1.用于与指数辐亮度拴系的连锁放大的组合物,其包含多个探针,其中所述组合物包含:
2.用于与指数辐亮度拴系的连锁放大的试剂盒,其包含多个探针,使得所述试剂盒至少包含:
3.用于与指数辐亮度拴系的连锁放大的方法,其包括以下步骤:
4.权利要求3的方法,其中个体地或以其任何组合重复步骤(i)-(vii)中的任何步骤。
5.权利要求3的方法,其包括使所述一级探针稳定化。
6.权利要求3的方法,其包括使所述二级探针稳定化。
7.权利要求3的方法,其包括使所述三级探针稳定化。
8.权利要求3的方法,其包括使所述四级探针稳定化。
9.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中每个二级、三级或四级探针包含至少两个放大器片段。
10.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述二级探针、二级和三级探针、二级和三级和四级探针、二级和四级探针、三级探针、三级和四级探针,或四级探针包含至少两个放大器片段。
11.权利要求9或10的组合物、试剂盒或方法,其中所述二级探针放大器片段至少包含:
12.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述三级探针放大器片段至少包含:
13.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述四级探针放大器片段至少包含:
14.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中连接酶连接任何二级、三级或四级放大器片段的所述第一或第二片段。
15.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中夹板序列与所述二级、三级或四级放大器片段的所述第一放大器片段、所述第二放大器片段或这两个放大器片段杂交,并且其中所述夹板序列包含至少两个夹板序列片段。
16.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述夹板序列片段是连接的。
17.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中读出探针与所述二级、三级或四级探针的所述第一或第二放大器片段杂交。
18.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中读出探针与夹板序列片段杂交。
19.权利要求3的方法,其中所述稳定化选自由以下组成的组:酶连接、化学连接、使用或不使用寡聚物夹板探针的uv交联、夹板探针的杂交、通过基质的交联和化学交联和其任何组合。
20.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述靶标选自转录物、rna、dna基因座、染色体、dna、蛋白质、脂质、聚糖、细胞靶标、细胞器和其任何组合。
21.权利要求20的靶标,其中所述靶标与一个或多个寡核苷酸序列缀合。
22.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述一级、二级、三级或四级探针通过顺式连接稳定化。
23.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述一级、二级、三级或四级探针通过使用酶的顺式连接稳定化。
24.权利要求23的酶,其中所述酶是dna或rna连接酶,或dna聚合酶或rna聚合酶,和或上述任何项的组合。
25.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中在探针的接触或杂交期间通过顺式连接使所述一级、二级、三级或四级探针稳定化。
26.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中每个一级探针包含与靶核酸序列互补的核酸序列。
27.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述序列互补性为至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
28.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述一级、二级、三级或四级探针通过丙烯酰胺交联顺式连接。
29.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述一级、二级、三级或四级探针通过所述探针上的反应基团顺式连接,其中所述反应基团是选自以下的反应对:烯烃、炔烃、叠氮化物、酰胺、胺、硝酮、磷酸酯、四嗪和四唑。
30.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述读出探针中的一个或多个包含具有可检测部分的寡核苷酸或抗体。
31.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述读出探针包含具有相同序列的寡核苷酸。
32.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述读出探针包含具有不同序列的寡核苷酸。
33.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述读出探针包含长度为至少5个核苷酸的寡核苷酸。
34.前述权利要求中任一项的组合物、试剂盒或方法,其包含至少两个不同的可检测部分。
35.权利要求1-34中任一项的组合物、试剂盒或方法,其中所述可检测部分是相同的。
36.前述权利要求中任一项的组合物或试剂盒,其中所述组合物或试剂盒进一步包含能够结合两个或更多个靶标的两个或更多个一级探针。
37.前述权利要求中任一项的组合物或试剂盒,其中所述组合物或试剂盒进一步包含能够结合一个或多个一级探针的两个或更多个二级探针,其中每个二级探针包含两个或更多个三级探针结合位点或两个或更多个读出探针结合位点。
38.前述权利要求中任一项的组合物或试剂盒,其中所述组合物或试剂盒进一步包含两个或更多个三级探针,其各自能够结合两个或更多个三级探针结合位点,并且其中每个三级探针包含一个或多个读出探针结合位点。
39.前述权利要求中任一项的组合物或试剂盒,其中所述组合物或试剂盒进一步包含两个或更多个读出探针,其能够结合至所述一个或多个读出探针结合位点的至少一个并且能够被检测。
40.权利要求2的试剂盒,其进一步包含dna连接酶。
41.前述权利要求中任一项的方法,其包括使样品与结合一个或多个靶标的一个或多个一级探针接触,其中所述一个或多个一级探针与所述靶标杂交。
42.前述权利要求中任一项的方法,其包括使二级探针与所述一级探针杂交;其中所述二级探针包含两个或更多个三级探针结合位点或两个或更多个读出探针结合位点。
43.前述权利要求中任一项的方法,其包括使三级探针与至少两个二级探针杂交;并且其中每个三级探针包含两个或更多个读出探针结合位点。
44.前述权利要求中任一项的方法,其包括使能够检测的读出探针与两个或更多个读出探针结合位点杂交。
45.权利要求3的方法,其进一步包括重复所述接触和成像步骤,每次用新的多个可检测地标记的读出探针进行,其中在每个新的多个中,针对一个靶标的至少一个读出探针与先前的多个中针对同一靶标的至少一个读出探针不同,其中它们至少在它们的可检测部分上不同。
46.前述权利要求中任一项的方法,其中所述一级探针是连接的或交联的。
47.前述权利要求中任一项的方法,其中所述一级、二级或三级探针是顺式或反式进行连接或交联的。
48.前述权利要求中任一项的方法,其中每个一级、二级或三级探针是顺式连接的。
49.根据前述权利要求中任一项的方法,其中在每个步骤之后洗涤所述样品。
50.权利要求49的方法,其中用除去非特异性杂交反应的缓冲液洗涤所述样品。
51.权利要求50的方法,其中所述洗涤缓冲液是严格的。