一种重组大肠杆菌工程菌及其全细胞催化制备茶黄素的方法与流程

文档序号:34821653发布日期:2023-07-20 02:07阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组大肠杆菌工程菌,其特征在于,含有氨基酸序列如seq id no.1所示的酶突变体基因bmtyrc24和/或氨基酸序列如seq id no.2所示的酶突变体基因bmtyrc25的表达载体。

2.权利要求1所述的重组大肠杆菌工程菌在全细胞催化制备茶黄素中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,

4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)采用的透性化试剂包括:十六烷基三甲基溴化铵ctab、聚乙二醇辛基醚triton x-100、甲苯、乙醇溶液中的至少一种。

5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(1)所用透性化试剂的反应浓度为0.5%-4%,处理时间为10-120min,ph为3.0-5.0,温度为28-32℃。

6.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)催化合成茶黄素tfdg反应参数为:全细胞催化剂50-100g/l,底物溶液ph为4.0-6.0,反应温度25-35℃,cu2+浓度为0.1-0.2mm,反应时间30-60min,底物egcg浓度为1-8mg/ml,底物ecg浓度为1-4mg/ml,搅拌转速180-200r/min。

7.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)底物溶液包括柠檬酸-磷酸盐缓冲液。

8.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,步骤(2)反应完成后离心得到的菌体沉淀能重复用于下一批次催化反应。

9.氨基酸序列如seq id no.1所示的酶突变体bmtyrc24和/或氨基酸序列如seq idno.2所示的酶突变体bmtyrc25。


技术总结
本发明属于生物技术领域,涉及到一种重组大肠杆菌工程菌及其全细胞催化制备茶黄素的方法。该工程菌通过在载体中实现双多酚氧化酶Bmtyrc24和Bmtyrc25突变体的共表达,以此工程菌株为基础制备全细胞催化剂,并以表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)为底物催化合成茶黄素双没食子酸酯(TFDG)。利用本发明的大肠杆菌工程菌株所制备的全细胞催化剂应用于茶黄素TFDG的催化合成,相比现有技术,具有操作更简单、对底物催化效率、产物TFDG产率更高,多批次反应稳定性好、生产成本更低的优势。

技术研发人员:周晶辉,刘仲华,张盛,许岗,赵强,彭勇,张羽桑
受保护的技术使用者:湖南福来格生物技术有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/1/13
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