专利名称:一种拐枣多糖的制备方法
技术领域：
本发明属于植物活性成分提取技术领域：
，具体的说，是一种从拐枣中提取水溶性 多糖的方法。
背景技术：
多糖是天然有机化合物中的大分子物质，某些活性多糖有抗肿瘤和增强免疫功能 的作用，一些多糖则具有复杂的控制细胞分裂和分化、调节细胞生长与衰老等多方面功能， 改性的多糖则有抗HIV感染的作用，一些重要的生理过程如炎症反应，受体识别，免疫反应 等都与多糖分子密切相关。已有的大量药理研究表明，植物多糖，特别是中药中的多糖具有 免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗感染、降血糖等多种生理活性，其原生药大多属补益类中药。 虽然目前有很多合成化疗药物，但它们在杀死癌细胞的同时也同样累及正常细胞，临床上 表现出很多副作用，特别是化疗药物对患者的免疫系统造成损害，但植物药的遗传毒性不 太明显，表明中草药在抗癌抗突变方面有其独特的优势和广阔的应用前景。因此，多糖类免 疫调节剂在肿瘤上的治疗很有吸引力。
拐枣(Hovenia cerba Lindl.)为鼠李科拐枣属落叶乔木，俗称犋子、钩子、鸡脚 爪、万字果、万寿果、龙爪。它全身都是宝，是一种果、药、材兼用的名贵树，有广阔的开发前 景。果实中含葡萄糖计苹果酸钙，种子含枳犋皂苷，具有镇静、抗惊厥和降血压等功效。肉 质可治风湿，有清热利尼奥止渴降火解毒功效，树皮可活血，舒筋解毒，果梗性甘平，有健胃 补血的作用，无毒，主治头风，润五脏利大小便。木质部含二羧酸三萜类化合物枳犋子酸 (Hobenia aced，C30H8005)。朱炯波等采用蒽酮-硫酸比色法测定其多糖含量为13.83%， 目前国内外对拐枣活性多糖的作用研究尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种拐枣多糖的制备方法，该制备方法收率高，过程简单，能 源消耗少，产量大，纯度高，保留了多糖风味，有利于制备各种与拐枣多糖相关的药品和食 品，大大提高了拐枣的经济效益。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案
一种拐枣多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤
(1)水提将拐枣洗净，阴干，粉碎成粗粉，加蒸馏水浸泡12_24h，再补加水至料液 比为1 10-1 20，反复超声提取，过滤，合并提取液；
(2)酶解将提取液浓缩至小体积，加酸调pH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶 解反应，酶解条件为时间5-10h，温度40-45°C ；
(3)除杂将酶解液通过非极性大孔树脂柱，收集透过液；
(4)醇沉将透过液加入乙醇使溶液的乙醇浓度为70% -80%，静置2_4h，再离心 分离，冷冻干燥得拐枣多糖成品。
所述步骤(1)中超声提取条件为超声波功率为200-500W，提取时间为l_2h，提取2-5 次。
所述步骤(2)中加入一定量的淀粉酶和蛋白酶，酶的加入量为脱色液量的2-5%。， 淀粉酶和蛋白酶的重量比为5 1。
所述步骤(3)中非极性大孔树脂柱可用D101、HZ802、XAD-1600大孔树脂。
本发明通过反复实验，对影响提取效率的因素如提取时间、料液比、温度、酶解pH、 醇沉用乙醇浓度等分别进行考察，确定拐枣多糖的最佳提取条件，为拐枣多糖的开发提供 依据。本发明采用超声波辅助提取结合酶水解法纯化拐枣多糖，与传统水提法相比，不需要 高温、缩短了操作时间，提高了生产效率，且节约了能耗，脱蛋白效率高。本发明提取纯化后 的拐枣多糖的得率为10.4%，含量在60%以上。本发明采用安全无毒的溶剂提取，方法安 全，对环境无污染，有利于进一步研究拐枣多糖在保健品和药品的作用效果。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1
将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过40目筛，称取500g置于超声波提取器中，加IL 蒸馏水充分搅勻，浸泡12小时，补加水至料液比为1 10，在200W的超声波功率下，超声提 取1小时，反复提取4次，过滤，合并提取液，浓缩至500ml，加酸调pH至5，按淀粉酶蛋白 酶=5 1的重量配比配制成酶制剂，加入1. 25g，在45°C温度下反应6小时，将酶解液通 过HZ802大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为80%，静置3小时，再离心15分 钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得52g成品，含量为64. 8%。
实施例2:
将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过60目筛，称取500g置于超声波提取器中，加 1.5L蒸馏水充分搅勻，浸泡18小时，补加水至料液比为1 20，在250W的超声波功率下， 超声提取1. 5小时，反复提取2次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至500ml，加酸调pH至 6，按淀粉酶蛋白酶=5 1的重量配比配制成酶制剂，加入2. 5g，在40°C温度下反应5 小时，将酶解液通过DlOl大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为80%，静置4小 时，再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得50g成品，含量为62. 4%。
实施例3
将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过60目筛，称取IOOOg置于超声波提取器中，加 2. 2L蒸馏水充分搅勻，浸泡14小时，补加水至料液比为1 14，在400W的超声波功率下， 超声提取2小时，反复提取4次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至1L，加酸调pH至5. 5， 按淀粉酶蛋白酶=5 1的重量配比配制成酶制剂，加入4. 0g，在45°C温度下反应7小 时，将酶解通过HZ802大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为75%，静置4小时， 再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得106g成品，含量为64. 4%。
实施例4
将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过40目筛，称取2kg置于超声波提取器中，加 4. 5L蒸馏水充分搅勻，浸泡16小时，补加水至料液比为1 16，在300W的超声波功率下， 超声提取1小时，反复提取5次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至2L，加酸调pH至5，按淀粉酶蛋白酶=5 1的重量配比配制成酶制剂，加入5. 0g，在43°C温度下反应6小时， 将酶解液通过XAD-1600大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为70%，静置3小 时，再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得218g成品，含量为62. 0%。
实施例5
将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过40目筛，称取5kg置于超声波提取器中，加IOL 蒸馏水充分搅勻，浸泡20小时，补加水至料液比为1 18，在400W的超声波功率下，超声提 取1. 5小时，反复提取5次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至5L，加酸调pH至5. 5，按淀 粉酶蛋白酶=5 1的重量配比配制成酶制剂，加入17.5g，在42°C温度下反应8小时， 将酶解液通过DlOl大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为80%，静置3小时，再 离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得510g成品，含量为62. 1%。
实施例6
将拐枣洗净并阴干，粉碎成粗粉，过60目筛，称取IOkg置于超声波提取器中，加 24L蒸馏水充分搅勻，浸泡24小时，补加水至料液比为1 15，在500W的超声波功率下，超 声提取2小时，反复提取3次，过滤，合并提取液，将提取液浓缩至10L，加酸调pH至6，按淀 粉酶蛋白酶=5 1的重量配比配制成酶制剂，加入45g，在40°C温度下反应10小时，将 酶解液通过XAD-1600大孔吸附树脂柱，透过液加入乙醇，使乙醇浓度为75%，静置4小时， 再离心15分钟，得到拐枣多糖，冷冻干燥得1050g成品，含量为64. 3%。
权利要求
1.一种拐枣多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤(1)水提将拐枣洗净，阴干，粉碎成粗粉，加蒸馏水浸泡12-24h，再补加水至料液比为 1 10-1 20，反复超声提取，过滤，合并提取液；(2)酶解将提取液浓缩至小体积，加酸调PH至5-6，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反 应，酶解条件为时间5-10h，温度40-45°C ；(3)除杂将酶解液通过非极性大孔树脂柱，收集透过液；(4)醇沉将透过液加入乙醇使溶液的乙醇浓度为70%-80%，静置2-4h，再离心分离， 冷冻干燥得拐枣多糖成品。
2.根据权利要求
1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)中超声提取条件为超声波 功率为200-500W，提取时间为l_2h，提取2-5次。
3.根据权利要求
1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中加入一定量的淀粉酶和蛋 白酶，酶的加入量为脱色液量的2-5%。，淀粉酶和蛋白酶的重量比为5 1。
4.根据权利要求
1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中非极性大孔树脂柱可用 D101、HZ802、XAD-1600 大孔树脂。
专利摘要
本发明公开了一种拐枣多糖的制备方法，包括如下步骤以拐枣为原料，加入蒸馏水搅拌，浸泡12-24h后，补加水至料液比为1∶10-1∶20，再进行超声提取，得到提取液，将提取液浓缩，加酸调至适当pH，加入淀粉酶和蛋白酶进行酶解反应，酶解液经过大孔树脂除杂，透过液加入乙醇，再离心分离，冷冻干燥得到高纯度拐枣多糖，产品中拐枣多糖的含量在60％以上。本发明的有益效果为该方法生产拐枣多糖，收率高，过程简单，能源消耗少，产量大，纯度高，保留了多糖风味。
文档编号C12S3/02GKCN102002108SQ201010558105
公开日2011年4月6日 申请日期2010年11月25日
发明者刘东锋, 杨成东, 郭琴 申请人:南京泽朗医药科技有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan