作为NUAK激酶的抑制剂的异吲哚啉酮氨基嘧啶化合物、其组合物和用途的制作方法

本技术涉及异吲哚啉酮氨基嘧啶化合物、它们的制备方法、包含它们的组合物，以及它们在疗法中的用途。更特别地，本技术涉及可用于治疗可通过抑制或阻断nuak激酶来治疗的疾病、病症或病况(如癌症和纤维化)的异吲哚啉酮氨基嘧啶化合物。

背景技术：

0、背景

1、hippo信号通路也称为salvador/warts/hippo通路，其通过调节细胞增殖和细胞凋亡来控制动物的器官尺寸。该通路的名称来源于果蝇属(drosophila)中鉴定的其关键信号转导组分之一——蛋白激酶hippo(hpo)，在脊椎动物中称为mst1/2。该基因中的突变导致组织过度生长、或“河马”状表型。hippo信号通路响应于多种不同的胞外信号，包括细胞接触和细胞骨架重构，以调节组织生长和器官发生(cell 2015,163,811；cancer cell2016,29,783)。从机制上讲，转录效应子yap和taz磷酸化，并由此被由肿瘤抑制激酶mst和lats构成的核心盒抑制。在大多数实体瘤中，yap/taz与hippo激酶盒解偶联，并因此是组成型核并驱动促癌转录程序。yap/taz活性促进癌症干细胞性状的增殖、迁移、侵袭和维持(cell 2015,163,811)。尽管活性yap/taz是癌症的标志，但通路组分的突变很罕见，因此迫切需要鉴定出新的可靶向节点。此前并未描述在体外或体内恢复通路活性的化合物。

2、使用系统性物理和功能筛选，作为与nuak1最密切相关的研究很少的ampk家族激酶，nuak2(此前称为snark)被鉴定为hippo通路的癌症相关负调控因子[nat commun.2018,9(1):3510；nat commun.2018,9(1):4834]。nuak亚型是泛表达的，并且具有n端激酶结构域(残基55-306，nuak1)，继之以c端区域，其尽管在nuak1与nuak2之间相似，但不具有其它蛋白质的明显结构域或与其它蛋白质的同源性。nuak1和nuak2亚型两者均使mypt1(磷酸肌球蛋白靶向亚基1)在ser445处磷酸化。使用sirna、shrna和crispr消除nuak2表达，或者使用商业工具化合物(wz4003或on123300)在数种癌细胞系中药理学抑制nuak活性，导致了(1)yap/taz核定位阻断，如使用手动或自动免疫荧光共聚焦显微镜(if)所确定，以及(2)减弱转录功能，如由靶基因表达的pcr分析所测量[nat commun.2018,9(1):3510；natcommun.2018,9(1):4834]。有趣的是，yap/taz可转录激活nuak2表达，揭示了其中nuak2正向增强yap/taz的促癌活性的前馈环。因此，通过抑制nuak2来破坏这种促癌环是有吸引力的治疗目标。

3、最近，还展示了myc驱动的肿瘤对nuak活性成瘾并且剪接体的完整功能与其存活相关[mol cell.2020,77(6):1322-1339]。myc驱动细胞生长和分裂所需的基因表达，并且在许多肿瘤中失调。myc本身已被证明对基于小分子的药理干预在很大程度上是难治疗的，从而使药物发现工作的大部分焦点转向其它潜在靶标——利用myc扩增或以其它方式使myc失调而有助于癌细胞存活的蛋白质或通路。通过rna干扰(rnai)耗竭nuak1特异性地诱导过表达myc的骨肉瘤细胞的细胞凋亡[nature.2012,483(7391):608-12]。nuak1活性的降低似乎通过使pnuts-pp1β失调而损害剪接，导致未剪接的转录物蓄积。这些结果表明，失调的myc覆盖掉对转录物延伸的检查点控制，由此忽略nuak1功能障碍所致的剪接缺陷——否则会触发延伸停滞和/或过早终止，从而导致rnapii捕获在非生产性延伸复合物中。因此，除了调节癌症中的hippo通路之外，抑制nuak活性还可在抑制myc驱动的肿瘤生长中发挥着显著作用。

4、蓄积的证据还表明，yap/taz以与其它建立的信号通路协作的方式，特别是与tgfβ和wnt信号通路进行信号对答来起作用(am.j.physiol.lung cell.mol.physiol.2015,309,l756-l767；cell 2012,151,1443-1456)。重要地，在免疫肿瘤学背景下，tgfβ已展示在调节抗肿瘤免疫反应中具有关键作用，并促成癌症患者针对抗-pd-1-pd-l1治疗的抗性(acs med.chem.lett.2018,9,1117)。因此，靶向tgfβ通路(通过nuak-yap/taz抑制)联合抗pd1或抗pd-l1抗体可有助于克服抗性并产生更有效的抗肿瘤反应。

5、另一种可潜在受益于抑制nuak-yap/taz-tgfβ信号轴的适应症是纤维化。纤维化是对组织或器官损伤(如慢性炎症或化学和机械侵害)的反应。在病理情况下，纤维化演变成不受控制的过程，特征在于细胞外基质(ecm)(主要是胶原)逐渐蓄积，最终破坏正常器官结构并导致器官功能丧失。纤维化的关键步骤是静止期成纤维细胞转化为活跃的肌成纤维细胞，所述活跃的肌成纤维细胞沉积细胞外基质(ecm)并且分泌tgfβ(其为驱动该激活过程的主要因子)(science 2002,296:1646-1647)。影响数种器官(如肝、肺和肾)的纤维化是造成工业化世界多达45％死亡数的原因(j.clin.invest.2007,117,524-529；front.pharmacol.2017,8,855)。目前的治疗剂主要是支持性而非治愈性的，并且迫切需要鉴定出具有治疗潜能的药物来解决这种疾病。调节yap/taz和tgfβ信号转导的nuak抑制是治疗纤维化的新型方法。

6、此前报道的nuak抑制剂药物缺乏效力和选择性，且并不理想，表明需要新型、有效和选择性的nuak抑制剂药物。鉴定结合特定激酶(如nuak)的化合物的设计工作可以导致对多种激酶靶标的抑制，并且可能对化合物安全性具有治疗影响。一种这样的脱靶激酶是极光激酶a(aura)，其抑制导致不期望的不良效应，如中性粒细胞减少症和血液毒性(semin.oncol.2015,42(6),832-848)。因此，鉴定出对nuak激酶有效且相对于aura具有选择性的化合物是寻找不良效应降低的配体的手段。

7、仍然需要提供用于治疗例如癌症和纤维化的有效nuak激酶抑制剂。而且，需要提供相对于其它激酶(如极光激酶a)具有选择性的nuak激酶抑制剂。

技术实现思路

0、概述

1、本技术描述了nuak激酶(nuak2和/或nuak1)的某些抑制剂以及它们通过调节hippo通路来治疗癌症和纤维化的用途。另外，本技术描述了相对于极光激酶a抑制剂具有选择性的nuak抑制剂，因此具有改善的安全性和治疗潜能。

2、因此，本发明包括式i的化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药：

3、

4、其中

5、r1选自h、卤素、c1-4烷基、oc1-4烷基、c1-4卤代烷基、oc1-4卤代烷基、cn、c1-4羟烷基和oc1-4羟烷基；

6、r2选自h、卤素、cn、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、oc1-4烷基和oc1-4卤代烷基；

7、r3选自h、卤素、c1-4烷基、oc1-4烷基、c1-4卤代烷基、oc1-4卤代烷基，

8、x选自cra和n；

9、y选自crb和n；

10、ra和rb独立地选自h、卤素、c1-4烷基和c1-4卤代烷基；

11、z选自c1-6亚烷基nr5r6、oc1-6亚烷基nr5r6、nr7c1-6亚烷基nr5r6、nr7c1-6亚烷基or5和nr5r6；

12、r4选自h、卤素、cn、c1-4烷基、c1-4卤代烷基、oc1-4烷基和oc1-4卤代烷基；或者

13、z和r4与它们之间的原子一起连接形成选自c3-12环烷基和c3-12杂环烷基的环b，其中所述环b任选地被一个或多个选自卤素、＝o、oh、c1-6烷基、c3-6环烷基、芳基、c5-6杂芳基、c3-6杂环烷基、c1-6亚烷基c3-6环烷基、c1-6亚烷基芳基、c1-6亚烷基c5-6杂芳基、c1-6亚烷基c3-6杂环烷基、c(o)c1-6烷基、oc1-6烷基、oc1-6亚烷基oc1-6烷基、c(o)nh2、c(o)nh(c1-6烷基)、c(o)n(c1-6烷基)(c1-6烷基)、nhc(o)c1-6烷基、n(c1-6烷基)c(o)c1-6烷基、nh2、nh(c1-6烷基)、n(c1-6烷基)(c1-6烷基)、sc1-6烷基、s(o)c1-6烷基和so2c1-6烷基的取代基取代，其中所述环b上的任选存在的取代基的所有烷基、亚烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基也任选地被卤素、c1-6烷基、oc1-6烷基、c1-6卤代烷基和oc1-6卤代烷基中的一者或多者取代；

14、r5选自h、c1-6烷基、c3-10环烷基、c3-10杂环烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c1-6亚烷基c3-10环烷基、c1-6亚烷基c3-10杂环烷基、c1-6烷基亚烷基or8和c1-6烷基亚烷基nr8r9，并且r5的所有烷基、烯基、炔基、亚烷基、杂环烷基和环烷基任选地被卤素、c1-6烷基和c1-6卤代烷基中的一者或多者取代；

15、r6选自h、c1-6烷基和c1-6卤代烷基；或者

16、r5和r6与它们之间的原子一起连接形成c3-12杂环烷基，所述c3-12杂环烷基任选地含有一个额外的选自nr10、o、s、s(o)和so2的杂部分，且任选地被一个或多个选自卤素、＝o、oh、c1-6烷基、c3-6环烷基、芳基、c5-6杂芳基、c3-6杂环烷基、c1-6亚烷基c3-6环烷基、c1-6亚烷基芳基、c1-6亚烷基c5-6杂芳基、c1-6亚烷基c3-6杂环烷基、c(o)c1-6烷基、oc1-6烷基、oc1-6亚烷基oc1-6烷基、c(o)nh2、c(o)nh(c1-6烷基)、c(o)n(c1-6烷基)(c1-6烷基)、nhc(o)c1-6烷基、n(c1-6烷基)c(o)c1-6烷基、nh2、nh(c1-6烷基)、n(c1-6烷基)(c1-6烷基)、sc1-6烷基、s(o)c1-6烷基和so2c1-6烷基的取代基取代，其中由r5和r6形成的c3-12杂环烷基上的任选存在的取代基的所有烷基、亚烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基也任选地被卤素、c1-6烷基、oc1-6烷基、c1-6卤代烷基和oc1-6卤代烷基中的一者或多者取代；并且

17、r7、r8、r9和r10独立地选自h、c1-6烷基和c1-6卤代烷基。

18、本发明还包括组合物，所述组合物包含本技术的一种或多种化合物以及载体和/或稀释剂。在一些实施方案中，所述组合物是药物组合物，所述药物组合物包含本技术的一种或多种化合物以及药学上可接受的载体和/或稀释剂。

19、在一些实施方案中，本技术的化合物用作药物。因此，本技术还包括用作药物的本技术的一种或多种化合物。

20、本技术的化合物显示出抑制或阻断nuak2和/或nuak1，包括nuak2和/或nuak1对yap/taz细胞质定位的促进，并且减弱yap/taz靶基因表达的转录功能。因此，本技术的化合物可用于抑制nuak2和/或nuak1(更具体地nuak2)。因此，本技术还包括抑制nuak2和/或nuak1的方法，所述方法包括将有效量的本技术的一种或多种化合物给药于需要其的细胞或个体。

21、本技术还包括本技术的一种或多种化合物用于抑制细胞或个体中的nuak2和/或nuak1的用途。本技术还包括本技术的一种或多种化合物，其用于抑制细胞或个体中的nuak2和/或nuak1。

22、在一些实施方案中，本技术的化合物可用于治疗可通过抑制nuak2和/或nuak1(更具体地nuak2)治疗的疾病、病症或病况。因此，本技术还包括治疗可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况的方法，所述方法包括将治疗有效量的本技术的一种或多种化合物给药于需要其的个体。

23、本技术还包括本技术的一种或多种化合物用于治疗可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况的用途，以及本技术的一种或多种化合物用于制备用于治疗可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况的药物的用途。本技术还包括本技术的一种或多种化合物，其用于治疗可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况。

24、在一些实施方案中，可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况是肿瘤性疾病。在一些实施方案中，所述治疗包括在需要这样的治疗的个体中给药或使用有效改善肿瘤性疾病的至少一种症状(例如，减少细胞增殖或减少肿瘤团块)的量的本技术的一种或多种化合物。

25、在一些实施方案中，可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况是癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自实体瘤，如乳腺癌、结肠癌、膀胱癌、皮肤癌、头颈癌、肝癌、骨癌和胶质母细胞瘤。

26、在一些实施方案中，可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况是纤维化。纤维化是对组织或器官损伤(如慢性炎症或化学和机械侵害)的反应。在病理情况下，纤维化演变成不受控制的过程，特征在于细胞外基质(ecm)(主要是胶原)逐渐蓄积，最终破坏正常器官结构并导致器官功能丧失。纤维化的相关步骤是静止期成纤维细胞转化为活跃的肌成纤维细胞，所述活跃的肌成纤维细胞沉积细胞外基质(ecm)并且分泌tgfβ(其为驱动该激活过程的主要因子)(science 2002,296:1646-1647)。纤维化影响着数个器官，如肝、肺和肾。

27、在一些实施方案中，纤维化选自纤维变性病，如肾纤维化、肺(肺部)纤维化和肝纤维化。

28、在一些实施方案中，治疗包括在需要这样的治疗的个体中给药或使用有效改善纤维化的至少一种症状(例如，减少细胞外基质(ecm)如胶原的蓄积)的量的本技术的一种或多种化合物。

29、在一些实施方案中，可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况是与通过抑制nuak2和/或nuak1直接或间接影响的不受控和/或异常细胞活性相关联的疾病、病症或病况。在另一个实施方案中，通过抑制nuak2和/或nuak1直接或间接影响的不受控和/或异常细胞活性是细胞的增殖活性。

30、在一些实施方案中，本技术还包括抑制细胞的增殖活性的方法，所述方法包括将有效量的本技术的一种或多种化合物给药于细胞。

31、在一些实施方案中，可通过抑制nuak2和/或nuak1治疗的疾病、病症或病况是癌症和/或纤维化，并且本技术的一种或多种化合物与一种或多种额外的癌症和/或抗纤维化治疗联合给药或使用。在另一个实施方案中，所述额外的治疗选自一种或多种放疗、化疗、靶向疗法如抗体疗法(包括抗pd1和/或抗pd-l1抗体)，以及小分子疗法如酪氨酸激酶抑制剂疗法、免疫疗法、激素疗法和抗血管生成疗法。

32、本技术还包括用于制备本技术的化合物的方法。一般和具体的方法将在下面的实施例中更详细地讨论和阐述。

33、在一些实施方案中，本技术包括用于制备本技术的化合物的方法，所述方法包括：

34、(a)使式a的取代的二氯嘧啶(其中r1如式i中所定义或为其保护的形式)与式b的7-氨基异吲哚啉-1-酮(其中r2如式i中所定义或为其保护的形式)在碱性条件下反应，以提供式d的化合物：

35、

36、(b)使式d的化合物与式e的苯胺(其中r3、r4、x、y和z如式i中所定义或为其保护的形式)在酸性或碱性条件下反应，以在根据需要移除任何保护基后提供式i的化合物：

37、

38、根据以下具体描述，本技术的其它特征和优点会是明显的。然而，应当理解，尽管指出了本技术的实施方案，但详细描述和具体实施例仅以例示的方式给出，并且权利要求的范围不应受这些实施方案的限制，而应当给出与整体描述一致的最广泛解释。