一种贝莱斯芽孢杆菌HC-5及其在制备生防/拮抗剂产品中的应用

本发明属于植物病害防治，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌hc-5及其在制备生防/拮抗剂产品中的应用，特别是在制备生姜青枯病防治及解磷产品中的应用。

背景技术：

1、生姜青枯病又称姜瘟病，多发于5月下旬至收获期，是生姜产区中最常见的一种毁灭性病害，对生姜产业造成重大威胁，每年给生姜种植户造成巨大经济损失。生姜青枯病病原为青枯劳尔氏菌(ralstonia solanacearum)，广泛分布于全世界热带、亚热带和温带地区，我国各生姜种植区均有发生。目前生产上该病害以农业轮作为主、化学药剂防治为辅的综合防治措施。但生产实际中生姜青枯病的传播速度和危害极为严重，导致种植户必须每年施用大量化学药剂来防治青枯病害。虽然化学防治能在一定程度上减轻青枯病害的流行和危害，但过量使用化学药剂会导致农药残留、环境污染等问题，并且容易导致青枯病原菌产生抗药性等负面效应逐年增加。相反，生物防治具有无污染、无公害和长效性等优点，近年来已逐渐在生姜青枯病的防治研究领域中占据越来越重要的位置。

2、本发明团队为了解决上述问题，在137种菌株中共筛选出9种对青枯菌有拮抗效果，其中贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株抑菌效果最好。

技术实现思路

1、本发明目的是提供一种贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)hc-5。

2、本发明另一目的是提供一种贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)hc-5在制备生防/拮抗剂产品中的应用。

3、本发明另一目的是提供一种贝莱斯芽孢杆菌hc-5在制备防治生姜青枯病中的应用。

4、本发明所述贝莱斯芽孢杆菌hc-5在制备防治卡哈瓦炭疽病菌、果生炭疽病菌、链格孢菌、茄腐镰刀菌、尖孢镰刀菌、玉米小斑病菌拮抗剂中的应用。

5、本发明所述产品为贝莱斯芽孢杆菌hc-5的发酵稀释液。

6、本发明所述贝莱斯芽孢杆菌hc-5的发酵稀释液由以下制备方法制成：

7、将所述贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株接种到lb斜面培养基，37℃恒温培养10～21h进行活化，挑取活化菌苔接入lb培养基中，37℃摇床振荡培养18～30h，以10％的接种量将培养物接种到lb培养基，37℃摇床振荡培养48～60h，用无菌水调节发酵液中hc-5菌株浓度至2.0×107～5.0×107cfu/ml，即得所述发酵稀释液。

8、优选的，本发明所述贝莱斯芽孢杆菌hc-5的发酵稀释液由以下制备方法制成：

9、将所述贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株接种到lb斜面培养基，37℃恒温培养12～18h进行活化，挑取活化菌苔接入lb培养基中，37℃摇床振荡培养20～28h，以10％的接种量将培养物接种到lb培养基，37℃摇床振荡培养48～60h，用无菌水调节发酵液中hc-5菌株浓度至2.0×107～5.0×107cfu/ml，即得所述发酵稀释液。

10、进一步优选的，本发明所述贝莱斯芽孢杆菌hc-5的发酵稀释液由以下制备方法制成：

11、将所述贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株接种到lb斜面培养基，37℃恒温培养16h进行活化，挑取活化菌苔接入lb培养基中，37℃摇床振荡培养24h，以10％的接种量将培养物接种到lb培养基，37℃摇床振荡培养48～60h，用无菌水调节发酵液中hc-5菌株浓度至2.0×107～5.0×107cfu/ml，即得所述发酵稀释液。

12、本发明所述的贝莱斯芽孢杆菌hc-5防治生姜青枯病的方法，具体步骤为：

13、s1:生姜姜种播种前浸种处理

14、播种前，将生姜姜种浸泡于hc-5菌株发酵稀释液中，30～37℃，浸泡30分钟。

15、s2:生姜植株生长期内灌根处理

16、待浸种完成后，将姜种立即播种至预先施有底肥的二茬田中，覆盖薄膜，保持温度：15-25℃，湿度：45％-70％,待姜苗出土1-3天后，第一次浇灌hc-5菌株发酵稀释液至生姜植株根际，每亩40～60公斤，然后，分别于一个月后和两个月后各浇灌1次，用法同第一次。

17、优选的，本发明所述三次浇灌hc-5菌株发酵稀释液至生姜植株根际的量为每亩50公斤。

18、有益效果：

19、本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

20、1.现有技术存在的问题：目前生产上生姜青枯病病害以农业轮作为主、化学药剂防治为辅的综合防治措施。但生产实际中生姜青枯病的传播速度和危害极为严重，导致种植户必须每年施用大量化学药剂来防治青枯病害。虽然化学防治能在一定程度上减轻青枯病害的流行和危害，但过量使用化学药剂会导致农药残留、环境污染等问题，并且容易导致青枯病原菌产生抗药性等负面效应逐年增加。

21、本发明解决了以上技术问题，采用贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)hc-5生物防治生姜青枯病病害，具有无污染、无公害和长效性等优点。

22、2.本技术通过青枯病生防菌筛选，在137种菌株中共筛选出9种对青枯菌有较好的拮抗效果，hc-5菌株抑菌效果最好，抑菌率为66.20％。

23、3.本技术通过共培养实验，表明拮抗菌hc-5菌株与青枯菌共培养后，能显著抑制青枯菌的生长与存活。

24、4.本技术通过抑菌谱实验发现，hc-5菌株对六种植物病原真菌都有拮抗作用。hc-5菌株对六种植物病原真菌的抑菌率均在50％以上。其中，hc-5菌株对果生炭疽病菌(colletotrichum fructicola)的拮抗作用较强，抑菌率为63.23％，对茄腐镰刀菌(fusarium solani)的抑菌率为54.20％。

25、5.本技术通过大田防效促生实验，田间防治效果试验结果显示，贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株对生姜青枯病的防效为76.65％，该结果说明，贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株对生姜青枯病具有显著的防治效果。田间增产效果试验结果显示，浇灌贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株后生姜产量相较于浇灌化学农药处理增加了33.14％，增产效果显著，该结果说明，贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株对生姜产量具有显著的增产效果。

26、6.本技术采用hc-5菌株的发酵稀释液灌根处理的生姜植株健康状况良好，叶片和地上部基本观察不到萎蔫和枯黄现象，受到生姜青枯病影响较小。

27、7.通过收获期化学农药组(左侧)和hc-5处理组(右侧)生姜植株的生长情况对比。采用hc-5菌株的发酵稀释液灌根处理的生姜植株地上部长势更好，生长情况更好，说明本发明提供的贝莱斯芽孢杆菌hc-5菌株对生姜植株具有较为明显的促生长效果。

28、菌株命名：贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)hc-5；

29、保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)；

30、保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

31、保藏日期：2022年12月26日；

32、保藏编号为cgmcc no.26250。