多重RNA向导的基因组工程

文档序号:34024994发布日期:2023-05-05 08:38阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种将外源核酸序列多重插入表达cas9酶的细胞中的dna内的方法,所述酶同与靶dna互补的向导rna形成共定位复合物并以位点特异性方式切割所述靶dna,所述方法包括:

2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述细胞是真核细胞。

3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述细胞是酵母细胞、植物细胞或者动物细胞。

4.根据权利要求1所述的方法,其中,所述向导rna是约10个至约500个之间的核苷酸。

5.根据权利要求1所述的方法,其中,所述向导rna是约20个至约100个之间的核苷酸。

6.根据权利要求1所述的方法,其中,所述向导rna是tracrrna-crrna融合体。

7.根据权利要求1所述的方法,其中,所述dna是基因组dna、线粒体dna、病毒dna、或外源dna。

8.根据权利要求1所述的方法,其中,通过重组插入所述供体核酸序列。

9.根据权利要求1所述的方法,其中,通过同源重组插入所述供体核酸序列。

10.根据权利要求1所述的方法,其中,所述向导rna存在于质粒上。

11.根据权利要求1所述的方法,其中,所述供体核酸包括侧接所述剪切位点的臂或同源序列。

12.根据权利要求1所述的方法,其中,所述供体核酸包括用于除去所述切割位点的序列。


技术总结
本发明提供了多重RNA向导的基因组工程。具体提供了将外源核酸序列多重插入表达Cas9酶的细胞中的DNA内的方法,所述酶同与靶DNA互补的向导RNA形成共定位复合物并以位点特异性方式切割所述靶DNA,所述方法包括:(a)将多种向导RNA和多种外源供体核酸序列引入至所述细胞中,其中所述多种向导RNA与所述靶DNA的不同位点互补,其中所述多种RNA中的各向导RNA和所述Cas9酶是与所述靶DNA的共定位复合物的成员,以及(b)重复步骤(a)以在所述细胞中对于所述DNA产生多种外源核酸的插入。

技术研发人员:乔治·M·丘奇,詹姆士·迪卡洛
受保护的技术使用者:哈佛大学校长及研究员协会
技术研发日:
技术公布日:2024/1/12
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