

技术研发人员:吴燕,邢丽彤,王舒,田振华
受保护的技术使用者:弈柯莱生物科技(集团)股份有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/2/25
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